非接触式共培养体外血脑屏障模型的跨膜电阻及通透性 被引量：14

1

作者 张水华 季龙凤 马璟 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期882-887,共6页

目的建立大鼠脑毛细血管内皮细胞(BCEC)与星形胶质细胞共培养血脑屏障模型并评价其功能。方法采用SD大鼠原代分离培养获得BCEC和星形胶质细胞。经细胞形态学观察、免疫组化检测相关抗原后建立非接触式共培养血脑屏障模型,测定共培养模... 目的建立大鼠脑毛细血管内皮细胞(BCEC)与星形胶质细胞共培养血脑屏障模型并评价其功能。方法采用SD大鼠原代分离培养获得BCEC和星形胶质细胞。经细胞形态学观察、免疫组化检测相关抗原后建立非接触式共培养血脑屏障模型,测定共培养模型所形成的跨细胞电阻及荧光素钠的通透性。采用LC-MS检测6个化合物透过血脑屏障模型的通透性,并与文献报道的体内数据进行比较。结果培养的BCEC多数为短梭形外观,免疫组化检测可见细胞高表达因子Ⅷ;星形胶质细胞呈现具有细胞突起的典型形态,免疫组化检测可见细胞高表达胶质纤维酸性蛋白。共培养的体外血脑屏障模型跨BCEC单层的电阻值为(373±41)Ω·cm2,荧光素钠跨BCEC单层的通透性为(0.34±0.14)×10-3cm·min-1,符合体外血脑屏障模型要求。对所选6个化合物体内外透过BBB模型渗透系数的比较,表明具有一定的相关性(R2=0.7679,P<0.05)。结论建立的体外BBB模型在跨内皮电阻和通透性方面具备了在体BBB的基本特性,可以用于模拟体内环境,进行药物早期筛选方面的研究。 展开更多

关键词 毛细血管内皮细胞 脑 星形胶质细胞 血脑屏障

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不同气腹压对腹腔镜胃癌根治术的影响 被引量：3

2

作者 丰陈 胡有力 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1237-1242,共6页

目的 评价深度肌松条件下低气腹压对腹腔镜胃癌根治术(LAG)患者炎性因子、氧化应激和远端大网膜毛细血管内皮细胞形态的影响。方法 选择2022年1—6月择期行LAG患者60例,男45例,女15例,年龄40~75岁,BMI 18~30 kg/m^(2),ASAⅠ或Ⅱ级。采... 目的 评价深度肌松条件下低气腹压对腹腔镜胃癌根治术(LAG)患者炎性因子、氧化应激和远端大网膜毛细血管内皮细胞形态的影响。方法 选择2022年1—6月择期行LAG患者60例,男45例,女15例,年龄40~75岁,BMI 18~30 kg/m^(2),ASAⅠ或Ⅱ级。采用随机数字法将患者分成两组:低气腹压组(PL组)和对照组(PH组),每组30例。两组均采用深度肌松条件(PTC计数为1或2),PL组气腹压设定为10 mmHg, PH组气腹压设定为14 mmHg。记录气腹维持时间、手术时间、麻醉时间、拔管时间、PACU停留时间、术后住院时间及术后48 h内PCIA有效按压次数、PCIA总按压次数、补救镇痛例数。记录麻醉诱导前5 min、关腹前5 min、术后24 h血浆白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。观察进腹后5 min、关腹前5 min大网膜毛细血管内皮细胞形态。结果 与PH组比较,PL组术后48 h内PCIA有效按压次数、PCIA总按压次数明显减少(P<0.05),关腹前5 min、术后24 h IL-6浓度明显降低(P<0.05),关腹前5 min MDA含量明显降低(P<0.05)。关腹前5 min PL组毛细血管内皮细胞轻度水肿,细胞内积液致细胞厚度不均匀,细胞核轻度肿胀、收缩功能稍减弱,血管管腔内径变窄;PH组毛细血管内皮细胞严重水肿、肿胀,细胞膜内积液、增厚明显,细胞核肿胀、几乎失去收缩功能,血管管腔极度缩窄,接近于全部闭塞。结论 低气腹压可以降低LAG患者血浆炎性因子浓度,减轻术后疼痛、氧化应激和远端大网膜毛细血管内皮细胞损伤。 展开更多

关键词 深度肌松 气腹压 腹腔镜胃癌根治术 炎性因子 氧化应激 毛细血管内皮细胞

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中药防治肺气血屏障功能障碍的研究进展 被引量：1

3

作者 杨爽 秦泓林 +3 位作者 李逸轩 王曦 张荣涛 杨剑 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第15期5075-5087,共13页

