期刊文献+
共找到13篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
谷氨酸棒杆菌10147基因组中启动子活性片段的克隆与分析 被引量:8
1
作者 刘桂明 赵智 +2 位作者 张英姿 王宇 丁久元 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期972-977,共6页
【目的】获得谷氨酸棒杆菌10147基因组中具有启动子活性片段的结构序列,为构建表达载体做准备。【方法】利用启动子探测载体pAKC6,采用鸟枪法克隆经过限制性内切酶Sau3A I完全酶切的谷氨酸棒杆菌10147染色体DNA片段,并测定pAKC6上报告... 【目的】获得谷氨酸棒杆菌10147基因组中具有启动子活性片段的结构序列,为构建表达载体做准备。【方法】利用启动子探测载体pAKC6,采用鸟枪法克隆经过限制性内切酶Sau3A I完全酶切的谷氨酸棒杆菌10147染色体DNA片段,并测定pAKC6上报告基因编码的氯霉素乙酰转移酶(CAT)的比活力,以筛选有启动子功能的片段。【结果】共克隆到30个具有启动子功能的片段。其中有3个插入片段启动的氯霉素乙酰转移酶比活力大于24 U/mg,插入片段F57启动的CAT比活力为32.50 U/mg;而插入有启动子Ptrc的阳性对照的CAT比活力为26.33 U/mg。【结论】获得3个DNA插入片段具有与已知启动子Ptrc相当的启动活性,这些片段可以用于构建谷氨酸棒杆菌表达载体。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 启动子探测载体 启动子 氯霉素乙酰转移酶
原文传递
Construction of transgenic mice producing CAT to milk by co-injection of two overlapping fragments of bovine αs1-casein-CAT gene
2
作者 劳为德 刘伟 +2 位作者 成国祥 徐少甫 成勇 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1996年第6期592-599,共8页
Two αs1-casein/chloramphenicol acetyltransferase (CAT) gene constructs overlapping by 3.0kb were constructed and co-injected into murine zygotes. In 9 of 10 lines of transgenic mice obtained, based on analysis of str... Two αs1-casein/chloramphenicol acetyltransferase (CAT) gene constructs overlapping by 3.0kb were constructed and co-injected into murine zygotes. In 9 of 10 lines of transgenic mice obtained, based on analysis of structure and expression of the transgene, accurate extrachromosomal homologous recombination (ECR) between the two overlapping DNA fragments was found. Different levels of CAT activity were detected in milk from these lines. The highest CAT activity was about 25-50μg/mL milk. In some mice. CAT activity was found in salvia gland, thymus and spleen extracts. The high frequency and accuracy of ECR reported here will be applicable in the experimental manipulation for generation of relatively large transgene. 展开更多
关键词 extrachromosomal homologous recombination BOVINE a si-casein GENE chloramphenicol acetyltransferase transgenic mice mammary gland.
