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应用荧光定量PCR技术快速定量检测猪瘟病毒 被引量：24
1
作者 温国元 万超 +1 位作者 潘兹书 张楚瑜 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期746-750,共5页
采用荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行快速定量检测.实验证明,该方法的检测灵敏度可达10拷贝/μL,对于不同毒株以及各种组织样品检测结果均为阳性.通过该方法与RT PCR、nPCR的比较,发现该方法检测灵敏度比RT PCR高100倍,与nPCR具有相同的... 采用荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行快速定量检测.实验证明,该方法的检测灵敏度可达10拷贝/μL,对于不同毒株以及各种组织样品检测结果均为阳性.通过该方法与RT PCR、nPCR的比较,发现该方法检测灵敏度比RT PCR高100倍,与nPCR具有相同的灵敏度,并且该方法避免了常规PCR电泳检测所带来的高污染率.因此,该方法以其快速、灵敏、低污染率的优点,会在猪瘟的早期检测及预防、控制上起到重要作用. 展开更多
关键词 猪瘟病毒 荧光定量PCR 定量检测
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猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备 被引量：25
2
作者 侯强 彭伍平 +1 位作者 孙元 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-5,共5页
利用RT-PCR扩增了猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗株(C株)的E2蛋白主要抗原区(tE2)编码区,并定向克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组表达载体pPROEX-tE2,将其转化大肠杆菌DH5α菌株,经IPTG诱导,tE2蛋白获得高效表达;经检测,该重组蛋白能被... 利用RT-PCR扩增了猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗株(C株)的E2蛋白主要抗原区(tE2)编码区,并定向克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组表达载体pPROEX-tE2,将其转化大肠杆菌DH5α菌株,经IPTG诱导,tE2蛋白获得高效表达;经检测,该重组蛋白能被CSFV C株抗血清识别。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株稳定分泌抗tE2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测,该单克隆抗体能够与CSFV C株和石门株以及杆状病毒表达的重组E2蛋白发生特异性反应。推测,该单克隆抗体是针对CSFV E2蛋白的一个保守线性表位。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 原核表达 单克隆抗体
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云南地区部分猪场猪呼吸道疾病综合症(PRDC)患病猪群中PRRSV,PCV-2,CSFV,PRV混合感染调查 被引量：25
3
作者 舒相华 尹革芬 +4 位作者 杨志雷 宋春莲 李文贵 潘伟荣 刘旭川 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期54-58,共5页
针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型... 针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型PCV-2特异抗体。结果表明:各季节和不同生长阶段猪群存在一种及两种以上的病毒混合感染,四重感染相对较少。从全年看单独感染占39.10%,PCV-2感染率最高,其次是PRV,PRRSV和CSFV;二重感染占26.13%,以PCV-2+PRV最常见,其次是PCV-2+PRRSV、PRV+PRRSV;三重感染占8.05%,PCV-2+PRRSV+PRV最常见;有四重感染出现,仅占1.57%。从季节来看,春季和夏季混合感染最高,分别为76.53%和60.74%,冬季和秋季的混合感染率分别为59.50%和53.55%。从年龄和性别看,育肥猪的混合感染率高于仔猪,分别为68.66%和61.11%,种公猪的感染率高于母猪,分别为70.00%和55.51%。说明4种病毒有单独感染或混合感染,推测其中PCV-2在混合感染中可能充当免疫抑制的角色,混合感染使PRDC症状更明显,死亡率增高。 展开更多
关键词 猪呼吸道疾病综合征 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒
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猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用 被引量：22
4
作者 赵耘 秦玉明 +4 位作者 张广川 赵启祖 宁宜宝 戴志红 谢磊 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第2期3-6,共4页
猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。本研究通过设计4对针对这4种病毒的特异引物建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:其... 猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。本研究通过设计4对针对这4种病毒的特异引物建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:其敏感性可达到CSFV 10 TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50 CSFV 10TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50。同时具有较好的特异性,对猪瘟病毒石门株、猪瘟病毒兔化弱毒株、PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSV KY 35株及PRRSV B13株6个毒株均能扩增出相应的片段,而BVDV、BDV均未扩增出相应的片段。本方法的建立对于这4种病毒病的早期快速检测具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒 多重PCR
