鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 被引量：5

1

作者 段志强 王郁杨 +4 位作者 朱艳梅 开妍 胡顺林 王晓泉 刘秀梵 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期1-5,共5页

选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装... 选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响。结果表明：提取的细胞总RNA的D260 nm/D280 nm为1.96,甲醛变性琼脂糖凝胶显示RNA未发生降解,质量良好。获得的文库容量为3×106cfu,插入的双链cDNA片段大小为0.3~3 kb,平均长度为1.3 kb左右,文库重组率为100%。该文库的构建为发现和研究与NDV M蛋白相互作用的宿主细胞蛋白提供有效工具。 展开更多

关键词 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞 酵母双杂交 CDNA文库 SMART技术

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鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库的构建及鉴定 被引量：3

2

作者 张改平 朱礼倩 +6 位作者 杨艳艳 赵绪永 乔松林 张红 王丽 李清州 王选年 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期216-219,共4页

为构建鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库并对文库质量进行鉴定,从鸡胚成纤维细胞中直接提取mRNA,用紫外分光光度计测定含量。经电泳确定mRNA的质量,反转录合成第一、二链cDNA,经苯酚氯仿抽提后与EcoRⅠ接头连接,经NotⅠ酶切后用spin col... 为构建鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库并对文库质量进行鉴定,从鸡胚成纤维细胞中直接提取mRNA,用紫外分光光度计测定含量。经电泳确定mRNA的质量,反转录合成第一、二链cDNA,经苯酚氯仿抽提后与EcoRⅠ接头连接,经NotⅠ酶切后用spin column除去小于500 bp的cDNA片段,与经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切的真核表达质粒连接,连接产物电转化感受态细胞,测定文库的容量大小并通过colony PCR鉴定插入cDNA片段的大小。构建成含8.8×105个重组子的鸡胚成纤维细胞cDNA文库,重组子中平均插入外源片段长度大于1.0 kb的约占85.7%。从结果看构建的文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆。 展开更多

关键词 鸡胚成纤维细胞 CDNA表达文库 传染性法氏囊病毒受体

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鸡胚成纤维细胞原代培养及应用 被引量：16

3

作者 朱国坡 周晓丽 +5 位作者 郭延锋 李瑞芳 高均伟 陈仕均 王丽荣 刘兴友 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期112-114,共3页

原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用... 原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方向。 展开更多

关键词 鸡胚成纤维细胞 原代培养 分离 纯化

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8种硫酸化多糖对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响 被引量：13

4

作者 王君敏 胡元亮 +6 位作者 张帆 王德云 赵晓娜 张靖 刘静 赵彪 郝丽华 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期118-122,共5页

用氯磺酸-吡啶法修饰当归多糖(CAPS)和枸杞多糖(LBPS),得到4种硫酸化当归多糖sCAPS0.6、sCAPS1.1、sCAPS1.9、sCAPS2.2和4种硫酸化枸杞多糖sLBPS0.7、sLBPS1.1、sLBPS1.5和sLBPS1.9。分别以CAPS和LBPS为对照,采用MTT法比较了这8种硫酸... 用氯磺酸-吡啶法修饰当归多糖(CAPS)和枸杞多糖(LBPS),得到4种硫酸化当归多糖sCAPS0.6、sCAPS1.1、sCAPS1.9、sCAPS2.2和4种硫酸化枸杞多糖sLBPS0.7、sLBPS1.1、sLBPS1.5和sLBPS1.9。分别以CAPS和LBPS为对照,采用MTT法比较了这8种硫酸化多糖对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响。结果表明:硫酸化修饰能显著提高当归多糖和枸杞多糖的抗病毒活性,且与硫酸基取代度有一定的相关性。sCAPS2.2、sLBPS1.5、sCAPS1.9和sLBPS1.9的活性较好,可以作为进一步研究的材料。 展开更多

关键词 硫酸化修饰 当归多糖 枸杞多糖 新城疫病毒 感染细胞能力 鸡胚成纤维细胞

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中药复方抗鸡新城疫病毒作用研究 被引量：10

5

作者 刘群 段亮亮 江平康 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第20期10697-10699,10724,共4页