原文传递
氯霉素乙酰基转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量:1
3
作者 高晨 侯星生 +3 位作者 张福萍 周伟 袁育康 董小平 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期69-73,共5页
目的 建立氯霉素乙酰基转移酶 (chloramphenicolacetyltransferase ,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列 ,插入到原核表达质粒pGEX 2T中 ,在大肠埃希菌DH5α中诱导表达 ;以纯化的融合蛋白G... 目的 建立氯霉素乙酰基转移酶 (chloramphenicolacetyltransferase ,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列 ,插入到原核表达质粒pGEX 2T中 ,在大肠埃希菌DH5α中诱导表达 ;以纯化的融合蛋白GST CAT为抗原免疫实验用兔 ,得到的CAT抗血清进行生物素标记 ,并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法。构建不同YY1结合位点突变的HPV16LCRCAT报道质粒 ,体外瞬时转染真核细胞 ,提取胞质蛋白 ,以建立的方法进行CAT表达检测。结果 SDS PAGE显示表达的GST CAT融合蛋白相对分子质量约为 5 40 0 0 ;制备的CAT抗血清可有效地识别原核及哺乳动物细胞表达的CAT蛋白 ;在不同启动子及调节序列的控制下 ,利用建立的CAT检测技术证明在瞬时转染的细胞中可诱导 2~ 8倍的CAT表达增强。结论 建立的双抗体夹心ELISA方法可敏感地反映上游序列的启动子活性 ,以及启动子调节序列变化对启动子活性的影响 。 展开更多
关键词 氯霉素乙酰转移酶 病毒抗体 酶联免疫吸附测定 人乳头状瘤病毒
原文传递
随机转座子插入构建甲型副伤寒杆菌启动子文库 被引量:1
4
作者 许泽仰 洪愉 +8 位作者 冯梦蝶 毛普加 赵继华 杨洪文 宋武战 王纪爱 黄芬 井申荣 曾韦锟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期7-11,共5页
目的构建携带氯霉素乙酰转移酶(CAT)的转座子自杀性质粒,通过接合转座获得甲型副伤寒沙门氏菌(副甲)启动子文库。方法 PCR扩增CAT的基因亚克隆至pMD-18T载体,鉴定正确后酶切插入转座子自杀性质粒pSC189,获得新的转座子载体pSC-CAT,将携... 目的构建携带氯霉素乙酰转移酶(CAT)的转座子自杀性质粒,通过接合转座获得甲型副伤寒沙门氏菌(副甲)启动子文库。方法 PCR扩增CAT的基因亚克隆至pMD-18T载体,鉴定正确后酶切插入转座子自杀性质粒pSC189,获得新的转座子载体pSC-CAT,将携带pSC-CAT的供体菌与副甲受体菌进行接合转座,涂布氯霉素平板筛选转座的细菌,以随机筛选出来的细菌基因组为模板,热不对称PCR扩增插入位点侧翼序列,并进行测序、比对分析。结果筛选获得约1000个突变菌,随机挑取6个菌,转座子插入位点的上游分别对应6个可疑启动子区域。结论通过自杀性转座子载体pSC-CAT可高效获得副甲菌启动子文库,为进一步研究副甲菌基因表达与调控奠定了基础。 展开更多
关键词 甲型副伤寒沙门氏菌 氯霉素乙酰转移酶 pSC189 接合转移转座
下载PDF
杜氏盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因启动子驱动氯霉素乙酰转移酶基因的表达及其活性检测
5
作者 张小毅 刘巨源 +1 位作者 邱乐乐 贾岩龙 《新乡医学院学报》 CAS 2012年第6期419-421,共3页
目的为建立稳定高效的盐藻生物反应器寻找合适的内源性启动子驱动表达外源基因。方法克隆鉴定了盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因5'上游区序列并成功构建由盐藻GAPDH基因启动子驱动的氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因表达载体pUC-Gcat... 目的为建立稳定高效的盐藻生物反应器寻找合适的内源性启动子驱动表达外源基因。方法克隆鉴定了盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因5'上游区序列并成功构建由盐藻GAPDH基因启动子驱动的氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因表达载体pUC-Gcat。利用构建的表达载体电击转化盐藻并在含有氯霉素的培养基中筛选转化藻株。随机挑选稳定转化的盐藻藻株进行CAT酶联免疫吸附测定分析。结果获得3株稳定转化的盐藻藻株。聚合酶链式反应鉴定和CAT酶联免疫吸附测定分析结果表明,CAT基因已整合到了转化的盐藻基因组中。结论本研究所克隆的内源性盐藻GAPDH基因启动子能够驱动CAT基因在盐藻中表达。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 氯霉素乙酰转移酶 启动子
