羧酸酯酶研究进展 被引量：25

1

作者 滕霞 孙曼霁 《生命科学》 CSCD 2003年第1期31-35,共5页

哺乳动物羧酸酯酶carboxylesterase(EC 3.1.1.1)组成一个多基因家族,其基因产物定位于多种组织的内质网中。羧酸酯酶能有效地催化酯类和酰胺类化合物水解,属丝氨酸水解酶家族。羧酸酯酶与多种药物、环境毒物及致癌物的解毒和代谢有关,... 哺乳动物羧酸酯酶carboxylesterase(EC 3.1.1.1)组成一个多基因家族,其基因产物定位于多种组织的内质网中。羧酸酯酶能有效地催化酯类和酰胺类化合物水解,属丝氨酸水解酶家族。羧酸酯酶与多种药物、环境毒物及致癌物的解毒和代谢有关,并参与脂质运输和代谢。作者详细介绍了羧酸酯酶的生化性质、作用机理及其分子生物学方面的最新进展。 展开更多

关键词 羧酸酯酶 一级结构 生化特性 药物代谢 基因克隆

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棉蚜抗氧化乐果品系的羧酸酯酶基因突变 被引量：14

2

作者 郭惠琳 高希武 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期194-202,共9页

用氧化乐果对室内敏感品系棉蚜Aphis gossypii (Glover) 进行抗性选育, 经24代筛选, 抗性指数达到124 7倍。以α_乙酸萘酯 (α_NA) 为底物, 比较了氧化乐果敏感和抗性品系棉蚜羧酸酯酶的比活力, 发现抗性品系羧酸酯酶比活力明显小于敏... 用氧化乐果对室内敏感品系棉蚜Aphis gossypii (Glover) 进行抗性选育, 经24代筛选, 抗性指数达到124 7倍。以α_乙酸萘酯 (α_NA) 为底物, 比较了氧化乐果敏感和抗性品系棉蚜羧酸酯酶的比活力, 发现抗性品系羧酸酯酶比活力明显小于敏感品系。对这两个品系的羧酸酯酶基因进行了克隆, 通过对抗性和敏感品系羧酸酯酶基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列比较, 发现抗性品系有4个氨基酸残基发生了替代 (His104→Arg, Ala128→Val, Thr333→Asp, Lys484→Arg)。对其蛋白质三维结构分析推测只有His104→Arg的替代是位于其活性中心。棉蚜氧化乐果敏感和抗性品系羧酸酯酶基因 cDNA全长的GenBank登录号分别为AY485216和AY485214。 展开更多

关键词 棉蚜 抗药性 羧酸酯酶基因 克隆 基因突变 氧化乐果

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家蚕羧酸酯酶基因克隆及差异表达 被引量：7

3

作者 高贵田 陈克平 +2 位作者 姚勤 王林玲 陈慧卿 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期930-937,共8页

家蚕浓核病毒(Bombyx moridensonucleosis virus,BmDNV)是蚕业生产上危害比较严重的一类病毒。用完全抗浓核病中国镇江株(BmDNV-Z)的家蚕品系秋丰、感性品系华八及以华八为轮回亲本回交8代和自交8代构建的近等基因系BC8为材料,采用mRNA... 家蚕浓核病毒(Bombyx moridensonucleosis virus,BmDNV)是蚕业生产上危害比较严重的一类病毒。用完全抗浓核病中国镇江株(BmDNV-Z)的家蚕品系秋丰、感性品系华八及以华八为轮回亲本回交8代和自交8代构建的近等基因系BC8为材料,采用mRNA荧光差显技术首次分离克隆了家蚕羧酸酯酶(B.moricarboxylesterase,BmCarE)基因全长cDNA,并用实时荧光定量PCR检测了添毒后12h、36h、72h BmCarE在感、抗BmDNV-Z家蚕品系中肠内的表达差异。结果表明:(1)添毒后12h不同品系家蚕中肠BmCarE表达差异最大,抗性品系BC8和秋丰分别是感性品系华八的17.714倍和3.602倍,三者彼此间的差异达到极显著水平;(2)同一品系添毒后12h与添清水后12hBmCarE表达也有较大差异,BC8添毒是BC8添清水的15.08倍,秋丰添毒是秋丰添清水的3.39倍,差异达到极显著水平,而华八添毒和添清水的BmCarE表达量均低,二者差异不显著;(3)同一品系添毒后不同时间BmCarE表达也有较大差异,BC8和秋丰添毒后12h BmCarE表达量最高,显著高于各自添毒后36h和72h表达水平,而添毒后36h与72h表达无显著差异;华八添毒后12h、36h和72h,BmCarE表达无显著差异。上述结果提示羧酸酯酶基因可能与家蚕抗浓核病毒有一定关系。 展开更多

