AMPK对过氧化氢诱导细胞衰老的阻遏研究

1

作者 陈翠 龚蕾 +1 位作者 徐晢 汪小波 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2255-2264,共10页

【目的】构建稳定表达腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/AMPK-T172D的NIH3T3细胞株,探讨AMPK对过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2O 2)诱导的细胞衰老的影响。【方法】采用PCR扩增AMPK基因... 【目的】构建稳定表达腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/AMPK-T172D的NIH3T3细胞株,探讨AMPK对过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2O 2)诱导的细胞衰老的影响。【方法】采用PCR扩增AMPK基因及其突变形式AMPK-T172D,将其克隆至慢病毒载体pLVX-IRES-Puro中,构建pLVX-IRES-AMPK/AMPK-T172D重组质粒并进行双酶切验证。将构建好的重组质粒包装成慢病毒,感染NIH3T3细胞,并利用嘌呤霉素筛选获得NIH3T3稳转细胞株。采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测稳转细胞株中AMPK的mRNA和蛋白表达情况。利用8.8 mmol/L H 2O 2处理AMPK/AMPK-T172D过表达NIH3T3细胞株,培养2 d后,采用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated-β-galactosidase,SA-β-Gal)染色检测细胞衰老情况,利用实时荧光定量PCR检测p 53、p 21及IL-6基因的表达情况。【结果】双酶切验证结果显示,pLVX-IRES-AMPK/AMPK-T172D表达质粒构建成功。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,与对照组相比,AMPK/AMPK-T172过表达的NIH3T3细胞中AMPK和AMPK-T172D mRNA和蛋白表达水平均极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),肉毒碱棕榈酰转移酶1(carnitine palmitoyltransferase-1,CPT-1)和脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)mRNA表达水平显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),SA-β-Gal细胞阳性率极显著降低(P<0.01);p 53、p 21和IL-6基因mRNA表达水平显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01)。【结论】试验成功获得AMPK/AMPK-T172D过表达NIH3T3稳转细胞株,激活AMPK能降低H 2O 2诱导的衰老细胞中SA-β-Gal细胞阳性率和衰老相关因子p53、p21和IL-6的表达。试验结果为研究AMPK在衰老中的作用、可能的分子机制及抗衰老治疗策略提供依据。 展开更多

关键词 AMPK基因 持续激活型 稳转细胞株 NIH3T3细胞 衰老

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青石棉体外诱发细胞微核与多核 被引量：3

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作者 刘云岗 刘玉清 +5 位作者 周谷 彭文珍 汪洋 李寿祺 董奇男 詹承烈 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期63-66,共4页

采用国产青石棉对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞和Ｖ７９细胞染毒，发现该２种细胞均可被青石棉诱发微核与多核．并且观察到含青石棉细胞的微核细胞率和多核细胞率均显著高于不含青石棉的细胞，而后者又比阴性对照显著增高．这提示青石棉进... 采用国产青石棉对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞和Ｖ７９细胞染毒，发现该２种细胞均可被青石棉诱发微核与多核．并且观察到含青石棉细胞的微核细胞率和多核细胞率均显著高于不含青石棉的细胞，而后者又比阴性对照显著增高．这提示青石棉进入细胞是其发挥遗传毒性作用的重要条件，但并非必需条件．与青石棉样品比较（２２％），这２种细胞内所含青石棉长纤维（＞１０μｍ）比例增大（６０％－６６％），提示细胞对青石棉的吞噬或保留作用具有一定长度选择性． 展开更多

关键词 青石棉 细胞微核 细胞多核 肿瘤发生

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逆转录病毒转染的小鼠IL－3基因在NIH／3T3细胞中的表达

