基于谷氨酸消旋酶基因(murI)构建杀香鱼假单胞菌减毒活疫苗株的染色体-质粒平衡致死表达系统

1

作者 张明明 叶浩达 +4 位作者 张朝政 王鹏程 王克诠 严小军 陶震 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期767-779,共13页

【目的】构建一种基于谷氨酸消旋酶(MurI)基因的染色体-质粒平衡致死系统,用于杀香鱼假单胞菌减毒活疫苗株(Pseudomonas plecoglossicidaΔtssD-1,PpΔtssD-1)中表达外源抗原,为开发多联活疫苗提供新的思路和方法。【方法】利用同源重... 【目的】构建一种基于谷氨酸消旋酶(MurI)基因的染色体-质粒平衡致死系统,用于杀香鱼假单胞菌减毒活疫苗株(Pseudomonas plecoglossicidaΔtssD-1,PpΔtssD-1)中表达外源抗原,为开发多联活疫苗提供新的思路和方法。【方法】利用同源重组技术,将亲本株PpΔtssD-1中的murI基因敲除,构建murI基因缺失突变株;将广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-2的卡那霉素抗性基因替换为murI基因,构建平衡致死质粒(即无抗性回补质粒);在平衡致死质粒的多克隆位点处插入绿色荧光蛋白以检测外源抗原是否稳定表达,对重组菌株进行生物学特性分析,包括生长曲线、质粒稳定性和外源抗原表达水平。【结果】murI基因缺失株在不含D-谷氨酸的LB培养基上无法生长;无抗性回补株在不含D-谷氨酸的LB培养基上恢复了生长能力,但生长速度低于亲本株;经鉴定外源抗原可在无抗性质粒中稳定表达,并可在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光信号;此外,平衡致死质粒在重组菌株中具有良好的遗传稳定性。【结论】本研究以murI为靶点构建了新型的染色体-质粒平衡致死系统,可在无抗性筛选条件下在PpΔtssD-1中表达外源抗原,为开发多联活疫苗提供了新的策略和方法。 展开更多

关键词 杀香鱼假单胞菌ΔtssD-1株 营养缺陷株 平衡致死系统 D-谷氨酸

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新型生长抑素原核表达质粒的构建及表达鉴定 被引量：5

2

作者 梁爱心 冯细钢 +5 位作者 韩丽 滑国华 桑雷 刘兴斌 刘耘 杨利国 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期995-998,共4页

将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)融合基因插入平衡致死系统原核表达质粒pYA3493中,转化至缺失asd基因的减毒猪霍乱沙门氏菌C500,经酶切、测序筛选得到非抗性的目的克隆,命名为pYA-SS。应用SDS-PAGE和Western blotting技术分离并检测融... 将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)融合基因插入平衡致死系统原核表达质粒pYA3493中,转化至缺失asd基因的减毒猪霍乱沙门氏菌C500,经酶切、测序筛选得到非抗性的目的克隆,命名为pYA-SS。应用SDS-PAGE和Western blotting技术分离并检测融合蛋白在宿主菌中的表达活性。结果表明,本试验构建的非抗性筛选生长抑素原核表达质粒可以在宿主菌C500中稳定、正确表达。此研究为开发新型、高效、安全的促生长疫苗提供了可靠的研究材料。 展开更多

关键词 生长抑素 原核表达 平衡致死系统

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表达SLTEC保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及生物学特性 被引量：4

3

作者 满晓营 吴斌 +5 位作者 罗勇 余腾 赵战勤 徐引弟 郭爱珍 陈焕春 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期518-523,共6页

【目的】利用平衡致死系统构建表达产类志贺氏毒素大肠杆菌(Shiga-liketoxin Escherichia coli,SLTEC)保护性抗原的减毒猪霍乱沙门氏菌。【方法】构建表达SLT-IIeB-FedF的重组质粒,再将其电转入终宿主菌减毒猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株... 【目的】利用平衡致死系统构建表达产类志贺氏毒素大肠杆菌(Shiga-liketoxin Escherichia coli,SLTEC)保护性抗原的减毒猪霍乱沙门氏菌。【方法】构建表达SLT-IIeB-FedF的重组质粒,再将其电转入终宿主菌减毒猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株中构建成口服活疫苗株,经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SLT-IIeB-FedF融合蛋白的表达情况,并观察重组菌体外培养的稳定性。【结果】利用宿主-载体平衡致死系统构建了表达SLTEC保护性抗原的重组减毒猪霍乱沙门氏菌,经SDS-PAGE电泳出现了1条蛋白质量约为37kDa的蛋白条带。且在没有选择压力的条件下体外能稳定地繁殖、生长和传代。【结论】成功构建表达SLTEC保护性抗原的重组减毒猪霍乱沙门氏菌,为发展猪水肿病-副伤寒的口服疫苗奠定了初步基础。 展开更多

