威灵仙提取物干预膝骨关节炎软骨细胞的生长活力 被引量：23

1

作者 徐扬 桂鉴超 +4 位作者 高峰 徐燕 王黎明 陆一鸣 尹昭伟 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第2期241-246,共6页

背景:近年来研究显示关节软骨细胞过度凋亡是骨性关节炎开始和进展的关键因素,利用药物抑制软骨细胞凋亡来控制骨性关节炎的进展是现在的研究热点。而威灵仙在国内临床治疗骨关节炎时取得了较确切的疗效,但是其具体的作用机制是否通过... 背景:近年来研究显示关节软骨细胞过度凋亡是骨性关节炎开始和进展的关键因素,利用药物抑制软骨细胞凋亡来控制骨性关节炎的进展是现在的研究热点。而威灵仙在国内临床治疗骨关节炎时取得了较确切的疗效,但是其具体的作用机制是否通过抑制软骨细胞凋亡来实现尚未见相关报道。目的:观察中药威灵仙提取物对膝骨关节炎软骨细胞生长活力的影响。方法:取骨关节炎晚期行膝关节置换的关节软骨,剪碎后,采用酶消化法消化细胞,将处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组分别加入0.01,0.05,0.1,0.5,1.0g/L威灵仙提取物培养基,对照组仅加入普通培养基进行培养。Live/Dead染色法测定人软骨细胞活力指数,TUNEL染色法测定人软骨细胞凋亡指数。结果与结论:0.05,0.1g/L威灵仙提取物能明显提高软骨细胞活力,而0.5,1.0g/L威灵仙提取物反而降低了软骨细胞活力,其活力指数与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05);0.01,0.05,0.1g/L威灵仙提取物能有效抑制软骨细胞凋亡,1.0g/L威灵仙提取物反而促进了软骨细胞凋亡,其凋亡指数与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。结果可见威灵仙提取物在合适的质量浓度时能有效提高人软骨细胞活力,抑制人软骨细胞凋亡,尤以0.1g/L时效果最佳。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 威灵仙 软骨细胞 骨关节炎 凋亡 细胞活力 凋亡指数 活力指数 组织构建图片文章

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体外传代培养兔关节软骨细胞的去分化现象 被引量：14

2

作者 徐磊 叶朝阳 +1 位作者 周燕 谭文松 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第20期3626-3634,共9页

背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可。目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象。方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7代... 背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可。目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象。方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7代,对细胞生长、形态、基质分泌以及基因表达等方面分别采用细胞计数,显微镜观察,F机动蛋白染色、番红O染色,糖胺聚糖定量测定以及半定量聚合链式反应进行鉴定和比较。结果与结论:光学显微镜下,兔关节软骨细胞在体外传代培养过程中细胞形态由小且圆形或多角形,逐步转变大且为成纤维细胞样的梭形形态,对F机动蛋白的染色进一步佐证了这样的形态变化。细胞计数结果表明,细胞增殖能力随代次增加显著下降,特别是第3代以后的软骨细胞基本无明显增殖;经过番红O染色以及定量测定糖胺聚糖的含量,发现软骨特性胞外基质分泌量从第2代细胞开始就呈现显著的降低。半定量聚合链式反应检测结果表明,随着传代次数的增加,特别是第3代以后,软骨相关特征分子(包括Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖、软骨寡聚基质蛋白和SOX9等)基因表达水平下调;而与去分化相关的特征分子Ⅰ型胶原和多能蛋白聚糖基因表达水平上调,同时,细胞表面分子CD90基因表达上调,而CD14基因表达未见明显变化。结果证实,兔软骨细胞在体外传代过程中可出现快速地去分化现象,呈现出特征基因表达水平的变化,第3代以内的软骨细胞适合应用于软骨组织再生修复。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 关节软骨损伤 软骨组织工程 兔 软骨细胞 传代培养 去分化 细胞形态 细胞生长 组织学染色 基因表达 部级基金

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碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡 被引量：8

3

作者 姜丽平 李龙婕 +3 位作者 宫德正 耿成燕 姜丽杰 仲来福 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第2期247-253,共7页

背景:近年碘乙酸钠多用于诱导骨关节炎的发生,病理结果观察到软骨区域凋亡的发生,但有关碘乙酸钠诱导软骨细胞凋亡机制的研究较少。目的:探讨不同剂量碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡的发生机制。方法:使用酶消化法建立大鼠关节软骨... 背景:近年碘乙酸钠多用于诱导骨关节炎的发生,病理结果观察到软骨区域凋亡的发生,但有关碘乙酸钠诱导软骨细胞凋亡机制的研究较少。目的:探讨不同剂量碘乙酸钠诱导原代大鼠软骨细胞凋亡的发生机制。方法:使用酶消化法建立大鼠关节软骨细胞培养体系;荧光显微镜和流式细胞仪检测软骨细胞凋亡;激光共聚焦显微镜和荧光分光光度计评估线粒体膜电位的改变;荧光分光光度法测定活性氧水平改变;免疫印迹法检测凋亡调控蛋白细胞色素C和caspase-3的表达。结果与结论:碘乙酸钠剂量依赖性地诱导软骨细胞凋亡,使活性氧水平显著升高(P<0.05),线粒体膜电位水平明显降低(P<0.05),凋亡调控蛋白的表达明显增加。提示碘乙酸钠诱导的原代大鼠软骨细胞凋亡主要与活性氧的产生及线粒体介导的caspase-3活化有关。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 软骨细胞 碘乙酸钠 活性氧 线粒体膜电位 细胞色素C CASPASE-3 凋亡 组织构建图片文章

