目的针对我国丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)主要基因型筛选出能有效诱导体液免疫和细胞免疫的抗原多肽。方法利用生物信息学方法预测评估我国HCV主要基因型1b、2a、6a型的优势B、CTL和Th抗原表位。以HCV-CTL、HCV-B+HCV-Th、HCV-...目的针对我国丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)主要基因型筛选出能有效诱导体液免疫和细胞免疫的抗原多肽。方法利用生物信息学方法预测评估我国HCV主要基因型1b、2a、6a型的优势B、CTL和Th抗原表位。以HCV-CTL、HCV-B+HCV-Th、HCV-CTL+HCV-B+HCV-Th组合肽作为免疫原免疫BALB/C小鼠,经乳酸脱氢酶释放法检测CTL杀伤活性、ELISPOT法检测分泌IFN-γ能力、ELISA法检测抗体滴度,对检测结果进行统计学分析。结果 SP2/0对照细胞未产生特异性免疫应答,而SP2/0-NS3实验细胞HCV-CTL+HCV-B+HCV-Th和HCV-CTL均诱导了特异性的CTL应答,且当效靶比为25∶1和50∶1时,三组间差异均有统计学意义(F=2045,F=6338,P均<0.05),且HCVCTL+HCV-B+HCV-Th联合免疫激活的CTL活性高于HCV-CTL单独免疫,HCV-CTL单独免疫高于PBS空白对照,差异均有统计学意义(P均<0.05)。细胞体液联合免疫、单独体液免疫、单独细胞免疫刺激的分泌IFN-γ的细胞数量差异有统计学意义(F=5308,P<0.05)。单独体液免疫、单独细胞免疫刺激的分泌IFN-γ的细胞数量均低于细胞、体液联合免疫,单独体液免疫刺激的分泌IFN-γ的细胞数量高于单独细胞免疫,且差异均有统计学意义(P均<0.05)。不同时间点不同免疫原所诱导的特异性的Ig G抗体滴度差异均有统计学意义(P均<0.01)。不同时间点用HCV-CTL+HCV-B+HCV-Th联合免疫和HCV-B+HCV-Th免疫所诱导的特异性Ig G抗体滴度均显著高于PBS空白对照,且差异均有统计学意义(P均<0.05),而细胞体液联合免疫与单独体液免疫之间特异性Ig G抗体滴度经比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HCV-CTL+HCV-B+HCV-Th联合免疫诱导了高效的体液免疫和细胞免疫应答,有望进一步开发为有效的重组HCV疫苗。展开更多