关键词 减毒猪霍乱沙门氏菌 平衡致死系统 产类志贺氏毒素大肠杆菌(Shiga-like TOXIN ESCHERICHIA coli SLTEC)

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表达宫颈癌抗原基因的李斯特菌平衡致死系统的构建及其生物学特性研究

4

作者 欧倩 陈昭斌 +3 位作者 唐静 陈梦蝶 张云雯 汪川 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1159-1166,共8页

目的 构建表达宫颈癌抗原的单增和绵羊李斯特菌平衡致死系统,并研究其基本生物学特性,为宫颈癌免疫治疗提供参考数据。方法 将实验室已有的HPV16型E6E7融合蛋白抗原基因盒通过无缝克隆的方式连接到含有营养基因dal的回补质粒pCWgfp-LM d... 目的 构建表达宫颈癌抗原的单增和绵羊李斯特菌平衡致死系统,并研究其基本生物学特性,为宫颈癌免疫治疗提供参考数据。方法 将实验室已有的HPV16型E6E7融合蛋白抗原基因盒通过无缝克隆的方式连接到含有营养基因dal的回补质粒pCWgfp-LM dal-Amp上,并用asd营养基因替换回补质粒的氨苄(ampicillin, Amp)抗性基因,转化大肠杆菌受体菌DH5αΔasd,利用营养筛选得到表达宫颈癌抗原同时不具有Amp抗性的回补质粒pCWgfp-E6E7-LM dalAmpfree,将其分别电转两株敲除了毒力基因actA、plcB和营养基因dal、dat的减毒李斯特菌营养缺陷株LMΔdd和LIΔdd中,得到表达宫颈癌抗原基因的单增和绵羊李斯特菌平衡致死系统。观察其体外生长情况,利用蛋白印迹实验检测蛋白表达情况,PCR检测回补质粒pCWgfp-E6E7-LM dal-Ampfree的体外传代稳定性,通过基本生化反应测定和溶血实验研究其基本生物学特性。结果 成功构建表达宫颈癌抗原的两种李斯特菌平衡致死系统;目标蛋白能够在李斯特菌平衡致死系统中成功表达;表达宫颈癌抗原的回补质粒能够在李斯特菌平衡致死系统中稳定存在;表达宫颈癌抗原的李斯特菌平衡致死系统较李斯特菌营养缺陷株相比明显恢复生长;生化反应测定结果显示,表达宫颈癌抗原的李斯特菌平衡致死系统与李斯特菌减毒株绝大多数生化反应保持一致;添加了宫颈癌抗原基因的李斯特菌平衡系统仍能保持溶血能力,但略逊于未表达宫颈癌抗原的李斯特菌平衡致死系统和李斯特菌减毒株。结论 成功构建表达宫颈癌抗原基因的两种李斯特菌平衡致死系统,其在体外能正常生长,回补质粒能在体外稳定存在,基本生化特性及溶血能力变化不大,可作为宫颈癌治疗性疫苗候选株进一步研究。 展开更多

关键词 宫颈癌 平衡致死系统 李斯特菌

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表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的减毒沙门氏菌工程菌株的构建 被引量：3

5

作者 毛旭虎 邹全明 +4 位作者 鲁东水 张卫军 吴超 罗萍 王宁 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期413-416,共4页