关键词 家蚕 羧酸酯酶基因 表达差异 近等基因系 RT-PCR

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溴氰菊酯对飞蝗羧酸酯酶基因表达的影响 被引量：6

4

作者 张建琴 王燕 +3 位作者 李大琪 杨美玲 张建珍 马恩波 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期418-424,共7页

【目的】研究溴氰菊酯作用下飞蝗羧酸酯酶基因的mRNA表达特性,为溴氰菊酯的代谢解毒及飞蝗Locusta migratoria防治中抗性风险的评估提供基础资料。【方法】本文采用不同剂量溴氰菊酯处理3龄飞蝗,提取总RNA,体外反转录合成cDNA模板,采用R... 【目的】研究溴氰菊酯作用下飞蝗羧酸酯酶基因的mRNA表达特性,为溴氰菊酯的代谢解毒及飞蝗Locusta migratoria防治中抗性风险的评估提供基础资料。【方法】本文采用不同剂量溴氰菊酯处理3龄飞蝗,提取总RNA,体外反转录合成cDNA模板,采用Real-time PCR技术分析飞蝗羧酸酯酶基因在溴氰菊酯不同浓度和不同时间处理后的表达模式。【结果】飞蝗经不同浓度溴氰菊酯处理12 h后,LmCesA3和LmCesE1表现为诱导效应;除LmCesA2外,其余羧酸酯酶基因经溴氰菊酯LD30剂量处理后分别在不同的时间点表现为诱导效应。【结论】5个羧酸酯酶基因LmCesA1、LmCesA3、LmCesD1、LmCesE1和LmCesI1可以被溴氰菊酯诱导,表明其可能参与飞蝗对溴氰菊酯的代谢解毒及抗性产生。 展开更多

关键词 飞蝗 溴氰菊酯 羧酸酯酶 基因表达 REAL-TIME PCR

原文传递

大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析 被引量：5

5

作者 杨帅 王玲 +1 位作者 赵奎军 韩岚岚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期3755-3763,共9页

【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b... 【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因AgCarE(GenBank登录号:JF970181)全长1 946 bp,编码526个氨基酸。羧酸酯酶AgCarE的等电点(pI)为6.08,蛋白活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体):Ser186、Glu313、His434,5个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族(EC:3.1.1.-)。将该基因编码序列与pET-21b载体重组,经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western-blot检测,在大肠杆菌BL21中成功表达约59 kD的AgCarE蛋白,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036mmol/100μL酶液。【结论】成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白AgCarE,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100μL酶液,有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用,为设计研发新型杀虫剂提供可能。 展开更多

关键词 大豆蚜 羧酸酯酶 基因克隆 活性分析

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羧酸酯酶1和羧酸酯酶2基因表达量与体质量指数的关系及其基因多态性分析 被引量：1

6

作者 张健雄 李丹丹 +2 位作者 胡梦梦 程雪微 董瑞华 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第1期13-19,共7页

目的通过检测健康志愿者的羧酸酯酶1(carboxylesterase 1,CES1)和羧酸酯酶2(carboxylesterase 2,CES2)的基因多态性和基因表达水平,探索CES1和CES2在代谢中的作用。方法从48例健康志愿者获得血样并提取DNA,对DNA进行二代基因测序,并提取... 目的通过检测健康志愿者的羧酸酯酶1(carboxylesterase 1,CES1)和羧酸酯酶2(carboxylesterase 2,CES2)的基因多态性和基因表达水平,探索CES1和CES2在代谢中的作用。方法从48例健康志愿者获得血样并提取DNA,对DNA进行二代基因测序,并提取总RNA检测基因表达量。使用多元线性回归分析CES1和CES2基因表达量与性别、年龄、体质量指数(body mass index,BMI)的关系。结果CES1的基因表达量为141.8(72.7,237.8),CES2的基因表达量为74.4(30.8,133.6)。多元线性回归分析中,BMI与CES2的基因表达有关,性别、年龄和BMI与CES1的基因表达无关。发现CES120个基因变异,其中10个会引起氨基酸序列改变;发现CES26个基因变异,其中2个引起氨基酸序列改变。结论发现CES2的表达水平与BMI相关,CES1的表达水平与BMI无明显相关,基因预测结果提示CES1的遗传变异可能影响其功能表达。 展开更多

