囊性纤维化跨膜转运调节体氯离子通道——跨上皮离子转运的多功能引擎(英文) 被引量：11

1

作者 李红宇 蔡志伟 +3 位作者 陈正豪 鞠敏 徐喆 David N.Sheppard 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期416-430,共15页

囊性纤维化跨膜转运调节体(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)是ATP结合转运体超家族(ATP- binding cassette transporter superfamily)的一名特殊成员,因为它是一个具有相当复杂调控机制的氯离子通道。CFTR... 囊性纤维化跨膜转运调节体(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)是ATP结合转运体超家族(ATP- binding cassette transporter superfamily)的一名特殊成员,因为它是一个具有相当复杂调控机制的氯离子通道。CFTR由五个结构域(domain)组成:两个跨膜结构域(membrane-spanning domains,MSDs),两个核苷酸结合域(nucleotide-binding domains,NBDs)和一个特殊的调控域(regulatory domain,RD)。MSDs构成一个低电导(6～12 pS)的阴离子选择性孔道(pore),其形状如同不对称的沙漏,胞外小胞内大,狭窄部分为离子筛。两个NBDs组成头尾相对的二聚体,在二聚体之间的接触面上有两个能和ATP结合的位点(位点1和位点2)。CFTR的门控机制是:ATP分子与位点1和2相互作用促使NBD二聚体的结合与解离,从而引起MSDs的构象发生变化进而使通道孔打开和关闭。RD具有多样化的结构,它含有多个磷酸化共有位点(consensus phosphorylation sites)。RD的磷酸化促进NBDs与ATP的结合,从而使CFTR得以激活。CFTR通过支架蛋白与其它膜受体以及蛋白激酶、磷酸酶形成大分子信号复合体。在复杂的细胞信号系统参与下,CFTR的功能活动在时间和空间上得到精确的调控。此外,CFTR的活动与细胞代谢有紧密联系:CFTR与代谢酶形成大分子复合体,当细胞能量需求增加时,CFTR活动会受到抑制而使细胞能量得以保存。CFTR广泛分布于机体上皮组织,它通过促进水盐转运而控制上皮细胞分泌物的量与组成。值得注意的足,在呼吸道,CFTR还对机体的防御机制起重要作用。CFTR功能失常严重影响跨上皮离子转运,进而引起或加重某些疾病。 展开更多

关键词 ATP结合转运体超家族 囊性纤维化跨膜转运调节体 囊性纤维化跨膜转运调节体相互作用蛋白 囊性纤维 化跨膜转运调节体相关疾病 囊性纤维化病 氯离子通道 跨上皮离子转运 大分子信号复合体 分泌性腹泻

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氯离子通道研究进展 被引量：3

2

作者 刘雅妮 张会然 +3 位作者 赵晨 黄东阳 杜雨薇 张海林 《神经药理学报》 2015年第4期33-42,共10页

氯离子是体内最重要最丰富的阴离子,它进出细胞的过程,除了与氯离子相关的一些转运体主动转运有关外,经过阴离子通道进行转运是重要方式之一。氯离子通道组织分布广泛,参与了众多的生理过程:包括细胞体积的调节、膜电位的稳定性调节、... 氯离子是体内最重要最丰富的阴离子,它进出细胞的过程,除了与氯离子相关的一些转运体主动转运有关外,经过阴离子通道进行转运是重要方式之一。氯离子通道组织分布广泛,参与了众多的生理过程:包括细胞体积的调节、膜电位的稳定性调节、信号转导以及跨上皮运输等。该文重点综述了钙激活氯通道和容积调节氯通道的生理功能及分子基础,简单介绍了电压门控氯通道、囊性纤维跨膜电导转运体及配体门控氯通道。 展开更多

关键词 氯离子 通道 钙激活氯通道 TMEM16A Bestrophin1 容积调节氯通道

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氯离子通道及相关肾病的研究进展

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作者 王烽 曾雪霖 +1 位作者 马晓鹂 黎雨欣 《今日药学》 CAS 2023年第2期106-111,共6页

