目的观察二氢杨梅素对人乳腺癌MCF-7细胞中第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)甲基化及其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法以CCK-8法检测细胞活力,qRT-...目的观察二氢杨梅素对人乳腺癌MCF-7细胞中第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)甲基化及其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法以CCK-8法检测细胞活力,qRT-PCR检测PTEN和DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的mRNA表达,Western blot法检测PTEN的蛋白表达,荧光法检测细胞DNA甲基转移酶总活性,甲基化特异性PCR法(methylation-specific PCR,MSP)检测PTEN基因甲基化水平。结果细胞活力检测结果表明,二氢杨梅素可剂量依赖性降低乳腺癌MCF-7细胞活力(P<0.05);qRT-PCR和Western blot检测结果表明,二氢杨梅素可显著上调PTEN的表达(P<0.05),并呈现剂量-效应关系;MSP检测结果显示,二氢杨梅素可显著诱导MCF-7细胞PTEN基因去甲基化;qRT-PCR和荧光法检测结果显示,二氢杨梅素可显著降低MCF-7细胞DNMT1表达和DNMT活性(P<0.05)。结论二氢杨梅素显著诱导乳腺癌细胞PTEN基因去甲基化,促进其表达,其机制可能主要涉及对DNMT1表达和活性的抑制。展开更多
目的人类干扰素诱导基因家族之一的人类干扰素诱导蛋白(absent in melanoma 2,AIM2)被视为抑癌基因,但目前其抑癌机制仍不清楚。文中研究AIM2诱发乳腺癌细胞凋亡的分子机制。方法建立Tet-Off诱导模式系统来诱发AIM2大量表达,MCF-7 t TA-...目的人类干扰素诱导基因家族之一的人类干扰素诱导蛋白(absent in melanoma 2,AIM2)被视为抑癌基因,但目前其抑癌机制仍不清楚。文中研究AIM2诱发乳腺癌细胞凋亡的分子机制。方法建立Tet-Off诱导模式系统来诱发AIM2大量表达,MCF-7 t TA-AIM2细胞为实验组,MCF-7 t TA-Luc细胞为对照组。Western blot检测AIM2在乳腺癌细胞株的表达及亚细胞定位,XTT assay分析AIM2对细胞增殖的影响。应用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶染色行检测细胞凋亡,Western blot检测细胞凋亡的机制。结果文中建立的Tet-Off诱导系统可使t TA结合到TRE,从而促进AIM2基因转录,进而使AIM2蛋白大量表达。在诱导4 d后,可在细胞质及细胞核中检测到AIM2的表达,随诱导天数的增加其表达量增加。AIM2表达于细胞质及细胞核中。由XTT assay可知,MCF-7 t TA-AIM2细胞株在诱导6 d后生长速率减慢。诱导AIM2大量表达后,其FITC荧光凋亡百分比显著增加(2.36%vs 14.45%,P<0.01)。AIM2大量表达后抑制抗凋亡蛋白-Bcl-x L表达,增加促凋亡蛋白-Bad、Bax,并且活化caspases进而造成DNA修复蛋白PARP裂解。结论在乳腺癌Tet-Off诱导系统中,AIM2影响细胞增殖,刺激线粒体促使细胞走向凋亡。展开更多
文摘目的人类干扰素诱导基因家族之一的人类干扰素诱导蛋白(absent in melanoma 2,AIM2)被视为抑癌基因,但目前其抑癌机制仍不清楚。文中研究AIM2诱发乳腺癌细胞凋亡的分子机制。方法建立Tet-Off诱导模式系统来诱发AIM2大量表达,MCF-7 t TA-AIM2细胞为实验组,MCF-7 t TA-Luc细胞为对照组。Western blot检测AIM2在乳腺癌细胞株的表达及亚细胞定位,XTT assay分析AIM2对细胞增殖的影响。应用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶染色行检测细胞凋亡,Western blot检测细胞凋亡的机制。结果文中建立的Tet-Off诱导系统可使t TA结合到TRE,从而促进AIM2基因转录,进而使AIM2蛋白大量表达。在诱导4 d后,可在细胞质及细胞核中检测到AIM2的表达,随诱导天数的增加其表达量增加。AIM2表达于细胞质及细胞核中。由XTT assay可知,MCF-7 t TA-AIM2细胞株在诱导6 d后生长速率减慢。诱导AIM2大量表达后,其FITC荧光凋亡百分比显著增加(2.36%vs 14.45%,P<0.01)。AIM2大量表达后抑制抗凋亡蛋白-Bcl-x L表达,增加促凋亡蛋白-Bad、Bax,并且活化caspases进而造成DNA修复蛋白PARP裂解。结论在乳腺癌Tet-Off诱导系统中,AIM2影响细胞增殖,刺激线粒体促使细胞走向凋亡。