关键词 羧酸酯酶 基因多态性 基因表达量 体质量指数

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棉铃虫羧酸酯酶基因HaCarE序列分析及其RNAi效应 被引量：1

7

作者 李海超 楚冬冬 +3 位作者 韩心怡 原国辉 苗雪霞 关若冰 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期602-609,共8页

为明确棉铃虫Helicoverpa armigera羧酸酯酶(carboxylesterase,CarE)编码基因的功能及其RNA干扰(RNA interfering,RNAi)效应,通过棉铃虫转录组数据筛选获得CarE基因,并克隆得到其全长cDNA序列,对其进行生物信息学分析,并利用实时荧光定... 为明确棉铃虫Helicoverpa armigera羧酸酯酶(carboxylesterase,CarE)编码基因的功能及其RNA干扰(RNA interfering,RNAi)效应,通过棉铃虫转录组数据筛选获得CarE基因,并克隆得到其全长cDNA序列,对其进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术检测该基因在棉铃虫不同发育时期和不同组织中的表达水平,同时通过RNAi技术检测其对棉铃虫的致死效果。结果表明,从棉铃虫中克隆获得的HaCarE基因全长cDNA序列为1677 bp,编码558个氨基酸,编码蛋白质由15个α螺旋和14个β折叠结构组成。qPCR检测结果显示该基因在棉铃虫不同发育时期均有表达,其中在1龄幼虫期的相对表达量最高,随着龄期的增长,相对表达量逐渐降低,在6龄幼虫期和蛹期的相对表达量最低;在5龄幼虫不同组织中,该基因在中肠中的相对表达量最高。注射dsHaCarE能够明显抑制靶标基因的表达,24 h抑制率为75.41%;饲喂dsHaCarE对棉铃虫2龄幼虫有显著致死作用,5 d时死亡率为64.57%,体长与对照组相比减少了23.29%。表明获得的HaCarE基因对棉铃虫生长发育有显著抑制作用,并有较好的致死效果。 展开更多

关键词 棉铃虫 羧酸酯酶 基因克隆 时空表达 RNA干扰

原文传递

棉蚜羧酸酯酶同工酶cDNA片段的基因克隆与序列分析 被引量：2

8

作者 李飞 韩召军 王荫长 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期336-339,共4页

采用简并引物和降落PCR技术,克隆了棉蚜2个羧酸酯酶同工酶基因的cDNA片段,分别命名为Ag.est1和Ag.est2。其中Ag.est1为479bp,编码160个氨基酸;Ag.est2为476bp,编码159个氨基酸。序列同源分析表明,PCR扩增获得的Ag.est1和Ag.est2基因与... 采用简并引物和降落PCR技术,克隆了棉蚜2个羧酸酯酶同工酶基因的cDNA片段,分别命名为Ag.est1和Ag.est2。其中Ag.est1为479bp,编码160个氨基酸;Ag.est2为476bp,编码159个氨基酸。序列同源分析表明,PCR扩增获得的Ag.est1和Ag.est2基因与其他昆虫的羧酸酯酶具有较高的相似性。2个羧酸酯酶同工酶基因cDNA片段的GeneBank登录号分别为:AF502083、AF502084。 展开更多

关键词 同工酶 CDNA片段 基因克隆 序列分析 棉蚜 羧酸酯酶 代谢抗性

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人羧酯酶的研究进展 被引量：2

9

作者 唐景荣 孙曼霁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第2期113-117,共5页

羧酯酶是一类可与有机磷化合物结合且活性受抑制的Ｂ－酯酶，分布很广，能水解许多羧酯类、。酰胺类、硫酯类物质，其天然底物尚未清楚，故其生理功能仍在研究中，可能与脂质代谢，药物或毒物的生物转化有关．对羧酯酶的一级结构及基因... 羧酯酶是一类可与有机磷化合物结合且活性受抑制的Ｂ－酯酶，分布很广，能水解许多羧酯类、。酰胺类、硫酯类物质，其天然底物尚未清楚，故其生理功能仍在研究中，可能与脂质代谢，药物或毒物的生物转化有关．对羧酯酶的一级结构及基因序列的研究表明，羧酯酶是由许多生化特性不同的同工酶组成． 展开更多

