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贫营养条件下EPS、SMP和微生物多样性的研究 被引量：20
1
作者 黄兴 孙宝盛 +1 位作者 孙井梅 张斌 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1468-1474,共7页
为了考察活性污泥在营养缺乏的条件下,胞外聚合物(EPS)、溶解性微生物产物(SMP)和微生物种群结构自身的变化情况,为优化MBR系统运行、延缓膜污染等提供理论依据,对天津大学游泳馆MBR中的污泥混合液进行贫营养实验,测定了污泥混合液中EPS... 为了考察活性污泥在营养缺乏的条件下,胞外聚合物(EPS)、溶解性微生物产物(SMP)和微生物种群结构自身的变化情况,为优化MBR系统运行、延缓膜污染等提供理论依据,对天津大学游泳馆MBR中的污泥混合液进行贫营养实验,测定了污泥混合液中EPS和SMP的含量,通过聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术和克隆测序技术对微生物多样性进行分析,根据序列数据进行同源性分析并构建系统进化树.实验初期,EPS和SMP的浓度由15.04 mg/g和0 mg/g分别上升到17.99 mg/g和3.29 mg/g.随着实验的进行,EPS有很大的降低,最终只有2.40 mg/g;SMP则一直在3.5 mg/g左右变化.实验表明,EPS和SMP对外界环境变化具有一定的缓冲作用,并且在营养缺乏的条件下微生物能够以降解EPS和SMP来维持自身生命活动.由于对EPS和SMP的利用,污泥的Shannon多样性指数由最初的0.81上升到最高时的1.09,随后开始降低,并最终稳定在0.95.克隆测序的结果表明,污泥中微生物的种类比较丰富,并且优势菌种大部分为未经培养菌种.部分菌种能够通过产生蛋白质和多糖水解酶来实现对EPS和SMP的降解,主要属于拟杆菌(Bacteroidetes)、黄杆菌(Flavobacterium)、腐螺旋菌(Saprospiraceae)和厚壁门菌(Firmicutes)等. 展开更多
关键词 膜生物反应器 胞外聚合物 溶解性微生物产物 微生物多样性 聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳 克隆测序
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J-亚群禽白血病JL-2株的分离鉴定 被引量：10
2
作者 宋素泉 付朝阳 +3 位作者 高宏雷 王笑梅 王英 魏萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期345-349,共5页
近年来 ,J_亚群禽白血病的暴发流行在国内时有报道 ,在本研究中 ,自吉林某患病鸡群分离出一株病毒 ,采用特异性引物 ,经RT_PCR扩增出长度为 5 4 5bp的J_亚群禽白血病病毒特异性核苷酸片段 ;将病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖 ,获取其前病毒... 近年来 ,J_亚群禽白血病的暴发流行在国内时有报道 ,在本研究中 ,自吉林某患病鸡群分离出一株病毒 ,采用特异性引物 ,经RT_PCR扩增出长度为 5 4 5bp的J_亚群禽白血病病毒特异性核苷酸片段 ;将病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖 ,获取其前病毒DNA ,依据原型毒株HPRS_10 3cDNA序列设计并合成一对引物 ,经PCR扩增得到包括gp85、gp37、E_element基因在内的近 1.8kb的DNA片段 ,将其连到pMD18_T载体上 ,转化大肠杆菌JM10 9,培养后提取质粒分别用HindIII,BamHI进行单酶切和双酶切鉴定 ,得到了阳性重组质粒pMD18_T_JL2 /env ,核苷酸序列测定结果表明 ,该片段为J_亚群禽白血病病毒囊膜基因 ,其中亚型特异性片段gp 85和标准对照毒株HPRS_10 3的同源率为 94 % ,所编码氨基酸的同源率为 87%。 展开更多
关键词 J-亚群禽自血病病毒 亚型特异性片段gp85 克隆及序列测定
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MBR和CAS工艺污泥在贫营养培养条件下的微生物群落结构研究 被引量：7
3
作者 胡怡杉 孙宝盛 王盛勇 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1900-1907,共8页