目的采用平衡致死系统构建表达幽门螺杆菌尿素酶 B亚单位的减毒沙门氏菌工程菌株。方法 PCR扩增幽门螺杆菌尿素酶 B亚单位 ,与 p YA 3149(asd+ )载体质粒重组 ,转化减毒的伤寒沙门氏菌突变株 ,SDS- PAGE,用 western- blot分析其表达 ,... 目的采用平衡致死系统构建表达幽门螺杆菌尿素酶 B亚单位的减毒沙门氏菌工程菌株。方法 PCR扩增幽门螺杆菌尿素酶 B亚单位 ,与 p YA 3149(asd+ )载体质粒重组 ,转化减毒的伤寒沙门氏菌突变株 ,SDS- PAGE,用 western- blot分析其表达 ,并观察重组菌体外传代培养的稳定性。结果利用宿主 -载体平衡致死系统构建了表达幽门螺杆菌尿素酶 B亚单位的重组减毒沙门氏菌工程菌株 ,且在有选择压力的条件下在体外能稳定地繁殖、生长和传代。 展开更多

关键词 减毒伤寒沙门氏菌 平衡致死系统 幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位 基因工程活疫苗

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平衡致死系原种平30雄蛾的交配性能研究 被引量：3

6

作者 陈诗 祝新荣 +3 位作者 王红芬 柳新菊 傅春红 孟智启 《蚕桑通报》 2010年第3期21-25,共5页

通过对平衡致死系原种平30饲育过程中不同营养条件、种茧期不同保护温度、雄蛾每天交配频度、雄蛾冷藏温度及蚕种场生产实际调查,认为相对饥饿饲育除对原蚕茧质有一定影响外,对雄蛾交配性能没有影响;种茧期高温保护对卵质有不良影响,但... 通过对平衡致死系原种平30饲育过程中不同营养条件、种茧期不同保护温度、雄蛾每天交配频度、雄蛾冷藏温度及蚕种场生产实际调查,认为相对饥饿饲育除对原蚕茧质有一定影响外,对雄蛾交配性能没有影响;种茧期高温保护对卵质有不良影响,但对雄蛾的交配性能基本没有影响。雄蛾每天交配2次比交配1次的利用率高,雄蛾冷藏温度高于10℃,雄蛾利用率下降,在正常情况下,平30的雄蛾利用率可达500%以上,雄蛾在5交范围内是安全有效的,建议雄蚕杂交种繁育中雌雄原蚕的蚁量比例以不超过3∶1为宜。 展开更多

关键词 雄蛾 平衡致死系 原种 平30 交配性能

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鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因缺失株平衡致死系统的构建及生物学特性分析 被引量：1

7

作者 张明亮 孙长江 +2 位作者 顾敬敏 崔子寅 韩文瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期3341-3349,共9页

本研究旨在构建基于减毒鼠伤寒沙门菌的平衡致死系统。将打靶基因片段Cat基因重组入鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因位置,之后将温敏型质粒pCP20转入菌体中用以消除Cat基因片段,通过PCR技术两步法筛选出缺失株Δasd LH430;将asd+的原核表达... 本研究旨在构建基于减毒鼠伤寒沙门菌的平衡致死系统。将打靶基因片段Cat基因重组入鼠伤寒沙门菌LH430株asd基因位置,之后将温敏型质粒pCP20转入菌体中用以消除Cat基因片段,通过PCR技术两步法筛选出缺失株Δasd LH430;将asd+的原核表达质粒pYA3493转入Δasd LH430,经PCR及测序鉴定表明鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430(pYA3493)构建成功。对构建的基因缺失株研究表明,该缺失株失去了在二氨基庚二酸(DAP)阴性环境中生存的能力;糖发酵试验表明,缺失菌株在利用碳源的能力方面与亲本菌株保持一致;9种生化试验结果显示,缺失菌株遗传了亲本菌株的生化特性;遗传稳定性试验表明,缺失菌株能够稳定遗传缺失的423 bp的基因片段;将绿色荧光基因转入所构建的平衡致死系统,成功构建携带绿色荧光基因的重组菌Δasd LH430(pYA-gfp),对其研究表明该重组菌能够有效表达绿色荧光蛋白。本研究成功构建了鼠伤寒沙门菌平衡致死系统Δasd LH430(pYA3493),能够有效表达所携带的基因,该系统可作为疫苗活载体来携带外源基因。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 平衡致死系统 活疫苗载体 生物学特性

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“平30”迟眠蚕饲养成绩调查与饲养技术要点

8

作者 王红芬 于少芳 《蚕桑通报》 2022年第3期31-32,51,共3页

平衡致死系“平30”迟眠蚕,虽然生长发育较缓慢,龄期经过有所延长,但各龄迟眠蚕的饲养成绩与对照区差异不大,因此在“平30”饲育过程中应慎重淘汰迟眠蚕,避免将发育缓慢的雄性健康个体淘汰,以致种茧雌雄比例失调,从而影响蚕种生产。