关键词 羧酯酶 生化特性 一级结构

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橘小实蝇羧酸酯酶基因BdCAREB1的克隆及其表达模式解析 被引量：5

10

作者 申光茂 豆威 王进军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1947-1955,共9页

【目的】在克隆获得橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)1条羧酸酯酶基因全长序列的基础上,解析该基因在橘小实蝇不同发育阶段和组织以及经高效氯氰菊酯饲喂后的表达模式。同时结合之前完成的有关橘小实蝇羧酸酯酶生化特性以及增效剂处理研... 【目的】在克隆获得橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)1条羧酸酯酶基因全长序列的基础上,解析该基因在橘小实蝇不同发育阶段和组织以及经高效氯氰菊酯饲喂后的表达模式。同时结合之前完成的有关橘小实蝇羧酸酯酶生化特性以及增效剂处理研究结果,综合分析橘小实蝇羧酸酯酶对高效氯氰菊酯作用的应激反应,为明确羧酸酯酶对菊酯类杀虫剂的解毒代谢机制奠定基础。【方法】通过同源序列比对的方法,从橘小实蝇转录组数据中筛选出1条羧酸酯酶基因序列片段,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增得到该基因的全长cDNA序列;应用生物信息学分析软件对该基因的开放阅读框、编码的氨基酸序列、分子量等信息进行预测,并基于最大似然法构建该基因与其他昆虫相关基因序列的系统发育树,阐明其分子生物学特征。此外,分别提取橘小实蝇不同发育阶段以及3龄幼虫的中肠、脂肪体、马氏管和气管等组织的RNA,在内参基因稳定性评估筛选的基础上,运用qPCR的方法解析该基因在不同发育阶段和组织间以及药剂处理后的表达模式。【结果】从橘小实蝇转录组数据库中筛选出1条长度为1 028 bp的羧酸酯酶基因片段,通过对5′端和3′端进行RACE扩增分别得到长度为1 073和625 bp的目的片段,经序列拼接和验证后,确定该基因全长为1 872 bp,完整开放阅读框1 710 bp,编码569个氨基酸,推测其蛋白质分子量为63.3 kD,理论等电点6.38。该基因经序列比对命名为BdCAREB1,GenBank登录号为KF539980。基于最大似然法构建的系统发育树显示,该基因编码的蛋白质与双翅目昆虫的羧酸酯酶具有高度的同源性。分析其在不同发育阶段的表达模式发现,BdCAREB1在3龄幼虫期的表达量最高,其次为成虫期,而在卵期的表达量最低。在橘小实蝇3龄幼虫不同组织间的定量分析结果表明,BdCAREB1在脂肪体中表达水平最高, 展开更多

关键词 橘小实蝇 羧酸酯酶 基因表达 脂肪体 解毒代谢

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哺乳动物羧酸酯酶在药物代谢中的作用 被引量：5

11

作者 王蕊 姜剑伟 李燕 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期186-191,共6页

羧酸酯酶(carboxylesterases,CESs)属于酯酶家族,参与体内多种内、外源物及药物的代谢过程。CESs体内分布广泛,主要表达于肺、肝脏、肠、肾、皮肤等组织。不同种属CESs的表达差异及基因多态性与药物代谢差异密切相关。本文简述了CESs分... 羧酸酯酶(carboxylesterases,CESs)属于酯酶家族,参与体内多种内、外源物及药物的代谢过程。CESs体内分布广泛,主要表达于肺、肝脏、肠、肾、皮肤等组织。不同种属CESs的表达差异及基因多态性与药物代谢差异密切相关。本文简述了CESs分类与分布、结构和作用机制、种属差异性与基因多态性,以期为CESs及相关药物设计研究提供思路。 展开更多