采用聚合酶链式-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,研究了膜生物反应器(MBR)和传统活性污泥工艺(CAS)反应器中微生物在贫营养条件下的总细菌群落结构.结果表明,在培养过程中,污泥的微生物种群经历了一个比较明显的变化过程,且以CAS污泥... 采用聚合酶链式-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,研究了膜生物反应器(MBR)和传统活性污泥工艺(CAS)反应器中微生物在贫营养条件下的总细菌群落结构.结果表明,在培养过程中,污泥的微生物种群经历了一个比较明显的变化过程,且以CAS污泥微生物种群的变化更为明显,演替过程中既有原始优势种群的消亡,又有新的优势种群的增强,故优势种群的功能地位处于动态变化中.两种污泥的来源、工艺进水水质和运行条件的不同造成了活性污泥中菌群结构的差异.两种污泥中主要存在的优势菌种大部分为未经培养菌种(uncultured bacterium)、弓形杆菌属(Arcobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)、γ-变形菌纲(gamma proteobacterium)细菌等,此外,亦存在一些病原性微生物,如Arcobacter属、Serratia属和Klebsiella属等. 展开更多
关键词 MBR CAS 16SrDNA PCR-DGGE 微生物群落结构 克隆测序
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克隆测序鉴定流感病毒诱导小鼠急性肺炎模型 被引量：5
4
作者 谢彬 王雪峰 +1 位作者 岳志军 南春红 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期145-149,共5页
目的结合RT-PCR病毒载量检测、克隆测序基因比对以及病理改变鉴定甲型流感病毒(influenzavirus,IV)鼠肺适应株(FM1株)诱导的小鼠急性肺炎模型,为急性肺炎模型提供科学的鉴定方案。方法以FM1株滴鼻诱导昆明小鼠急性肺炎,分别于第3、5、7... 目的结合RT-PCR病毒载量检测、克隆测序基因比对以及病理改变鉴定甲型流感病毒(influenzavirus,IV)鼠肺适应株(FM1株)诱导的小鼠急性肺炎模型,为急性肺炎模型提供科学的鉴定方案。方法以FM1株滴鼻诱导昆明小鼠急性肺炎,分别于第3、5、7天取小鼠肺脏,以RT-PCR法检测IV病毒载量,并通过质粒克隆测定cDNA序列;同时观察小鼠肺脏病理改变。结果正常组小鼠肺组织的肺泡、肺泡囊和肺泡隔形态完整,周围血管未见炎症细胞浸润;模型组在感染IV后第3、5、7天均见肺泡、肺泡囊、肺泡管、肺泡隔等结构破坏,肺泡间隔增厚,细支气管壁增厚,大量炎症细胞浸润,肺泡壁毛细血管扩张,可见大量红细胞。与正常组比较,模型组在不同时间点的病理变化程度均有显著性差异(P<0.01)。不同时间点模型组小鼠肺组织中均可检测到IV病毒核酸,且不同时间点小鼠肺组织的病变程度与病毒载量呈正相关(P<0.01)。经测序比对发现,IV感染小鼠肺组织中RT-PCR扩增产物与已知IV cDNA序列相应片段吻合度高达99.1%。结论克隆测序基因比对法可鉴定FM1株诱导的小鼠急性肺炎模型。 展开更多
关键词 克隆测序 流感病毒 肺炎模型 小鼠
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贫营养条件下2种MBR污泥微生物的菌群对比 被引量：5
5
作者 杜江 孙宝盛 +3 位作者 马瑶 于凤庆 周强建 宋大伟 《环境工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期2255-2261,共7页
为了揭示贫营养环境下MBR污泥微生物群落结构的演替和菌群变化的异同,取洗浴再生水、工业再生水MBR的污泥进行周期培养,利用PCR-DGGE和克隆测序技术获得了DNA指纹图谱并建立系统发育树。研究表明,微生物群落结构在贫营养条件下演替明显... 为了揭示贫营养环境下MBR污泥微生物群落结构的演替和菌群变化的异同,取洗浴再生水、工业再生水MBR的污泥进行周期培养,利用PCR-DGGE和克隆测序技术获得了DNA指纹图谱并建立系统发育树。研究表明,微生物群落结构在贫营养条件下演替明显,洗浴水污泥微生物形成新的优势菌群(Uncultured Pseudomonas)而工业水只维持了原有的部分菌群(Uncultured Sphaerotilus)。2种污泥培养过程中种群多样性变化突出且差异显著。同时洗浴水污泥菌群相似性在培养第8天时发生突变而工业水总体变化平缓。克隆测序表明2种MBR污泥中既有与贫营养环境适生的共性种属又有与各自来源相对应的特性种属。菌群特异性与废水来源紧密相关,是造成2种污泥对贫营养环境适应能力不同的根本原因。 展开更多
关键词 MBR 贫营养 PCR-DGGE 克隆测序 污泥