肺气血屏障由肺泡腔、毛细血管腔及肺间质组成,可保证气体在肺泡与血液间的有效扩散,防止肺泡过度膨胀或塌陷,维持肺部的正常功能。气血屏障功能障碍是急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的主要病理特征,气血屏障一旦被破坏,会导致血浆... 肺气血屏障由肺泡腔、毛细血管腔及肺间质组成,可保证气体在肺泡与血液间的有效扩散,防止肺泡过度膨胀或塌陷,维持肺部的正常功能。气血屏障功能障碍是急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的主要病理特征,气血屏障一旦被破坏,会导致血浆蛋白渗漏到肺泡腔中诱发肺水肿,影响正常的气体交换,加重靶器官的缺氧甚至威胁生命。中药治疗ALI已经得到广泛的认可和验证。通过对防治气血屏障损伤的中药复方、单味药材及中药单体进行了综述,为中药防治ALI的应用研究及修复气血屏障功能障碍的可能作用机制提供依据。 展开更多

关键词 气血屏障 中药 急性肺损伤 肺泡上皮细胞 毛细血管内皮细胞 屏障稳定性 屏障功能性

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前列腺毛细血管内皮细胞屏障功能研究 被引量：5

4

作者 崔栋 尚永刚 +3 位作者 韩广玮 刘城城 李龙坤 易善红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期385-389,共5页

目的 分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,体外研究大鼠前列腺毛细血管内皮细胞的屏障功能。方法 采用细胞生长特性选择法分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,用第Ⅷ因子相关抗原抗体对分离培养的前列腺毛细血管内皮细胞进行免疫学鉴... 目的 分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,体外研究大鼠前列腺毛细血管内皮细胞的屏障功能。方法 采用细胞生长特性选择法分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,用第Ⅷ因子相关抗原抗体对分离培养的前列腺毛细血管内皮细胞进行免疫学鉴定。免疫组化观察毛细血管内皮细胞之间紧密连接蛋白claudin-1的表达,采用跨膜电阻测量仪检测毛细血管内皮细胞的跨膜电阻,用酚红渗漏实验检测其通透性,以大鼠肺毛细血管内皮细胞、脑毛细血管内皮细胞作为阴性与阳性对照。结果 成功分离大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,体外培养可以形成紧密的单层细胞结构,呈铺路石样生长。第Ⅷ因子相关抗原抗体的免疫荧光结果显示：分离培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞胞浆表达绿色荧光,提示分离的细胞为毛细血管内皮细胞;免疫组化结果显示紧密连接蛋白claudin-1在相邻的毛细血管内皮细胞之间表达;体外培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,阴性对照组肺毛细血管内皮细胞,阳性对照组脑毛细血管内皮细胞的跨膜电阻峰值分别可以达到（142.2±3.1）、（43.3±3.5）、（248.2±6.2）Ω/cm2,并稳定保持2-3 d,三者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。酚红渗漏实验结果显示前列腺毛细血管内皮细胞、阳性对照组脑毛细血管内皮细胞随着细胞单层跨膜电阻的增加,基底侧的酚红浓度减低,阴性对照组肺毛细血管内皮细胞酚红渗透量随跨膜电阻的改变变化趋势不明显。结论 大鼠前列腺毛细血管内皮细胞与脑毛细血管内皮细胞等屏障内皮相比拥有相似的结构功能,体外培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞具有屏障特性,可以作为血前列腺屏障研究的体外模型。 展开更多

关键词 前列腺 毛细血管内皮细胞 血前列腺屏障 跨膜电阻

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肾脏纤维化的细胞学基础及中医药防治研究进展 被引量：10

5

作者 陈朝青 李彧 李亚东 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期412-415,共4页

各种原发性和继发性肾脏疾病的最终结果将导致肾脏纤维化。文章从肾脏纤维化的细胞学基础方面入手,就系膜细胞、肾小球毛细血管内皮细胞、足细胞、肾小管上皮细胞、成纤维细胞在肾间质纤维化中的病理学机制及中医药防治有关的研究进展... 各种原发性和继发性肾脏疾病的最终结果将导致肾脏纤维化。文章从肾脏纤维化的细胞学基础方面入手,就系膜细胞、肾小球毛细血管内皮细胞、足细胞、肾小管上皮细胞、成纤维细胞在肾间质纤维化中的病理学机制及中医药防治有关的研究进展及现状进行综述。 展开更多

关键词 肾脏纤维化 系膜细胞 '肾小球毛细血管内皮细胞 足细胞 肾小管上皮细胞 成纤维细胞

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羟基红花黄色素A对高糖作用下视网膜微血管内皮细胞增殖的影响 被引量：10