3

作者 方敏 王立人 +1 位作者 雷学锋 毕爱华 《同济医科大学学报》 CSCD 北大核心 1996年第6期417-420,共4页

将小鼠白细胞介素３（ＩＬ－３）ｃＤＮＡ重组到逆转录病毒载体ｐＮ２Ａ质粒上，用电穿孔法将此重组子转染包装细胞系（ＰＡ３１７），经用Ｇ４１８（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）选择培养基筛选，得到产病毒效价为每ｍｌ５×１０４～２... 将小鼠白细胞介素３（ＩＬ－３）ｃＤＮＡ重组到逆转录病毒载体ｐＮ２Ａ质粒上，用电穿孔法将此重组子转染包装细胞系（ＰＡ３１７），经用Ｇ４１８（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）选择培养基筛选，得到产病毒效价为每ｍｌ５×１０４～２×１０５ＣＦＵ（ｃｏｌｏｎｙ－ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）的Ｇ４１８抗性细胞克隆。然后取其培养上清液转染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞。通过检测被病毒转染的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞培养上清液对小鼠骨髓细胞的增殖反应（ＭＴＴ法）和促分化作用（ＣＦＵ培养法），表明转染的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞克隆能分泌ＩＬ－３。此结果为进行ＩＬ－３转基因治疗研究奠定了实验基础。 展开更多

关键词 逆转录病毒 载体 白细胞介素3 CDNA 基因 表达

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龟甲水提液调控NF-κB炎症微环境对MC3T3-E1成骨分化的影响 被引量：10

4

作者 张玉卓 尚奇 +4 位作者 沈耿杨 任辉 敖海清 江晓兵 周本根 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期89-94,共6页

目的:探讨龟甲水提液调控核转录因子-κB(NF-κB)炎症微环境促小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)成骨分化的作用及机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,并进行成骨诱导,龟甲水提液干预。实验分为空白组、成骨诱导组、龟甲水提液(20 mg·L^-1... 目的:探讨龟甲水提液调控核转录因子-κB(NF-κB)炎症微环境促小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)成骨分化的作用及机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,并进行成骨诱导,龟甲水提液干预。实验分为空白组、成骨诱导组、龟甲水提液(20 mg·L^-1)联合成骨诱导组。细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测MC3T3-E1增殖能力,并确定最佳干预浓度;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红(ARS)染色检测MC3T3-E1成骨分化能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NF-κB p65,NF-κB p105,白细胞介素-6(IL-6),ALP和Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达。结果:CCK-8结果显示,随着时间的增长,MC3T3-E1增殖虽无统计学差异,但呈上升趋势,而在20 mg·L^-1质量浓度时增殖较其他组明显;ALP和ARS染色结果显示,成骨诱导组和龟甲水提液联合成骨诱导组染色阳性率较空白组明显升高;Real-time PCR结果显示,龟甲干预第7天,与空白组比较,龟甲水提液联合成骨诱导组NF-κB p105和IL-6 mRNA的表达明显降低(P<0.01),ALP和COL-ⅠmRNA的表达明显升高(P<0.05);龟甲干预第14天,与空白组比较,龟甲水提液联合成骨诱导组NF-κB p65,NF-κB p105和IL-6 mRNA的表达明显降低(P<0.01),ALP和COL-ⅠmRNA的表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:龟甲水提液能够促进MC3T3-E1成骨分化,其机制可能与抑制NF-κB炎性微环境有关。 展开更多

关键词 龟甲水提液 促小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1) 成骨分化 核转录因子-ΚB 炎症微环境

原文传递

氟和铝对小鼠胚胎成骨细胞骨保护蛋白和核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响 被引量：3

5

作者 郭晓英 蔡偌欣 孙贵范 《中国工业医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第1期3-5,8,共4页

目的观察氟和铝对小鼠胚胎成骨细胞株(MC3T3-E1)骨保护蛋白(OPG)和NF-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法 在细胞培养液中加入50μmol/L氟化钠或/和5μmol/L氯化铝;72 h后提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析MC3T3-E1细胞OPG... 目的观察氟和铝对小鼠胚胎成骨细胞株(MC3T3-E1)骨保护蛋白(OPG)和NF-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法 在细胞培养液中加入50μmol/L氟化钠或/和5μmol/L氯化铝;72 h后提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析MC3T3-E1细胞OPG和RANKL的mRNA表达,进行半定量分析。结果与对照组比较,氟铝联合染毒可显著提高MC3T3-E1细胞OPG mRNA的表达(P<0.05),两者具有协同作用(P<0.05),但氟铝联合染毒对MC3T3-E1细胞RANKL mRNA的表达水平无显著改变;因此,与对照组相比,氟铝联合染毒组RANKL/OPG比值显著降低(P<0.05)。结论氟铝联合可能通过增加成骨细胞OPG基因表达水平来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,使骨形成大于骨吸收。 展开更多