关键词 平衡致死系 平30 迟眠蚕 性比 种茧 卵质 饲养技术

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表达肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA抗原的减毒沙门氏菌株的构建 被引量：1

9

作者 宁元元 毛旭虎 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期187-190,共4页

目的利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法构建表达EspA的重组质粒,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌x4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检测EspA蛋... 目的利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法构建表达EspA的重组质粒,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌x4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检测EspA蛋白的表达情况。并观察重组菌体外培养的稳定性。结果利用宿主-载体平衡致死系统构建了表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌,经Tricine-SDS-PAGE电泳出现了1条Mr约21000的蛋白条带,Westen-blot检测能与抗EspA的单克隆抗体发生特异性反应。且在没有选择压力的条件下体外能稳定地繁殖、生长和传代。结论表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌构建成功,为发展口服抗EHEC O157:H7的疫苗奠定了初步基础。 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 平衡致死系统 EHEC O157:H7

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禽伤寒沙门氏菌SG9R株asd基因缺失株平衡致死系统平台的构建

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作者 王小舟 杨样 +6 位作者 胡会杰 宋玉洁 王勇祥 谢静 李芙蓉 陆广富 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期595-599,共5页

为研发以禽伤寒沙门氏菌(SG)SG9R弱毒疫苗株为载体表达外源基因的活菌疫苗,本研究利用Red同源重组系统对SG9R株基因组中编码天冬氨酸β-半醛脱氢酶的asd基因进行敲除,构建SG9R△asd缺失突变株。该突变株在缺乏外源DAP培养条件下溶菌死亡... 为研发以禽伤寒沙门氏菌(SG)SG9R弱毒疫苗株为载体表达外源基因的活菌疫苗,本研究利用Red同源重组系统对SG9R株基因组中编码天冬氨酸β-半醛脱氢酶的asd基因进行敲除,构建SG9R△asd缺失突变株。该突变株在缺乏外源DAP培养条件下溶菌死亡,而在添加DAP或导入表达链球菌asd+质粒p YA3342后才能够恢复增殖能力,以此建立了以asd营养基因为筛选标志的SG染色体-质粒平衡致死系统。并且进一步采用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,将其克隆于asd+质粒p YA3342中,电转化于SG9R△asd缺失突变株中,通过无DAP培养条件的筛选,获得了表达GFP外源基因的SG重组菌,经体外连续25次传代后,鉴定结果显示,GFP仍能够在重组SG中持续稳定的表达。本研究结果为以SG弱毒疫苗菌株作为活载体的基因工程疫苗的研制提供简便易行的操作平台。 展开更多

关键词 禽伤寒沙门氏菌 asd基因 平衡致死系统 绿色荧光蛋白

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通过大肠杆菌thyA染色体质-粒平衡致死系统构建无抗性基因表达载体 被引量：5

11

作者 黄维 曹诚 +2 位作者 李平 钟辉 马清钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期521-526,共6页

克隆了大肠杆菌和霍乱弧菌胸腺嘧啶合成酶基因thyA ,并以pcDNA3质粒为基础 ,分别用两种来源的thyA基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建了不含抗性基因 ,且可在thyA营养缺陷型大肠杆菌中基于染色体 质粒平衡致死系统稳定传代的真核表达载体... 克隆了大肠杆菌和霍乱弧菌胸腺嘧啶合成酶基因thyA ,并以pcDNA3质粒为基础 ,分别用两种来源的thyA基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建了不含抗性基因 ,且可在thyA营养缺陷型大肠杆菌中基于染色体 质粒平衡致死系统稳定传代的真核表达载体。该载体可有效表达红色荧光蛋白报告基因。 展开更多

关键词 基因疫苗 染色体-质粒平衡致死系统 表达载体 核酸疫苗

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以减毒沙门菌为载体布鲁氏菌DNA疫苗的构建及免疫原性分析 被引量：7

12

作者 周丽丽 姚碧涛 +3 位作者 罗德炎 焦新安 刘秀梵 王希良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期486-490,共5页