6

作者 黄沁园 黄敏丽 何纯刚 《国际眼科杂志》 CAS 2011年第8期1324-1326,共3页

目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对高糖培养下恒河猴脉络膜血管内皮细胞(RF/6A)增殖及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:取体外培养的RF/6A细胞,分为NG+H0组(含有5.5mmol/L葡萄糖,HSYA的浓度为0mg/L)及HG+H0、HG+H18、HG+H37... 目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对高糖培养下恒河猴脉络膜血管内皮细胞(RF/6A)增殖及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:取体外培养的RF/6A细胞,分为NG+H0组(含有5.5mmol/L葡萄糖,HSYA的浓度为0mg/L)及HG+H0、HG+H18、HG+H37、HG+H73组(各组中均含有22mmol/L葡萄糖,HSYA的浓度分别为0,18,37,73mg/L)。培养24,48和72h,分别使用噻唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖的活性。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组中RF/6A细胞中VEGFmRNA的表达。结果:MTT检测结果表明,HSYA作用48h,HG+H37、HG+H73组细胞吸光度值均明显低于HG+H0组(P<0.01),随着HSYA浓度的增加,各组吸光度值降低。作用72h,HG+H18、HG+H37和HG+H73组细胞吸光度值均明显低于HG+H0组(P<0.01),随着HSYA浓度的增加,各组吸光度值降低,HG+H73组抑制作用最明显,其细胞吸光度值明显低于HG+H18和HG+H37组(分别为P<0.01和P<0.05)。RT-PCR实验结果表明:与HG+H0组相比,作用48h,HG+H37、HG+H73对RF/6A细胞VEGFmRNA表达的抑制作用显著(P<0.01);而作用72h,HG+H18、HG+H37和HG+H73对高糖诱导的VEGFmRNA的表达均有抑制作用(P<0.01)。结论:HSYA能够抑制高糖诱导的RF/6A细胞的增殖并下调高糖所致的VEGFmRNA表达升高,提示其可能机制是通过VEGF途经来实现的。 展开更多

关键词 糖尿病性视网膜病变 视网膜微血管内皮细胞 细胞增殖 羟基红花黄色素A

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青蒿琥酯对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞增殖及VEGF表达的影响 被引量：9

7

作者 刘逸 彭辉灿 唐虹 《国际眼科杂志》 CAS 2013年第2期252-255,共4页

目的:研究青蒿琥酯(artesunate)对体外高糖环境下培养的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelialcells,HRCECs)的增殖及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:从新鲜人... 目的:研究青蒿琥酯(artesunate)对体外高糖环境下培养的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelialcells,HRCECs)的增殖及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:从新鲜人眼球提取HRCECs,进行体外培养。取第3～4代生长良好的细胞用于实验,实验分为低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度青蒿琥酯组(15,30,60,120μg/mL),用噻唑蓝(MTT)比色法检测HRCECs的增殖,通过免疫细胞化学法观察各分组HRCECs中VEGF的表达。结果:MTT比色法检测细胞增殖结果显示:与低糖组比较,高糖显著促进HRCECs增殖(P>0.05);15,30,60,120μg/mL青蒿琥酯处理24h或48h,可时间和浓度依赖性地抑制高糖环境下HRCECs的增殖(P<0.05)。免疫细胞化学法检测VEGF表达结果显示:与低糖对照组相比,高糖对照组VEGF表达明显增加(P<0.05);高糖+不同浓度青蒿琥酯(15,30,60μg/mL)组与高糖对照组相比VEGF表达明显下降(P<0.05),高糖+不同浓度青蒿琥酯组之间两两比较均具有统计学差异(P<0.05),且随着药物浓度的提高,VEGF的表达量逐渐减少。结论:青蒿琥酯呈浓度依赖性地抑制高糖环境下HRCECs的增殖以及VEGF的表达,表明青蒿琥酯抑制高糖环境诱导HRCECs增殖可能与其抑制VEGF表达有关。 展开更多

关键词 青蒿琥酯 人视网膜微血管内皮细胞 增殖 血管 内皮生长因子

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三七总皂苷对高糖诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞损伤的保护作用 被引量：7

8

作者 乔园 段惠惠 +1 位作者 黄建梅 唐民科 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期318-322,I0001,共6页

目的：观察三七总皂苷（ PNS）对高浓度葡萄糖致大鼠视网膜微血管内皮细胞（ RRCECs）损伤的保护作用和对细胞黏附分子－1（ICAM－1）的影响。方法体外原代培养RRCECs，并通过免疫荧光化学方法鉴定；用PNS作用于4-6代的RRCECs，实验分... 目的：观察三七总皂苷（ PNS）对高浓度葡萄糖致大鼠视网膜微血管内皮细胞（ RRCECs）损伤的保护作用和对细胞黏附分子－1（ICAM－1）的影响。方法体外原代培养RRCECs，并通过免疫荧光化学方法鉴定；用PNS作用于4-6代的RRCECs，实验分为正常组、高糖组（30 mmol／L）和高糖不同浓度PNS（20、50、100 mg／L）组，分别使用MTT比色法和台盼蓝计数法观察PNS对细胞活力及数目的影响，使用Western blotting检测药物作用前后ICAM－1的表达变化。结果 MTT比色法结果显示，PNS 50、100 mg／L作用48 h和72 h可明显减轻高糖造成的RRCECs损伤，提高RRCECs活力（P＜0．01）；台盼蓝计数结果显示，在PNS作用48 h后PNS 100 mg／L组细胞数目明显增加（P＜0．01），72 h后PNS 50、100 mg／L 组细胞数目均明显增加（ P＜0．05）。 Western blotting 检测显示，随着PNS药物浓度的增高，高糖环境下RRCECs中的ICAM－1表达量逐渐减少（ P＜0．05）。结论 PNS可以减轻高糖引起的RRCECs损伤，减少高糖环境下RRCECs中ICAM－1表达。 PNS对RRCECs的保护作用与ICAM－1表达调节之间的关系有待进一步研究。 展开更多