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人参皂苷Rg1对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响 被引量：6

4

作者 张业勇 程文丹 +2 位作者 陈哲峰 范卫民 刘锋 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第11期1917-1924,共8页

背景:人参是具有抗炎、抗应激、调节免疫等广泛药理学活性的中草药,其主要药理活性成分是人参皂苷,而Rg1是含量较多的活性成分。目的:探讨人参皂苷Rg1对白细胞介素1β诱导的人骨关节炎模型中软骨细胞Ⅱ型胶原及环氧合酶2mRNA表达的影响... 背景:人参是具有抗炎、抗应激、调节免疫等广泛药理学活性的中草药,其主要药理活性成分是人参皂苷,而Rg1是含量较多的活性成分。目的:探讨人参皂苷Rg1对白细胞介素1β诱导的人骨关节炎模型中软骨细胞Ⅱ型胶原及环氧合酶2mRNA表达的影响。方法:取因骨关节炎接受全膝关节置换患者的膝关节软骨进行体外培养,取第2代体外培养的软骨细胞,CCK-8检测0.001,0.01,0.1,1,10,100mg/L人参皂苷Rg1对软骨细胞增殖率的影响。再将第2代体外培养的关节软骨细胞,随机分为空白组、对照组和实验组,分别加入DMEM培养液、10μg/L白细胞介素1β,10μg/L白细胞介素1β+0.1,1,10,100mg/L人参皂苷Rg1,培养24h后反转录PCR检测各组细胞中Ⅱ型胶原和环氧合酶2mRNA的表达。结果与结论:与对照组相比,人参皂苷Rg1质量浓度为0.001,0.01,0.1,1mg/L时促进软骨细胞的增殖作用不明显,差异无显著性意义(P>0.05);当人参皂苷Rg1质量浓度为10,100mg/L时,促进软骨细胞的增殖作用明显(P<0.05)。与空白组相比,对照组的软骨细胞Ⅱ型胶原的mRNA表达明显下降,而环氧合酶2mRNA表达明显升高(P<0.05);与对照组相比,联合加入人参皂苷Rg1质量浓度为0.1和1mg/L时,人软骨细胞中Ⅱ型胶原和环氧合酶2mRNA表达没有明显变化(P>0.05);而联合加入人参皂苷Rg1质量浓度为10和100mg/L时,人软骨细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达增加,而环氧合酶2mRNA表达降低(P<0.05)。说明一定浓度的人参皂苷Rg1可以拮抗白细胞介素1β引起的人软骨细胞中Ⅱ型胶原的mRNA表达的降低和环氧合酶2mRNA表达的升高。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 人参皂苷RG1 Ⅱ型胶原 环氧合酶2 软骨细胞 白细胞介素1β 反转录聚合酶链反应 骨关节炎 CCK-8 组织构建图片文章

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葛根素保护大鼠颈椎间盘纤维环细胞的最佳浓度 被引量：5

5

作者 陈少清 林建平 +3 位作者 王诗忠 陈乐春 洪钰 张坤木 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第7期1156-1161,共6页

背景:葛根素能抑制椎间盘纤维环细胞凋亡,在一定程度上延缓椎间盘退变。目的:观察最佳浓度葛根素对大鼠颈椎间盘纤维环细胞的保护作用。方法:用不同质量浓度Fas配体(5,20,50μg/L)诱导大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡,用流式细胞仪Annexin V... 背景:葛根素能抑制椎间盘纤维环细胞凋亡,在一定程度上延缓椎间盘退变。目的:观察最佳浓度葛根素对大鼠颈椎间盘纤维环细胞的保护作用。方法:用不同质量浓度Fas配体(5,20,50μg/L)诱导大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡,用流式细胞仪Annexin V–FITC-PI双染法检测纤维环细胞凋亡情况,通过MTT法和流式细胞仪观察不同质量浓度葛根素(0.01,0.1,1g/L)对纤维环细胞的保护作用。结果与结论:5μg/LFas配体诱导的纤维环细胞存活率及早期凋亡率与胎牛血清对照组比较差异无显著性意义(P>0.05),20μg/L及50μg/LFas配体组纤维环细胞存活率及早期凋亡率高于胎牛血清对照组(P<0.01),且随着Fas配体质量浓度的增加,大鼠成熟纤维环细胞活性比例逐渐降低,而早期凋亡率逐渐增加。3种浓度的葛根素作用20μg/LFas配体诱导的纤维环细胞,随着葛根素质量浓度的增加,纤维环细胞存活比例逐渐增加,而早期凋亡率逐渐减少(P<0.01)。结果提示:①Fas配体能够诱导大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡,增加大鼠成熟颈椎间盘纤维环细胞的凋亡率。②3种质量浓度葛根素均有抑制椎间盘纤维环细胞死亡作用,且呈剂量依赖型。③葛根素对大鼠颈椎间盘纤维环细胞有明显保护作用。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 颈椎病 葛根素 中药 最佳浓度 剂量依赖 FAS FASL 细胞凋亡 纤维环细胞 大鼠 国家自然科学基金 组织构建图片文章