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运用PCR-DGGE和克隆技术对串联附积床系统生物膜菌群的分析 被引量：3
6
作者 张岩 鄢胜勇 +3 位作者 张彦清 王慧 杨正阳 王丽丽 《北京工业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期122-130,共9页
采用PCR-DGGE﹑克隆等分子生物学手段研究了多级串联附积床同时硝化反硝化脱氮系统生物膜菌群的时间演变,并对生物膜菌群进行同源性分析和系统发育树构建,同时讨论了生物膜菌群对系统中有机物的去除及对同时硝化反硝化脱氮的贡献.结果表... 采用PCR-DGGE﹑克隆等分子生物学手段研究了多级串联附积床同时硝化反硝化脱氮系统生物膜菌群的时间演变,并对生物膜菌群进行同源性分析和系统发育树构建,同时讨论了生物膜菌群对系统中有机物的去除及对同时硝化反硝化脱氮的贡献.结果表明,随着时间的推移,生物膜菌群发生了较大演变而且具有高度多样性.对DGGE图谱优势条带进行分析表明,优势菌群分为5个不同的细菌类群:β-变形菌类群(β-proteobacteria)﹑γ-变形菌类群(γ-proteobacteria)、未分类菌类群(unclassified bacteria)、α-变形菌类群(α-proteobacteria)、放线菌类群(Actinobacteria).β-变形菌类群不仅在数量上占有优势,而且在有机物的降解、营养物质的去除中起着重要作用.生物膜细菌中起硝化作用的主要是亚硝化单胞菌和硝化螺旋菌;起反硝化作用的主要是施氏假单胞菌. 展开更多
关键词 同时硝化反硝化 PCR变性梯度凝胶电泳(PCR—DGGE) 克隆测序 生物膜 菌群
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非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用 被引量：3
7
作者 刘宁宁 张璐 +4 位作者 吕军华 高继明 吴海珍 肖一红 周恩民 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期589-592,共4页
为研究非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)羧基端在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞中的作用,本实验通过提取Marc-145细胞总RNA,RT-PCR方法扩增NMHCⅡ-A羧基端930 bp基因PRA,并进行核苷酸序列测定。将该基因连接到pEGFP... 为研究非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)羧基端在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞中的作用,本实验通过提取Marc-145细胞总RNA,RT-PCR方法扩增NMHCⅡ-A羧基端930 bp基因PRA,并进行核苷酸序列测定。将该基因连接到pEGFP-N1载体中,采用双酶切和PCR方法对重组质粒pEGFP-N1-PRA进行鉴定。将pEGFP-N1-PRA转染至Marc-145细胞后感染PRRSV,测定TCID50值及间接免疫荧光(IFA)检测PRA对PRRSV感染Marc-145细胞的影响。TCID50及IFA结果显示,与未转染的Marc-145细胞相比,转染pEGFP-N1-PRA的Marc-145细胞的PRRSV感染能力降低50%。本研究初步证明了PRA编码蛋白在PRRSV感染细胞中的作用,为PRRSV感染机制的研究提供了一定的依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NMHCⅡ-A羧基端 克隆测序 转染
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抗bFGF鼠单克隆抗体轻链可变区基因的克隆及序列分析
8
作者 刘纯杰 王德文 +3 位作者 张兆山 高亚兵 熊呈琦 郑兆荣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第5期359-362,共4页