[目的]探讨中药复方抗鸡新城疫病毒(NDV)的作用机理,为临床合理使用抗病毒性药物提供科学的理论依据。[方法]以白花蛇舌草、金银花、黄芪和甘草组成中药复方,制备成中药复方流浸膏并配制成不同浓度梯度的药液;测定中药复方对鸡成纤维细... [目的]探讨中药复方抗鸡新城疫病毒(NDV)的作用机理,为临床合理使用抗病毒性药物提供科学的理论依据。[方法]以白花蛇舌草、金银花、黄芪和甘草组成中药复方,制备成中药复方流浸膏并配制成不同浓度梯度的药液;测定中药复方对鸡成纤维细胞(CEF)最大无毒浓度,并测定NDV在CEF上半数感染力(TCID50);设中药复方不同浓度组,正常细胞和NDV感染细胞对照组,采用3种不同的作用方式作用于各组以检测中药复方抗NDV活性,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT法)测定OD值,以治疗指数为评价指标。[结果]中药复方对CEF的最大无毒浓度为2-6g/ml,NDV对CEF的TCID50为10-7.3;第①种作用方式中药复方的最小有效浓度是2-10g/ml,第②种作用方式为2-8g/ml,第③种作用方式为2-7g/ml。[结论]第①种作用方式对病毒的灭杀作用最强,第②种作用方式次之,第③种对病毒的灭杀作用最弱。表明中药复方不仅具有细胞外直接杀灭病毒作用,而且还具有抑制病毒吸附、穿入、复制和成熟的某一环节,为研究中药抗病毒的作用机理及临床应用提供了可靠的试验依据。 展开更多

关键词 中药复方 鸡胚成纤维细胞 鸡新城疫病毒

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TLRs信号通路和促炎症细胞因子基因在鸡胚成纤维细胞感染新城疫病毒过程中的表达分析 被引量：8

6

作者 曾胜强 冯泽清 +1 位作者 刘益平 杨志勤 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期436-441,共6页

【目的】研究新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞中TLRs抗病毒信号通路和促炎症相关细胞因子的诱导作用。【方法】采用分离培养的原代鸡胚成纤维细胞感染中等毒力的新城疫病毒,并在感染后的4、8、12、16、24h收集细胞,利用定量PCR检测TLRs信号... 【目的】研究新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞中TLRs抗病毒信号通路和促炎症相关细胞因子的诱导作用。【方法】采用分离培养的原代鸡胚成纤维细胞感染中等毒力的新城疫病毒,并在感染后的4、8、12、16、24h收集细胞,利用定量PCR检测TLRs信号通路及促炎症相关细胞因子在细胞新城疫病毒感染过程中的表达变化。【结果】结果显示,TLR3、TLR7、TLR15,及其衔接蛋白基因MYD88、TRIF,以及下游基因IFN-α、IFN-β、Mx的表达量在病毒感染后呈现出显著上调(P<0.05)。同时促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量在病毒感染后也表现出显著上调(P<0.05)。【结论】研究表明,在鸡胚成纤维细胞对新城疫病毒的识别过程中,由TLR3、TLR7、TLR15介导抗病毒信号通路,同时诱导产生促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α,并在新城疫病毒诱导的炎症反应过程中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 鸡成纤维细胞 新城疫病毒 抗病毒免疫

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中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究 被引量：8

7

作者 布合丽倩穆·依明 赛福丁·阿不拉 +3 位作者 艾克拜尔·依明 胡安古丽·努尔别克 阿克珠利·努尔包 李昊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2737-2744,共8页