关键词 三七总皂苷 视网膜微血管内皮细胞 细胞间黏附分子-1 大鼠

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Nogo-B与核转录因子κB在胎盘组织中的表达及其与子痫前期的相关性研究 被引量：6

9

作者 王艳丽 卢国荣 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第32期30-34,共5页

目的探讨重度子痫前期患者胎盘绒毛毛细血管内皮细胞中Nogo-B、核转录因子κB(NF-κB)表达及意义。方法选取50例重度子痫前期患者胎盘组织做为研究对象,以50例正常晚孕妇女胎盘组织做为正常对照,采用免疫组织化学及逆转录-聚合酶链反应(... 目的探讨重度子痫前期患者胎盘绒毛毛细血管内皮细胞中Nogo-B、核转录因子κB(NF-κB)表达及意义。方法选取50例重度子痫前期患者胎盘组织做为研究对象,以50例正常晚孕妇女胎盘组织做为正常对照,采用免疫组织化学及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定胎盘绒毛毛细血管内皮细胞中NogoB及NF-κB的定位及表达。结果重度子痫前期患者胎盘绒毛毛细血管内皮细胞中Nogo-B及NF-κB蛋白和m RNA的表达水平均高于正常晚孕妇女(P<0.05),且两者上升水平呈正相关(P<0.05)。结论胎盘绒毛毛细血管内皮细胞中Nogo-B和NF-κB参与重度子痫前期的病理生理过程。 展开更多

关键词 重度子痫前期 胎盘绒毛毛细血管内皮细胞 Nogo-B 核转录因子ΚB

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补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞自噬的影响 被引量：4

10

作者 石颖 陈子扬 +3 位作者 陈凯铭 胡艳红 胡俊 陈胜 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2022年第11期858-862,共5页

目的观察补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬的影响,以期为DR自噬调控机制及药物治疗提供依据。方法HRCECs随机分5组,即正常对照组、高糖组、补阳还五汤组、miR-21 mimic组、miR-21 mimic+补阳还五... 目的观察补阳还五汤对高糖环境下miR-21介导的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬的影响,以期为DR自噬调控机制及药物治疗提供依据。方法HRCECs随机分5组,即正常对照组、高糖组、补阳还五汤组、miR-21 mimic组、miR-21 mimic+补阳还五汤组。除正常对照组外,其余各组细胞于25.0 g·L^(-1)葡萄糖环境中培养,建立高糖损伤模型,补阳还五汤组加用5 g·L^(-1)补阳还五汤水提液干预;miR-21 mimic组孵育转染miR-21 mimic的HRCECs;miR-21 mimic+补阳还五汤组用5 g·L^(-1)补阳还五汤水提液干预转染miR-21 mimic的HRCECs。荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-21的表达,Western blot检测各组细胞中LC3蛋白表达。结果经转染miR-21 mimic后,大部分HRCECs呈绿色荧光,荧光强度为32.708±1.001。实时荧光定量PCR检测结果显示,miR-21 mimic组HRCECs的miR-21相对表达量为106.677±5.787,明显高于高糖组(5.892±0.341)和正常对照组(0.993±0.015),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。高糖组和miR-21 mimic组HRCECs中LC3蛋白相对表达量均较正常对照组升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05),且miR-21 mimic组HRCECs中LC3蛋白相对表达量高于高糖组(P=0.001)。补阳还五汤组HRCECs中LC3蛋白相对表达量低于高糖组和miR-21 mimic组(均为P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P=0.197)。miR-21 mimic+补阳还五汤组HRCECs中LC3蛋白相对表达量低于miR-21 mimic组,但高于补阳还五汤组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),与高糖组比较差异无统计学意义(P=0.930)。结论高糖环境下,miR-21介导HRCECs的自噬,补阳还五汤可以下调HRCECs的miR-21表达,进而减少细胞自噬。 展开更多

关键词 补阳还五汤 MIR-21 自噬 高糖 视网膜微血管内皮细胞

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补阳还五汤对高糖培养的人视网膜微血管内皮细胞自噬和血管形成的干预作用 被引量：1