我们采用基因工程抗体制备技术，从分泌抗人 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ单抗的鼠杂交瘤细胞成功地克隆了其轻链可变区基因，并对其进行了序列测定及抗体基因结构分析。这为构建 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ单链抗体，防止 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ引起的副作用及进行体内定位诊断... 我们采用基因工程抗体制备技术，从分泌抗人 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ单抗的鼠杂交瘤细胞成功地克隆了其轻链可变区基因，并对其进行了序列测定及抗体基因结构分析。这为构建 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ单链抗体，防止 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ引起的副作用及进行体内定位诊断等研究打下了基础。 展开更多
关键词 轻链可变区基因 克隆 序列分析 BFGF
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家养野猪源猪圆环病毒2型安徽株的分离鉴定及其全基因组序列分析
9
作者 陈蓉 李郁 +4 位作者 孙裴 李超 苏金存 许大文 魏建忠 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2010年第9期788-792,797,共6页
目的对安徽省临诊疑似PMWS家养野猪病例进行猪圆环病毒2型（PCV2）分离鉴定，并对分离株的全基因组进行克隆与序列分析。方法应用PK-15细胞进行PCV2的分离与增殖，根据PCR、IFA、电镜技术进行PCV2分离株的鉴定，克隆分离株的全基因组，... 目的对安徽省临诊疑似PMWS家养野猪病例进行猪圆环病毒2型（PCV2）分离鉴定，并对分离株的全基因组进行克隆与序列分析。方法应用PK-15细胞进行PCV2的分离与增殖，根据PCR、IFA、电镜技术进行PCV2分离株的鉴定，克隆分离株的全基因组，并对序列进行分析。结果获得1株来自安徽家养野猪源PCV2分离株，命名为YZ0901。该毒株全基因组长为1767bp，属于PCV2b基因型。与GenBank已发表的国内外参考毒株的同源性介于93．9％～99．2％，与安徽分离毒株彼此之间的同源性介于93．4％～99．5％。结论安徽省家养野猪中存在PCV2感染，分离毒株与家猪源病毒差异不大，PCV2核苷酸序列比较稳定，其进化不存在明显的地域相关性，家养野猪源PCV2的基因型与当地PCV2流行株的基因型密切相关。 展开更多
关键词 家养野猪 猪圆环病毒2型 分离鉴定 全基因组 序列分析
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甜菜ATP合酶β亚基基因atpB的克隆、序列分析及进化 被引量：13
10
作者 崔杰 徐德昌 +2 位作者 李滨胜 杨谦 孙璟晗 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期583-588,共6页
atpB基因编码ATP合酶β亚基,是光合作用中的重要基因。ATP合酶是生物体内能量代谢的关键酶,参与氧化磷酸化和光合磷酸化反应。利用植物叶绿体基因组在进化过程中高度保守的特点,根据已知植物烟草、水稻和菠菜等的叶绿体基因组全序列,设... atpB基因编码ATP合酶β亚基,是光合作用中的重要基因。ATP合酶是生物体内能量代谢的关键酶,参与氧化磷酸化和光合磷酸化反应。利用植物叶绿体基因组在进化过程中高度保守的特点,根据已知植物烟草、水稻和菠菜等的叶绿体基因组全序列,设计并合成了一对引物,以甜菜叶绿体DNA为模板,PCR扩增得到包含atpB完整基因(GenBank登录号为DQ067451)在内的一段序列,测序与序列分析表明:该克隆片段全长2 293 bp,其中包括有1 497 bp的编码区序列,推测编码498个氨基酸。同源性比较,该克隆基因与烟草、菠菜、油菜、水稻atpB基因的核苷酸序列同源性分别为90.92%、95.79%、87.71%和86.37%,推测的氨基酸序列同源性分别为94.58%、97.19%、92.17%和91.97%。同时,建立了几种植物的氨基酸序列系统进化树。 展开更多
关键词 甜菜 叶绿体基因组 αtpB基因 克隆与序列分析
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人白细胞介素18cDNA编码区存在基因变异 被引量：8
11
作者 王倩 刘世德 +1 位作者 陈浩 宋国兴 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期24-26,共3页
目的 :为了获得中国人白细胞介素 18cDNA。方法 :采用RT PCR方法从中国人 7种组织标本中获取IL 18cDNA。结果 :7种组织中有 6种组织标本IL 18cDNA序列与报道序列存在有意义突变。结论 :IL 18基因在人体多种组织表达 。
关键词 白细胞介素18 RT-PCR 基因克隆 序列分析 CDNA