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猪瘟病毒的形态结构与形态发生 被引量：8
5
作者 王镇 闵光伟 +2 位作者 李明义 藤俊琳 丁明孝 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期237-242,共6页
建立了猪瘟病毒 (CSFV)弱毒疫苗Thiverval株 (T株 )与中国兔化弱毒疫苗C株在MPK细胞中的感染模式。使用MPK细胞增殖CSFV ,其病毒滴度明显提高 ,从而为应用电镜超薄切片技术研究猪瘟病毒的形态结构与形态发生提供了可能性。猪瘟病毒呈圆... 建立了猪瘟病毒 (CSFV)弱毒疫苗Thiverval株 (T株 )与中国兔化弱毒疫苗C株在MPK细胞中的感染模式。使用MPK细胞增殖CSFV ,其病毒滴度明显提高 ,从而为应用电镜超薄切片技术研究猪瘟病毒的形态结构与形态发生提供了可能性。猪瘟病毒呈圆形颗粒 ,直径约为 70nm。其内部是电子致密的核心 ,直径约为 40nm ,有时呈六角形 ;外有包膜包裹。在CSFV感染的MPK细胞质中 ,可观察到处于不同发育阶段的子代病毒粒子。此外 ,猪瘟病毒的感染能够引起某些宿主细胞超微结构上的变化。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 超微结构 形态发生 宿主细胞
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猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株在原代牛睾丸细胞中增殖特性的研究 被引量：12
6
作者 王镇 陆宇 丁明孝 《中国病毒学》 CSCD 2000年第2期170-179,共10页
以猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株 (CSFVC株 )为实验材料 ,研究该病毒株在原代牛睾丸细胞中增殖的基本特性与规律。找到了一株能够使用免疫荧光技术进行检测的C株猪瘟病毒 ,并对病毒滴度的测定方法进行了改进 ,发展完善了荧光斑技术 (F PFU... 以猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株 (CSFVC株 )为实验材料 ,研究该病毒株在原代牛睾丸细胞中增殖的基本特性与规律。找到了一株能够使用免疫荧光技术进行检测的C株猪瘟病毒 ,并对病毒滴度的测定方法进行了改进 ,发展完善了荧光斑技术 (F PFU)。使用改进的病毒滴度测定方法 ,对接毒后培养上清中病毒滴度的变化趋势进行检测。在原代牛睾丸细胞中 ,接毒后 5d ,几乎所有的细胞都可被病毒感染 ;释放到培养液中有活性的病毒粒子达到 10 5F PFU/mL以上 ,后维持在该水平。对原代细胞中细胞种类随代次增加的变化趋势进行了观察 ,并对CSFV的增殖特点及生产中出现的一收毒价不稳定、多次收获病毒等现象的机制进行探讨。并对影响猪瘟病毒增殖的因素进行了实验 ,不仅加深了对猪瘟病毒C株在原代牛睾丸细胞中增殖规律的了解 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 弱毒疫苗 C株 病毒增殖 原代细胞
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猪瘟病毒中国标准强毒株——F114株全长cDNA的构建 被引量：5
7
作者 聂玉春 柯叶艳 +1 位作者 陈建国 丁明孝 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期452-456,共5页
应用RT PCR技术 ,分段克隆了猪瘟病毒中国标准强毒株F1 1 4株的全基因组 ,经测序验证 ,用DNAman软件比较分析与其它几个代表毒株的同源性 ,发现与Brescia、Alfort及C株核苷酸序列同源性分别为 96 80 % ,86 0 3%和 95 70 % ,氨基酸序列... 应用RT PCR技术 ,分段克隆了猪瘟病毒中国标准强毒株F1 1 4株的全基因组 ,经测序验证 ,用DNAman软件比较分析与其它几个代表毒株的同源性 ,发现与Brescia、Alfort及C株核苷酸序列同源性分别为 96 80 % ,86 0 3%和 95 70 % ,氨基酸序列同源性分别为 98 54% ,93 33%和 97 41 %。将各段cDNA连接到pGEM T和pBluescriptⅡsk+质粒 ,得到两个亚克隆sk 0 1 64(即sk+质粒中插入片断为 1～ 6441nts,依次类推 )和sk 641 2 2 ,再将两个亚克隆连接成sk 1 2 2 97,即CSFV全长cDNA克隆。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 全长CDNA 序列同源性
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猪瘟和猪蓝耳病病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：18
8
作者 陈甜甜 程福亮 +2 位作者 梁瑾 宿志瑞 范群平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期425-429,共5页
目的建立猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）和猪蓝耳病病毒（Porcine respiratory and reproductivesyndrome virus,PRRSV）多重RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据GenBank中登录的CSFV和PRRSV疫苗株基因组序列... 目的建立猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）和猪蓝耳病病毒（Porcine respiratory and reproductivesyndrome virus,PRRSV）多重RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据GenBank中登录的CSFV和PRRSV疫苗株基因组序列,分别设计针对CSFV和PRRSV的两对引物,建立多重RT-PCR检测方法,并进行敏感性及特异性验证。