目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X45... 目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd+-pVAX1-BLS-L7/L12)。以1×109CFU/只的剂量口服免疫Balb/C小鼠,3次免疫后进行免疫效果的评价。结果构建的重组减毒沙门菌质粒转染COS-7细胞经免疫组化和Western-blot试验证明BLS-L7/L12融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清和肠黏液中有特异性抗体IgG和sIgA产生。通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论所构建的以重组沙门菌为载体口服布鲁氏菌DNA疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,且以细胞免疫应答为主。可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 BLS-L7/L12 DNA疫苗 伤寒沙门菌 平衡致死系统

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霍乱弧菌以thyA基因为选择压力的染色体质粒致死平衡系统的构建 被引量：4

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作者 夏晓滨 祁国明 +1 位作者 刘延清 高守一 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第3期223-227,共5页

目的　为构建霍乱弧菌口服活疫苗提供稳定实用的载体系统。方法　在改良MM基本培养基的基础上 ,建立了霍乱弧菌thyA基因突变菌株的筛选方法 ,继而用PCR插入法克隆了大肠杆菌thyA基因全序列 (pXXB10 6 ) ,并电击转化入霍乱弧菌thyA基因... 目的　为构建霍乱弧菌口服活疫苗提供稳定实用的载体系统。方法　在改良MM基本培养基的基础上 ,建立了霍乱弧菌thyA基因突变菌株的筛选方法 ,继而用PCR插入法克隆了大肠杆菌thyA基因全序列 (pXXB10 6 ) ,并电击转化入霍乱弧菌thyA基因缺陷株 (PL10 2 ) ,使后者在MM改良培养基上的生长恢复为野生状态。结果　选育出的thyA基因突变的霍乱弧菌IEM10 1菌株PL10 2突变性状及生物学性状基本稳定。进而构建了以thyA基因为选择压力的霍乱弧菌染色体 质粒致死平衡系统。结论　构建成的抗原呈递系统作为构建肠道疫苗的受体菌株是稳定的 ,也是适用的。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 染色体-质粒致死平衡系统 thyA基因

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鼠伤寒沙门菌SL1344株环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统的构建及其雏鸡免疫保护试验 被引量：8

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作者 李静 陈松彪 +9 位作者 余祖华 何雷 李小康 贾艳艳 郁川 张春杰 程相朝 李银聚 吴庭才 赵战勤 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期942-948,共7页

【目的】为构建鼠伤寒沙门菌环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统,并对其生物学特性进行检测。【方法】以鼠伤寒沙门菌SL1344Δcya株为亲本株,利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的同源重组技术,经两步法缺失并筛选asd基因缺失株(SL1344... 【目的】为构建鼠伤寒沙门菌环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统,并对其生物学特性进行检测。【方法】以鼠伤寒沙门菌SL1344Δcya株为亲本株,利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的同源重组技术,经两步法缺失并筛选asd基因缺失株(SL1344ΔcyaΔasd)。将含asd基因且无抗性的p YA3493质粒电转化至缺失株SL1344ΔcyaΔasd,构建重组菌株SL1344ΔcyaΔasd(p YA3493)。【结果】试验结果表明,重组菌株SL1344ΔcyaΔasd(p YA3493)生化特性和生长速度与参考株SL1344相比差异较大,与亲本株SL1344Δcya基本一致,SL1344ΔcyaΔasd(p YA3493)失去了利用麦芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力,也不能分解H2S、半乳糖和鼠李糖,但仍保留了利用葡萄糖的能力。对1日龄雏鸡攻毒试验表明,SL1344ΔcyaΔasd(p YA3493)毒力较参考株SL1344降低了约104倍。免疫保护试验显示,1日龄雏鸡免疫SL1344ΔcyaΔasd(p YA3493)后第17天,利用鼠伤寒沙门菌参考株攻毒,保护率为62.5%。【结论】鼠伤寒沙门菌SL1344株环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统构建成功,且具有较好的免疫保护性,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 缺失株 asd平衡致死系统 免疫保护

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昆虫种群遗传调控和生殖特性干扰及其在草地贪夜蛾防控中的应用前景 被引量：6

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作者 徐汉虹 王佳丽 +2 位作者 韦加奇 朱剑 林菲 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-8,共8页