关键词 羧酸酯酶 药物代谢动力学 种属差异 基因多态性

原文传递

羧酸酯酶1基因多态性在药物反应性中的研究进展

12

作者 杨婉花 刘亮明 《医学综述》 CAS 2023年第16期3134-3139,共6页

哺乳动物羧酸酯酶(CES)是丝氨酸水解酶超家族的关键酶,其中CES1可直接影响多种内源性酯类、含酯类药物的代谢结果。经过CES1代谢的酯类药物的疗效存在显著个体差异,主要表现为同样的药物剂量在不同的患者应用中可能有效或无效,甚至出现... 哺乳动物羧酸酯酶(CES)是丝氨酸水解酶超家族的关键酶,其中CES1可直接影响多种内源性酯类、含酯类药物的代谢结果。经过CES1代谢的酯类药物的疗效存在显著个体差异,主要表现为同样的药物剂量在不同的患者应用中可能有效或无效,甚至出现不良反应,而药物反应性不同与CES基因多态性密切相关。因此,遗传学和代谢学的组合研究在患者的药物精准治疗中具有指导意义,而细化CES1基因分型在提高患者药物治疗的有效性、避免不良反应方面具有重要的预测意义。 展开更多

关键词 羧酸酯酶1 基因多态性 药物代谢 药物反应性

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CES1基因多态性影响达比加群酯血药浓度及有效性与安全性的研究

13

作者 李菁冉 阎雨 《海峡药学》 2023年第1期64-69,共6页

目的评估CES1基因多态性与口服达比加群酯后达比加群血药浓度及有效性、安全性的相关性,为临床提供循证依据,促进药物合理使用与上市后风险管理。方法系统检索PubMed、Embase、Cochrane Library、中国知网(CNKI)、万方和中国生物医学文... 目的评估CES1基因多态性与口服达比加群酯后达比加群血药浓度及有效性、安全性的相关性,为临床提供循证依据,促进药物合理使用与上市后风险管理。方法系统检索PubMed、Embase、Cochrane Library、中国知网(CNKI)、万方和中国生物医学文献(CBM)数据库,检索日期截自建库至2022年7月9日。按纳入、排除标准筛选文献,提取资料。结果共纳入9项研究,其中7项研究对象为长期服用达比加群酯患者(2560例患者),2项为单剂量生物等效性临床研究(188名健康志愿者)。结论中国人群CES1 rs2244613和rs8192935等位基因频率与欧洲人群均有较大差异。CES1 rs2244613次要等位基因携带者(AC或CC型)相比非携带者(AA型),达比加群血药浓度降低,C/D值降低,出血风险显著降低;CES1 rs8192935次要等位基因携带者(CT或TT型)相比非携带者(CC型)达比加群血药浓度降低。CES1基因多态性与达比加群酯疗效无显著相关性。 展开更多

关键词 达比加群酯 羧酸酯酶1 基因多态性 血药浓度 有效性 安全性

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星豹蛛四个羧酸酯酶基因克隆及溴氰菊酯胁迫下的表达模式 被引量：2

14

作者 王雅丽 赵瑞 +3 位作者 王美 赵萌萌 张晓晨 李锐 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期490-499,共10页

【目的】探究星豹蛛Pardosa astrigera羧酸酯酶基因PaCarE1-4是否与其代谢溴氰菊酯有关。【方法】采用RT-PCR技术克隆星豹蛛4个羧酸酯酶基因PaCarE1-4 cDNA序列,通过生物信息学软件分析其序列特性。采用RT-qPCR技术测定这4个羧酸酯酶基... 【目的】探究星豹蛛Pardosa astrigera羧酸酯酶基因PaCarE1-4是否与其代谢溴氰菊酯有关。【方法】采用RT-PCR技术克隆星豹蛛4个羧酸酯酶基因PaCarE1-4 cDNA序列,通过生物信息学软件分析其序列特性。采用RT-qPCR技术测定这4个羧酸酯酶基因在星豹蛛雌雄成蛛不同组织(头胸部、腹部和足)以及在不同浓度(LC_(10)=5.151 mg/L;LC_(30)=8.619 mg/L;LC_(50)=12.311 mg/L)溴氰菊酯胁迫12 h和LC_(30)浓度溴氰菊酯胁迫2,4,8,12,24和48 h雄成蛛中的相对表达水平。【结果】克隆获得星豹蛛羧酸酯酶基因PaCarE1-4(GenBank登录号分别为MZ643212,MZ643214,MZ643215和MZ643216)的全长cDNA序列,开放阅读框(ORF)分别长1653,1803,1827和1818 bp,分别编码550,600,608和605个氨基酸。组织表达谱结果表明,PaCarE1和PaCarE2在星豹蛛雌雄成蛛腹部中的表达量最高,且在雄成蛛腹部中的表达量高于雌成蛛中的;PaCarE3和PaCarE4在雌雄成蛛头胸部中的表达量最高,且PaCarE3在雌成蛛头胸部中的表达量高于雄成蛛中的,PaCarE4在雄成蛛头胸部中的表达量高于雌成蛛中的。LC_(30)浓度溴氰菊酯胁迫12 h诱导了星豹蛛雄成蛛中PaCarE1的表达,LC_(10)和LC_(30)浓度溴氰菊酯胁迫12 h诱导了PaCarE2的表达。LC_(30)浓度溴氰菊酯胁迫不同时间后,与对照组(丙酮处理组)相比,星豹蛛雄成蛛中PaCarE4的表达量与对照组均无显著差异,而PaCarE1的表达量在处理后2,8和12 h,PaCarE2的表达量在处理后12 h,以及PaCarE3的表达量在处理后24 h显著上调。【结论】羧酸酯酶基因PaCarE1,PaCarE2和PaCarE3可以被溴氰菊酯诱导表达,表明其可能参与星豹蛛对溴氰菊酯的代谢过程。本研究结果有助于了解星豹蛛对外源物质的代谢机理,为这一捕食性天敌的保护提供了新思路。 展开更多