用建立的多重RT-PCR法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料,并与市售RT-PCR试剂盒的检测结果进行比较;检测病料的部分PCR产物测序后,与9株具有代表性的CSFV毒株和10株具有代表性的PRRSV毒株进行核苷酸序列同源性比对。结果以CSFV和PRRSV混合引物扩增,分别可扩增出286和664 bp的特异性条带。建立的多重RT-PCR检测方法可检出100倍稀释的病毒RNA;该方法可检出CSFV、PRRSV及CSFV与PRRSV混合病毒,而猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Trans-missible gastro-enteritis virus,TGEV）、猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）、猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）和猪伪狂犬病病毒（Porcine pseudorabies virus,PRV）的检测结果均为阴性;该方法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料的结果与市售RT-PCR试剂盒比较,灵敏度达100%;选取的两份CSFV扩增片段与9株具有代表性的CSFV毒株的核苷酸序列同源性在92.3%~98.2%之间,扩增的PRRSV与10株具有代表性的PRRSV毒株的核苷酸序列同源性在94.1%~97.9%之间。结论成功建立了CSFV和PRRSV多重RT-PCR检测方法,为猪瘟和猪蓝耳病的早期诊断及流行病学调查奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪蓝耳病病毒 多重逆转录聚合酶链反应
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猪瘟病毒感染性cDNA克隆的构建及其致病性 被引量：13
9
作者 王毅 吴海祥 +3 位作者 张楚瑜 伊光辉 曹晟 温国元 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期43-47,共5页
为了建立研究猪瘟病毒的技术平台,利用RT PCR技术构建了猪瘟病毒中国石门株(Shimen)的全长有感染性cDNA克隆pT7SM。通过体外转录线性化的pT7SM并将转录的RNA转染至PK 15细胞中,获得了猪瘟病毒粒子。再用间接免疫荧光法测定了其生长曲线... 为了建立研究猪瘟病毒的技术平台,利用RT PCR技术构建了猪瘟病毒中国石门株(Shimen)的全长有感染性cDNA克隆pT7SM。通过体外转录线性化的pT7SM并将转录的RNA转染至PK 15细胞中,获得了猪瘟病毒粒子。再用间接免疫荧光法测定了其生长曲线,通过电镜观察到重组病毒呈球形,具有囊膜结构。进一步把获得的猪瘟病毒粒子感染非免疫实验猪,结果子代病毒与石门株类似,对非免疫实验猪有强烈的致病性,证明该全长cD NA克隆可靠稳定,忠实地保留了石门株病毒的感染性和致病特征。由此为进一步探讨猪瘟病毒的致弱机制及病毒与机体相互作用的机制打下了良好的基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 全长CDNA克隆 体外转录 电镜观测 致病性 RT-PCR 猪瘟 疫苗
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用RT-PCR法对猪瘟病毒检测的研究 被引量：11
10
作者 乔军 陈创夫 +1 位作者 高丰 贾桂珍 《塔里木农垦大学学报》 2001年第4期25-27,共3页
用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取病料细胞总RNA并进行反转录 ,再以此产物为模板对CSFV可疑病料进行了PCR扩增。结果用CSFV特异性引物扩增能得到与设计片段大小相同的产物 (2 72bp) ,并且不扩增猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒的核酸 ;... 用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取病料细胞总RNA并进行反转录 ,再以此产物为模板对CSFV可疑病料进行了PCR扩增。结果用CSFV特异性引物扩增能得到与设计片段大小相同的产物 (2 72bp) ,并且不扩增猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒的核酸 ;其敏感性要高于猪瘟荧光抗体染色法、猪瘟强弱毒酶标单克隆抗体染色法和电镜负染法 ,为临床上猪瘟的诊断提供了一个快速、有效的诊断方法。 展开更多
关键词 RT-PCR法 猪瘟病毒 检测 诊断 异硫氰酸胍-酚-仿一步抽提法
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抗猪瘟病毒NS3(p80)蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定 被引量：14
11
作者 鲁絮 张彦明 +5 位作者 郑增忍 穆杨 龚振华 李葳 徐浩 余欣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期464-468,共5页
在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达猪瘟病毒石门株NS3基因部分功能片段,以纯化的重组NS3(p80)蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选及3次连续克隆化获得了4株可分泌抗NS3单抗的杂交瘤细胞(2G7,2F11,5D2... 在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达猪瘟病毒石门株NS3基因部分功能片段,以纯化的重组NS3(p80)蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选及3次连续克隆化获得了4株可分泌抗NS3单抗的杂交瘤细胞(2G7,2F11,5D2和6F11),通过小鼠体内诱生法制备腹水,并对杂交瘤细胞和单克隆抗体的特性进行鉴定。结果表明,杂交瘤细胞染色体正常,抗体分泌稳定,单抗效价高,亲和力各不相同,Ig亚类鉴定均为IgG1。Westernblot分析证明4株单抗均能与原核表达的NS3蛋白特异性结合,6F11株与真核表达的NS3蛋白有较强的特异性反应。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 NS3基因 表达 蛋白纯化 单克隆抗体