为探讨牛皮消多糖(CAP)对体外抗新城疫病毒(NDV)能力的影响,本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测,采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,多糖的安全浓度统一为625μg/mL... 为探讨牛皮消多糖(CAP)对体外抗新城疫病毒(NDV)能力的影响,本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测,采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,多糖的安全浓度统一为625μg/mL,选择安全浓度范围内的(39.06~625μg/mL)5种浓度的各级多糖,用3种加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药)检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示,先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP 50、CAP 30、CAP t、CAP 80和CAP 70均能显著抑制NDV感染CEF的能力,两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%;先加多糖后接病毒组CAP 50、CAP 30能显著抑制NDV感染CEF的作用(P<0.05),阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%,其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP 50及CAP 30的抗NDV活性较强,可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。 展开更多

关键词 牛皮消多糖 鸡胚成纤维细胞 新城疫病毒 抗病毒

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中性红染色法检测人参皂苷及其衍生物对CEF增殖的影响 被引量：5

8

作者 苏建青 褚秀玲 +3 位作者 李俊霞 付本懂 申海青 韦旭斌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第35期17523-17525,17527,共4页

[目的]为体外研制人参皂苷及其衍生物的抗MDV作用机制提供理论依据。[方法]采用中性红染料吸收法,检测了人参皂苷及其衍生物对鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养中增殖活性的影响。[结果]各药物的促增殖作用不完全相同,低毒性的药物促增殖作... [目的]为体外研制人参皂苷及其衍生物的抗MDV作用机制提供理论依据。[方法]采用中性红染料吸收法,检测了人参皂苷及其衍生物对鸡胚成纤维细胞(CEF)体外培养中增殖活性的影响。[结果]各药物的促增殖作用不完全相同,低毒性的药物促增殖作用更明显。从药物对CEF细胞的不同作用时间点来看,以72 h的OD值和正常对照的差异最大,在24 h和正常对照组差异不显著。[结论]人参皂苷及其衍生物在中、低浓度能够促进CEF细胞的增殖,且药物作用具有时间依赖性。 展开更多

关键词 人参皂苷 衍生物 鸡胚成纤维细胞 安全浓度

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新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞中免疫相关细胞因子表达的检测 被引量：3

9

作者 刘温泉 王远萍 +2 位作者 邹年莉 柳萍 黄勇 《中国家禽》 北大核心 2009年第19期12-15,共4页

分别采用新城疫强毒株F48E9与新城疫弱毒株LaSota感染10日龄鸡胚制作的鸡胚成纤维细胞,感染后24h提取鸡胚成纤维细胞的总RNA,通过RT-PCR技术结合凝胶成像系统扫描检测21种免疫相关细胞因子在鸡胚成纤维细胞中的表达量。实验结果表明,在... 分别采用新城疫强毒株F48E9与新城疫弱毒株LaSota感染10日龄鸡胚制作的鸡胚成纤维细胞,感染后24h提取鸡胚成纤维细胞的总RNA,通过RT-PCR技术结合凝胶成像系统扫描检测21种免疫相关细胞因子在鸡胚成纤维细胞中的表达量。实验结果表明,在鸡胚成纤维细胞中,无论是否感染新城疫病毒,IL-2、IL-3、IL-4、IL-21不能检测到其相应条带。通过统计学分析,IFN-β、IFN-γ、IL-9、IL-12-P35、IL-12-P40在病毒感染组与对照组间呈现出显著的差异,而强毒感染组与弱毒感染组的比较中,仅IFNγ、IL-9表现出显著差异。 展开更多

关键词 鸡胚成纤维细胞 F48E9毒株 LA Sota毒株 细胞因子表达差异

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一种优化鸡胚成纤维细胞制备方法及生长曲线测定 被引量：4

10

作者 王友 尤永君 +2 位作者 徐兆强 罗冠群 王军 《中国动物保健》 2013年第7期17-20,共4页

鸡胚成纤维细胞(CEF)的来源方便,制备简单,耐受性好,且适合于许多病毒的生长繁殖,因此被广泛用于疫苗的生产、病毒的培养以及一些细胞和分子生物学的研究。然而传统的鸡胚成纤维细胞制备方法存在制备时间长、死细胞较多和细胞贴壁慢的... 鸡胚成纤维细胞(CEF)的来源方便,制备简单,耐受性好,且适合于许多病毒的生长繁殖,因此被广泛用于疫苗的生产、病毒的培养以及一些细胞和分子生物学的研究。然而传统的鸡胚成纤维细胞制备方法存在制备时间长、死细胞较多和细胞贴壁慢的问题。笔者根据经验摸索出一种实验室快速制备CEF的简便方法,并通过台盼蓝染色用细胞计数法绘制了原代CEF及次代CEF的生长曲线。该简便方法的建立为实验室快速制备高质量高纯度的鸡胚成纤维细胞提供了方便,同时对其生长曲线的测定也为进行基因转染方面的研究积累了资料。 展开更多