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葡萄卷叶伴随病毒基因的克隆及序列分析 被引量：5
12
作者 张满良 朱水芳 赵冬兰 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第5期70-75,共6页
根据葡萄卷叶伴随病毒 美国分离物的 GLRa V- 3CP基因序列 ,设计并合成了 1对该病毒的 PCR引物 ,利用 IC- RT- PCR成功地检查到合适大小的 PCR产物 ;同时将PCR产物克隆到中间载体 PGEM- 3Zf上 ,转化大肠杆菌 DH5α菌株 ,筛选阳性克隆... 根据葡萄卷叶伴随病毒 美国分离物的 GLRa V- 3CP基因序列 ,设计并合成了 1对该病毒的 PCR引物 ,利用 IC- RT- PCR成功地检查到合适大小的 PCR产物 ;同时将PCR产物克隆到中间载体 PGEM- 3Zf上 ,转化大肠杆菌 DH5α菌株 ,筛选阳性克隆。通过双酶切以及序列分析表明 ,扩增样品与美国分离物的同源性为 94.1 %。 展开更多
关键词 CP基因 克隆 序列分析 葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ 葡萄卷叶病
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葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ宁夏分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：5
13
作者 顾沛雯 《宁夏大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第4期383-386,共4页
用酶联免疫吸附法对宁夏贺兰山东麓地区不同葡萄品种进行卷叶伴随病毒Ⅲ(GLRaVⅢ)的测定,检测率为37.1%,与田间自然发病率调查结果基本一致.设计GLRaVⅢ外壳蛋白(CP)基因序列引物对,进行RT-PCR扩增,获得1.1 kb的特异片段.其中,CP基因长9... 用酶联免疫吸附法对宁夏贺兰山东麓地区不同葡萄品种进行卷叶伴随病毒Ⅲ(GLRaVⅢ)的测定,检测率为37.1%,与田间自然发病率调查结果基本一致.设计GLRaVⅢ外壳蛋白(CP)基因序列引物对,进行RT-PCR扩增,获得1.1 kb的特异片段.其中,CP基因长942 bp,推导的编码蛋白含有313个氨基酸.通过对GLRaVⅢCP基因同源性比较,结果表明,GLRaVⅢ宁夏分离物的CP基因与四川分离物SL-10 CP基因的亲缘关系最近,核苷酸和所编码的氨基酸序列同源性分别为98.8%和98.1%;与巴西分离物PET-4和智利分离物C1-817 CP基因亲缘关系较远,核苷酸序列同源性低于95.0%,所编码的氨基酸序列同源性低于97.0%,认为GLRaVⅢ株系间的CP基因存在差异. 展开更多
关键词 葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ(GLRaVⅢ) 宁夏分离物 CP基因 克隆和序列分析
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牦牛MC1R基因的克隆测序及其分析研究 被引量：5
14
作者 唐懿挺 钟红梅 +6 位作者 姬秋梅 张成福 柴志欣 赵尚娟 白雪 信金伟 钟金城 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期88-93,共6页
以麦洼牦牛、斯布牦牛、天祝牦牛和九龙牦牛为研究对象,对黑色素皮质素受体1(Melanocortin receptorⅠ,MC1R)基因编码区进行了克隆测序及分析。结果表明,牦牛的MC1R基因编码区全长954 bp,编码317个氨基酸;4个牦牛品种间及与普通牛间在M... 以麦洼牦牛、斯布牦牛、天祝牦牛和九龙牦牛为研究对象,对黑色素皮质素受体1(Melanocortin receptorⅠ,MC1R)基因编码区进行了克隆测序及分析。结果表明,牦牛的MC1R基因编码区全长954 bp,编码317个氨基酸;4个牦牛品种间及与普通牛间在MC1R基因的编码区内共有13个碱基差异,无碱基的插入和缺失现象,编码蛋白共有9个氨基酸差异。MC1R蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,有糖基化位点和7个跨膜区。系统进化分析显示,麦洼牦牛与斯布牦牛的MC1R基因相似性最近。本研究结果对今后开展MC1R基因与牦牛毛色性状的相关性分析以及牦牛的毛色遗传机理、基因定位、基因表达调控等研究具有重要的意义。 展开更多
关键词 牦牛 MC1R基因 克隆测序