氯离子通道是一类主要转运氯离子及其他阴离子如NO_(3)^(-)、PO_(4)^(3-)等的蛋白,发挥着细胞信号传导,维持细胞内pH值,调节细胞膜电位和体积、水和电解质分泌等作用。在肾脏,不同的部位分布着不同的氯离子通道,有研究结果表明肾脏中的... 氯离子通道是一类主要转运氯离子及其他阴离子如NO_(3)^(-)、PO_(4)^(3-)等的蛋白,发挥着细胞信号传导,维持细胞内pH值,调节细胞膜电位和体积、水和电解质分泌等作用。在肾脏,不同的部位分布着不同的氯离子通道,有研究结果表明肾脏中的氯离子通道参与了众多生理功能,如浓缩尿液、盐和蛋白的重吸收等,这些氯离子通道蛋白表达异常可引发多种肾脏疾病。本文主要介绍了电压依赖氯通道、囊性纤维跨膜电导调控子和钙激活氯通道的结构、生理功能以及和肾脏的疾病关系。 展开更多

关键词 氯离子 TMEM16A 通道 肾脏疾病

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腹腔注射去甲肾上腺素小鼠心肌组织形态学、容积调节性氯离子通道蛋白3表达变化及其意义 被引量：3

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作者 陈梦青 黄丹 +2 位作者 孙宇 汪帅 李春梅 《山东医药》 CAS 2019年第12期41-43,共3页

目的观察腹腔注射去甲肾上腺素(NE)小鼠心肌组织形态学、容积调节性氯离子通道蛋白3(Cl C-3)表达变化,并探讨其意义。方法将C57BL/6小鼠分为NE组、酚妥拉明(Phe)+NE组、对照组; NE组每天腹腔注射NE(2 mg/kg); Phe+NE组每天先腹腔注射Phe... 目的观察腹腔注射去甲肾上腺素(NE)小鼠心肌组织形态学、容积调节性氯离子通道蛋白3(Cl C-3)表达变化,并探讨其意义。方法将C57BL/6小鼠分为NE组、酚妥拉明(Phe)+NE组、对照组; NE组每天腹腔注射NE(2 mg/kg); Phe+NE组每天先腹腔注射Phe(8 mg/kg),2 h后再腹腔注射NE(2 mg/kg);对照组每天腹腔注射等量生理盐水。所有药物连续注射7 d后,测算各组小鼠心脏指数并观察心肌组织形态学变化,Real-time PCR法检测各组小鼠心肌组织中Cl C-3和心房钠尿肽(ANF) mRNA,Western blotting法检测各组小鼠心肌组织中Cl C-3蛋白。结果 NE组、Phe+NE组、对照组小鼠心脏指数分别为5. 22±0. 46、4. 80±0. 23、4. 61±0. 25,NE组与Phe+NE组、对照组相比,P均<0. 05; NE组小鼠心肌细胞和心肌肌束排列异常,心肌细胞及细胞核异常肥大、变形,细胞核聚集,出现明显的心脏重构、心肌细胞增大现象。NE组、Phe+NE组、对照组小鼠心肌组织中Cl C-3 mRNA的相对表达量分别为0. 50±0. 10、1. 16±0. 38、1. 00±0. 00,ANF mRNA的相对表达量分别为2. 95±1. 78、1. 96±0. 75、1. 00±0. 00,Cl C-3蛋白的相对表达量分别为0. 46±0. 02、0. 68±0. 02、0. 69±0. 04,NE组与Phe+NE组、对照组相比,P均<0. 05。结论 NE可诱导小鼠心肌肥厚,其机制可能与其抑制Cl C-3 mRNA和蛋白的表达有关。 展开更多