下载PDF
c-myc特异性结合序列增强基因表达的研究
6
作者 孙蕾 王会信 周廷冲 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1998年第2期125-128,共4页
目的:c-myc是一种转录因子,它与其特异性结合序列结合后,可增强下游基因的表达。方法:将4个重复拷贝的c-myc顺式反应元件(CACGTG)4、CMV增强子/启动子以及带有CMV增强子/启动子的(CACGTG)4分... 目的:c-myc是一种转录因子,它与其特异性结合序列结合后,可增强下游基因的表达。方法:将4个重复拷贝的c-myc顺式反应元件(CACGTG)4、CMV增强子/启动子以及带有CMV增强子/启动子的(CACGTG)4分别插入报道基因质粒pBLCAT2,得到3种融合报道质粒:pM4CAT2、pCMVCAT、pM4CMVCAT。结果:CAT测活表明,在c-myc高表达的BT325细胞中,pM4CAT2的CAT活性比pBLCAT2增高10.7倍,而在c-myc低表达的HeLa细胞中,仅增高1.1倍;在BT325细胞中,pM4CAT2的CAT活性为pCMVCAT的1/4,而pM4CMVCAT的CAT活性与pCMVCAT相当。结论:连接了(CACGTG)4的TK启动子的转录活性依赖于c-myc的扩增情况。而在(CACGTG)4TK的前面再增加一个强的增强子可进一步增强该启动子的活性。 展开更多
关键词 C-MYC 特异性综合序列 表达 肿瘤细胞 启动子
原文传递
An expressional system of human cytochrome P-450 CYP1A1 gene transcription
7
作者 汪晖 彭仁 《中国药理学报》 CSCD 1998年第5期429-432,共4页
目的:在人HepG2细胞系上,建立人细胞色素P450CYP1A1(CYP1A1)基因转录的表达系统.方法:瞬时转染含人CYP1A1启动子的质粒(pMC63K)、ELISA法测定报道基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的... 目的:在人HepG2细胞系上,建立人细胞色素P450CYP1A1(CYP1A1)基因转录的表达系统.方法:瞬时转染含人CYP1A1启动子的质粒(pMC63K)、ELISA法测定报道基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的含量和酶学测定CYP1A1活性.结果:β萘黄酮2.5μmol·L-1明显增强CAT表达和CYP1A1活性(P<0.01);在2.5-10μmol·L-1范围内,CAT表达随浓度增高而不断增强,而CYP1A1活性则接近最高水平;10μmol·L-1时它们的作用强度分别为对照组的94.3和2.8倍.用这种方法对八种含不同侧链的芥子油苷进行检测的结果表明,芸苔苷的水解产物(而非吲哚3原醇)诱导CYP1A1基因表达. 展开更多
关键词 细胞色素P450 基因转录 表达系统 致癌物 芸苔苷
原文传递
伤寒沙门菌耐药基因检测及定位 被引量:7
8
作者 孙宪锋 刘晓霞 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期198-201,共4页
目的探讨伤寒沙门菌耐药基因的定位。方法32P随机引物标记氯霉素耐药基因为探针,以Slotblot、Southernblot法检测,同时以氯霉素乙酰转移酶活性(CAT)和药敏试验(MIC)作为耐药标志。结果16株伤寒菌... 目的探讨伤寒沙门菌耐药基因的定位。方法32P随机引物标记氯霉素耐药基因为探针,以Slotblot、Southernblot法检测,同时以氯霉素乙酰转移酶活性(CAT)和药敏试验(MIC)作为耐药标志。结果16株伤寒菌中有14株含98600000大质粒。经杂交,其中7株质粒阳性;1株染色体阳性;3株质粒与染色体均为阳性。质粒杂交带位于4.3kb片段,染色体为5.2kb片段。结论伤寒菌耐氯霉素基因大部分位于98600000大质粒上。 展开更多
关键词 伤寒沙门氏菌 抗药性 耐药基因 CAT 药敏试验
原文传递
打靶载体pIJ792的构建 被引量:2
9
作者 张南燕 洪文荣 +1 位作者 林玉双 樊伟明 《海峡药学》 2010年第4期164-166,共3页
