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日本沼虾表皮几丁质结合蛋白基因的克隆以及KK-42对其表达的影响 被引量：2
1
作者 张宇 王佩 +1 位作者 吕艳杰 宁黔冀 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2016年第5期106-111,共6页
为探讨KK-42缩短日本沼虾蜕皮周期的可能机制,首次从日本沼虾步足表皮组织克隆了编码几丁质结合蛋白的一个新基因——MnCBP-1部分cDNA序列,对其序列进行生物信息学分析,qRT-PCR技术检测MnCBP-1基因的表达水平以及KK-42的影响.结果表明,M... 为探讨KK-42缩短日本沼虾蜕皮周期的可能机制,首次从日本沼虾步足表皮组织克隆了编码几丁质结合蛋白的一个新基因——MnCBP-1部分cDNA序列,对其序列进行生物信息学分析,qRT-PCR技术检测MnCBP-1基因的表达水平以及KK-42的影响.结果表明,MnCBP-1基因部分cDNA序列为1396bp,含有特征性的几丁质结合结构域(chitin-bind-4),经BLAST比对,MnCBP-1与蚤状溞相似性为44%.qRT-PCR结果显示,步足表皮组织内MnCBP-1基因表达量随着蜕皮前期(D0-2)的开始逐渐增多.KK-42处理后,蜕皮间期(C)幼虾内MnCBP-1基因表达水平分别在6、12、24和48h比对照组显著升高,而在D0-2期和D3-4期MnCBP-1基因转录物仅在个别时间点有所增多.研究表明,MnCBP-1基因表达与蜕皮周期有关,KK-42处理可显著诱导MnCBP-1基因表达,且表达的高峰提前至C期,这可能是KK-42缩短蜕皮周期的机制之一. 展开更多
关键词 日本沼虾 几丁质结合蛋白 KK-42 克隆 基因表达
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萝卜CBPs溶菌酶活性的稳定性研究 被引量：1
2
作者 赖晓芳 沈善瑞 +1 位作者 王炜军 徐凤彩 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第6期1330-1333,共4页
植物溶菌酶是植物防御体系中的一部分,在植物防卫体系中具有重要作用。萝卜中有2个具溶菌酶活性的几丁质结合蛋白(Chitin-binding proteins,CBPs),分别是CBP1、CBP2组分。为了解CBPs的作用机制以及在萝卜中的生理功能,试验研究了CBP1、C... 植物溶菌酶是植物防御体系中的一部分,在植物防卫体系中具有重要作用。萝卜中有2个具溶菌酶活性的几丁质结合蛋白(Chitin-binding proteins,CBPs),分别是CBP1、CBP2组分。为了解CBPs的作用机制以及在萝卜中的生理功能,试验研究了CBP1、CBP2溶菌酶组分酶活性的稳定性。结果显示,CBP1、CBP2在pH 5.4、65℃条件下迅速失活,在pH 3.4～10.6、25℃条件下较稳定;CBP1较CBP2对氧化剂H2O2、NaClO敏感;CBP2较CBP1对木瓜蛋白酶敏感;2个组分对胰蛋白酶均敏感。 展开更多
关键词 萝卜 溶菌酶活性 几丁质结合蛋白 稳定性
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双叉犀金龟表皮蛋白Td14144表达纯化及性质研究 被引量：1
3
作者 刘晶 包涵 +3 位作者 陈磊 刘源涛 刘田 杨青 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2022年第2期513-520,共8页
表皮蛋白是昆虫表皮的重要组成成份,在昆虫的生长发育过程中起着重要作用,有可能成为农业害虫的防治靶标。双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus是铁皮石斛的一种重要害虫,且对其表皮蛋白的研究较少。本文通过研究双叉犀金龟表皮蛋白Td1414... 表皮蛋白是昆虫表皮的重要组成成份,在昆虫的生长发育过程中起着重要作用,有可能成为农业害虫的防治靶标。双叉犀金龟Trypoxylus dichotomus是铁皮石斛的一种重要害虫,且对其表皮蛋白的研究较少。本文通过研究双叉犀金龟表皮蛋白Td14144的表达纯化及与几丁质结合的相关性质明确Td14144功能的重要性。根据双叉犀金龟转录组测序数据,利用RT-PCR获得表皮蛋白Td14144基因(GenBank登录号:MZ463195),并对其进行生物信息学分析。序列分析表明表皮蛋白Td14144属于CPR家族中RR-2亚族,含有R&R保守结构域;系统进化分析结果表明,Td14144与光肩星天牛Anoplophora glabripennis的AgCP的亲缘关系最近。