草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda是世界十大害虫之一,其入侵和为害对我国的农业生产构成了重大的威胁。草地贪夜蛾寄主范围广,对多种化学药剂和转Bt玉米产生抗性,随着抗药性及农药安全问题的加剧,迫切需要新型防治方法。本文对昆虫种... 草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda是世界十大害虫之一,其入侵和为害对我国的农业生产构成了重大的威胁。草地贪夜蛾寄主范围广,对多种化学药剂和转Bt玉米产生抗性,随着抗药性及农药安全问题的加剧,迫切需要新型防治方法。本文对昆虫种群遗传调控技术,如性连锁平衡致死系统、构建杂交不育平衡致死品系,以及干扰昆虫生殖特性的方法,如控制昆虫性别、干扰昆虫生长发育的关键基因、调整性信息素比例等进行了综述。基于草地贪夜蛾玉米型和水稻型2个品系的杂种不育和交配障碍等生殖隔离现象,探讨了种群遗传调控和生殖特性干扰在草地贪夜蛾防控中的应用前景。以昆虫生殖为切入点,为昆虫不育技术在草地贪夜蛾上的应用提供理论依据。 展开更多

关键词 草地贪夜蛾 性连锁平衡致死系统 杂交不育 生殖特性干扰

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减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(pYA3493)宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究 被引量：4

16

作者 尚珂 张俊峰 +6 位作者 程相朝 张春杰 李银聚 陈桂华 颜云飞 翟崇凯 赵战勤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期358-363,共6页

目的:开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcya C78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasd C78-1,再将携带asd基因的互补质粒p YA3493... 目的:开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcya C78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasd C78-1,再将携带asd基因的互补质粒p YA3493电转至上述菌株,构建ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特性。结果:PCR及测序结果共同表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)构建成功。生物学特性检测结果表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的血清型与亲本株ΔcrpΔcya C78-1和疫苗株C500相同,并能够稳定遗传缺失型asd基因片段;其生长速度略慢于ΔcrpΔcya C78-1,且二者均明显慢于疫苗株C500;其生化特性结果也与ΔcrpΔcya C78-1基本相同。小鼠口服攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的毒力与ΔcrpΔcya C78-1基本相当,但其半数致死量约为疫苗株C500的412倍。结论:上述结果表明,减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)有潜力作为高效表达外源基因的口服活疫苗载体。 展开更多

关键词 自杀性质粒 宿主-载体平衡致死系统 ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(PYA3493) 口服活疫苗载体

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利用λ-Red重组系统和平衡致死系统改造抗药性致腹泻工程疫苗 被引量：3

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作者 袁盛凌 王芃 +3 位作者 刘向昕 王艳春 展德文 张兆山 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期10-15,共6页

质粒pMM085是含有猪毒素源性大肠杆菌(ETEC)的黏附素K88与无毒肠毒素LTA-B+基因的重组质粒,含氯霉素抗性基因,由此构建的菌苗株带有抗药性。利用平衡致死系统改建此疫苗株,即将质粒上的氯霉素抗性基因cat替换成asd基因,并把新构建的质... 质粒pMM085是含有猪毒素源性大肠杆菌(ETEC)的黏附素K88与无毒肠毒素LTA-B+基因的重组质粒,含氯霉素抗性基因,由此构建的菌苗株带有抗药性。利用平衡致死系统改建此疫苗株,即将质粒上的氯霉素抗性基因cat替换成asd基因,并把新构建的质粒转移到缺失asd基因的大肠杆菌X6097中。但由于质粒pMM085是一个23kD的大质粒,传统的基因工程操作不易进行,利用λ-Red重组系统,将表达Red重组蛋白的质粒pKD46转化含pMM085的大肠杆菌X6097,并用两端各带有39ntcat基因同源区、含全长asd基因的PCR产物电击转化此感受态细胞,在λ-Red重组系统的帮助下,成功实现了asd基因对cat基因的置换。 展开更多

关键词 λ-Red重组系统 抗药性基因 平衡致死系统

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口服鼠疫F1-V重组融合基因DNA活菌疫苗的构建及免疫原性研究 被引量：3

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作者 郭习勤 焦新安 +5 位作者 王栋 董梅 邢丽 颜艳 何维明 王希良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期176-179,共4页