关键词 心肌肥厚 去甲肾上腺素 氯离子通道 容积调节性氯离子通道蛋白3 酚妥拉明

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氯离子通道在胃癌中的研究进展 被引量：2

5

作者 李云花 刘雪梅 庹必光 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第6期941-944,共4页

胃癌是一种具有高度侵袭性和致命性的恶性肿瘤,其发病率及死亡率呈逐年增高,好发年龄在50岁以上,男女比例约为2∶1。因此明确胃癌的病因与发病机制、寻找早期诊断方法及有效药物靶点显得尤为重要。近年的研究表明,氯离子通道蛋白的异常... 胃癌是一种具有高度侵袭性和致命性的恶性肿瘤,其发病率及死亡率呈逐年增高,好发年龄在50岁以上,男女比例约为2∶1。因此明确胃癌的病因与发病机制、寻找早期诊断方法及有效药物靶点显得尤为重要。近年的研究表明,氯离子通道蛋白的异常表达与肿瘤的发生发展密切相关,氯离子通道的主要功能是调节跨上皮转运、膜电位和细胞免疫应答。氯离子通道异常与胃癌的增殖、凋亡、迁移、侵袭密切相关。本文就氯离子通道蛋白CLIC1、TMEM16A和SLC26A9与胃癌的关系进行一综述。 展开更多

关键词 氯离子通道 胃癌 CLIC1 TMEM16A SLC26A9

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氯通道阻滞剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤致心肌细胞凋亡的作用 被引量：2

6

作者 陈涛 雷兰萍 +1 位作者 周和平 金振晓 《中国体外循环杂志》 2011年第2期85-88,共4页

目的本研究应用大鼠在体心肌缺血再灌注损伤(I/RI)动物模型,观察氯通道阻滞剂DIDS(4,4'-disothiocya-nostibibene-2,2'-disulfonic acid)对心肌细胞凋亡的作用以及与磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路可能存在的相互... 目的本研究应用大鼠在体心肌缺血再灌注损伤(I/RI)动物模型,观察氯通道阻滞剂DIDS(4,4'-disothiocya-nostibibene-2,2'-disulfonic acid)对心肌细胞凋亡的作用以及与磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路可能存在的相互作用,明确DIDS心肌保护作用的可能机制。方法 75只大鼠随机分成5组:假手术组,I/RI组,I/RI+DIDS(14 mg/kg),I/RI+LY294002(PI3K-Akt特异性阻断剂),I/R+DIDS+LY294002组。TTC染色检测心肌梗死范围;TUNEL法测定细胞凋亡;Caspase-3试剂盒检测caspase-3活性;免疫印迹法检测p-Akt水平。结果与I/R组比较DIDS可以减少心肌梗死范围(各组n=4,P<0.01),可以明显抑制心肌细胞凋亡(各组n=5,P<0.01),降低凋亡效应子caspase-3活性(各组n=5,P<0.01),提高I/RI心肌的p-Akt水平(各组n=5,P<0.01),LY294002可以部分阻断这些作用,LY294002自身并无减少心肌梗死范围的作用。结论氯离子通道阻滞剂DIDS对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用,其作用部分是通过PI3K/Akt信号通路来实现的。 展开更多

关键词 缺血再灌注损伤 氯离子通道 凋亡 PI3K/AKT

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阻断氯离子通道对荷Hep-2细胞瘤裸鼠移植瘤生长、细胞凋亡及Oct4和CD133蛋白表达的影响 被引量：2

7

作者 余文发 赵玉林 +3 位作者 王萍 鲁保才 马慧敏 王慧敏 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2014年第3期312-315,共4页

