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色氨酸残基在碳-碳水解酶催化中的关键作用 被引量：2
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作者 杨秀清 沈翀 高冲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期538-545,共8页
碳-碳水解酶(C-C水解酶)作为α/β水解酶超家族中的一员,负责催化环裂产物C-C键的断裂,该反应是细菌降解芳香族化合物途径中的关键步骤.为了解水解酶的催化特性,本文对该酶部分氨基酸进行了定点突变,并对突变体的动力学参数,化学修饰剂... 碳-碳水解酶(C-C水解酶)作为α/β水解酶超家族中的一员,负责催化环裂产物C-C键的断裂,该反应是细菌降解芳香族化合物途径中的关键步骤.为了解水解酶的催化特性,本文对该酶部分氨基酸进行了定点突变,并对突变体的动力学参数,化学修饰剂对突变体活性的影响以及突变体的二级结构进行了测定.各突变体的动力学参数特征为:突变体S110A,H265A和D237A的催化效率为野生型的1/104～1/103;突变体W85A和W219A催化效率分别为野生型的5/18和1/3,而同为色氨酸的突变体,W266A的催化效率只有野生型的1/104.化学修饰剂对突变体S110A,H265A,D237A和W266A的酶活性几乎没有影响;而对突变体W85A和W219A却有较大的影响,修饰后,其相对活性仅为对照的10%～30%.突变体的圆二色谱(CD谱)分析表明,与野生型相比,突变体的二级结构没有发生改变.证明了Ser110,Asp237,His265是2-羟基-6-氧-6-苯基己-2,4-二烯酸水解酶(HOPDA hydrolase,HOPDA水解酶)催化反应所必需的氨基酸,并提出了Trp266在催化反应中也同样起到了非常关键的作用. 展开更多
关键词 色氨酸 碳-碳水解酶 定点突变 化学修饰 圆二色谱(cd谱)
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