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斑点热群立克次体HL-93株ompA蛋白基因片段的克隆及序列分析 被引量：5
15
作者 张健之 范明远 毕德增 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期227-230,共4页
以根据立氏立克次体分子量为１９０×１０＾３蛋白抗原基因序列设计的一对引物Ｒｒ１９０．７０ｐ和Ｒｒ１９０．６０２ｎ，用聚合酶链反应技术从斑点热群立克次体ＨＬ－９３株染色体ＤＮＡ中扩增出了１９０×１０＾３蛋白基因... 以根据立氏立克次体分子量为１９０×１０＾３蛋白抗原基因序列设计的一对引物Ｒｒ１９０．７０ｐ和Ｒｒ１９０．６０２ｎ，用聚合酶链反应技术从斑点热群立克次体ＨＬ－９３株染色体ＤＮＡ中扩增出了１９０×１０＾３蛋白基因的部分片段。通过载体质粒ｐＧＥＭ－Ｔ将该部分基因片段克隆进入了大肠杆菌ＪＭ１０１，并进行了核苷酸序列分析。 展开更多
关键词 斑点热 立克次体 序列分析 HL-93株 ompA蛋白
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海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：4
16
作者 张稚兰 刘静雯 +2 位作者 董双林 苏国成 张彦锋 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期152-158,共7页
在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量... 在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量高纯度的病毒颗粒。根据已报道的其它EhV株系主要外壳蛋白(MCP)基因内保守片段设计合成一对特异引物,从EhV-99B1病毒基因组中克隆到了长度约为300bp的病毒外壳蛋白基因保守片段。该片段与pBS-T载体连接后转化Escherichia coli DH5α,对筛选到的阳性克隆进行序列测定与分析。结果表明,该克隆片段与GenBank中EhV163(AF453851)分离株的同源性最高,该区域内的核苷酸与对应推导的氨基酸序列同源性均为100%,证实获得的DNA片段是EhV-99B1的外壳蛋白基因;与EhV203(AF453855)分离株的核苷酸及氨基酸序列的同源性较低,分别为93%和100%。表明该病毒在自然海域中分布广泛并具有一定的多态性,同时在进化上也存在相当的复杂性。因此,MCP基因可以作为一种新的分子遗传标记以区分自然群落中EhV的不同基因型,对于理解海洋球石藻类病毒与宿主之间复杂的相互作用关系将是一个十分有价值的工具。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒(EhV) 病毒主要外壳蛋白(MCP) 基因克隆与序列分析
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一步法扩增克隆IBDV上海超强毒VP2-4-3基因 被引量：2
17
作者 孙建和 蒋静 +1 位作者 陆苹 赵渝 《中国病毒学》 CSCD 2002年第4期358-361,共4页
分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒 (vvIBDV)上海株SH95的病毒核酸dsRNA ,应用随机引物将RNA反转录成cDNA ,以此为模板一步扩增出A片段前体融合蛋白基因即VP2 4 3基因 ,将其克隆入 pGEM T载体 ,并进行序列分析 ,其与超强毒株HK... 分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒 (vvIBDV)上海株SH95的病毒核酸dsRNA ,应用随机引物将RNA反转录成cDNA ,以此为模板一步扩增出A片段前体融合蛋白基因即VP2 4 3基因 ,将其克隆入 pGEM T载体 ,并进行序列分析 ,其与超强毒株HK4 6的核苷酸序列的同源性达 98% ,整个基因有 5个氨基酸差异 ,同源性达99.5 1% (10 0 7/ 10 12 )。 展开更多
关键词 一步法扩增 克隆 IBDV上海超强毒 VP2-4-3基因 鸡传染性法氏囊病病毒
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绿僵菌蝗虫菌株Pr1蛋白酶基因的克隆及序列分析 被引量：2
18
作者 农向群 张泽华 +1 位作者 高松 苏红田 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2006年第1期33-36,共4页