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人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞的共培养 被引量：5

6

作者 张立智 蒋垚 +1 位作者 毛彦杰 黄成龙 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第11期1909-1916,共8页

背景:软骨细胞移植等组织工程方法已经成为非常有潜力的骨关节炎治疗措施,软骨下骨的成骨细胞对软骨细胞的作用不仅参与骨关节炎的发生和发展,而且与细胞移植治疗预后有着密切的关系。目的:培养人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞,构... 背景:软骨细胞移植等组织工程方法已经成为非常有潜力的骨关节炎治疗措施,软骨下骨的成骨细胞对软骨细胞的作用不仅参与骨关节炎的发生和发展,而且与细胞移植治疗预后有着密切的关系。目的:培养人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞,构建两者共培养的细胞培养模型,探讨软骨下骨成骨细胞对软骨细胞的作用。方法:收集骨关节炎患者行全膝关节置换和严重创伤患者行截肢后遗弃的胫骨平台组织,采用Ⅰ型胶原酶连续消化后进行贴壁培养的方法,培养软骨下骨的成骨细胞,应用Ⅱ型胶原酶消化方法,培养软骨细胞,然后应用多孔插入器细胞培养池构建成骨细胞和软骨细胞三维共培养模型。结果与结论:通过免疫组化,NBT/BCIP染色,茜素红染色等检查,证实成功培养出成骨细胞和软骨细胞。实时定量RT-PCR显示,在与骨关节炎的软骨下骨成骨细胞共培养的软骨细胞中,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达明显下降。可见骨关节炎患者的成骨细胞能促进软骨细胞的退变。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 软骨下骨 成骨细胞 软骨细胞 骨关节炎 共培养 实时定量RT-PCR Ⅱ型胶原 蛋白聚糖 Ⅰ型胶原 碱性磷酸酶 国家自然科学基金 组织构建图片文章

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早期骨关节炎软骨下骨趋化因子信号通路的表达 被引量：5

7

作者 张荣凯 叶志强 +5 位作者 陈琰 方航 张颂阳 吴兆亚 赵庆 蔡道章 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第11期1925-1930,共6页

背景:趋化因子广泛存在于炎症反应组织当中,起诱导炎症细胞趋向炎症组织参与免疫应答的作用,大量的实验研究表明,趋化因子在骨关节炎致病过程中起了重要作用。目的:分析早期骨关节炎软骨下骨的趋化因子信号通路表达改变情况,为阐述其在... 背景:趋化因子广泛存在于炎症反应组织当中,起诱导炎症细胞趋向炎症组织参与免疫应答的作用,大量的实验研究表明,趋化因子在骨关节炎致病过程中起了重要作用。目的:分析早期骨关节炎软骨下骨的趋化因子信号通路表达改变情况,为阐述其在骨关节炎致病机制中的重要作用提供依据。方法:30只SD大鼠随机均分为实验组和对照组。实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带,对照组仅切开关节囊。于造模后1,2,4周取右膝关节标本,采用全基因表达谱芯片技术研究软骨下骨全基因表达,利用差异基因分析、信号通路分析的方法分析趋化因子信号通路的表达改变情况。结果与结论:①发现一系列与趋化因子信号通路相关的差异表达基因。②实验组与对照组相比较,趋化因子信号通路在造模后1周差异有显著性意义(P<0.05),造模后2,4周差异无显著性意义(P>0.05)。说明趋化因子信号通路在极早期膝关节骨关节炎的软骨下骨改变中起重要作用。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 基因芯片 骨性关节炎 软骨下骨 趋化因子 信号通路 半月板 内侧副 韧带 炎症组织 免疫应答 成骨细胞 863项目

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维药买朱尼对关节软骨前炎性因子的影响 被引量：4

8

作者 洪汉刚 张耀武 +2 位作者 牛清海 方锐 孟庆才 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第7期1162-1167,共6页