目的构建携带鼠疫耶尔森菌F1-V融合基因的重组减毒沙门菌苗,口服免疫Balb/c小鼠检测其免疫原性,为口服鼠疫活载体DNA疫苗研究打下基础。方法将F1-V融合基因克隆到真核表达载体asd-pVAX1,进一步依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X455... 目的构建携带鼠疫耶尔森菌F1-V融合基因的重组减毒沙门菌苗,口服免疫Balb/c小鼠检测其免疫原性,为口服鼠疫活载体DNA疫苗研究打下基础。方法将F1-V融合基因克隆到真核表达载体asd-pVAX1,进一步依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd-pVAX1/F1-V),提取重组质粒转染COS-7细胞并做免疫组化和Western-blot检测F1-V融合蛋白在细胞中的表达。以1×109CFU/只的剂量3次口服免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中抗体水平。结果构建的重组减毒沙门菌转染COS-7细胞后,免疫组化和Western-blot试验证明F1-V融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清有特异性抗体IgG产生。结论构建的重组沙门菌能运送DNA疫苗到体内并成功释放质粒刺激机体产生特异性免疫应答,为口服鼠疫活载体DNA疫苗的黏膜免疫研究打下了基础。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 鼠疫 DNA疫苗 伤寒沙门菌 平衡致死系统

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大肠杆菌胸腺嘧啶合成酶thyA缺失突变菌株的构建 被引量：1

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作者 黄维 钟辉 +2 位作者 李平 曹诚 马清钧 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期62-66,共5页

大肠杆菌K 1 2DY330菌株的染色体上整合有一种新型的同源重组系统———缺陷型λ原噬菌体同源重组系统。以DY330为出发菌 ,通过同源重组构建大肠杆菌thyA- 株DY330 TI,其基因组特点是 :thyA基因除保留N端的1～ 4 9氨基酸残基相对应的... 大肠杆菌K 1 2DY330菌株的染色体上整合有一种新型的同源重组系统———缺陷型λ原噬菌体同源重组系统。以DY330为出发菌 ,通过同源重组构建大肠杆菌thyA- 株DY330 TI,其基因组特点是 :thyA基因除保留N端的1～ 4 9氨基酸残基相对应的必需核苷酸序列外 ,将其余部分全部缺失 ;此外 ,还敲除了DY330 TI中与缺陷型λ原噬菌体同源重组功能相关的基因 ,从而尽可能避免了通过同源重组产生回复突变的可能性。通过大肠杆菌thyA基因对该突变株的转化实验 ,检测转化子的回复突变率 ,进一步证实该突变株的突变性状稳定 ,为构建以thyA为选择标志的大肠杆菌染色体 展开更多

关键词 大肠杆菌 胸腺嘧啶合成酶 thyA缺失突变菌株 同源重组

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减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsseK1Δasd宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究 被引量：2

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作者 杨亚东 丁轲 +3 位作者 张春杰 程相朝 贾艳艳 何雷 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1521-1526,共6页

目的:为构建减毒鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株平衡致死系统,并将其开发为能够稳定携带外源基因的活疫苗载体。方法:利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的等位基因交换技术,以减毒鼠伤寒沙门菌株SL1344Δsse K1为亲本株,运用二步法筛选... 目的:为构建减毒鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株平衡致死系统,并将其开发为能够稳定携带外源基因的活疫苗载体。方法:利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的等位基因交换技术,以减毒鼠伤寒沙门菌株SL1344Δsse K1为亲本株,运用二步法筛选asd基因缺失株SL1344Δsse K1Δasd。将携带有asd基因的无抗性p YA3493质粒电转至上述缺失菌株SL1344Δsse K1Δasd,构建SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)重组菌株。结果:PCR及测序结果表明SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)构建成功。进一步研究表明重组菌株SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)血清型和强毒株SL1344及亲本株SL1344Δsse K1相同,且能稳定遗传缺失后的asd基因;其生化特性和生长速度与强毒株SL1344及亲本株SL1344Δsse K1相比均无明显差异。小鼠毒力试验表明,SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为5.24×108CFU,毒力较强毒株SL1344约下降至0.048%;免疫保护效力试验显示,运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保护率,与亲本株SL1344Δsse K1基本一致。结论:以上结果表明,鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株宿主-载体平衡致死系统构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,具有较好的免疫原性,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 自杀性质粒 宿主-载体平衡致死系统 活疫苗载体

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