目的:研究阻断氯离子通道对荷Hep-2细胞瘤裸鼠移植瘤的抑制作用及可能机制。方法:以Hep-2细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,应用不同浓度(0、10、50、100和150μmol/L)的氯离子通道阻断剂(NPPB)处理4周,每组6只。观察移植瘤体积的变化,采用TU... 目的:研究阻断氯离子通道对荷Hep-2细胞瘤裸鼠移植瘤的抑制作用及可能机制。方法:以Hep-2细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,应用不同浓度(0、10、50、100和150μmol/L)的氯离子通道阻断剂(NPPB)处理4周,每组6只。观察移植瘤体积的变化,采用TUNEL染色检测移植瘤组织细胞凋亡情况,免疫组化法检测移植瘤组织Oct4和CD133蛋白的表达。结果:不同浓度的NPPB组间移植瘤体积、细胞凋亡指数及Oct4和CD133蛋白的阳性表达率差异均有统计学意义(F=7.361、126.385,P均<0.05);与对照组(0μmol/L NPPB组)相比,50、100和150μmol/L NPPB组移植瘤体积减小,细胞凋亡指数升高,Oct4和CD133蛋白的阳性表达率降低(P<0.05或0.005)。结论:体内阻断氯离子通道可抑制荷Hep-2细胞瘤裸鼠移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与降低Oct4和CD133蛋白的表达有关。 展开更多

关键词 喉肿瘤 氯离子通道 OCT4 CD133 裸鼠 HEP-2

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电压门控氯通道ClC蛋白突变体及相关疾病研究进展 被引量：1

8

作者 张海峰 柏志全 +1 位作者 陈丽新 王立伟 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第9期999-1001,共3页

ClC是一组介导氯离子跨膜转运的蛋白质,参与细胞多种生理及病理过程。基因突变形成的异常ClC蛋白影响离子通道门控特性,从而扰乱氯离子的正常跨膜转运,可导致先天性肌强直、先天性癫痫、Bartter综合征、Dents病、视网膜退化病及骨硬化... ClC是一组介导氯离子跨膜转运的蛋白质,参与细胞多种生理及病理过程。基因突变形成的异常ClC蛋白影响离子通道门控特性,从而扰乱氯离子的正常跨膜转运,可导致先天性肌强直、先天性癫痫、Bartter综合征、Dents病、视网膜退化病及骨硬化病等多种疾病。 展开更多

关键词 氯离子 氯离子通道 基因突变

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氯离子通道蛋白在卵巢癌发生及发展中作用的研究进展 被引量：1

9

作者 陈国通 张颖 《中华实用诊断与治疗杂志》 2021年第3期314-316,共3页

卵巢癌早期症状不典型,多数患者明确诊断时已处于中晚期,病死率较高。氯离子通道相关蛋白如钙离子激活氯离子通道蛋白1、细胞内氯离子通道蛋白1等在维持细胞功能、细胞膜两侧电位和细胞状态中发挥重要作用。氯离子通道蛋白过表达可促进... 卵巢癌早期症状不典型,多数患者明确诊断时已处于中晚期,病死率较高。氯离子通道相关蛋白如钙离子激活氯离子通道蛋白1、细胞内氯离子通道蛋白1等在维持细胞功能、细胞膜两侧电位和细胞状态中发挥重要作用。氯离子通道蛋白过表达可促进卵巢癌的发生、发展,其可作为卵巢癌诊断的新型肿瘤标志物、治疗靶点。本文就氯离子通道蛋白在卵巢癌发生、发展中作用的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 卵巢癌 氯离子通道 肿瘤标志物

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TMD2前断裂CFTR翻译后的连接及氯离子通道功能 被引量：1

10

作者 朱甫祥 宫贤弟 +3 位作者 刘泽隆 杨树德 屈慧鸽 迟晓艳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1710-1716,共7页

CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病——囊性纤维化(CF)。利用split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术的真核细胞双载体转CFTR基因,旨在研究翻译后水平CFTR的连接,以及由其建立的氯离子通道功能。于CFTR膜内第2个跨膜结构域(... CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病——囊性纤维化(CF)。利用split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术的真核细胞双载体转CFTR基因,旨在研究翻译后水平CFTR的连接,以及由其建立的氯离子通道功能。于CFTR膜内第2个跨膜结构域(TMD2)前的Glu838密码子后将其cDNA断裂为N端和C端两部分,与具有蛋白质反式剪接作用的split Ssp DnaB intein编码序列融合,分别插入到载体pEGFP-N1和pEYFP-N1,构建一对真核表达载体pEGFP-NInt和pEYFP-IntC。用脂质体将这对载体共转染至幼年仓鼠肾细胞(BHK),瞬时表达实验用Western blotting观察CFTR蛋白质的连接,并用膜片钳技术记录Cl-通道电流。结果显示,基因共转染细胞呈现完整的CFTR蛋白条带,膜片钳记录到全细胞Cl-电流和单个Cl-通道开放活性。结果表明split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术可用于双载体共转移CFTR基因,为CF基因治疗应用双腺相关病毒载体(AAV)转运CFTR基因,克服AAV的容量限制提供了依据。 展开更多

关键词 CFTR Cl-通道 SPLIT SSP DNAB INTEIN 蛋白质反式剪接 双载体基因转移

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Poly(A)^+mRNA翻译产生的GABA受体-氯离子通道复合体 被引量：1

11

作者 倪燕 孙曼霁 周廷冲 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期81-86,共6页

采用生化药理学方法首次在注射了胚鸡脑poly(A)^+mRNA的非洲爪蟾卵母细胞表面检测到GABA受体复合体,从生化角度证实了移植GABA受体、安定受体的结合部位及其功能部位氯离子通道的存在。注射Barth液和poly(A)RNA的卵母细胞不能表达此受... 采用生化药理学方法首次在注射了胚鸡脑poly(A)^+mRNA的非洲爪蟾卵母细胞表面检测到GABA受体复合体,从生化角度证实了移植GABA受体、安定受体的结合部位及其功能部位氯离子通道的存在。注射Barth液和poly(A)RNA的卵母细胞不能表达此受体复合体。放射性配体结合实验中,〔~3H〕FNZP终浓度高于0.6nmol/L时,结合趋于饱和,K_D=1.17nmol/L,B_(max)=1.5fmol/cell。此结合可被过量的氟安定抑制,而不受QNB的影响。蝇蕈醇(20μmol/L),内源性GABA受体激动剂(19μg/μl),苯巴比妥(500μmol/L)可以增强移植安定受体与〔~3H〕FNZP的结合。GABA(2μmol/L)及低浓度的印防己毒素(50μmol/L)对结合无影响,较高浓度(125μmol/L)的印防己毒素对结合有抑制作用。 展开更多

关键词 mRNA GABA 受体 氯 离子通道 药理学

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电压门控氯通道3（ClC-3）的生物学作用及其与疾病的关系 被引量：1

12

作者 潘萌 张燕丽 +2 位作者 何惠明 毛勇 段小红 《医学分子生物学杂志》 CAS 2014年第5期274-277,共4页

ClC-3属于电压门控氯通道家族，存在于细胞膜和细胞质，以及某些肿瘤细胞的细胞核内，高表达于中枢神经系统、肾脏和肠道。ClC-3参与离子转运、容积调节、免疫应答、细胞迁移、增殖、分化、凋亡等生理生物学活动，近年发现ClC-3与肿瘤... ClC-3属于电压门控氯通道家族，存在于细胞膜和细胞质，以及某些肿瘤细胞的细胞核内，高表达于中枢神经系统、肾脏和肠道。ClC-3参与离子转运、容积调节、免疫应答、细胞迁移、增殖、分化、凋亡等生理生物学活动，近年发现ClC-3与肿瘤、糖尿病等疾病的发生密切相关。 展开更多