关键词 鸡胚成纤维细胞(CEF) 简便方法 生长曲线 基因转染

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鸡胚成纤维细胞cDNA表达文库的构建 被引量：4

11

作者 刘伟 高玉龙 +2 位作者 高宏雷 王笑梅 许修宏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期413-417,共5页

鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cDNA表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cDNA,能够解决常规... 鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cDNA表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。该技术将CEF的mRNA分离纯化后,以5′端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接Adapter,层析柱纯化,通过BP重组反应构建cDNA入门文库,其平均滴度为1.1×106cfu/mL,文库总容量为1.2×107cfu,平均插入片段为2243bp,重组率为100%。通过LR重组反应将入门文库转换为表达文库,经测定平均滴度为5×105cfu/mL,文库总容量为5.5×106cfu,平均插入片段为2411bp,重组率为100%。结果表明,所构建的文库具有较高的重组率和较大的库容量,可作为较高质量的文库来研究IBDV的相关基因,为研究病毒受体和病毒入侵途径,进一步了解IBDV的致病机理奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡胚成纤维细胞(CEF) GATEWAY技术 CDNA表达文库 传染性法氏囊病病毒(IBDV)

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基于CRISPR-Cas9技术构建TET2基因敲除的鸡胚成纤维细胞系 被引量：2

12

作者 王强州 潘诗雨 +4 位作者 方梦雅 李微 王佳兴 刘茵茵 陈世豪 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期227-233,共7页

为研究甲基胞嘧啶双加氧酶2(tet methylcytosine dioxygenase 2,TET2)及其介导的羟甲基化修饰在调控天然免疫反应中的作用,利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建TET2基因敲除的鸡胚成纤维细胞系。针对鸡TET2 mRNA的2种剪接变体的共有CDS序... 为研究甲基胞嘧啶双加氧酶2(tet methylcytosine dioxygenase 2,TET2)及其介导的羟甲基化修饰在调控天然免疫反应中的作用,利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建TET2基因敲除的鸡胚成纤维细胞系。针对鸡TET2 mRNA的2种剪接变体的共有CDS序列设计4组sgRNA,构建sgRNA表达质粒,连同Cas9-T2A-GFP质粒共转染DF-1细胞,筛选高切割效率的sgRNA;将转染该sgRNA的DF-1细胞,进行流式细胞分选,获取表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的细胞,再通过有限稀释法筛选单克隆细胞,并用DNA测序进行鉴定。单克隆敲除细胞扩大培养后,Western blot和Dot blot检测TET2蛋白的表达水平和羟甲基化(5hmC)水平。DNA测序结果表明,TET2-gRNA-2靶位点附近分别发生2和28 bp的缺失突变,引起TET2蛋白移码突变,将该细胞株命名为DT-6。DT-6细胞传代15次以上,细胞形态稳定。Western blot结果显示,与DF-1细胞相比,DT-6细胞几乎不表达TET2蛋白。Dot blot结果显示,与DF-1细胞相比,DT-6细胞全基因组羟甲基化水平显著降低。利用CRISPR-Cas9技术成功构建了敲除TET2基因的鸡胚成纤维细胞系,为研究鸡TET2及其介导羟甲基化修饰参与调控天然免疫反应的途径和分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 鸡 TET2 CRISPR-Cas9 TET2基因敲除 鸡胚成纤维细胞

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芝芪菌质多糖对CEF的增殖和抵抗NDV感染的研究 被引量：3