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猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立 被引量：13
12
作者 杨利峰 杨建民 +2 位作者 周向梅 彭红 赵德明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期292-295,共4页
将RT-PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,先建立猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的RT-PCR方法,用地高辛标记RT-PCR产物;再建立CSFV的PCR-ELISA方法,用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记... 将RT-PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,先建立猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的RT-PCR方法,用地高辛标记RT-PCR产物;再建立CSFV的PCR-ELISA方法,用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记的PCR产物,最后进行免疫显色得出结果。试验主要对RT-PCR ELISA的各种反应条件进行了优化,确定了1mg/L的链亲和素、50μg/L生物素标记的探针、1∶3000抗地高辛的过氧化物酶、37℃杂交2h等为最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测高100倍以上,克服了组织样品中CSFV含量少而难以检测的困难,为猪瘟的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 RT—PCR ELISA 诊断
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猪瘟病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：12
13
作者 李健 熊炜 +2 位作者 方雪恩 王巧全 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1033-1038,共6页
利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),建立了猪瘟病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果,根据猪瘟病毒5′端非编码区的一段保守序列设计的LAMP引物能够在65℃下1h内实现目标核酸区段的大量扩增,检测结果可直... 利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),建立了猪瘟病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果,根据猪瘟病毒5′端非编码区的一段保守序列设计的LAMP引物能够在65℃下1h内实现目标核酸区段的大量扩增,检测结果可直接用肉眼判断。结果表明,该检测体系具有极高的特异性,只能检测到目标病毒,与其他类似病毒如猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的核酸等无交叉反应,可检测到1×10-3稀释度的目标病毒核酸量,比普通RT-PCR的灵敏性高10倍。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 逆转录环介导等温核酸扩增 检测
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猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及其初步应用 被引量：9
14
作者 孙世琪 郭慧琛 +6 位作者 尚佑军 魏旭文 靳野 马军武 韩雪清 刘湘涛 谢庆阁 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第9期3-6,共4页
建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测... 建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测出 35 0 μL1∶10 0 (相当于 3.5mg)的兔脾组织悬液中的C株CSFV ,特异性强 ,避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT PCR和微量杂交系统的条件优化 ,该方法用于检测C株兔脾组织毒、细胞适应毒和野毒感染的猪组织毒样品 。 展开更多
关键词 猪瘟 RT-PCRELISA 诊断方法 应用 生物素标记 微量杂交系统
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基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：8
15
作者 孙元 夏照和 +2 位作者 梁冰冰 彭伍平 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期315-319,共5页
根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法... 根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化。确定的ELISA最佳条件为:抗原包被浓度为2μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释。确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35。将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%。表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 密码子优化 杆状病毒表达系统 间接ELISA
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应用免疫金银技术检测猪瘟病毒兔化弱毒株感染细胞 被引量：4
16
作者 王镇 张海 丁明孝 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期356-359,共4页