背景:骨关节炎病理过程中,白细胞介素1β被认为是促进软骨基质降解和关节软骨破坏的最重要的细胞因之一。目的:观察白细胞介素1β在关节软骨中的表达,并观察维药买朱尼对其的影响。方法:将40只SD大鼠随机数字表法随机等分为模型对照组... 背景:骨关节炎病理过程中,白细胞介素1β被认为是促进软骨基质降解和关节软骨破坏的最重要的细胞因之一。目的:观察白细胞介素1β在关节软骨中的表达,并观察维药买朱尼对其的影响。方法:将40只SD大鼠随机数字表法随机等分为模型对照组、维药买朱尼组、假手术组、正常对照组。模型对照组和维药买朱尼组采用改良Hulth造模法建立大鼠膝骨关节炎模型,假手术组仅显露膝关节,不切断韧带,不切除内侧半月板。维药买朱尼组建模第2周开始灌胃维药买朱尼10.31mg/(kgd),模型组及假手术组大鼠均灌服等量生理盐水,连续4周。结果与结论:模型组软骨退变程度明显重于维药买朱尼组,模型组软骨大体评分及Mankin评分均明显高于维药买朱尼组(P<0.05),模型组软骨细胞白细胞介素1β的表达强度亦明显高于维药买朱尼组(P<0.05)。与正常对照组比较,假手术组软骨大体评分、Mankin评分及软骨细胞白细胞介素1β差异无显著性意义(P>0.05)。结果说明,维药买朱尼可以抑制关节软骨前炎性因子白细胞介素1β的表达。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 骨关节炎 关节炎 膝关节 关节软骨 前炎性因子 白细胞介素1Β 白细胞介素1 维药买朱尼 Mankin评分 软骨细胞 省级基金 组织构建图片文章

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大鼠髁突软骨细胞凋亡与胰岛素样生长因子1的影响 被引量：3

9

作者 魏立 江莉婷 +2 位作者 周琦 朱雅萍 高益鸣 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第33期5901-5908,共8页

背景:胰岛素样生长因子 1 参与了髁突软骨生长与改建,是软骨发育关键因子。目的:探索胰岛素样生长因子 1 对体外培养大鼠髁突软骨细胞凋亡的作用,以及对凋亡相关因子 Bcl-2 和 BaxmRNA 及蛋白表达变化的影响。方法:体外培养并鉴定出生后... 背景:胰岛素样生长因子 1 参与了髁突软骨生长与改建,是软骨发育关键因子。目的:探索胰岛素样生长因子 1 对体外培养大鼠髁突软骨细胞凋亡的作用,以及对凋亡相关因子 Bcl-2 和 BaxmRNA 及蛋白表达变化的影响。方法:体外培养并鉴定出生后 1,28 d 大鼠髁突软骨细胞后,将每个年龄组的髁突软骨细胞分别分为实验组和对照组。饥饿培养 24 h 后,实验组加入 100 μg/L 重组大鼠胰岛素样生长因子 1 细胞因子孵育 48 h,对照组正常培养。结果与结论:与对照组相比,实验组加入重组胰岛素样生长因子 1 后,髁突软骨细胞数量增多,增殖速度显著增加(P < 0.05)。实时 PCR 和 Western blot 检测显示,加入重组胰岛素样生长因子 1 培养 48 h 后,各组髁突软骨细胞中 bcl-2 mRNA 和蛋白表达增加,bax mRNA 和蛋白表达减少(P < 0.05)。提示胰岛素样生长因子 1 可以促进新出生及青春期大鼠髁突软骨细胞增殖,抑制其凋亡,并可能通过 Bcl-2 和 Bax 介导抑制凋亡。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 胰岛素样生长因子 1 下颌骨髁突 软骨细胞 细胞凋亡 细胞增殖 BAX Bcl-2 省级基金

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软骨组织工程生物反应器的研究进展 被引量：2

10

作者 吕晓杰 周广东 曹谊林 《国际生物医学工程杂志》 CAS 2006年第2期73-76,共4页

体外软骨构建是软骨组织工程产业化发展及临床应用的重要手段。然而,采用现有的体外构建技术无法构建功能接近正常的软骨。生物反应器能够在一定程度上模拟体内环境,有望弥补现有体外构建技术的弊端。研究发现,流体剪切力、静态液压力... 体外软骨构建是软骨组织工程产业化发展及临床应用的重要手段。然而,采用现有的体外构建技术无法构建功能接近正常的软骨。生物反应器能够在一定程度上模拟体内环境,有望弥补现有体外构建技术的弊端。研究发现,流体剪切力、静态液压力和直接压缩力是体内软骨发育和成熟的重要力学因素,常用软骨生物反应器均据此设计而产生。由于不同类型生物反应器各具特点,研究和开发新型复合式生物反应器将成为未来的发展方向。对目前软骨组织工程生物反应器的研究现状做一综述。 展开更多

关键词 软骨组织工程 生物反应器 体外构建

原文传递

人类髓核细胞分离培养方法的优化选择 被引量：3

11

作者 张子言 佟珅 +2 位作者 颜华东 姜睿 武汉 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第28期5151-5156,共6页