13

作者 张敦林 张李阳 +1 位作者 唐宁 刘建平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第20期8604-8605,8614,共3页

[目的]明确芝芪菌质多糖是否是芝芪菌质提高动物免疫力的有效成分。[方法]用不同浓度的乙醇对芝芪菌质水提物进行分级沉淀,得到3种芝芪菌质多糖(GAP30、GAP60和GAP90),采用中性红染料吸收法,研究其对鸡胚成纤维细胞(CEF)增殖的影响及抵... [目的]明确芝芪菌质多糖是否是芝芪菌质提高动物免疫力的有效成分。[方法]用不同浓度的乙醇对芝芪菌质水提物进行分级沉淀,得到3种芝芪菌质多糖(GAP30、GAP60和GAP90),采用中性红染料吸收法,研究其对鸡胚成纤维细胞(CEF)增殖的影响及抵抗NDV感染的效果。[结果]GAP30、GAP60、GAP90的得率分别为0.37%、0.70%、1.04%,表明乙醇分级沉淀已将芝芪菌质中的多糖成分提取完全。GAP30、GAP60在浓度为1×10-1、1×10-2mg/ml时能显著促进CEF增殖,GAP90在浓度为1×10-3mg/ml时即能显著促进CEF增殖。GAP30、GAP60在浓度为1×10-2mg/ml时能显著抵抗NDV感染,GAP90在浓度为1×10-1、1×10-2mg/ml时能显著抵抗NDV感染。[结论]芝芪菌质多糖能不同程度地促进CEF增殖、抵抗NDV感染,以GAP90的效果最好。 展开更多

关键词 芝芪菌质多糖 鸡胚成纤维细胞 NDV 免疫力

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我国1株鹦鹉幼稚病毒的细胞培养特性 被引量：2

14

作者 李天宪 冯锋 +2 位作者 夏苇 陈绳亮 赵林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期138-140,共3页

为进一步研究鹦鹉幼稚病病毒 ( BFDV)的分子生物学特性奠定基础 ,对 BFDV湖北分离株进行了 2种原代细胞的适应性培养。首先在鹦鹉胚成纤维细胞盲传至第 5代后再过渡到鸡胚成纤维细胞培养 ,建立了BFDV的适应细胞培养体系。观察了 3种不... 为进一步研究鹦鹉幼稚病病毒 ( BFDV)的分子生物学特性奠定基础 ,对 BFDV湖北分离株进行了 2种原代细胞的适应性培养。首先在鹦鹉胚成纤维细胞盲传至第 5代后再过渡到鸡胚成纤维细胞培养 ,建立了BFDV的适应细胞培养体系。观察了 3种不同温度对细胞病变 ( CPE)的影响 ,结果表明 ,BFDV在 3 8.5℃培养 4 8～ 96h可产生明显的 CPE。再将该培养液做免疫扩散试验结果出现明显的免疫复合物沉淀线 ,抗体中和试验显示 CPE消失 ,进一步证实此 CPE是由 BFDV增殖而产生的。研究证明 。 展开更多

关键词 鹦鹉幼稚病病毒 鸡胚成纤维细胞 细胞病变

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鸡Mx基因全长cDNA序列的克隆及分析 被引量：2

15

作者 倪黎纲 程金花 +4 位作者 谢飞 陈昊 何先红 余飞 李碧春 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期34-36,共3页

以Poly(I)-Poly(C)诱导鸡成纤维细胞Mx基因的表达,提取总RNA,RT-PCR扩增出全长Mx cDNA,扩增产物克隆入pMD19-T Simple载体中进行序列测定。结果表明:与GenBank公布的鸡Mx cDNA序列相比,其同源性达99.9%,为进一步研究鸡Mx基因的抗病毒活... 以Poly(I)-Poly(C)诱导鸡成纤维细胞Mx基因的表达,提取总RNA,RT-PCR扩增出全长Mx cDNA,扩增产物克隆入pMD19-T Simple载体中进行序列测定。结果表明:与GenBank公布的鸡Mx cDNA序列相比,其同源性达99.9%,为进一步研究鸡Mx基因的抗病毒活性和作用机理奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡 成纤维细胞 RT—PCR扩增 序列分析