11

作者 陈凯铭 陈子扬 +3 位作者 石颖 胡艳红 胡俊 陈胜 《中国中医眼科杂志》 2023年第2期105-110,共6页

目的探究补阳还五汤(BYHW)对高糖培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬影响和血管形成的干预作用。方法将HRCECs随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、BYHW组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。除CG组外,其余各组细胞于25 g/L葡萄糖... 目的探究补阳还五汤(BYHW)对高糖培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)自噬影响和血管形成的干预作用。方法将HRCECs随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、BYHW组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。除CG组外,其余各组细胞于25 g/L葡萄糖环境中培养建立高糖损伤模型,BYHW组在MG组的基础上加入5 mg/mL的BYHW水提液,3-MA组加入40μM的3-MA,各组细胞均孵育24 h。采用血管形成实验检测HRCECs血管生成情况,划痕实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blot法分别检测细胞中微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、苄氯素1(Becline-1)的mRNA和蛋白表达水平。结果(1)血管形成:与CG组比较,MG组血管形成数升高(t=7.747,P=0.000);与MG组比较,BYHW、3-MA组血管形成数降低(t_(BYHW)=-6.303,P=0.000;t_(3-MA)=-4.596,P=0.002),差异均有统计学意义。而BYHW、3-MA组血管形成数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)迁移能力:与CG组比较,MG组HRCECs迁移率升高(t=14.035,P=0.000);与MG组比较,BYHW、3-MA组HRCECs迁移率降低(t_(BYHW)=-9.247,t_(3-MA)=-5.358,均P=0.000);与BYHW组比较,3-MA组HRCECs迁移率升高(t=-3.890,P=0.003),差异均有统计学意义。(3)自噬:与CG组比较,MG组LC3 mRNA、蛋白表达水平升高(t_(mRNA)=8.249,t_(蛋白)=14.890,均P=0.000),Beclin-1蛋白表达水平升高(t=7.114,P=0.000);与MG组比较,BYHW、3-MA组的LC3 mRNA和蛋白表达水平均降低(BYHW:t_(mRNA)=-9.298,t_(蛋白)=-11.727,均P=0.000。3-MA:t_(mRNA)=-3.718,P=0.006;t_(蛋白)=-7.511,P=0.000),BYHW组的Beclin-1蛋白表达水平下降(t=-4.115,P=0.003);与BYHW组比较,3-MA组HRCECs的Beclin-1蛋白表达水平升高(t=-2.448,P=0.038),差异均有统计学意义。结论BYHW延缓非增殖期糖尿病视网膜病的发展可能与其调控HRCECs自噬减少血管形成和迁移有关。 展开更多

关键词 补阳还五汤 高糖 人视网膜微血管内皮细胞 自噬 血管形成 糖尿病视网膜病变

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银杏叶提取物对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的影响 被引量：4

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作者 燕建军 彭辉灿 +2 位作者 王俞方 吴橙香 刘照耀 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第12期2417-2420,共4页

目的:研究不同浓度的银杏叶提取物(ginkgo biloba ex-tract,GBE)对体外培养的高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCECs)增殖和凋亡的影响。方法:体外培养从角膜移植术后新鲜人眼球提取的HRC... 目的:研究不同浓度的银杏叶提取物(ginkgo biloba ex-tract,GBE)对体外培养的高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCECs)增殖和凋亡的影响。方法:体外培养从角膜移植术后新鲜人眼球提取的HRCECs。取生长良好的第3～4代细胞用于实验,实验分为低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度GBE组,用噻唑蓝(MTT)比色法检测HRCECs的增殖。吖啶橙(AO)/溴乙锭(EB)荧光双染色、流式细胞术检测HRCECs的凋亡率,并在荧光显微镜下观察荧光染色后HRCECs凋亡形态学改变。结果:MTT比色法结果显示:用12.5,25.0,50.0,100.0mg/L的GBE处理高糖环境下HRCECs,作用24,48,72h,高糖+不同浓度GBE组与高糖对照组相比具有显著性差异(P<0.05),高糖+不同浓度GBE组之间两两比较均具有显著性差异(P<0.05)。AO/EB荧光染色法、流式细胞术检测细胞凋亡率显示:高糖+不同浓度GBE组与高糖对照组比较均有显著性差异(P<0.05),高糖对照组显著高于低糖对照组(P<0.05)。荧光显微镜下观察到活细胞,早期凋亡细胞,晚期凋亡细胞,非凋亡的死亡细胞生物学形态改变的特征。结论:GBE促进高糖环境下HRCECs的增殖,抑制其凋亡。 展开更多

关键词 人视网膜微血管内皮细胞 增殖 凋亡

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牛蒡子苷调控血管内皮生长因子抑制糖尿病视网膜病变的机制研究 被引量：4

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作者 闫媛媛 刘平 《中国医药生物技术》 2020年第1期40-47,共8页

目的探讨牛蒡子苷(Arc)是否通过调控血管内皮生长因子(VEGF)表达进而抑制糖尿病视网膜病变。方法体外培养人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs),用不同浓度的Arc处理HRCECs,同时将si-VEGF或pcDNA3.1-VEGF分别转染入HRCECs,MTT法检测HRCECs增... 目的探讨牛蒡子苷(Arc)是否通过调控血管内皮生长因子(VEGF)表达进而抑制糖尿病视网膜病变。方法体外培养人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs),用不同浓度的Arc处理HRCECs,同时将si-VEGF或pcDNA3.1-VEGF分别转染入HRCECs,MTT法检测HRCECs增殖能力;Western blot检测p21、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、载脂蛋白M(ApoM)、VEGF蛋白表达。结果与LG组相比,HG组HRCECs的OD值明显升高(P<0.05),cyclinD1、TNF-α、MCP-1、ApoM、VEGF水平均显著升高(P<0.05),而p21表达下调(P<0.05),Arc作用后可显著逆转HG对HRCECs增殖、cyclinD1、TNF-α、MCP-1、ApoM、VEGF及p21表达的作用,且Arc不同剂量组间均存在显著性差异(P<0.05);抑制VEGF表达可明显减弱高糖作用下的HRCECs增殖能力并降低相关炎性因子表达;过表达VEGF能逆转Arc对高糖诱导的HRCECs增殖及炎症反应的抑制作用。结论牛蒡子苷可能通过降低高糖诱导的HRCECs细胞中VEGF的高表达进而抑制HRCECs增殖,并可通过减轻炎症反应保护细胞免受损伤。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子类 糖尿病视网膜病变 牛蒡子苷 人视网膜微血管内皮细胞