关键词 氟 铝 小鼠胚胎成骨细胞株(MC3T3-E1) 骨保护蛋白(OPG) 核因子κB受体活化因子配体(RANKL)

原文传递

成骨细胞诱导乳腺癌侧群细胞获得骨模拟特性的研究 被引量：2

6

作者 杨晓宁 周艳 +3 位作者 齐晓伟 王明浩 范林军 姜军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1102-1106,共5页

目的以乳腺癌细胞株MDA-MB231和成骨细胞株MC3T3-E1为对象,研究在共培养条件下乳腺癌侧群细胞向成骨细胞转化的能力。方法通过流式细胞技术分选出MDA-MB231乳腺癌侧群细胞,将其与成骨细胞株MC3T3-E1按照1∶1的细胞比例分别置于Transwel... 目的以乳腺癌细胞株MDA-MB231和成骨细胞株MC3T3-E1为对象,研究在共培养条件下乳腺癌侧群细胞向成骨细胞转化的能力。方法通过流式细胞技术分选出MDA-MB231乳腺癌侧群细胞,将其与成骨细胞株MC3T3-E1按照1∶1的细胞比例分别置于Transwell间接共培养体系的上、下小室中(实验组),设置相同密度的单纯乳腺癌侧群细胞为对照组,观察侧群细胞的形态变化。通过细胞免疫荧光技术及Western blot,比较2组侧群细胞中OPN、Runx2、Wnt-1表达水平的改变。结果实验组细胞分化明显,细胞免疫荧光技术检测实验组侧群细胞中OPN、Runx2、Wnt-1表达水平明显高于对照组。Western blot检测表明实验组侧群细胞中OPN(5.15±0.35)、Runx2(6.22±0.36)、Wnt-1(9.30±0.28)的蛋白表达水平均高于对照组OPN(1.00±0.15)、Runx2(1.00±0.14)、Wnt-1(1.00±0.13),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论与成骨细胞株共培养后,乳腺癌侧群细胞获得成骨细胞相关生物学特性。 展开更多

关键词 乳腺癌 侧群细胞 MDA—MB231 成骨细胞MC3T3-E1

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PFKFB3基因在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解及生长的影响 被引量：1

7

作者 李骏 张倩 +2 位作者 江东根 陈楚杰 庞俊 《中华腔镜泌尿外科杂志（电子版）》 2020年第6期460-465,共6页

目的探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(PFKFB3)基因在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解及生长的影响。方法收集我院病理科前列腺增生和前列腺癌蜡块组织,应用免疫组化技术检测PFKFB3的表达水平。通过荧光定量PCR和W... 目的探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(PFKFB3)基因在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解及生长的影响。方法收集我院病理科前列腺增生和前列腺癌蜡块组织,应用免疫组化技术检测PFKFB3的表达水平。通过荧光定量PCR和Western blot实验检测正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)和四种前列腺癌细胞系(PC3、LNCaP、DU145、C4-2)中PFKFB3的表达。应用RNA干扰技术敲低PFKFB3表达,采用细胞糖酵解试剂盒、CCK-8和克隆形成实验检测PFKFB3对前列腺癌细胞的糖酵解和增殖活性的影响。结果与前列腺增生组织相比,前列腺癌组织中的PFKFB3表达量明显增高[(59.7±0.25)vs(3.08±0.16),P<0.05],且病理Gleason评分越高,PFKFB3表达量也越高。同样PFKFB3在不同前列腺癌细胞系中均明显高表达。抑制PFKFB3基因表达后,前列腺癌细胞的糖酵解和增殖能力显著降低。结论PFKFB3基因在前列腺癌恶性进展中表达上调,促进肿瘤细胞的糖酵解和增殖,靶向PFKFB3可能为前列腺癌分子诊断和治疗提供潜在的应用价值。 展开更多

关键词 前列腺癌 细胞系 6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3 RNA干扰 糖酵解 增殖

原文传递

高三尖杉酯碱通过激活Caspase-3诱导T-淋巴细胞白血病细胞Molt-3凋亡 被引量：12

8

作者 蔡真 林茂芳 +2 位作者 Wolf-Dieter Ludwig Leonid Karawajew Zhihai Qin 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期607-610,共4页

