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小麦条锈菌PsCdc2基因的克隆及在条锈菌侵染小麦后的转录表达分析
被引量：
4
1
作者
代西维
郭军
+5 位作者
陈玥颖
段迎辉
夏宁
魏国荣
黄丽丽
康振生
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期174-181,共8页
【目的】克隆小麦条锈菌细胞分裂基因PsCdc2,分析该基因在条锈菌接种小麦后不同时间点的表达特征。【方法】利用PCR和RT-PCR技术克隆PsCdc2的cDNA序列和基因组序列,采用生物信息学技术预测分析该基因编码蛋白的保守结构域及基本特性,对...
【目的】克隆小麦条锈菌细胞分裂基因PsCdc2,分析该基因在条锈菌接种小麦后不同时间点的表达特征。【方法】利用PCR和RT-PCR技术克隆PsCdc2的cDNA序列和基因组序列,采用生物信息学技术预测分析该基因编码蛋白的保守结构域及基本特性,对该蛋白进行系统发育分析,构建进化树;运用实时荧光定量RT-PCR技术,以PsCdc2在夏孢子时期的表达情况为对照,分析该基因在亲和及非亲和互作中不同时间点的表达特征。【结果】PsCdc2基因组序列长2279 bp,由11个外显子和10个内含子构成,开放阅读框为885 bp,编码294个氨基酸,分子量为33.14 kDa,等电点为6.26。编码蛋白含两个保守的激酶特征位点,一个跨膜螺旋区域。PsCdc2基因编码蛋白与小麦秆锈菌、新型隐球菌、玉米瘤黑粉菌等多种真菌的Cdc2高度相似,其中与小麦秆锈菌的Cdc2亲缘关系最近,序列相似性达73.1%。实时荧光定量RT-PCR结果表明,在亲和组合中,该基因在条锈菌接种小麦的前期上调表达,其中接种后12 h时表达量最高,约为夏孢子中表达量的1.62倍,接种后24-268 h,基因表达基本呈下调趋势,其中96 h基因表达量最低,仅为夏孢子时期的0.07倍。在非亲和组合中,该基因表达基本呈下调趋势,在接种后各个时间点的表达量均低于在夏孢子中的表达量,其中接种后12 h时表达量最高,但仅为夏孢子中表达量的0.34倍;接种后96 h表达量最低,为夏孢子中表达量的0.02倍。【结论】PsCdc2可能通过调控条锈菌的细胞周期循环参与了侵染前期初生菌丝生长和吸器母细胞的形成,与条锈菌的致病性相关。本文首次报道了小麦条锈菌的Cdc2基因,为进一步揭示条锈菌细胞周期调控的本质及研究开发靶向Cdc2的新型农药,以及实现对小麦条锈病的新型药剂防治提供了理论基础。
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关键词
细胞周期蛋白依赖性激酶
细胞分裂基因
2
进化树
实时定量PCR
原文传递
CyclinE1、CyclinE2在低浓度MNNG诱发的FL细胞中的表达研究
被引量：
2
2
作者
李红娟
陈维亚
《杭州师范学院学报（医学版）》
2008年第6期387-390,共4页
目的研究低浓度N-甲基-N′-硝基-N-甲基亚硝基胍对人羊膜FL细胞的细胞周期基因表达的影响,以助于阐明MNNG引起细胞应答反应的机制。方法用实时荧光定量PCR方法,检测FL细胞在1.0μmol/LMNNG处理后细胞周期基因CyclinE1及CyclinE2基因表...
目的研究低浓度N-甲基-N′-硝基-N-甲基亚硝基胍对人羊膜FL细胞的细胞周期基因表达的影响,以助于阐明MNNG引起细胞应答反应的机制。方法用实时荧光定量PCR方法,检测FL细胞在1.0μmol/LMNNG处理后细胞周期基因CyclinE1及CyclinE2基因表达的改变,数据用ABI公司的SDS2.1软件分析。结果MNNG处理后,细胞周期基因CyclinE1及CyclinE2表达显著上调(P<0.05)。结论低浓度MNNG攻击可使人羊膜FL细胞周期发生异常。
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关键词
N-甲基-N'-硝基-N-甲基亚硝基胍
细胞周期基因
CyclinE1
CyclinE
2
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职称材料
人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定
被引量：
1
3
作者
徐波
郑永晨
费邵阳
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期834-836,共3页
目的:从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2(CDC2),并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白。方法:从人肝癌组织中提取RNA,采用RT-PCR法扩增CDC2cDNA,用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物,将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和XhoⅠ两酶...