关键词 氯离子通道 CLC-3 特性 功能 疾病

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广西地区一家系先天性肌强直的临床资料和基因测定

13

作者 廖海羚 王进 +2 位作者 薛丽虹 周家彬 黄坚毅 《中国临床神经科学》 2013年第4期429-432,437,共5页

目的探讨先天性肌强直(MC)一家系的临床特点及CLCN1基因部分外显子位点突变的情况。方法收集广西壮族自治区1例MC患者的临床及家系资料,提取家系成员和对照组(无血缘关系的健康体检者6名)的外周静脉血DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增部分... 目的探讨先天性肌强直(MC)一家系的临床特点及CLCN1基因部分外显子位点突变的情况。方法收集广西壮族自治区1例MC患者的临床及家系资料,提取家系成员和对照组(无血缘关系的健康体检者6名)的外周静脉血DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增部分CLCN1基因,测定该基因第3、5、8、13、14、15、16号外显子序列,并对突变位点进行分析。结果 MC患者的6名家系和对照组成员的PCR扩增凝胶电泳分析表明,同一引物对应各样本条带均无显著差异;CLCN1基因被测序的第3、5、8、13、14、15、16号外显子序列均未发现有突变位点。结论该MC患者及家系中患者的MC致病基因位点未位于CLCN1基因这7个外显子序列上,需要对CLCN1基因全外显子序列进行检测分析。 展开更多

关键词 先天性肌强直 遗传 氯离子通道 基因 突变

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氯离子通道蛋白及β-肌动蛋白基因在人胃癌组织中的表达 被引量：3

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作者 王妍 周建奖 +3 位作者 谢渊 赵艳 陈娴 李毅 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期201-204,共4页

目的:研究Hp(Helicobacter pylori,Hp)感染在胃癌发生发展中的作用。方法:运用实时定量PCR法检测氯离子通道蛋白基因(Chloride ion channel protein,CICP)及β-肌动蛋白基因在50例人胃癌组织的表达,并分析其表达与临床病理特征和胃癌组... 目的:研究Hp(Helicobacter pylori,Hp)感染在胃癌发生发展中的作用。方法:运用实时定量PCR法检测氯离子通道蛋白基因(Chloride ion channel protein,CICP)及β-肌动蛋白基因在50例人胃癌组织的表达,并分析其表达与临床病理特征和胃癌组织中Hp感染状态的关系。结果:两个基因在人胃癌组织及淋巴结组织的表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。氯离子通道蛋白基因的表达与胃癌患者pTNM分期及患者生存期相关(P<0.05),而β-肌动蛋白基因的表达与pTNM分期及淋巴结转移相关(P<0.05);人胃癌组织中Hp的感染与氯离子通道蛋白及β-肌动蛋白基因的表达上调相关(P<0.05)。结论:Hp的感染可以上调胃癌组织中氯离子通道蛋白及β-肌动蛋白基因的表达,检测这两个基因的表达对预测胃癌患者的预后有一定作用。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 胃癌氯离子通道蛋白 Β-肌动蛋白

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容积敏感性外向整流氯离子通道的调节机制及药理学探讨 被引量：3

15

作者 杨磊 王晓明 《中国药业》 CAS 2014年第3期1-3,共3页

氯离子通道存在于各种细胞,并对细胞功能产生重要影响。其中容积敏感性氯离子通道不仅参与细胞容积平衡及调节细胞的电活动,而且在细胞凋亡中发挥着重要作用。随着新药研发的迅猛发展,针对氯离子通道的中药单体研究也成为当今的热点。... 氯离子通道存在于各种细胞,并对细胞功能产生重要影响。其中容积敏感性氯离子通道不仅参与细胞容积平衡及调节细胞的电活动,而且在细胞凋亡中发挥着重要作用。随着新药研发的迅猛发展,针对氯离子通道的中药单体研究也成为当今的热点。该文根据氯离子通道的研究进展,从研究基本情况、通道特性、调节机制及生理功能、相关中药单体等几方面介绍了容积调节性氯离子通道。 展开更多

