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题名一株高抗汞细菌的分离鉴定及其抗性基因的克隆与表达
被引量：9
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作者
曾艳
陈强
王敏
孙建光
高俊莲
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机构
北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心
四川农业大学资源环境学院微生物学系
中国农业科学院农业资源与农业区划研究所
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出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期1628-1633,共6页
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基金
北京市自然科学基金(5062010)
国家"863计划"(2006AA06Z386)~~
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文摘
【目的】本研究旨在从重金属汞抗性细菌中分离鉴定汞抗性基因【方法】从北京凉水河河床底泥中分离抗汞细菌,采用16SrRNA基因序列分析结合生理生化特征对菌株进行鉴定。根据GenBank中已发表的多种抗汞细菌的merA基因序列设计引物,以抗性细菌基因组DNA为模板,扩增merA基因,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)表达。同时对表达菌株的重金属汞抗性进行测定。【结果】分离得到一株能在含HgCl2为70mg/L的平板上生长良好的高抗汞细菌,编号为KHg2。16S rRNA基因序列分析结果表明,菌株KHg2与Bacillus silvestris的模式菌株DSM12223T有96%的同源性,其形态特征及生理生化特性与文献报道的Bacillus silvestris一致。从菌株KHg2中扩增得到1687bp DNA片断,其序列与Pseudomonas putida的merA基因序列同源性达到99%,将该DNA片断克隆于pET-30a(+)得到重组质粒pZY2,转化宿主菌获得表达菌株E.coliBL21(DE3).pZY2,经IPTG诱导后产生相对分子量约为33KD的蛋白。重金属汞抗性测定结果表明,表达菌株E.coliBL21(DE3).pZY2可以在含HgCl2为20mg/L的培养基中生长,而转入空载体pET-30a(+)的阴性对照菌株E.coliBL21(DE3)pET-30a(+)则不能在含HgCl2为20mg/L的培养基中生长。【结论】分离的抗汞菌株KHg2与Bacillus silvestris关系密切;从菌株KHg2中克隆到汞抗性基因merA,并在大肠杆菌中得到了成功表达;表达merA基因的大肠杆菌具有抗重金属汞的特性。
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关键词
重金属污染土壤
抗汞细菌
分离鉴定
16S
RRNA基因序列分析
merA基因克隆与表达
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Keywords
soil contamination by heavy metal
bacteria with resistance to mercury
isolation and identification
sequences analysis of 16S rRNA gene
clone and expression of merA gene
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分类号
Q93
[生物学—微生物学]
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