从绿僵菌蝗虫菌株M2189克隆了昆虫表皮降解酶Pr1的基因。以特异性引物,分别进行了DNA-PCR和mRNA-RT-PCR反应,得到了预期扩增片段,回收纯化后通过pGEM-T载体转化大肠杆菌JM109,得到重组质粒,EcoRⅠ酶切鉴定表明目的片段已插入质粒。对重... 从绿僵菌蝗虫菌株M2189克隆了昆虫表皮降解酶Pr1的基因。以特异性引物,分别进行了DNA-PCR和mRNA-RT-PCR反应,得到了预期扩增片段,回收纯化后通过pGEM-T载体转化大肠杆菌JM109,得到重组质粒,EcoRⅠ酶切鉴定表明目的片段已插入质粒。对重组质粒中插入的DNA片段进行了核苷酸序列测定,表明该序列全长1369bp,其中有3个内含子,分别为76、59、67bp;编码序列长度为1167bp,含有起始密码子和终止密码子,是一个完整的蛋白读码框。与菌株Me1得到的Pr1编码序列(GenBank/M73795)相比,二者的核苷酸数目相同,同源性达到92.2%,编码的389个氨基酸中48个不同,占12.3%。 展开更多
关键词 绿僵菌 蝗虫 pr1基因 克隆 序列分析
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人巨细胞病毒临床低传代病毒株UL97基因的克隆与分析 被引量：2
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作者 王波 李月琴 +4 位作者 田传军 张纯青 苏运贞 何华坤 周天鸿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期694-699,共6页
分离人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代GZ02病毒株,并根据GenBank提供的实验室标 准病毒株HCMV AD169磷酸转移酶基因UL97 DNA序列及有关文献设计引物,从HCMY GZ02病毒 株基因组DNA中通过PER扩增UL97基因,并克隆至pGEM3Z质粒载体．重组质粒... 分离人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代GZ02病毒株,并根据GenBank提供的实验室标 准病毒株HCMV AD169磷酸转移酶基因UL97 DNA序列及有关文献设计引物,从HCMY GZ02病毒 株基因组DNA中通过PER扩增UL97基因,并克隆至pGEM3Z质粒载体．重组质粒经测序鉴定,发 现HCMV GZ02病毒株UL97基因序列保守区域与HCMV AD169 UL97长度完全一致,但发生G205A、 G761A、T823C、T1173C、T1282C、T1334C、T2106C等7个位点的碱基突变,涉及到编码氨基酸E69K, S275P,CA28R和F445S位点发生改变． 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 野生型 UL97基因 突变 克隆 序列分析
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雨生红球藻β-胡萝卜素酮化酶基因的cDNA和基因组DNA克隆及序列分析 被引量：1
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作者 滕长英 张立 +1 位作者 秦松 曾呈奎 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期20-27,共8页
根据已知的β-胡萝卜素酮化酶(β-carotene ketolase,BKT)的cDNA序列设计引物,利用长距离PCR扩增获得了bkt基因的cDNA完整编码片段及基因组DNA片段,并对这些片断进行了序列测定。cDNA和基因组DNA比对结果表明该基因至少包括5个内含子,... 根据已知的β-胡萝卜素酮化酶(β-carotene ketolase,BKT)的cDNA序列设计引物,利用长距离PCR扩增获得了bkt基因的cDNA完整编码片段及基因组DNA片段,并对这些片断进行了序列测定。cDNA和基因组DNA比对结果表明该基因至少包括5个内含子,它们的剪切位点皆符合GU-AG规律。在比对结果中同时还发现一个19bp的短序列重复,该重复序列在bkt的cDNA和基因组DNA上都发生了多次重复,推测在BKT的表达调控中可能具有一定功能。另外,在序列比对过程中还发现本实验所获得的cDNA和基因组DNA序列与前人报道的cDNA序列之间都存在多处单碱基差异和19bp的短序列差异。 展开更多
关键词 雨生红球藻(Haematococcus pluvialis) β-胡萝卜素酮化酶}cDNA 基因组DNA 克隆 序列分析
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