关键词 容积调节性氯离子通道 细胞凋亡 调节性容积减少 中药单体

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双载体断裂CFTR基因转移及翻译后的连接和功能 被引量：3

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作者 朱甫祥 刘泽隆 +1 位作者 屈慧鸽 迟晓艳 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期60-65,共6页

囊性纤维化跨膜电导调节体(CFTR)基因突变导致一种常染色体隐性遗传病囊性纤维化(CF),利用腺辅助病毒(AAV)载体转运CFTR基因的基因疗法受到AAV载体容量的限制。本文采用intein的蛋白质反式剪接技术,以双载体转运CFTR基因,研究了于其调... 囊性纤维化跨膜电导调节体(CFTR)基因突变导致一种常染色体隐性遗传病囊性纤维化(CF),利用腺辅助病毒(AAV)载体转运CFTR基因的基因疗法受到AAV载体容量的限制。本文采用intein的蛋白质反式剪接技术,以双载体转运CFTR基因,研究了于其调节结构域(R)断裂成两部分的CFTR基因翻译后的连接及其产生的Cl-通道功能。将人CFTRcDNA于R结构域的Ser712密码子前断裂,构建一对融合SspDna Bintein编码序列的真核表达载体。将这对载体共转染培养的幼年仓鼠肾(BHK)细胞,通过瞬时表达,全细胞和单通道膜片钳记录Cl-电流,并用Westernblotting观察CFTR蛋白的剪接。结果表明,共转染细胞显示较高的全细胞Cl-电流和单个Cl-通道开放活性,说明CFTR的Cl-通道功能的恢复,用CFTR特异性抗体进行的细胞总蛋白Westernblotting显示有完整的CFTR蛋白条带形成,表明intein可有效连接翻译后的两部分CFTR蛋白。结果提示,蛋白质剪接技术可有效用于双载体系统转运CFTR基因,为进一步应用双AAV载体转运CFTR基因的CF基因治疗研究提供了实验依据。 展开更多

关键词 蛋白质反式剪接 囊性纤维化跨膜电导调节体基因 氯离子通道 双载体系统

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东亚钳蝎氯离子通道毒素BmK CTa在大肠杆菌中的异源表达及其对宿主菌增殖的影响 被引量：2

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作者 殷丽天 付月君 +1 位作者 梁爱华 殷国荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期209-212,共4页

目的在大肠杆菌中异源表达东亚钳蝎氯离子通道毒素BmK CTa,并观察其对宿主菌增殖的影响。方法构建BmK CT基因原核表达质粒pExSecI-rBmK CTa,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。光密度法... 目的在大肠杆菌中异源表达东亚钳蝎氯离子通道毒素BmK CTa,并观察其对宿主菌增殖的影响。方法构建BmK CT基因原核表达质粒pExSecI-rBmK CTa,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。光密度法检测含不同质粒的大肠杆菌BL21(DE3)及空菌在37℃,LB液体培养基中的生长速率。结果重组原核表达质粒pExSecI-rBmK CTa经PCR、双酶切和测序证明构建正确。目的蛋白的表达量占全菌总蛋白的19.94%,为可溶性表达,且具有良好的反应原性。rBmK CTa的异源表达显著抑制了大肠杆菌在对数生长期的增殖。结论rBmK CTa在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,且对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用。提示BmK CT可能特异性地作用于宿主菌的氯离子通道,对原核生物的氯离子通道有抑制作用。 展开更多

关键词 东亚钳蝎 氯离子通道毒素 BmKCT 宿主菌 细胞增殖

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氯离子通道膜蛋白内部离子输运的动力学模拟

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作者 于涛 胡雄飞 +2 位作者 王哲 向泽雨 王鑫 《济南大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第6期718-722,731,共6页