关键词 星豹蛛 羧酸酯酶 基因克隆 基因表达 解毒代谢

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家蚕羧酸酯酶基因Bmae35的克隆、序列分析及表达 被引量：3

15

作者 杨微 齐登伟 +1 位作者 余泉友 张泽 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期634-641,共8页

昆虫羧酸酯酶是一类能对外源化合物解毒和气味分子降解的重要酶系。本研究选取在家蚕Bombyx mori幼虫嗅觉感器中有表达,并与蛀茎夜蛾Sesamia nonagrioides触角酯酶基因Snon-EST可能为直系同源基因的Bmae35进行克隆和外源表达研究。结果... 昆虫羧酸酯酶是一类能对外源化合物解毒和气味分子降解的重要酶系。本研究选取在家蚕Bombyx mori幼虫嗅觉感器中有表达,并与蛀茎夜蛾Sesamia nonagrioides触角酯酶基因Snon-EST可能为直系同源基因的Bmae35进行克隆和外源表达研究。结果表明:该基因编码区长1581bp,共编码526个氨基酸。与其他昆虫触角酯酶的多序列比对分析发现,Bmae35编码的蛋白具有酯酶活性必须的催化残基Ser191,Glu313和His429,也保持着α-酯酶家族特征基序Gly-x-Ser-x-Gly。RT-PCR分析显示,Bmae35在家蚕5龄第3天各组织中均有表达,其中在头、脂肪体、马氏管、体壁和丝腺中的表达量较高。Bmae35在雌蛾性信息腺中表达,并与性信息素合成呈正相关,暗示其在信息素合成中起重要作用。构建Bmae35与pET28(a)重组载体,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,电泳检测发现该基因以包涵体形式表达,以镍亲和层析柱纯化,Western blotting鉴定证实Bmae35在大肠杆菌Escherichiacoli中正确表达并得以纯化。本实验通过对家蚕Bmae35基因的克隆、原核表达与纯化,为进一步深入研究其表达定位和气味降解等功能奠定基础。 展开更多

关键词 家蚕 羧酸酯酶 基因克隆 表达模式 原核表达 蛋白免疫印迹

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华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠羧酸酯酶基因HoCL1的克隆与序列分析 被引量：3

16

作者 高勇 周洪旭 +1 位作者 郑桂玲 李长友 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期398-404,共7页

利用粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)围食膜蛋白多克隆抗体,从已构建的华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库中筛选得到1个编码羧酸酯酶的cDNA克隆HoCL1,其开放阅读框(ORF)长1 599 bp,编码532个氨基酸,推导的蛋白质分子质量为59... 利用粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)围食膜蛋白多克隆抗体,从已构建的华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库中筛选得到1个编码羧酸酯酶的cDNA克隆HoCL1,其开放阅读框(ORF)长1 599 bp,编码532个氨基酸,推导的蛋白质分子质量为59.5 kDa,等电点(pI)为4.5。HoCL1蛋白具有羧酸酯酶的保守结构域:1个二硫键形成的位点和1个丝氨酸活性中心,三联体催化活性中心位于Ser207、Asp333和His422上,不含有氮联糖基化位点和氧联糖基化位点,只含有3个半胱氨酸残基。依据氨基酸序列同源性分析和保守结构域分析,HoCL1属于B类酯酶,与赤拟谷盗Tribolium castaneum羧酸酯酶相似性最高,为35.2%。通过与其他昆虫羧酸酯酶序列比对及构建系统发育树,发现HoCL1羧基端的氨基酸序列保守性低,但靠近N端的活性中心处的氨基酸序列则高度保守,可与赤拟谷盗、异色瓢虫Harmonia axyridis羧酸酯酶聚类在一起。羧酸酯酶HoCL1基因的克隆鉴定为进一步研究该基因在华北大黑鳃金龟体内的表达及功能奠定了基础。 展开更多