目的:从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2(CDC2),并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白。方法:从人肝癌组织中提取RNA,采用RT-PCR法扩增CDC2cDNA,用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物,将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和XhoⅠ两酶切位点之间,转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导表达人CDC2蛋白。结果:RT-PCR扩增出约894bp的DNA片段,与GenBank中的CDC2基因序列完全一致。经限制性内切图谱和测序鉴定,成功构建了pET28a(+)/CDC2原核表达载体。SDS-PAGE分析结果显示人CDC2蛋白在大肠杆菌中得已表达。结论:从人肝癌组织中成功地扩增出CDC2基因,并在大肠杆菌中表达。
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关键词
人细胞分裂周期基因
2
基因克隆
原核表达
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职称材料
题名
小麦条锈菌PsCdc2基因的克隆及在条锈菌侵染小麦后的转录表达分析
被引量：
4
1
作者
代西维
郭军
陈玥颖
段迎辉
夏宁
魏国荣
黄丽丽
康振生
机构
西北农林科技大学植物保护学院
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期174-181,共8页
基金
国家“973”项目(2006CB100203)
教育部科学技术研究重点项目(107104)
+3 种基金
现代农业产业技术体系建设专项资金
高等学校学科创新引智计划资助项目(B07049)
农业部行业计划项目
西北农林科技大学青年学术骨干支持计划~~
文摘
【目的】克隆小麦条锈菌细胞分裂基因PsCdc2,分析该基因在条锈菌接种小麦后不同时间点的表达特征。【方法】利用PCR和RT-PCR技术克隆PsCdc2的cDNA序列和基因组序列,采用生物信息学技术预测分析该基因编码蛋白的保守结构域及基本特性,对该蛋白进行系统发育分析,构建进化树;运用实时荧光定量RT-PCR技术,以PsCdc2在夏孢子时期的表达情况为对照,分析该基因在亲和及非亲和互作中不同时间点的表达特征。【结果】PsCdc2基因组序列长2279 bp,由11个外显子和10个内含子构成,开放阅读框为885 bp,编码294个氨基酸,分子量为33.14 kDa,等电点为6.26。编码蛋白含两个保守的激酶特征位点,一个跨膜螺旋区域。PsCdc2基因编码蛋白与小麦秆锈菌、新型隐球菌、玉米瘤黑粉菌等多种真菌的Cdc2高度相似,其中与小麦秆锈菌的Cdc2亲缘关系最近,序列相似性达73.1%。实时荧光定量RT-PCR结果表明,在亲和组合中,该基因在条锈菌接种小麦的前期上调表达,其中接种后12 h时表达量最高,约为夏孢子中表达量的1.62倍,接种后24-268 h,基因表达基本呈下调趋势,其中96 h基因表达量最低,仅为夏孢子时期的0.07倍。在非亲和组合中,该基因表达基本呈下调趋势,在接种后各个时间点的表达量均低于在夏孢子中的表达量,其中接种后12 h时表达量最高,但仅为夏孢子中表达量的0.34倍;接种后96 h表达量最低,为夏孢子中表达量的0.02倍。【结论】PsCdc2可能通过调控条锈菌的细胞周期循环参与了侵染前期初生菌丝生长和吸器母细胞的形成,与条锈菌的致病性相关。本文首次报道了小麦条锈菌的Cdc2基因,为进一步揭示条锈菌细胞周期调控的本质及研究开发靶向Cdc2的新型农药,以及实现对小麦条锈病的新型药剂防治提供了理论基础。
关键词
细胞周期蛋白依赖性激酶
细胞分裂基因
2
进化树
实时定量PCR
Keywords
cyclin-dependent
kinase
cell
division
cycle
gene
2
phylo
gene
tic
tree
real
time
PCR
分类号
S435.121 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
原文传递
题名
CyclinE1、CyclinE2在低浓度MNNG诱发的FL细胞中的表达研究
被引量：
2
2
作者
李红娟
陈维亚
机构
杭州师范大学基础医学部
浙江大学医学院病理学和病理生理教研室
出处
《杭州师范学院学报（医学版）》
2008年第6期387-390,共4页
基金
国家973项目(No.2002CB512901
2002CB512902)
杭州师范大学科学研究基金(No.2006XM206)
文摘
目的研究低浓度N-甲基-N′-硝基-N-甲基亚硝基胍对人羊膜FL细胞的细胞周期基因表达的影响,以助于阐明MNNG引起细胞应答反应的机制。方法用实时荧光定量PCR方法,检测FL细胞在1.0μmol/LMNNG处理后细胞周期基因CyclinE1及CyclinE2基因表达的改变,数据用ABI公司的SDS2.1软件分析。结果MNNG处理后,细胞周期基因CyclinE1及CyclinE2表达显著上调(P<0.05)。结论低浓度MNNG攻击可使人羊膜FL细胞周期发生异常。
关键词
N-甲基-N'-硝基-N-甲基亚硝基胍
细胞周期基因
CyclinE1
CyclinE
2
Keywords
N-methyl-N＇-
nitro-N-nitrosoguanidine
cell
division
cycle
gene
CyclinE1
CyclinE
2
分类号
R994.6 [医药卫生—毒理学]
下载PDF
职称材料
题名
人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定
被引量：
1
3
作者
徐波
郑永晨
费邵阳
机构
吉林大学第二医院中心实验室
吉林省第三人民医院神经外科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期834-836,共3页
基金
吉林省科学技术厅资助课题(20030434)
文摘
目的:从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2(CDC2),并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白。方法:从人肝癌组织中提取RNA,采用RT-PCR法扩增CDC2cDNA,用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物,将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和XhoⅠ两酶切位点之间,转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导表达人CDC2蛋白。结果:RT-PCR扩增出约894bp的DNA片段,与GenBank中的CDC2基因序列完全一致。经限制性内切图谱和测序鉴定,成功构建了pET28a(+)/CDC2原核表达载体。SDS-PAGE分析结果显示人CDC2蛋白在大肠杆菌中得已表达。结论:从人肝癌组织中成功地扩增出CDC2基因,并在大肠杆菌中表达。
关键词
人细胞分裂周期基因
2
基因克隆
原核表达
Keywords
human
cell
division
cycle
gene
2
gene
clone
prokaryotic
expression
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小麦条锈菌PsCdc2基因的克隆及在条锈菌侵染小麦后的转录表达分析
代西维
郭军
陈玥颖
段迎辉
夏宁
魏国荣
黄丽丽
康振生
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
原文传递
2
CyclinE1、CyclinE2在低浓度MNNG诱发的FL细胞中的表达研究
李红娟
陈维亚
《杭州师范学院学报（医学版）》
2008
2
下载PDF
职称材料
3
人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定
徐波
郑永晨
费邵阳
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
下载PDF
职称材料
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