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钙敏感受体在高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞内皮间质转化中的作用

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作者 贺梦璇 曹鑫 宋愈 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2023年第8期604-607,共4页

目的观察钙敏感受体(CaSR)在高糖(HG)诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)内皮间质转化(EndMT)中的作用和机制。方法将HRCECs分为3组:对照组(NG组,培养基中加入5.5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、高糖组(HG组,培养基中加入25.0 mmol·... 目的观察钙敏感受体(CaSR)在高糖(HG)诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)内皮间质转化(EndMT)中的作用和机制。方法将HRCECs分为3组:对照组(NG组,培养基中加入5.5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、高糖组(HG组,培养基中加入25.0 mmol·L-1 D-葡萄糖)及HG+Calhex231组(培养基中加入25.0 mmol·L^(-1)D-葡萄糖和3μmol·L^(-1)Calhex231)。CCK-8法检测各组HRCECs的细胞活力,Transwell实验检测各组HRCECs的迁移能力,利用细胞管腔形成实验检测各组HRCECs的管腔形成能力,Western blot检测CaSR、VE-cadherin、CD31、α-SMA及Nuclearβ-catenin蛋白的表达。结果HG组CaSR的表达较NG组增加。与NG组相比,HG组HRCECs的细胞活力、迁移能力和成管能力均增强,细胞中CaSR、α-SMA和Nuclearβ-catenin蛋白表达均明显增加,VE-cadherin和CD31蛋白表达均明显降低(均为P<0.05)。与HG组相比,HG+Calhex231组HRCECs的上述指标均明显逆转(均为P<0.05)。结论CaSR表达参与HG诱导的EndMT进展,其机制可能与促进β-catenin核易位有关。 展开更多

关键词 钙敏感受体 人视网膜血管内皮细胞 内皮间质转化

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姜黄素对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖及VEGF和NF-κB p65表达的抑制作用 被引量：3

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作者 项彪 潘颖喆 +2 位作者 谢安琪 程希 邓玲 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2022年第5期764-768,共5页

目的:观察不同浓度姜黄素对体外高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖及血管内皮生长因子(VEGF)、核因子-κB(NF-κB)p65表达的影响。方法:用高糖培养基模拟糖尿病环境建立HRCECs体外高糖模型,将培养的细胞分为:正常对照组、高... 目的:观察不同浓度姜黄素对体外高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖及血管内皮生长因子(VEGF)、核因子-κB(NF-κB)p65表达的影响。方法:用高糖培养基模拟糖尿病环境建立HRCECs体外高糖模型,将培养的细胞分为:正常对照组、高糖对照组、高糖+20、40、80μmol/L姜黄素组,分别用CCK-8法检测姜黄素干预后HRCECs的增殖能力,用Western-blot及免疫细胞化学法检测VEGF、NF-κB p65的表达。结果:CCK-8法结果示:与正常对照组比较,高糖显著促进HRCECs增殖(P<0.01),各浓度姜黄素作用12、24、48h后与高糖对照组比较,细胞增殖均有明显抑制作用(P<0.01),且呈浓度与时间依赖性。Western-blot结果示:与正常对照组比较,高糖对照组中VEGF-A、NF-κB p65表达显著增加(P<0.01),各浓度姜黄素作用12、24、48h后与高糖对照组比较,VEGF-A、NF-κB p65的表达显著减少,且随着浓度增加、时间延长抑制作用增强,各加药组间两两比较均有差异(P<0.01)。免疫细胞化学法结果示:与正常对照组相比,高糖对照组VEGF表达显著增加(P<0.01),各浓度姜黄素干预24h后与高糖对照组比较,VEGF表达逐渐下降(P<0.01),各加药组间两两比较均有差异(P<0.01)。结论:姜黄素可呈浓度与时间依赖性地抑制高糖诱导的HRCECs增殖以及VEGF、NF-κB p65的表达,这种增殖抑制作用可能与其下调VEGF、NF-κB p65表达有关。 展开更多

关键词 姜黄素 人视网膜血管内皮细胞 增殖 血管内皮生长因子(VEGF) 核因子-κB(NF-κB)

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miR-155/PTEN轴在高糖诱导HRCEC凋亡中的作用及机制 被引量：3

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作者 蔡文丽 谢红波 《中国中医眼科杂志》 2022年第5期337-342,363,共7页