背景:关于人类髓核细胞的分离培养方法不一,所用消化酶组分及消化时间差异较大,如何提高人类髓核细胞获得效率的问题尚未解决。目的:优选人类髓核细胞获取的消化酶组分和消化方法。方法:髓核组织标本取自吉林大学中日联谊医院骨科成人... 背景:关于人类髓核细胞的分离培养方法不一,所用消化酶组分及消化时间差异较大,如何提高人类髓核细胞获得效率的问题尚未解决。目的:优选人类髓核细胞获取的消化酶组分和消化方法。方法:髓核组织标本取自吉林大学中日联谊医院骨科成人椎间盘3例。无菌条件下取突出至椎管内的急性创伤后椎间盘组织,可见到外周白色的纤维环和中心胶冻样的髓核组织。按不同混合酶组分划分为2组,Ⅰ组成分为0.2%Ⅱ型胶原酶;Ⅱ组成分为先用0.25%胰酶消化30min,再用0.2%Ⅱ型胶原酶。每组再按消化时间分为2,4h,过夜3个亚组。最后重悬细胞终体积均定位2mL并计数,采用含胎牛血清的DMEM培养液体外培养细胞。观察不同组分酶对分离所得髓核细胞数量、活性及增殖能力的影响,采用锥虫蓝染色计数细胞总数及活细胞比值,MTT法测定髓核细胞生长曲线。结果与结论:采用2种不同酶组分进行消化,发现消化时间2,4h时,Ⅱ组消化细胞较Ⅰ组多,但差异无显著性意义(P>0.05)。孵育过夜时,Ⅰ组和Ⅱ组的存活细胞率较消化2,4h明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。在作用4h时,组织块消失,计数细胞数量最多。提示以Ⅱ型胶原酶为主要成分的Ⅰ组对分离髓核细胞有利,消化时间以4h为宜,该条件具有操作简单,效率较高,成本较低等优点,可以认为0.2%Ⅱ型胶原酶消化髓核组织块4h为获取髓核细胞的最佳条件。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 髓核细胞 人类 Ⅱ型胶原酶 胰酶 消化 分离培养 MTT 国家自然科学基金

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不同代次兔髓核细胞的形态学特征和生物学性状 被引量：2

12

作者 武海军 银和平 +3 位作者 李树文 白明 杜志才 曹振华 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第11期1901-1908,共8页

背景:椎间盘退变是个慢性、复杂的过程,然而椎间盘退变其发生机制尚未完全阐明,很难自行修复。近年来研究细胞移植治疗椎间盘退行性变尚处在实验室阶段。研究髓核细胞的生物学性状可为研究椎间盘退变机制、组织工程构建椎间盘、基因治... 背景:椎间盘退变是个慢性、复杂的过程,然而椎间盘退变其发生机制尚未完全阐明,很难自行修复。近年来研究细胞移植治疗椎间盘退行性变尚处在实验室阶段。研究髓核细胞的生物学性状可为研究椎间盘退变机制、组织工程构建椎间盘、基因治疗等提供理论依据。目的:研究兔不同代次髓核细胞的生物学特性,旨在找出合适的种子细胞去治疗椎间盘退变性疾病。方法:从新西兰大耳白兔椎间盘髓核组织中,分离并培养髓核细胞同时进行培养传代,对原代及第3,4代髓核细胞进行苏木精-伊红染色观察细胞形态学变化;甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学法检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达;反转录PCR法测定Ⅱ型胶原和聚合蛋白聚糖mRNA的表达水平,观察各代髓核细胞生物学特性的变化。结果与结论:兔椎间盘髓核细胞可以在体外培养并进行传代,原代髓核细胞一般需7d左右贴壁,形状呈类圆形或多角形,原代和第3代髓核细胞都呈圆形或多角形,活力较强,苏木精-伊红染色后细胞核被染成均一蓝黑色,胞浆呈现淡粉色;髓核细胞经过甲苯胺蓝染色后,胞浆内呈现天蓝色,通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色后,胞浆内表现为黄褐色沉淀。到第4代细胞出现退变,Ⅱ型胶原和聚合蛋白聚糖mRNA的表达水平较前几代细胞显著下降。前3代的髓核细胞代谢旺盛,表型一致,聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达正常,传第4代后髓核细胞开始出现衰老、退变。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 兔 髓核细胞 体外培养 聚集蛋白聚糖 Ⅱ型胶原 椎间盘退变 细胞培养 省级基金 组织构建图片文章

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膝关节腔内培养骨髓间充质干细胞复合脱钙骨的组织工程软骨 被引量：2

13

作者 徐斌 王英明 +1 位作者 徐洪港 王瑞 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第24期4371-4379,共9页