关键词 华北大黑鳃金龟 羧酸酯酶 基因克隆 序列分析 CDNA表达文库

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褐飞虱羧酸酯酶基因cDNA片段的克隆及表达分析 被引量：1

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作者 杨之帆 何光存 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期195-198,共4页

利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术克隆了褐飞虱羧酸酯酶基因编码区的cDNA片段,并进行了序列测定.结果表明,所克隆到的cDNA片段长度为396 bp,经BLAST查找比对发现,该片段所编码的氨基酸序列与来自铜绿蝇、家蝇、沟鼠、黑腹果蝇、线... 利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术克隆了褐飞虱羧酸酯酶基因编码区的cDNA片段,并进行了序列测定.结果表明,所克隆到的cDNA片段长度为396 bp,经BLAST查找比对发现,该片段所编码的氨基酸序列与来自铜绿蝇、家蝇、沟鼠、黑腹果蝇、线虫和埃及伊蚊的羧酸酯酶的片段存在高度同源性.Northern杂交分析显示,在褐飞虱取食抗性水稻后,羧酸酯酶基因表达水平明显升高.以上结果表明,羧酸酯酶基因的表达受抗性水稻的诱导,该基因在有毒化学物质解毒及增强褐飞虱对抗性水稻的耐受性方面可能起着重要作用. 展开更多

关键词 褐飞虱 RT-PCR 羧酸酯酶基因 Northem杂交分析

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中华稻蝗羧酸酯酶家族基因生物信息学及组织表达特异性分析 被引量：2

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作者 刘娇 张建珍 +3 位作者 李大琪 张婷婷 马恩波 张建琴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第21期4272-4284,共13页

[目的]对重要农业害虫中华稻蝗(Oxya chinensis)羧酸酯酶(carboxylesterases,Ces)家族基因进行生物信息学分析,并对部分基因的组织表达特性进行研究,为揭示中华稻蝗Ces基因功能及研发新的分子靶标提供依据。[方法]基于中华稻蝗转录组数... [目的]对重要农业害虫中华稻蝗(Oxya chinensis)羧酸酯酶(carboxylesterases,Ces)家族基因进行生物信息学分析,并对部分基因的组织表达特性进行研究,为揭示中华稻蝗Ces基因功能及研发新的分子靶标提供依据。[方法]基于中华稻蝗转录组数据库,通过关键词搜索获得Ces基因序列,采用生物信息学方法进行比对拼接、氨基酸序列推导和开放阅读框分析,选择全长序列构建系统发育树,采用在线软件分析中华稻蝗Ces氨基酸序列结构、理化性质、信号肽和N糖基化位点等特征。采用实时定量PCR技术,通过ge Norm与Normfinder软件分析4个候选内参基因β-肌动蛋白(β-actin)、延长因子(EF1α)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)和核糖体蛋白49(RP49)表达稳定性,筛选中华稻蝗5龄若虫不同组织部位最适内参基因并检测10个羧酸酯酶基因在不同组织部位相对表达量。[结果]从中华稻蝗转录组数据库搜索获得Ces基因c DNA片段180个,经筛选获得28个Ces基因全长序列进行生物信息学分析。推导的氨基酸序列与其他昆虫物种的聚类分析结果显示,中华稻蝗28个Ces分布于4个功能簇中,其中A簇直翅目和部分双翅目昆虫α酯酶(20个)、D簇表皮特异酯酶(2个)、E簇β酯酶(4个)和F簇非鳞翅目保幼激素酯酶(2个)。氨基酸序列分析结果显示,中华稻蝗大部分Ces的等电点(p I)均为偏酸性或弱酸性,p I为4.38—6.84,只有3个Ces的p I值偏碱性。中华稻蝗所有的Ces基因都具有N糖基化位点、N端保守的半胱氨酸残基及氧离子洞,信号肽预测结果表明19个Ces具有完整的信号肽;21个Ces具有典型的催化三联体S-E-H,其余7个Ces催化三联体发生了不同的替换。Ge Norm与Normfinder分析结果显示,4个候选内参基因稳定性EF1α=RP49>β-actin>GAPDH。选择EF1α作为内参基因,RT-q PCR结果显示10个羧酸酯酶基因在7个不同组织部位均有表达,其中OcCesA1、OcCesA6、OcCesA12、OcCesA1 展开更多