目的研究微小RNA-155(miR-155)/磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)在高糖诱导视网膜微血管内皮细胞(HRCEC)凋亡中的作用及机制。方法培养HRCEC并分为miRNC组、miR-NC+高糖组、miR-155+高糖组、miR-NC+空白质粒组、miR-NC+空白质粒+高糖组、m... 目的研究微小RNA-155(miR-155)/磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)在高糖诱导视网膜微血管内皮细胞(HRCEC)凋亡中的作用及机制。方法培养HRCEC并分为miRNC组、miR-NC+高糖组、miR-155+高糖组、miR-NC+空白质粒组、miR-NC+空白质粒+高糖组、miR-155+空白质粒组+高糖组、miR-155+PTEN质粒组+高糖组,转染阴性对照(NC)序列、miR-155模拟物、空白质粒、PTEN质粒。转染后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-155表达水平,四唑氮化合物(MTS)法检测细胞活力,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率,WesternBlot检测PTEN、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达水平,双荧光素酶报告基因验证miR-155靶向PTEN基因mRNA 3’UTR。结果(1)miR-155表达:与miR-NC+高糖组比较,转染miR-155模拟物显著增加高糖环境下HRCEC中miR-155的表达,差异具有统计学意义(t=4.069,P=0.004);(2)细胞活力:与miRNC+高糖组比较,转染miR-155模拟物显著提高高糖环境下HRCEC的OD_(490)水平、抑制细胞凋亡,差异均有统计学意义(t_(OD490)=2.907,P=0.020;t_(凋亡率)=5.957,P=0.000);与miR-155+空白质粒组+高糖组比较,转染miR-155模拟物及PTEN质粒显著降低高糖环境下HRCEC的OD_(490)水平、促进细胞凋亡,差异均有统计学意义(t_(OD490)=3.777,P=0.005;t_(凋亡率)=6.406,P=0.000);(3)PTEN通路:与miR-NC+高糖组比较,转染miR-155模拟物显著抑制高糖环境下HRCEC中PTEN的表达,增加p-AKT、eNOS的表达,差异均有统计学意义(t_(PTEN)=3.855,P=0.005;tp-AKT=6.450,P=0.000;t_(eNOS)=4.875,P=0.001)。结论高糖环境下HRCEC凋亡激活且miR-155表达减少、PTEN表达增加,过表达miR-155能够靶向抑制PTEN并抑制高糖诱导的HRCEC凋亡。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 视网膜微血管内皮细胞 MIR-155 凋亡 磷脂酶和张力蛋白同源物 靶基因

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通心络对高糖诱导人视网膜微血管内皮细胞损伤的保护作用 被引量：4

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作者 位庚 曹柳 +3 位作者 张苏明 侯凤英 赵玉莎 何素彦 《中国医药导报》 CAS 2018年第36期12-15,共4页

目的探讨通心络对高糖诱导人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)损伤的干预作用及其相关机制。方法用高糖培养基建立细胞损伤模型,采用随机数字表法将HRCECs分为正常对照组(normal组)、模型组(model组,30 mmol/L葡萄糖)、通心络低剂量组(TXL-... 目的探讨通心络对高糖诱导人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)损伤的干预作用及其相关机制。方法用高糖培养基建立细胞损伤模型,采用随机数字表法将HRCECs分为正常对照组(normal组)、模型组(model组,30 mmol/L葡萄糖)、通心络低剂量组(TXL-L组,100μg/mL通心络)、通心络中剂量组(TXL-M组,200μg/mL通心络)、通心络高剂量组(TXL-H组,400μg/mL通心络)。检测各组细胞生存活性,细胞上清液内皮素-1(ET-1)、白介素-6(IL-6)和细胞间黏附因子-1(ICAM-1)含量,以及细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达情况。结果与normal组比较,model组细胞生存活性明显降低,细胞上清液中ET-1、IL-6和ICAM-1含量升高,细胞eNOS蛋白表达下调,NF-κB蛋白表达上调(P <0.01);与model组比较,TXL-M组和TXL-H组细胞上清液ET-1含量明显减少(P <0.01),TXL-L组、TXL-M组和TXL-H组细胞上清液IL-6和ICAM-1含量明显减少,eNOS蛋白表达上调,NF-κB蛋白表达下调(P <0.05或P <0.01)。结论通心络可明显改善高糖诱导的HRCECs损伤,并通过减轻炎症损伤发挥细胞保护作用。 展开更多

关键词 通心络 人视网膜微血管内皮细胞 高糖 炎症

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薏苡仁油对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞增殖和VEGF表达的影响 被引量：3

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作者 李敏 章运生 +1 位作者 李芳 彭辉灿 《国际眼科杂志》 CAS 2014年第12期2147-2150,共4页