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三种转染试剂介导pGPU6/GFP/Neo真核表达载体转染鸡胚成纤维细胞的比较研究 被引量：3

16

作者 何星 李华 +5 位作者 邵雁 胡莹 顾子春 陈力 马菁晶 兰志勇 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期660-665,共6页

目的:采用不同转染试剂介导pGPU6/GFP/Neo质粒转染鸡胚成纤维细胞UMNSAH/DF-1,以获得最优化的方法。方法:分别采用不同剂量(1.25μl、2.0μl、2.5μl)的Lipofectamin2000、Gbfectene-Elite及HilyMax转染试剂介导1μg质粒进行转染,观察... 目的:采用不同转染试剂介导pGPU6/GFP/Neo质粒转染鸡胚成纤维细胞UMNSAH/DF-1,以获得最优化的方法。方法:分别采用不同剂量(1.25μl、2.0μl、2.5μl)的Lipofectamin2000、Gbfectene-Elite及HilyMax转染试剂介导1μg质粒进行转染,观察其转染效率,测定其转染细胞存活率。结果:HilyMax组的转染效率为(86.85%±2.32%),较Lipofectamin2000组(48.33%±3.24%)、Gbfectene-Elite组(37.35%±5.41%)高(F=18.882,P<0.05);其中,HilyMax 2.5μl组的转染效率最高为(90.53%±1.15%)。Lipofectamin2000组的细胞存活率(65.76%±5.78%)明显低于HilyMax组(89.54%±0.86%)、Gbfectene-Elite组(82.45%±3.56%)(F=90.676,P<0.05)。结论:HilyMax对于鸡胚成纤维细胞具有最好的转染效率和最低的细胞毒性,推荐使用2.5μl HilyMax:1μg质粒进行鸡胚成纤维细胞的转染。 展开更多

关键词 转染 质粒DNA/遗传学 鸡胚成纤维细胞/细胞学 绿色荧光蛋白质类 细胞毒性

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一种肌腱缝合线的细胞毒性研究 被引量：3

17

作者 李文平 何理平 +2 位作者 崔建国 李香鑫 罗国良 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期535-537,共3页

为检测采用海狸鼠尾部肌腱经过脱脂、脱水、两次固定等一系列加工过程而制成的新型可吸收手术缝合线的细胞毒性,将它与鸡胚成纤维细胞共同体外培养,观察其对细胞形态和增殖率的影响.结果表明,这种缝合线对细胞形态无影响,对细胞增殖有... 为检测采用海狸鼠尾部肌腱经过脱脂、脱水、两次固定等一系列加工过程而制成的新型可吸收手术缝合线的细胞毒性,将它与鸡胚成纤维细胞共同体外培养,观察其对细胞形态和增殖率的影响.结果表明,这种缝合线对细胞形态无影响,对细胞增殖有一定的促进作用,细胞相容性好,符合医用缝合线的要求. 展开更多

关键词 肌腱缝合线 细胞毒性 鸡胚成纤维细胞

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腺病毒载体介导的GFP在鸡胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉 被引量：3

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作者 傅安静 汤承 +2 位作者 李定霏 谢青 岳华 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第2期276-280,共5页