关键词 中华稻蝗 转录组 羧酸酯酶基因 生物信息学 组织特异表达

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麦长管蚜羧酸酯酶基因cDNA片段克隆及吡虫啉胁迫对其表达的影响 被引量：2

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作者 白微微 高海峰 +2 位作者 张航 杨安沛 李广阔 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期109-114,共6页

羧酸酯酶在昆虫对杀虫剂的解毒代谢过程中发挥重要作用,本研究旨在分析吡虫啉胁迫对麦长管蚜羧酸酯酶基因表达的影响。采用同源克隆方法克隆麦长管蚜羧酸酯酶基因cDNA片段,实时荧光定量PCR技术检测羧酸酯酶基因在不同吡虫啉剂量下的表... 羧酸酯酶在昆虫对杀虫剂的解毒代谢过程中发挥重要作用,本研究旨在分析吡虫啉胁迫对麦长管蚜羧酸酯酶基因表达的影响。采用同源克隆方法克隆麦长管蚜羧酸酯酶基因cDNA片段,实时荧光定量PCR技术检测羧酸酯酶基因在不同吡虫啉剂量下的表达量变化。扩增所得麦长管蚜羧酸酯酶基因cDNA片段大小为392 bp,命名为SaEST 3(GenBank登录号KY 441614),该片段编码130个氨基酸残基,分子量14 kD,等电点4.93。序列同源性比对及生物信息学分析表明SaEST3推导的氨基酸序列与豌豆长管蚜、麦双尾蚜、夹竹桃蚜、桃蚜的羧酸酯酶氨基酸序列相似性较高,分别为94%、85%、80%和80%。实时荧光定量PCR结果显示,不同吡虫啉处理剂量下,SaEST3 m RNA的相对表达量均上调。克隆得到的基因片段为麦长管蚜羧酸酯酶基因片段,吡虫啉对麦长管蚜羧酸酯酶基因SaEST3表达有一定的影响。 展开更多

关键词 羧酸酯酶 麦长管蚜 吡虫啉 克隆 基因表达

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基于稻纵卷叶螟触角转录组的羧酸酯酶类气味降解基因CXE66鉴定及其表达谱 被引量：2

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作者 李尧 王楚楚 +3 位作者 杜海涛 唐庆东 潘秦剑 刘芳 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1291-1302,共12页

为了解稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis气味降解机制,利用稻纵卷叶螟基因组和触角转录组鉴定羧酸酯酶(carboxylesterase,CXE)基因,同时采用同源比对和系统发育进化树对其进行分类,进一步克隆获得稻纵卷叶螟CXE66的全长序列,并采用... 为了解稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis气味降解机制,利用稻纵卷叶螟基因组和触角转录组鉴定羧酸酯酶(carboxylesterase,CXE)基因,同时采用同源比对和系统发育进化树对其进行分类,进一步克隆获得稻纵卷叶螟CXE66的全长序列,并采用实时荧光定量PCR分析该基因在各组织中的表达情况。结果显示,共鉴定出触角特异性表达的45个CXE基因,其中新发现29个CXE,分属于CXE八个亚族。触角组织中高表达的CXE66基因开放阅读框长1605 bp,编码534个氨基酸,且具有典型CXE结构特征,其在稻纵卷叶螟触角、头、胸、腹、足和翅中均有表达,且在触角中表达量最高。表明45个CXE基因可能参与稻纵卷叶螟的气味降解和性信息素降解、有毒物质代谢、蜕皮发育和神经发育等生理生化过程,其中CXE66可能参与酯类植物挥发物的降解。 展开更多

关键词 稻纵卷叶螟 气味降解酶 羧酸酯酶 基因 触角

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