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基因突变技术在抗体亲和力体外成熟中的应用 被引量：5
1
作者 刘媛 林曼曼 +5 位作者 张霄 徐重新 焦凌霞 仲建锋 武爱华 刘贤金 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-7,共7页
从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低,在微摩尔水平;同时,经过多次免疫获得的天然抗体也存在100 pmol/L的亲和力极限。然而,以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术,可以模拟体细胞高频突变和克隆选择过程。该技... 从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低,在微摩尔水平;同时,经过多次免疫获得的天然抗体也存在100 pmol/L的亲和力极限。然而,以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术,可以模拟体细胞高频突变和克隆选择过程。该技术可以解决库来源抗体亲和力不高、实际应用难的问题,也可以帮助天然抗体突破其亲和力极限。抗体基因体外突变技术可以模拟自体高频突变过程,是抗体亲和力体外成熟的重要手段,常见的抗体基因体外突变技术可以分为易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、DNA改组、突变株、定点突变和链替换等方法。易错PCR可以在抗体基因全长或部分区域随机引入突变,但随着突变率的增加,阳性克隆数量呈指数性递减。DNA改组包括抗体片段随机化切割和重组步骤,可以加快抗体的体外进化速度。突变株法易于构建超大容量的抗体库,但有害突变和突变率难以控制。定点突变的区域通常选择与抗原直接接触的互补决定区(complementary determination region,CDR)或自体突变热点进行操作。链替换通常保留母体抗体的一条重链或轻链,而对另一条链进行随机化组合。这些基因突变方法在提高抗体亲和力中获得了不同程度的应用,但也存在效率不高,且方法选择较为盲目等问题。可是,采用抗体X射线晶体衍射和计算机模拟等方法,却可以帮助预测抗体结合部位,为突变位点的理性设计和方法选择提供有效信息,因而成为亲和力体外成熟技术未来发展的趋势之一。 展开更多
关键词 抗体 亲和力成熟 易错PCR DNA改组 突变株 定点突变 链替换
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轻链替换文库对抗HBs基因工程Fab抗体亲和力的影响 被引量：2
2
作者 刘雪林 唐晓敏 +1 位作者 李申龙 宋宏彬 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期770-772,共3页
目的测定轻链替换文库对基因工程Fab抗体的亲和力的影响。方法将PCR扩增的人抗体轻链基因插入已克隆有人源抗乙肝表面抗原（HBsAg）抗体重链Fd基因的噬菌粒中，构建成轻链替换文库，经亲和淘洗，从该文库中筛选与重链Fd基因相匹配的轻... 目的测定轻链替换文库对基因工程Fab抗体的亲和力的影响。方法将PCR扩增的人抗体轻链基因插入已克隆有人源抗乙肝表面抗原（HBsAg）抗体重链Fd基因的噬菌粒中，构建成轻链替换文库，经亲和淘洗，从该文库中筛选与重链Fd基因相匹配的轻链基因。结果链替换的噬菌体抗体（phab）的ELISA光吸收值（A）从0．43±0．09提高到最高为1．24±0．10。序列分析ELISA光吸收值（A）最高的5株phab的轻链基因，3株κ链的碱基序列基本一致，属ⅤκⅢ亚群，2株λ链的基因序列相同，属ⅤλⅠ亚群。结论所筛选出来的phab具有抗HBsAg的特异性。 展开更多
关键词 链替换 噬菌体抗体 肝炎表面抗原 乙型 抗体亲和力
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噬菌体展示技术构建和表达抗人整合素β_1单链Fv抗体(英文) 被引量：2
3
作者 王棣 Ken +2 位作者 Wong John Wilkins 《微生物学免疫学进展》 2001年第4期6-14,共9页
整合素 (Integrins)是细胞膜蛋白的组成成分 ,它们是一类细胞粘附分子 ,并与形态形成的调节密切相关。整合素在细胞与细胞之间 ,细胞与基质之间的粘附中发挥着重要的作用。本研究通过选择使用鼠抗人整合素 β1抑止性单克隆抗体和刺激性... 整合素 (Integrins)是细胞膜蛋白的组成成分 ,它们是一类细胞粘附分子 ,并与形态形成的调节密切相关。整合素在细胞与细胞之间 ,细胞与基质之间的粘附中发挥着重要的作用。本研究通过选择使用鼠抗人整合素 β1抑止性单克隆抗体和刺激性单克隆抗体 ,利用噬菌体展示技术 ,成功地构建了单链Fv抗体 (scFv) ,并对其与整合素 β1的结合 ,选择最佳的可溶性抗体的生产条件等诸方面 ,进行了应用性研究。同时 ,也应用链转换 (Chainshuffling) 展开更多
关键词 整合素Β1 噬菌体展示 单链Fv抗体 链转换
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用导向选择链更替技术建立抗肝癌抗原HAb18G的人源性Fab基因库 被引量：2
4
作者 包国强 马庆久 +2 位作者 邢金良 杨向民 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期437-440,共4页
目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基... 目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基因的展示载体pComb3X/CL中 ,建立人 -鼠杂合的Fab基因库 ,以原核表达的非融合HAb18G的胞外区片段为抗原 ,筛选杂合的Fab基因 ,以得到人Fd基因。然后应用筛选出的Fd基因与人L链基因库配对 ,建立全为人Fab的基因库 ,并筛选全人Fab基因。将IPTG诱导的表达菌裂解 ,取其上清对pⅢ Fab融合蛋白的功能进行分析 ,并对其编码基因进行测序。结果 :建立了库容为 2× 10 7的杂合Fab基因库 ,经 6轮筛选后得到 7株杂合Fab基因。利用筛选的人Fd基因建立了库容为 0 .8× 10 7的全人Fab基因库 ,经 4轮筛选得到 2株亲和力较高、特异性强的人Fab基因。测序结果显示 ,2株Fab基因具有相同的Fd基因序列 ,与亲本抗体同属IgG2亚类 ;L链基因为κ型 ,可变区均属于Vκ3家族。结论 :利用导向选择链更替技术 ,筛选出特异性较强、完全人源化的抗肝癌抗原HAb18G的Fab抗体 ,为进一步的工作打下了基础。 展开更多
关键词 抗体基因库 人源化 肝癌 pComb3X 导向选择 链更替
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链替换技术提高噬菌体抗体亲和力的研究进展
5
作者 王乃东 袁安文 薛立群 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期71-75,共5页
高亲和力抗体基因的克隆是噬菌体抗体在基础研究、临床诊断治疗研究等重要领域中应用的基础。链替换技术已逐步广泛用于噬菌体抗体的性能改造。该技术不仅可以促进噬菌体的体外亲和力成熟,提高抗体亲和力,有助于低剂量抗体达到实际应用... 高亲和力抗体基因的克隆是噬菌体抗体在基础研究、临床诊断治疗研究等重要领域中应用的基础。链替换技术已逐步广泛用于噬菌体抗体的性能改造。该技术不仅可以促进噬菌体的体外亲和力成熟,提高抗体亲和力,有助于低剂量抗体达到实际应用所需要的抗原结合效应,拓宽抗体的应用开发前景,而且可应用于减少抗体人抗鼠抗体反应,分析重链或轻链基因对抗原抗体结合的影响,有助于较好的理解免疫化学。就链替换的原理、策略及其应用进行综述。 展开更多
关键词 链替换 噬菌体展示技术 亲和力成熟
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