为了方便、直观地研究氯离子通道膜蛋白内部氯离子输运过程的动力学性质,利用全原子分子动力学模拟方法对大肠杆菌氯离子通道膜蛋白的蛋白质-膜-水溶液系统进行能量最小化和平衡模拟,并对氯离子在通道中输运过程的受力进行拉伸分子动力... 为了方便、直观地研究氯离子通道膜蛋白内部氯离子输运过程的动力学性质,利用全原子分子动力学模拟方法对大肠杆菌氯离子通道膜蛋白的蛋白质-膜-水溶液系统进行能量最小化和平衡模拟,并对氯离子在通道中输运过程的受力进行拉伸分子动力学模拟计算。结果表明:平衡模拟约40 ns后,膜蛋白结构逐步达到热力学平衡态;通道内部中间结合位点氯离子与周围氨基酸相互作用最强,稳定性最好;氯离子输运过程中主要受到通道尺寸影响,通道宽处受力小,通道窄处受力大,其中靠近外部结合位点处通道最窄,氯离子所受拉力最大,约为300 pN。 展开更多

关键词 氯离子通道膜蛋白 分子动力学模拟 拉伸分子动力学 离子输运

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氯离子通道蛋白-3在胶质瘤免疫逃逸中的作用及其机制

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作者 邓杰 廖凌骁 +1 位作者 廖勇仕 王兵 《临床神经外科杂志》 CAS 2019年第2期181-184,共4页

近些年来免疫逃逸在肿瘤发生、发展中所起的作用受到越来越多学者的关注。胶质瘤起源于神经上皮组织,是最常见的原发性颅内恶性肿瘤,其复发率高、预后差。究其原因,高度侵袭性和免疫逃逸是导致胶质瘤患者预后不良的原因之一。氯离子通... 近些年来免疫逃逸在肿瘤发生、发展中所起的作用受到越来越多学者的关注。胶质瘤起源于神经上皮组织,是最常见的原发性颅内恶性肿瘤,其复发率高、预后差。究其原因,高度侵袭性和免疫逃逸是导致胶质瘤患者预后不良的原因之一。氯离子通道蛋白-3(chloride channel-3,Cl C-3)作为氯通道家族一员,在胶质瘤中高表达并广泛参与细胞容积调节、增殖、迁移及凋亡等多种生理过程;但其是否介导胶质瘤的免疫逃逸目前未见报道。 展开更多

关键词 氯离子通道蛋白-3 胶质瘤 免疫逃逸

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不结球白菜氯离子通道蛋白ClC-d基因的克隆及表达分析

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作者 赵瑞丽 钟凤林 +3 位作者 林义章 高世超 叶丽萍 林琳琳 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期23-30,共8页

根据从不结球白菜中获得的与铜胁迫相关的氯离子通道蛋白基因ClC-d的TDF片段设计引物,运用RACE技术克隆出具有完整阅读框的不结球白菜氯离子通道蛋白基因ClC-d,该基因全长2 752bp,开放阅读框为2 376bp,编码792个氨基酸,分子量为87.06kD... 根据从不结球白菜中获得的与铜胁迫相关的氯离子通道蛋白基因ClC-d的TDF片段设计引物,运用RACE技术克隆出具有完整阅读框的不结球白菜氯离子通道蛋白基因ClC-d,该基因全长2 752bp,开放阅读框为2 376bp,编码792个氨基酸,分子量为87.06kD,理论等电点为8.35,为碱性蛋白。结构分析表明:该蛋白含有1个电压门控的氯离子通道和2个CBS结构域。进化树分析显示,不结球白菜氯离子通道蛋白基因ClC-d推导的氨基酸序列与拟南芥氯离子通道蛋白基因的相似度高达100%,属于ClC类氯离子通道蛋白。RT-PCR结果表明在铜胁迫下该基因表达量增加,处理10d时达到最高,推测其可能参与对铜胁迫的应答反应。本研究结果有助于进一步研究该基因在不结球白菜逆境应答中的作用及其作用机制。 展开更多

关键词 不结球白菜 氯离子通道蛋白 RACE RT-PCR

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