目的利用pIJ790,pIJ773和pUC19等基本质粒,构建金色链霉菌基因打靶筛选体系所需质粒pIJ792。方法以质粒pIJ790为模板,将PCR扩增的cat基因片段插入到pMD19-T的多克隆位点,得重组质粒pFD31。EcoRⅠ和HindⅢ双酶切pIJ773,其小片段与pUC19... 目的利用pIJ790,pIJ773和pUC19等基本质粒,构建金色链霉菌基因打靶筛选体系所需质粒pIJ792。方法以质粒pIJ790为模板,将PCR扩增的cat基因片段插入到pMD19-T的多克隆位点,得重组质粒pFD31。EcoRⅠ和HindⅢ双酶切pIJ773,其小片段与pUC19经同样双酶切后的片段酶连克隆,得新质粒pFD32。pFD31和pFD32再分别经SacⅠ酶切,将pFD31含cat的小片段和pFD32的大片段酶连克隆,筛选得重组质粒pFD33,EcoRⅠ与HindⅢ酶切,将切下的两个小片段与pIJ773经同样双酶切后的大片段进行酶连克隆,最终得筛选质粒pIJ792。结果新质粒pIJ792的抗氯霉素能力超过150μg.mL-1。结论 pIJ792可满足金色链霉菌基因打靶的筛选需要,实现了用于金色链霉菌PCR基因打靶所需筛选体系的构建。 展开更多
关键词 基因打靶 金色链霉菌 氯霉素抗性基因
下载PDF
重组人TGF-β1对TGF-β1基因启动活性的影响 被引量:1
10
作者 包广宇 高春芳 +1 位作者 仲人前 孔宪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期332-335,共4页
目的:探讨TGF β1对人TGF β1基因自身启动子活性的影响。方法:以人全血基因组DNA为模板,PCR扩增获得TGF β1基因转录起始位点上游5′端- 132 8~+812bp和+2 2 7~+812bp的片段,以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因而不... 目的:探讨TGF β1对人TGF β1基因自身启动子活性的影响。方法:以人全血基因组DNA为模板,PCR扩增获得TGF β1基因转录起始位点上游5′端- 132 8~+812bp和+2 2 7~+812bp的片段,以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因而不含启动子的pCAT enhancer质粒构建成重组质粒,并将其转染至大鼠星状细胞株nFSC中,细胞在DMEM培养基中进行培养,用不同浓度的TGF β1进行干涉,测定并比较细胞的CAT表达水平。结果:不同浓度的TGF β1对大鼠的肝脏星状细胞的增殖具有抑制作用,而且这种抑制作用在实验用的浓度范围内具有剂量依赖关系;浓度为2 5ng/mlTGF β1可以使转染phTGF0 5 85、phTGF1 12 0、phTGF1 4 2 3、phTGF1 6 80、phTGF2 14 0质粒的大鼠肝星状细胞的CAT活性分别增加2~5倍。结论:TGF β1在大鼠nFSC细胞中对TGF β1启动子活性具有自身促进作用,为进一步研究TGF β1的调节机制提供了依据。 展开更多
关键词 TGF-Β1 启动子 氯霉素乙酰基转移酶
下载PDF
人类XBP1基因5′上游DNA序列的转录激活功能分析(英文) 被引量:1
11
作者 郭风劲 成海恩 +2 位作者 易发平 彭惠民 宋方洲 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-6,共6页
目的分析人类转录因子X-盒结合蛋白1(X-box binding proteinⅠ,XBP1)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别,研究其转录调控机制。方法在对XBP1基因进行生物信息学分析的基础上,设计6种XBP1启动子缺失突变体,分别包括XBP1基因5′上游-... 目的分析人类转录因子X-盒结合蛋白1(X-box binding proteinⅠ,XBP1)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别,研究其转录调控机制。方法在对XBP1基因进行生物信息学分析的基础上,设计6种XBP1启动子缺失突变体,分别包括XBP1基因5′上游-1039~66bp、-859~66bp、-623~66bp、-351~66bp,-227~66bp、-227^-45bp,针对每一种缺失突变体构建相应的氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltansferase,CAT)报告基因载体,再分别瞬时转染K562、HepG2、NIH-3T3和L02细胞,应用报告基因CAT瞬时表达系统,检测XBP1每一种缺失突变体在K562、HepG2、NIH-3T3和L024种不同细胞中的活性差异,并进一步确定XBP1基因启动子的具体调节部位。