随后将基因片段与pET-28a载体同源重组构建表达载体pET28a-14144,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中原核表达,并使用金属螯合层析进行分离纯化,SDS-PAGE及Western blot验证重组蛋白的表达纯化,成功获得95%以上纯度的Td14144蛋白。利用几丁质结合试验评估Td14144与不同类型几丁质结合的能力,发现Td14144可以与壳聚糖、α-几丁质、β-几丁质和胶体几丁质结合,其中对壳聚糖和α-几丁质的结合能力最强。 展开更多
关键词 双叉犀金龟 表皮蛋白 几丁质结合蛋白
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维氏气单胞菌几丁质酶ChiC的性质和与几丁质结合蛋白协同作用的研究 被引量：3
4
作者 霍凤敏 杨雅麟 +3 位作者 徐俐 张美超 何夙旭 周志刚 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期167-175,共9页
为了探索维氏气单胞菌B565低酶活几丁质酶ChiC的性质及突破其低酶活的应用瓶颈,构建了重组ChiC毕赤酵母工程菌GS115/PIC9-ChiC,进行甲醇诱导表达纯化,研究其基本酶学性质。结果表明,ChiC在毕赤酵母中分泌表达,甲醇诱导48 h后,达到摇瓶... 为了探索维氏气单胞菌B565低酶活几丁质酶ChiC的性质及突破其低酶活的应用瓶颈,构建了重组ChiC毕赤酵母工程菌GS115/PIC9-ChiC,进行甲醇诱导表达纯化,研究其基本酶学性质。结果表明,ChiC在毕赤酵母中分泌表达,甲醇诱导48 h后,达到摇瓶水平最大表达量232.6 mg/L。ChiC最适反应pH为8.0,温度为40℃。最适反应条件时比活力为7.6 U/mg。ChiC具有较宽的pH及温度适应性,在pH 3.0-10.0,40℃或者0-40℃,pH 7.0,均可以保持80%以上最适酶活力。同时几丁质结合蛋白CBP21于大肠杆菌中实现胞内可溶表达,其表现出对虾壳几丁质和胶体几丁质的具有不同的结合能力。但CBP21促进ChiC降解胶体几丁质的能力（提高约9倍）明显高于其促进ChiC降解虾壳几丁质的能力（提高约2倍）。上述结果为该几丁质酶基因的深入研究奠定了理论基础,为突破该低酶活几丁质酶的应用瓶颈提供了一种可能的解决方案。 展开更多
关键词 几丁质酶 几丁质结合蛋白 酶学性质 协同效应
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家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)的表达纯化及活性分析
5
作者 袁野 闫恕 +4 位作者 张丹丹 孔令聪 裴志花 刘树明 马红霞 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第1期8-13,共6页
为了研究家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)在家蝇防御体系中的相关活性,采用PCR技术,对从鸡源沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选到的家蝇幼虫几丁质结合蛋白Ⅰ基因(Musca domestica chitin binding proteinⅠ,Md-CBPⅠ... 为了研究家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)在家蝇防御体系中的相关活性,采用PCR技术,对从鸡源沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选到的家蝇幼虫几丁质结合蛋白Ⅰ基因(Musca domestica chitin binding proteinⅠ,Md-CBPⅠ)进行扩增,并成功构建了重组表达质粒p ET-32a-Md-CBPⅠ,于大肠杆菌BL21(DE3)中得以高效表达,纯化并获得了MdCBPⅠ融合蛋白。进一步对该蛋白的亲和活性进行了研究,发现Md-CBPⅠ融合蛋白对几丁质以及纤维素均有一定的结合作用,且其对几丁质的结合作用相对较好。试验为家蝇几丁质结合蛋白生物学活性和免疫学活性的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 家蝇 几丁质结合蛋白 克隆 原核表达
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