背景:如何更好地以组织工程学方法修复关节软骨缺损并达到良好的远期疗效目前尚无公识。目的:创新性地在膝关节腔内培养兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的组织工程软骨。方法:采用全骨髓贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞,DME... 背景:如何更好地以组织工程学方法修复关节软骨缺损并达到良好的远期疗效目前尚无公识。目的:创新性地在膝关节腔内培养兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的组织工程软骨。方法:采用全骨髓贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞,DMEM/F12完全培养基培养,成软骨诱导条件培养基诱导分化。取同种异体兔的髂骨和椎体骨制作成脱钙骨支架,诱导后的骨髓间充质干细胞种植于脱钙骨支架上,培养1d后将细胞-支架复合物用筋膜包裹置于兔左膝关节腔内培养,单纯脱钙骨支架筋膜包裹置入右膝关节腔。于培养第4,8,12周分别取材,行大体观察并制成石蜡切片,采用苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色,Ⅱ型胶原免疫组化染色方法进行组织学观察。结果与结论:培养4,8周,细胞-支架组标本Ⅱ型胶原免疫组化的平均吸光度值(A)分别为0.263±0.031,0.340±0.052,单纯支架组标本分别为0.147±0.027,0.165±0.030,两组比较差异有显著性意义(P<0.05);培养12周细胞-支架组标本Ⅱ型胶原免疫组化A值平均为0.362±0.037,标本类似正常软骨外观,Ⅱ型胶原免疫组化反应呈阳性;而单纯支架组脱钙骨支架降解。培养12周细胞-支架组苏木精-伊红染色结果显示细胞数量多,脱钙骨支架基本被吸收;而甲苯胺蓝染色结果显示有被染成紫红色的异染性基质形成。结果提示兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨可在兔膝关节腔内培养出组织工程软骨。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 骨髓间充质干细胞 细胞支架蛋白质类 同种异体 脱钙骨 组织工程软 骨细胞 兔 省级基金

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缺血再灌流股骨头骺影响关节软骨细胞的凋亡 被引量：1

14

作者 张敬东 易先宏 李玉安 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第28期5133-5138,共6页

背景:缺血再灌注后可以引起关节软骨的退行性变化,但其中具体机制尚无公识。目的:观察发育期髋关节股骨头骺关节软骨及缺血再灌注后关节软骨的退行性变化及其细胞凋亡现象。方法:80只SD大鼠随机分为2组,缺血再灌注组建立髋关节缺血再灌... 背景:缺血再灌注后可以引起关节软骨的退行性变化,但其中具体机制尚无公识。目的:观察发育期髋关节股骨头骺关节软骨及缺血再灌注后关节软骨的退行性变化及其细胞凋亡现象。方法:80只SD大鼠随机分为2组,缺血再灌注组建立髋关节缺血再灌注实验动物模型,假手术组开腹暴露腹主动脉5min常规关腹。于模型建立后6h,12h,24h,48h,5d,2周,4周不同时点对股骨头骺关节软骨进行光镜病理形态学观察,同时对标本进行TUNEL法检测股骨头骺关节软骨细胞凋亡现象。结果与结论:缺血再灌注组术后光镜观察到软骨细胞变性、减少、基质可见局限性纤维化等关节软骨退行变化,两组TUNEL法检测均观察到关节软骨细胞的凋亡现象,假手术组偶见有散在分布5个以下的软骨细胞凋亡,缺血再灌注组观察到48h可见10-30个软骨细胞发生凋亡。结果提示,缺血再灌注对髋关节股骨头骺关节软骨可引起退行性改变,发育期髋关节缺血再灌注后关节软骨的细胞凋亡可能参与关节软骨的损害,抑制关节软骨的细胞凋亡可能有助于防治早发的骨关节炎。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 缺血再灌注 股骨头骺 髋关节 关节软骨 细胞凋亡 软骨细胞 动物模型

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RhoA/ROCK信号通路在异常应力下关节软骨中的表达

15

作者 张海翔 王宸 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第2期235-240,共6页

背景:RhoA/ROCK信号通路在活体内关节软骨退变或者骨性关节炎的病理过程中是否发挥着作用,为此设计了该实验。目的:探索RhoA/ROCK信号通路在软骨退变过程中的作用。方法:采用家兔右膝关节伸直位制动模型,对制动2,4,6周及对照组家兔的右... 背景:RhoA/ROCK信号通路在活体内关节软骨退变或者骨性关节炎的病理过程中是否发挥着作用,为此设计了该实验。目的:探索RhoA/ROCK信号通路在软骨退变过程中的作用。方法:采用家兔右膝关节伸直位制动模型,对制动2,4,6周及对照组家兔的右膝关节胫骨平台负重面全层软骨进行苏木精-伊红染色、番红O染色及RhoA、ROCK免疫组织化学染色,比较制动前后软骨组织学、病理积分及RhoA、ROCK表达变化情况。结果与结论:随着制动时间的延长,关节软骨退变程度逐渐加重,Mankin评分逐渐增加,且各组评分之间差异有显著性意义(P<0.05)。免疫组织化学提示RhoA、ROCK表达变化主要集中在切线层及中间层软骨,且二者在关节软骨退变过程中表达变化趋势一致,均为先增多后减少。结果表明,在关节软骨退变过程中,RhoA/ROCK信号通路表达先递增后逐渐降低,RhoA/ROCK信号通路在异常应力所致的关节软骨退变过程中发挥了效应。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 异常应力 关节软骨 RHOA ROCK 免疫组织化学 制动 组织构建图片文章

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改良简易法获取人退变椎间盘髓核细胞及生物学特点 被引量：1