结果成功获得XBP1基因启动子6种缺失突变体的正确克隆和6种相应的报告基因载体p1-XBP1p,p2-XBP1p,p3-XBP1p,p4-XBP1p,p5-XBP1p,p6-XBP1p,每一种报告基因转染K562、HepG2、NIH-3T3和L024种不同细胞系后,p4-XBP1p和p5-XBP1p在K562、HepG2细胞中的转录活性均高于其它报告载体,p5-XBP1p在HepG2细胞中转录活性最高;而6种报告基因载体在NIH-3T3小鼠成纤维细胞中不具有转录活性。结论XBP1基因的转录激活能力在不同细胞中有所差异,其表达活性具有一定的细胞类型特异性,与细胞类型和细胞状态密切相关;XBP1基因启动子的-227~66bp区域是该启动子的核心部位,而且核心启动子区包括ATG翻译起始密码子的下游部位,这一部位是转录活性的重要部位,一旦缺失,XBP1基因启动子会丧失活性。 展开更多
关键词 X-盒结合蛋白1 启动子 氯霉素乙酰转移酶报告基因 转录调控
原文传递
一种亨廷顿舞蹈症体外药物筛选细胞模型的建立
12
作者 王爱娥 张睢扬 +5 位作者 于新荣 王东霞 王英 马建新 梅开城 闫春莲 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期18-23,共6页
为建立以多聚谷氨酰胺(polyQ)为靶点的亨廷顿舞蹈症体外药物筛选细胞模型,以随机引物PCR法克隆了不同长度的CAG片段,经序列测定正确后,分别融合到已经建立的氯霉素抗性融合蛋白表达系统pCAR中CAT的N端。重组质粒转化大肠杆菌,并在其中... 为建立以多聚谷氨酰胺(polyQ)为靶点的亨廷顿舞蹈症体外药物筛选细胞模型,以随机引物PCR法克隆了不同长度的CAG片段,经序列测定正确后,分别融合到已经建立的氯霉素抗性融合蛋白表达系统pCAR中CAT的N端。重组质粒转化大肠杆菌,并在其中诱导表达,SDS-PAGE和氯霉素抗性平板试验对目的蛋白可溶性与氯霉素活性进行测定。结果显示长度在40以上的polyQ为不溶性包涵体表达,表现为低水平的氯霉素抗性,40以下的polyQ则以可溶形式表达,表现为高水平氯霉素抗性,从而建立起能够模拟亨廷顿舞蹈症病理过程的体外细胞模型。通过检测模型细胞的氯霉素抗性,可以定性、定量地反映polyQ在体内的折叠状态和可溶性,故可以借助该模型对促溶药物或生物活性物质进行高通量筛选,为亨廷顿舞蹈症预防、诊断、治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 多聚谷氨酰胺(polyQ) 亨廷顿舞蹈症(HD) 蛋白溶解性 氯霉素乙酰基转移酶 细胞模型
下载PDF
人巨细胞病毒形态转化区的鉴定
13
作者 Leonard J Rosenthal Shang Shi-zhang Anita Inamdar 《中国病毒学》 CAS CSCD 1991年第4期281-290,共10页
DNA of human cytomegalovirus (HCMV) contains three transforming fragments, which have been mapped in the long unique region of the viral genome(see Fig.1). A minimal region of 558 base pairs(bp) (pCM4127) was localize... DNA of human cytomegalovirus (HCMV) contains three transforming fragments, which have been mapped in the long unique region of the viral genome(see Fig.1). A minimal region of 558 base pairs(bp) (pCM4127) was localized in the XbaI-Hindlll fragment of HCMV strain AD169 (mapunit 0.123—0.140)and designated morphological transforming region Ⅰ (mtrⅠ). MtrⅠwas reported to cause one-step focal transformation of primary 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 转化活性 DNA序列分析 Southern印迹 启动子 氯霉素乙烯转移酶
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部