鸡胚成纤维细胞(CEF)是多种动物及人类病毒的易感细胞;也是研究鸡的基因组功能的理想材料.本试验的目的是研究非复制型腺病毒载体对CEF的转染效率及安全性;并建立在CEF细胞中进行RNAi的技术平台.采用GFP重组非复制型腺病毒载体(Ade-GFP... 鸡胚成纤维细胞(CEF)是多种动物及人类病毒的易感细胞;也是研究鸡的基因组功能的理想材料.本试验的目的是研究非复制型腺病毒载体对CEF的转染效率及安全性;并建立在CEF细胞中进行RNAi的技术平台.采用GFP重组非复制型腺病毒载体(Ade-GFP)转染CEF细胞;结果证明0.1-2000 MOI Adv-GFP均可转染CEF细胞并表达GFP;转染后16h开始出现GFP阳性细胞;胞核与胞浆可见明亮的荧光;荧光细胞数量及荧光强度在24～36h达到高峰;以后逐渐衰减;约180h全部消失;转染效率最高为22.3%;形态学观察及流式细胞仪测定结果显示;Adv-GFP转染的CEF细胞未见细胞病变;多数转染组细胞活力不受影响;说明用Adv-GFP携带外源转染CEF细胞是安全可行的;用脂质体转染试剂转染化学合成的GFP-siRNA;成功地干涉了腺病毒载体介导的GFP基因在鸡胚成纤维细胞的表达;干涉效率为85%;证明了鸡胚成纤维细胞中存在RNAi机制;为进一步利用非复制型腺病毒载体递送siRNA在CEF细胞内进行RNAi的研究奠定了基础. 展开更多

关键词 RNA干涉 腺病毒载体 鸡胚成纤维细胞 绿荧光蛋白

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全胚连续消化制备鸡胚成纤维细胞技术研究 被引量：1

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作者 吴长新 甘军纪 +1 位作者 刘秀梵 詹爱军 《生命科学研究》 CAS CSCD 1998年第4期283-287,共5页

在一定条件下，将全胚置胰酶消化液中搅拌连续消化，建立了全胚连续消化制备鸡胚成纤维细胞（ＣｈｉｃｋｅｎＥｍｂｒｙｏＦｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＥＦ）技术，用该技术制备ＣＥＦ，每胚细胞产量达２．０亿个以上，是传统技术的２～３... 在一定条件下，将全胚置胰酶消化液中搅拌连续消化，建立了全胚连续消化制备鸡胚成纤维细胞（ＣｈｉｃｋｅｎＥｍｂｒｙｏＦｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＥＦ）技术，用该技术制备ＣＥＦ，每胚细胞产量达２．０亿个以上，是传统技术的２～３倍．所制备的细胞活性高，贴壁性强，分散度好，培养的单层均匀．以这种细胞单层为基质增殖病毒，病毒产量不低于传统方法制备的细胞单层的水平． 展开更多

关键词 鸡 胚成纤维细胞 全胚 连续消化 活力 贴壁性

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鸡胚成纤维细胞感染马立克氏病病毒后部分染色体上微卫星不稳定性研究 被引量：2

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作者 高喜梅 邱燕 +2 位作者 韩涛 姚刚 杨德吉 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第1期12-17,共6页

研究鸡胚成纤维细胞(CEF)感染马立克氏病毒(MDV)后部分染色体(5,6,7,8,9)微卫星的变化。CEF感染马立克氏病超强毒RB1B株后,提取正常鸡胚成纤维细胞和感染病毒的成纤维细胞DNA,应用5,6,7,8,9号染色体上的43个微卫星引物进行PCR扩增,产物... 研究鸡胚成纤维细胞(CEF)感染马立克氏病毒(MDV)后部分染色体(5,6,7,8,9)微卫星的变化。CEF感染马立克氏病超强毒RB1B株后,提取正常鸡胚成纤维细胞和感染病毒的成纤维细胞DNA,应用5,6,7,8,9号染色体上的43个微卫星引物进行PCR扩增,产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测。结果表明43个微卫星标记有38个表现出不同程度的微卫星不稳定性,ABR0262发生率最高,为38.10%,ABR0048,ABR0041和MCW0183也较高,为33.33%。21组样品中全部检测到微卫星不稳定性,9号样品微卫星不稳定性发生率最高,为41.86%。11号样品的发生率也较高,为32.56%。表明马立克氏病病毒感染鸡胚成纤维细胞后,可以导致广泛的宿主基因组变化。这些变化是随机的,但是也有一定的规律,而且这些变化可以用微卫星标记来检测。 展开更多

关键词 鸡胚成纤维细胞 马立克氏病毒 微卫星不稳定性

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