16

作者 王海 黄博 +2 位作者 周跃 王建 李长青 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第28期5139-5144,共6页

背景:目前较常应用的原代髓核细胞培养方法,多应用Ⅱ型胶原酶联合胰酶消化法、单纯Ⅱ型胶原酶消化法等,但这些方法获取细胞数量偏少存在一定的缺限。目的:利用改良简易传统的方法从人退变椎间盘获取髓核细胞。方法:分离培养髓核细胞,每... 背景:目前较常应用的原代髓核细胞培养方法,多应用Ⅱ型胶原酶联合胰酶消化法、单纯Ⅱ型胶原酶消化法等,但这些方法获取细胞数量偏少存在一定的缺限。目的:利用改良简易传统的方法从人退变椎间盘获取髓核细胞。方法:分离培养髓核细胞,每日倒置相差显微镜下观察髓核细胞形态,取原代和传代细胞培养悬液进行锥虫蓝细胞活性检测,分别于第1,3,5,7,9,11,13天采用MTT法测细胞生长情况,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞形态。结果与结论:成功分离出髓核细胞,成功传至P3代。原代细胞生长为梭形,P1及P2传代细胞形态多呈三角形或多角形,类似成纤维细胞形态,接近融合时呈铺路石样外观。锥虫蓝染色细胞活力测定原代分离时活力为99%,第3代细胞活力稍下降为93%-95%。髓核细胞随着传代的次数的增加,增殖活性逐渐降低,P2代和P3代在对数生长期相对P1代也逐渐趋于平缓。激光共聚焦显微镜观察细胞形态与相差显微镜观察的结果相似。结果提示,改良简易法相对于传统方法能可靠地获取人退变椎间盘多种细胞且所获细胞表现出了良好的生物学性能。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 髓核细胞 改良简易法 椎间盘 腰椎间盘突出症 细胞培养 细胞增殖 形态学 生物学性能 Ⅱ型胶原酶 细胞生长曲线 国家自然科学基金

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长距离跑步大鼠膝关节滑膜基质金属蛋白酶的表达 被引量：1

17

作者 上官雅娴 卫小春 +1 位作者 李凯 卫建平 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第33期5909-5916,共8页

背景:很多研究表明基质金属蛋白酶 1,3,9 和 13 对关节软骨的退变存在影响,但是针对关节滑膜进行的专项研究相对较少。目的:观察长距离跑步运动对基质金属蛋白酶 1,3, 9 以及基质金属蛋白酶 13 在滑膜上的表达的影响。方法:Wistar 雄性... 背景:很多研究表明基质金属蛋白酶 1,3,9 和 13 对关节软骨的退变存在影响,但是针对关节滑膜进行的专项研究相对较少。目的:观察长距离跑步运动对基质金属蛋白酶 1,3, 9 以及基质金属蛋白酶 13 在滑膜上的表达的影响。方法:Wistar 雄性大鼠 15 只随机分为 3 组:对照组、平板组和上坡组。对照组普通笼养;平板组每天在平板0°的水平面跑步机上以 1 km/h,运动 1 h,持续 45 d;上坡组先在平板 0°跑步机上以 1 km/h,运动 1 h,持续 15 d,然后在上坡+20°的跑步机上每天以 1 km/h,运动 1 h,持续 30 d。造成不同程度的膝关节滑膜损伤模型,造模成功后取双后肢膝关节,进行石蜡包埋,矢状面整体切片,而后进行苏木精-伊红和免疫组织化学染色,观察并分析实验结果。结果与结论:长距离跑步运动后,平板组和上坡组的滑膜组织中基质金属蛋白酶 1 的表达都比对照组增高(P < 0.05),但平板组和上坡组之间差异无显著性意义(P > 0.05);而 3 组基质金属蛋白酶 3 的表达并无明显变化(P > 0.05);基质金属蛋白酶 9 和基质金属蛋白酶 13 在滑膜组织中的表达呈梯度递增状态(P < 0.05),对照组表达最低,平板组有所升高,上坡组的表达最高。说明长距离跑步运动可通过改变基质金属蛋白酶的表达而影响大鼠膝关节滑膜组织的正常生理结构。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 滑膜炎 膝关节 滑膜损伤 基质金属蛋白酶 长距离 跑步运动 免疫组织化学 国家自然科学基金

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雌激素与机械张应力对骨重建相关因子的作用 被引量：1

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作者 彭伟 廖春晖 +1 位作者 钟小龙 陈珊 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第7期1141-1145,共5页