目的：研究不同浓度的薏苡仁油对体外高糖条件下培养的人视网膜血管内皮细胞（ HRCECs ）增殖及血管内皮生长因子（ VEGF）表达的影响。 方法：将新鲜人眼球提取的HRCECs进行体外培养,最终用于实验的为生长良好的第3～4代细胞,实验分... 目的：研究不同浓度的薏苡仁油对体外高糖条件下培养的人视网膜血管内皮细胞（ HRCECs ）增殖及血管内皮生长因子（ VEGF）表达的影响。 方法：将新鲜人眼球提取的HRCECs进行体外培养,最终用于实验的为生长良好的第3～4代细胞,实验分为空白对照组、低糖对照组、高糖对照组,高糖＋不同浓度（50μL/mL,100μL/mL,200μL/mL）薏苡仁油组。不同浓度的薏苡仁油对体外培养的HRCECs增殖的抑制作用是通过用噻唑蓝比色法（ MTT ）检测。各分组HRCECs中VEGF的表达由免疫细胞化学法检测。 结果：MTT比色法结果显示：不同浓度的薏苡仁油作用于体外培养的HRCECs 48h,其细胞增殖抑制与高糖对照组相比有显著性差异（P〈0.05）。48h内呈浓度依赖性。而低糖对照组与高糖对照组差异无统计学差异（P〉0.05）。免疫细胞化学检测法表明：用50,100,200μL/mL的薏苡仁油作用于高糖下HRCECs 48h,高糖＋不同浓度薏苡仁油组与高糖对照组相比VEGF表达下降明显（ P〈0.05）,将高糖＋不同浓度薏苡仁油组之间进行两两比较亦具有统计学意义（P〈0.05）。且呈浓度依赖性。高糖对照组与低糖对照组相比,VEGF表达明显（P〈0.05）。 结论：薏苡仁油可抑制高糖环境下 HRCECs 的增殖和VEGF的表达。 展开更多

关键词 薏苡仁油 血管内皮生长因子 人视网膜血管内皮细胞

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LC-MS测定大鼠脑微血管内皮细胞中卡马西平的含量 被引量：3

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作者 孙晶晶 谢林 +2 位作者 梁艳 张冬梅 刘晓东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期241-244,共4页

目的:建立大鼠脑微血管内皮细胞中卡马西平的LC-MS测定方法。方法:细胞悬液中加入内标盐酸非洛普,高速离心沉淀蛋白,取上清液进行LC-MS测定。色谱柱为ShimpackODSC18(5.0μm,150mm×2.0mmID),离子源为ESI,检测离子为[M+H]+:卡马西平... 目的:建立大鼠脑微血管内皮细胞中卡马西平的LC-MS测定方法。方法:细胞悬液中加入内标盐酸非洛普,高速离心沉淀蛋白,取上清液进行LC-MS测定。色谱柱为ShimpackODSC18(5.0μm,150mm×2.0mmID),离子源为ESI,检测离子为[M+H]+:卡马西平(m/z):237;DDPH(m/z):344,流动相为2mmol/L醋酸铵缓冲液(pH=4)与乙腈(60∶40,v/v)。结果:本实验条件下卡马西平与内标盐酸非洛普可良好分离,保留时间分别为5.0min和3.6min左右;线性范围为0.39～50.00ng/mL;方法回收率为96%～104%;日内日间变异系数均小于13%;最低检测浓度为0.39ng/mL。结论:该方法符合生物样品测定要求,可用于细胞内卡马西平浓度的测定。 展开更多

关键词 卡马西平 高效液相色谱-质谱法 脑微血管内皮细胞

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丙丁酚对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞增殖及VEGF表达的影响 被引量：2

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作者 李梅 彭辉灿 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第3期228-231,共4页

目的研究不同浓度的丙丁酚(普罗布考,Probucol)对体外培养的高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCEC)增殖及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方... 目的研究不同浓度的丙丁酚(普罗布考,Probucol)对体外培养的高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCEC)增殖及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法 体外培养从角膜移植术后新鲜人眼球提取的HRCEC。取生长良好的第3-4代细胞用于实验,实验分为低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度丙丁酚(5μmol.L-1、10μmol.L-1、20μmol.L-1、40μmol.L-1、80μmol.L-1)组,用噻唑蓝比色法(MTT)检测24h不同浓度的丙丁酚对其增殖的抑制作用。免疫细胞化学法检测低糖对照组、高糖对照组和不同浓度丙丁酚(5μmol.L-1、40μmol.L-1、80μmol.L-1)组HRCEC中VEGF的表达。结果 MTT比色法结果显示:不同浓度的丙丁酚作用于原代培养HRCEC24h,细胞增生抑制率分别为8.40%、20.84%、34.90%、45.32%、55.38%。一定质量浓度范围内丙丁酚可抑制高糖环境下HRCEC的增殖(P<0.05),24h内呈质量浓度依赖性。低糖对照组与高糖对照组相比差异无统计学意义(P=0.067>0.05)。低糖对照组、高糖对照组与丙丁酚浓度分别为5μmol.L-1、40μmol.L-1、80μmol.L-1作用于HRCEC24h,免疫细胞化学背景灰度值与阳性灰度值之差分别为28.75±3.77、71.93±8.37、54.67±4.33、41.43±3.45、29.18±3.37。与高糖对照组相比,加药组作用24h VEGF表达明显下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05),且呈质量浓度依赖性。与低糖对照组相比,高糖对照组VEGF的表达明显增加(P<0.05)。结论 丙丁酚对体外培养的高糖环境下HRCEC的增殖及高糖引起VEGF表达的上调具有抑制作用。 展开更多

关键词 丙丁酚 人视网膜微血管内皮细胞 免疫组织化学 VEGF

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