目的 :研究高三尖杉酯碱 (HHT)诱导T 淋巴细胞白血病细胞凋亡的作用机制。方法 :采用流式细胞仪等技术对HHT诱导T 淋巴细胞白血病细胞 (Molt 3)的凋亡作用进行探讨。结果 :HHT诱导Molt 3凋亡 ,凋亡率与作用浓度和时间成正比 ;细胞被阻滞... 目的 :研究高三尖杉酯碱 (HHT)诱导T 淋巴细胞白血病细胞凋亡的作用机制。方法 :采用流式细胞仪等技术对HHT诱导T 淋巴细胞白血病细胞 (Molt 3)的凋亡作用进行探讨。结果 :HHT诱导Molt 3凋亡 ,凋亡率与作用浓度和时间成正比 ;细胞被阻滞在G1期。HHT作用 2 4h后细胞内Caspase 3活性增高 ,Caspase 3抑制剂Z DEVD FMK能特异地阻断HHT对Molt 3凋亡的诱导 ;Fas抗体可诱导细胞凋亡 ,但HHT对Fas受体 配体途径无影响。结论 :HHT对T 淋巴细胞白血病细胞的促凋亡作用和激活Caspase 3有关。 展开更多

关键词 T-淋巴细胞白血病 Molt-3 细胞凋亡 CASPASE-3

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茵陈五苓散含药血清对LO2细胞株LDL-R及HMG-CoA还原酶表达的影响 被引量：5

9

作者 李若梦 刘石密 +2 位作者 吴凝 赵琳琳 王东生 《中医杂志》 CSCD 北大核心 2015年第14期1243-1246,共4页

目的探讨茵陈五苓散含药血清调节血脂的可能机制并筛选其最佳给药浓度及作用时间。方法将40只雄性SD大鼠随机分为菌陈五苓散低、中、高剂量组,辛伐他汀组及空白组,每组8只。菌陈五苓散低、中、高剂量组分别给予4、8、16 g/(kg·d)... 目的探讨茵陈五苓散含药血清调节血脂的可能机制并筛选其最佳给药浓度及作用时间。方法将40只雄性SD大鼠随机分为菌陈五苓散低、中、高剂量组,辛伐他汀组及空白组,每组8只。菌陈五苓散低、中、高剂量组分别给予4、8、16 g/(kg·d)菌陈五苓散;辛伐他汀组给予1 mg/(kg·d)辛伐他汀片;空白组给予20 mg/(kg·d)生理盐水,各组大鼠每天灌胃2次,连续3天,制备含药血清。取对数生长期的LO2细胞株经过24 h孵化贴壁后随机分为茵陈五苓散低、中、高剂量组,辛伐他汀组及空白组,每组各18孔,每孔分别加入受试血清10μl。同浓度的18孔再分为3组,每组6孔,分别培养24、48、72 h,实时荧光定量法检测各组细胞的低密度脂蛋白受体(LDL-R)mRNA及3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶mRNA表达情况。结果与空白组比较,茵陈五苓散各剂量组及辛伐他汀组各时间点LDL-R mRNA表达均明显升高,HMG-Co A还原酶mRNA表达均明显下降(P<0.05或P<0.01),其中茵陈五苓散在中浓度、干预48 h的条件下LDL-R mRNA表达达高峰、HMG-Co A还原酶mRNA表达最低。结论茵陈五苓散含药血清调节血脂的机制可能与其能明显上调LDL-R表达、下调HMG-Co A还原酶表达有关,在药物浓度为中浓度、干预时间为48 h时效果最佳。 展开更多

关键词 茵陈五苓散 LO2细胞株 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 低密度脂蛋白受体

原文传递

STAT3在人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内的表达 被引量：4

10

作者 张丽杰 单保恩 +2 位作者 鹿刚 张引娟 赵振军 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期371-372,共2页