背景:牙槽骨是人体骨代谢最活跃的区域之一,对于在正畸治疗过程中的女性患者容易受到雌激素水平的影响。目的:观察雌激素对机械张应力作用下的牙周膜成纤维细胞骨重建相关因子骨保护素、核因子κB受体活化子配体mRNA表达水平的影响。方... 背景:牙槽骨是人体骨代谢最活跃的区域之一,对于在正畸治疗过程中的女性患者容易受到雌激素水平的影响。目的:观察雌激素对机械张应力作用下的牙周膜成纤维细胞骨重建相关因子骨保护素、核因子κB受体活化子配体mRNA表达水平的影响。方法:利用一定浓度雌激素干预人牙周膜成纤维细胞后使用四点弯曲加力装置对细胞进行不同时间段的机械张应力加载,并利用RT-PCR检测雌激素与机械张应力共同作用后牙周膜成纤维细胞骨保护素、核因子κB受体活化子配体基因表达变化。结果与结论:雌激素刺激后再进行机械张应力加载的人牙周膜成纤维细胞跟单纯受到机械张应力作用的人牙周膜成纤维细胞相比,骨保护素mRNA表达量明显上调,而核因子κB受体活化子配体mRNA表达量显著下降。实验表明雌激素对机械张应力状态下的牙周膜成纤维细胞骨重建相关因子核因子κB受体活化子配体、骨保护素有较强调控作用。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 牙周膜成纤维细胞 张应力 雌激素 骨保护素 核因子κB受体活化子配体 骨重建 组织构建图片文章

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微载体旋转立体培养成人退变髓核细胞及鉴定

19

作者 宁斌 丁远景 +4 位作者 龚维明 刘海飞 刘勇 王德春 胡有谷 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第7期1168-1173,共6页

背景:旋转生物反应器是目前应用较多的微载体培养系统。目的:应用微载体旋转立体培养方法对成人退变髓核细胞进行扩增及鉴定。方法:对手术切除的髓核组织进行原代培养,传代后进行单层培养和微载体旋转立体培养的对比,并行苏木精-伊红、G... 背景:旋转生物反应器是目前应用较多的微载体培养系统。目的:应用微载体旋转立体培养方法对成人退变髓核细胞进行扩增及鉴定。方法:对手术切除的髓核组织进行原代培养,传代后进行单层培养和微载体旋转立体培养的对比,并行苏木精-伊红、Gimsa染色观察细胞形态,利用电镜观察其超微结构,利用MTT比色法检测细胞生长活性。结果与结论:倒置相差显微镜观察培养的细胞符合退变髓核细胞形态,透射电镜下可显示其退变改变。倒置相差显微镜和扫描电镜下观察,可见退变的髓核细胞呈立体状生长,并能够成功甩珠传代。细胞在对数生长期时,微载体培养的细胞的生长活性明显高于单层培养组的细胞。表明微载体旋转立体培养法可以较好的维持细胞表型,对对数生长期髓核细胞的细胞活性具有明显的刺激作用。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 髓核细胞 退变 微载体 细胞培养 细胞鉴定 立体培养 单层培养 国 家自然科学基金 组织构建图片文章

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急性创伤后2周软骨下骨未发生明显力学变化

20

作者 郭新宇 张瑗 +4 位作者 王直兵 秦川 郝勇 张玉梅 张峡 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第20期3635-3642,共8页

背景:既往研究主要集中于退行性软骨损伤及软骨下骨的修复机制,而对于急性创伤后软骨下骨的组织、形态研究比较少。目的:观察软骨急性损伤后软骨下骨的早期组织形态学、分子生物、生物力学的变化。方法:健康成年新西兰兔24只,建立股骨... 背景:既往研究主要集中于退行性软骨损伤及软骨下骨的修复机制,而对于急性创伤后软骨下骨的组织、形态研究比较少。目的:观察软骨急性损伤后软骨下骨的早期组织形态学、分子生物、生物力学的变化。方法:健康成年新西兰兔24只,建立股骨头软骨缺损模型,分别收集模后即刻、造模后4,7,14d兔股骨头软骨及软骨下骨标本,大体观察造模后兔股骨头软骨及软骨形态变化,番红-固绿染色观察软骨及软骨下骨形态变化、免疫组织化学法测定骨转换标志物骨保护素/核因子κB受体活化因子配体的表达、Micro-CT扫描分析软骨下骨超微结构改变、力学检测法评估软骨下骨机械强度变化。结果与结论:大体粗测可见股骨头缺损模型于造模后7d出现软骨缺损面积扩大,深度增加及退变表现,利用染色法观测进一步证实了造模后7d其软骨厚度降低,软骨下骨骨小梁吸收。免疫组织化学及免疫荧光检测发现,造模后7-14d软骨下骨中骨保护素表达明显减少,核因子κB受体活化因子配体表达量显著增加,骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比值降低,提示骨转化减弱甚至逆转。采用Micro-CT分析发现造模后7-14d软骨下骨的骨小梁数量增加,骨小梁数目及间距减小,通透性降低。抗压力学试验分析抗压强度和弹性模量未见统计学差异。结果提示,软骨损伤后软骨下骨可在早期造模后7d后即发生显著组织形态变化和骨转换能力的下调,从而导致软骨进一步破坏;造模后2周内未见软骨下骨从在明显力学改变,基于此的修复手段可为软骨损伤修复提供治疗靶点。 展开更多

关键词 组织构建 软骨组织构建 关节软骨 软骨下骨 重建与吸收 骨小梁 形态学 生物力学 国家自然科学基金

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