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慢病毒介导VEGF165转染的内皮祖细胞移植可减轻大鼠ALI 被引量：7
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作者 何招辉 贺慧为 +4 位作者 卢院华 陈志 徐芳华 王荣胜 杨春丽 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1015-1020,共6页
目的 探讨慢病毒介导血管内皮生长因子165（VEGF165）转染的内皮祖细胞（EPCs）移植在大鼠急性肺损伤（ALI）中的保护作用.方法 分离培养雄性SD大鼠单核细胞获得EPCs备用.构建携带人VEGF165基因的慢病毒载体.按随机数字表法将90只雄性S... 目的 探讨慢病毒介导血管内皮生长因子165（VEGF165）转染的内皮祖细胞（EPCs）移植在大鼠急性肺损伤（ALI）中的保护作用.方法 分离培养雄性SD大鼠单核细胞获得EPCs备用.构建携带人VEGF165基因的慢病毒载体.按随机数字表法将90只雄性SD大鼠分为ALI模型组、磷酸盐缓冲液（PBS）组、EPCs干预组、空载质粒EPCs干预组、VEGF165转染EPCs干预组,每组再分为4、12、48 h 3个时间点亚组,每个亚组6只.经尾静脉注射0.15 μL/g油酸建立大鼠ALI模型;各干预组经尾静脉相应给予PBS、EPCs、空载质粒EPCs和VEGF165转染EPCs各0.2 mL（含细胞数1＆#215;106）.分别于各时间点取大鼠腹主动脉血进行血气分析;取左肺组织计算肺湿/干重比值（W/D）,用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮素-1（ET-1）、VEGF165表达;苏木素-伊红（HE）染色后,光镜下观察肺组织病理学改变并进行肺损伤评分.结果 与ALI模型组比较,EPCs、空载质粒EPCs和VEGF165转染EPCs治疗组4 h开始动脉血氧分压（PaO2）明显升高,肺W/D比值及肺组织iNOS和ET-1表达均明显下降,VEGF165表达明显升高.与EPCs干预组比较,VEGF165转染EPCs干预组PaO2升高、肺W/D比值及肺组织iNOS和ET-1表达下降、以及VEGF165表达升高均随时间延长更加显著〔4 h：PaO2（mmHg,1 mmHg=0.133 kPa）为82.84±10.69比72.34±9.36,肺W/D为4.83±0.23比5.55±0.37,iNOS（ng/mg）为8.77±1.10比14.84±1.34,ET-1（ng/mg）为103.41±5.66比153.08±5.12,VEGF165（ng/mg）为130.56±12.16比83.03±5.95;12 h：PaO2（mmHg）为91.67±6.81比78.50±8.81,肺W/D比值为4.44±0.35比5.32±0.25,iNOS（ng/mg）为7.23±0.24比14.04±1.18,ET-1（ng/mg）为91.98±3.52比125.99±7.55,VEGF165（ng/mg）为164.49±5.71比96.61±6.12〕;48 h个别指标达到谷值或峰值〔肺W/D：4.26±0.30比4.89±0.15,iNOS（ng/mg）：5.79±0.85比12.72±1.10,ET-1（ng/mg）：74.53±7.10比108.33±5.84,VEGF165（ 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 内皮祖细胞 急性肺损伤 慢病毒 细胞转染
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胶质细胞源性营养因子及内皮素B受体基因共转染神经干细胞实验研究
2
作者 陈景波 王国斌 +3 位作者 孙念峰 陶凯雄 舒晓刚 张景辉 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1465-1468,1473,共5页
目的探讨神经干细胞转染的新方法,并观察转染后目的基因的表达情况。方法原代培养神经干细胞,运用jetPEI转染试剂将目的基因胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和内皮素B受体基因(EDNRB基因)共转染至神经干细胞内,免疫荧光显微镜观察、流... 目的探讨神经干细胞转染的新方法,并观察转染后目的基因的表达情况。方法原代培养神经干细胞,运用jetPEI转染试剂将目的基因胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和内皮素B受体基因(EDNRB基因)共转染至神经干细胞内,免疫荧光显微镜观察、流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,测定转染效率,RT-PCR检测目的基因表达情况。结果成功培养出可用于基因转染的神经干细胞,转染后24h即可在免疫荧光显微镜下观察到GFP表达,流式细胞仪显示24、48和72h转染效率分别为15.36%、24.67%和25.73%。RT-PCR显示目的基因在神经干细胞内成功表达。结论运用jetPEI成功将目的基因转染至神经干细胞内,为相关神经变性疾病的基因治疗打下了实验基础。 展开更多
关键词 GDNF基因 EDNRB基因 神经干细胞 细胞转染
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