目的研究信号传导及转录活化因子STAT3在人肝癌细胞内的表达及其表达产物STAT3酪氨酸磷酸化活化情况。方法分别采用western blotting、流式细胞术检测人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内STAT3蛋白和磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白的表达。结果人肝... 目的研究信号传导及转录活化因子STAT3在人肝癌细胞内的表达及其表达产物STAT3酪氨酸磷酸化活化情况。方法分别采用western blotting、流式细胞术检测人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内STAT3蛋白和磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白的表达。结果人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内有STAT3的表达和酪氨酸(Y705)磷酸化。结论STAT3的异常表达和活化可能在肝癌的发生发展中起重要作用。 展开更多

关键词 人肝癌细胞 SMMC-7721细胞株 信号转导和转录活化因子

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GDNF和NT-3对噪声性毛细胞损伤的防护作用——细胞核形态学观察 被引量：1

11

作者 杨卫平 胡吟燕 +2 位作者 胡博华 郭维 杨伟炎 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1048-1049,共2页

观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)和神经营养素 3 (NT 3 )对噪声性毛细胞损伤的防护作用。将GDNF和NT 3缓慢注入内耳 ,以灌注人工外淋巴液动物为对照 ,检测噪声暴露后耳蜗毛细胞核形态、数量的变化。噪声暴露 10天后 ,毛细胞核荧光... 观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)和神经营养素 3 (NT 3 )对噪声性毛细胞损伤的防护作用。将GDNF和NT 3缓慢注入内耳 ,以灌注人工外淋巴液动物为对照 ,检测噪声暴露后耳蜗毛细胞核形态、数量的变化。噪声暴露 10天后 ,毛细胞核荧光染色计数发现 ,实验组手术耳和非手术耳耳蜗外毛细胞核肿胀率明显低于对照组 (P <0 0 1)。研究表明 ,GDNF和NT 展开更多

关键词 GDNF NT-3 噪声性细胞损伤 细胞核 形态学 噪声性聋

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阿司匹林通过抑制STAT3磷酸化下调MCL-1和VEGF mRNA和蛋白表达促进胆囊癌细胞凋亡、抑制增殖 被引量：1

12

作者 李皇保 周俊 +2 位作者 赵凤庆 吴晓俊 闵捷 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2021年第3期158-164,共7页

目的探讨阿司匹林对人胆囊癌细胞株GBC-SD细胞凋亡及增殖的影响及其潜在机制。方法采用MTT法检测不同浓度梯度及作用时间下阿司匹林对GBC-SD细胞增殖的影响,流式细胞术检测阿司匹林对细胞凋亡的影响;Real-time PCR检测GBC-SD细胞中信号... 目的探讨阿司匹林对人胆囊癌细胞株GBC-SD细胞凋亡及增殖的影响及其潜在机制。方法采用MTT法检测不同浓度梯度及作用时间下阿司匹林对GBC-SD细胞增殖的影响,流式细胞术检测阿司匹林对细胞凋亡的影响;Real-time PCR检测GBC-SD细胞中信号转导和转录激活因子3(STAT3)、髓细胞白血病因子-1(MCL-1)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达水平,Western blotting检测STAT3、磷酸化信号转导与转录激活因子3(pSTAT3)、MCL-1、VEGF的蛋白表达情况。结果阿司匹林对GBC-SD细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖及时间依赖,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。阿司匹林可促进GBC-SD细胞凋亡。阿司匹林可下调MCL-1和VEGF的mRNA表达水平,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),但对STAT3 mRNA表达水平无明显影响(P>0.05)。阿司匹林可下调pSTAT3、MCL-1、VEGF的蛋白表达水平(P<0.05),但对STAT3蛋白表达水平无明显影响(P>0.05);使用STAT3激动剂后,STAT3、pSTAT3、MCL-1、VEGF的蛋白表达水平高于未使用激动剂组(P<0.05),在激动剂组加入阿司匹林后,pSTAT3、MCL-1、VEGF的蛋白表达水平下调(P<0.05),但高于无激动剂组(P<0.05)。结论在GBC-SD细胞中,阿司匹林通过抑制STAT3磷酸化下调MCL-1、VEGF的mRNA及蛋白表达水平,从而促进胆囊癌细胞的凋亡,抑制增殖。 展开更多

关键词 胆囊癌 GBC-SD细胞株 阿司匹林 信号转导与转录激活因子3(STAT3) 髓细胞白血病因子-1(MCL-1) 血管内皮生长因子(VEGF)

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