在应用免疫金银染色技术成功地对猪瘟病毒弱毒疫苗Thiveral株（CSFV．T株）感染的PK－15细胞进行检测的基础上，通过改进免疫金银反应的条件，进一步提高了免疫金银法的检测灵敏度和特异性。目前已将该技术应用到对猪瘟病毒兔化弱毒疫... 在应用免疫金银染色技术成功地对猪瘟病毒弱毒疫苗Thiveral株（CSFV．T株）感染的PK－15细胞进行检测的基础上，通过改进免疫金银反应的条件，进一步提高了免疫金银法的检测灵敏度和特异性。目前已将该技术应用到对猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株（CSFVC株）感染细胞的检测，获得较为满意的实验结果。免疫金银染色技术的应用为研究CSFV在细胞中增殖的规律提供更为灵敏的检测手段，并且可望为猪瘟疫苗生产中的滴度测定提供一种简便有效的手段。 展开更多
关键词 免疫金银染色 IGSS 猪瘟病毒 兔化弱毒株 csfv
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RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗 被引量：10
17
作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 黄秀琴 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期338-343,共6页
【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列... 【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(csfv) 猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) RT-LAMP 浊度 特异性 敏感度
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牛病毒性腹泻病毒感染对猪瘟免疫的影响 被引量：10
18
作者 张慧英 《四川畜牧兽医》 2010年第10期21-22,25,共3页
猪瘟病毒(CSFV)与同属的牛病毒性腹泻病病毒(BVDV)同源性较高,抗原性上有交叉。本次调查对368份猪瘟免疫猪血清样本进行BVDV抗原检测,其中7份呈阳性,阳性率1.90%。对7份BVDV阳性血清采用ELISA和IHA两种方法检测猪瘟(CSFV)抗体水平,抗体... 猪瘟病毒(CSFV)与同属的牛病毒性腹泻病病毒(BVDV)同源性较高,抗原性上有交叉。本次调查对368份猪瘟免疫猪血清样本进行BVDV抗原检测,其中7份呈阳性,阳性率1.90%。对7份BVDV阳性血清采用ELISA和IHA两种方法检测猪瘟(CSFV)抗体水平,抗体合格率偏低,两者的结果符合率为71%。研究表明:BVDV在一定程度上干扰了猪瘟疫苗的免疫效果,影响抗体水平。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 猪瘟 免疫抗体
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种公猪精液中猪瘟和蓝耳病病毒混合感染的快速检测 被引量：10
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作者 周斌 吴增坚 +1 位作者 贾赟 陈溥言 《畜牧与兽医》 北大核心 2005年第5期1-3,共3页
参考GenBank公布的猪蓝耳病病毒(PRRSV)VL 2332株、LV株以及猪瘟兔化弱毒(CSFV)C株的基因序列,各设计合成了一对引物,建立了在相同PCR扩增条件下能同时检测PRRSV和CSFV的RT-PCR方法.对2003～2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等... 参考GenBank公布的猪蓝耳病病毒(PRRSV)VL 2332株、LV株以及猪瘟兔化弱毒(CSFV)C株的基因序列,各设计合成了一对引物,建立了在相同PCR扩增条件下能同时检测PRRSV和CSFV的RT-PCR方法.对2003～2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的17个大中型猪场送检的186份种公猪精液进行了检测,结果18份呈PRRSV阳性,24份呈CSFV阳性,其中有11份为PRRSV和CSFV的混合感染,约占送检精液样品的5.91%.试验结果表明,所建立的RT-PCR方法可用于精液中这2种野毒感染的快速鉴定和分子流行病学调查. 展开更多
关键词 精液 猪瘟病毒 猪蓝耳病病毒 RT—PCR
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猪瘟病毒荧光RT-PCR快速检测方法的建立 被引量：6
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作者 单松华 夏懿 +2 位作者 黄忠荣 周煜 李春阳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期950-954,共5页
以猪瘟病毒5′端非编码区为靶核酸序列设计引物和探针,建立了一步法荧光RT-PCR检测猪瘟病毒。荧光RT-PCR仅检测出猪瘟C株、T株,未能检测出牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪呼吸系统冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒... 以猪瘟病毒5′端非编码区为靶核酸序列设计引物和探针,建立了一步法荧光RT-PCR检测猪瘟病毒。荧光RT-PCR仅检测出猪瘟C株、T株,未能检测出牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪呼吸系统冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、PK-15细胞和牛睾丸原代细胞;对猪瘟病毒T株的扩增反应产物进行了测序分析,与预期序列相符。荧光RT-PCR的检测极限可达到1 TCID50/mL,整个试验流程只需2 h。采用荧光RT-PCR和抗原捕获ELISA同时检测临床病料、猪副产品共207份样本,两种方法的检出率分别为17.4%和13.5%,两者符合率为95.7%(198/207);荧光RT-PCR的检出率高于ELISA,两者差异显著。结果表明,建立的荧光RT-PCR可用于猪产品、临床病料中猪瘟病毒的快速检测。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 荧光RT-PCR 猪产品 检测
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