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用蛋白质工程的方法改良枯草杆菌蛋白酶E(Subtilisin E)的抗氧化性 被引量：5
1
作者 王培之 王贤舜 +1 位作者 孔丽云 李党生 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第5期541-546,共6页
以含有蛋白酶E基因(aprE)的单链M13mp18-aprE DNA为模板,合成的寡核苷酸5′-3′为诱变引物,用缺口双链法对aprE进行Met-222-Ala点突变。经菌落印迹杂交筛选,选出阳性噬斑。用SaⅡ酶解M13mp18-aprE得到aprE,将它和pPZW103重组,转化中性... 以含有蛋白酶E基因(aprE)的单链M13mp18-aprE DNA为模板,合成的寡核苷酸5′-3′为诱变引物,用缺口双链法对aprE进行Met-222-Ala点突变。经菌落印迹杂交筛选,选出阳性噬斑。用SaⅡ酶解M13mp18-aprE得到aprE,将它和pPZW103重组,转化中性、碱性蛋白酶缺失宿主菌DB104。经含卡那霉素和脱脂奶粉板筛选和比较aprE限制性内切酶NcoⅠ和SacⅡ水解电泳图谱分析,完成构建一个分泌抗氧化的枯草杆菌蛋白酶E的工程菌PW8888。 展开更多
关键词 蛋白酶E 抗氧化性 枯草杆菌
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枯草杆菌Ki－2－132高表达遗传工程系统的研究 被引量：2
2
作者 潘学峰 章银梅 汤懋 《高技术通讯》 CAS CSCD 1996年第6期46-51,共6页
利用芽孢杆菌多效调控基因ｈｐｒ、ｄｅｑＱａ、ｄｅｇＲ、ｄｅｇＵ／５３２（Ｈｙ）等和枯草杆菌Ｋｉ－２－１３２自身的积生孢、感受态相关基因的协调作用，构建了系列的高表达遗传工程宿主。这些宿主对于ＡＰｒＥ都实现了较高水平的... 利用芽孢杆菌多效调控基因ｈｐｒ、ｄｅｑＱａ、ｄｅｇＲ、ｄｅｇＵ／５３２（Ｈｙ）等和枯草杆菌Ｋｉ－２－１３２自身的积生孢、感受态相关基因的协调作用，构建了系列的高表达遗传工程宿主。这些宿主对于ＡＰｒＥ都实现了较高水平的表达。其中，由ｈｐｒ和ｃｏｍ、ｓｐｏ等配合的宿主表达ＡｐｒＥ的能力比野生型宿主提高了１００—２００倍。 展开更多
关键词 枯草杆菌 调控基因 遗传工程系统
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aprE基因表达的分子生物学和微量热法分析 被引量：7
3
作者 李美菊 陈向东 +7 位作者 刘国生 杨洋 王小娟 耿晶 梅运军 刘义 沈萍 王金晶 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第18期1646-1650,共5页
利用分子生物学方法(SDS-PAGE和酶活检测法)未检测到所克隆的aprE基因在大肠杆菌中的表达产物(碱性蛋白酶),而微量热法检测结果发现:重组菌株的生长代谢产热曲线之间存在明显的差异.根据这些差异,分析了该基因的上、下游调控序列对该基... 利用分子生物学方法(SDS-PAGE和酶活检测法)未检测到所克隆的aprE基因在大肠杆菌中的表达产物(碱性蛋白酶),而微量热法检测结果发现:重组菌株的生长代谢产热曲线之间存在明显的差异.根据这些差异,分析了该基因的上、下游调控序列对该基因在大肠杆菌中表达的重要作用,从而进一步对该基因进行了亚克隆,得到了生物学方法可检测到的表达产物.由此推测,微量热技术有可能为检测外源基因表达及其调控,以及为指导进一步基因工程操作提供一种新的快速灵敏的技术和方法. 展开更多
关键词 大肠杆菌 apre基因 微量热技术 基因表达 分子生物学方法 外源基因表达 微量热法 表达产物 碱性蛋白酶 检测法
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n-3/n-6多不饱和脂肪酸对高糖损伤视网膜色素上皮细胞的影响与机制 被引量：3
4
作者 马颀 于海宁 +3 位作者 倪晓锋 徐健 张程程 沈生荣 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期36-40,47,共6页
目的探究不同n-3/n-6系多不饱和脂肪酸(PUFAs)是否能够调节视网膜细胞的高糖损伤,并探讨其可能的作用机制。方法以APRE-19细胞系作为研究对象,建立高糖损伤环境,筛选细胞能耐受的5种PUFAsα-亚麻酸(ALA)、亚油酸(LA)、花生四烯酸(AA)、... 目的探究不同n-3/n-6系多不饱和脂肪酸(PUFAs)是否能够调节视网膜细胞的高糖损伤,并探讨其可能的作用机制。方法以APRE-19细胞系作为研究对象,建立高糖损伤环境,筛选细胞能耐受的5种PUFAsα-亚麻酸(ALA)、亚油酸(LA)、花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)的最高安全浓度,并以此浓度分别协同高糖处理细胞,测定细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、脂氧素A4(LXA4)的分泌量及胞内抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力。结果 APRE-19细胞株对上述五种PUFAs耐受量存在差异,100μmol/L是其均可耐受的最高安全浓度。与高糖协同处理时,LA、EPA显著下调TNF-α分泌,LA、ALA、EPA、DHA显著下调IL-6分泌,LA、ALA、AA、DHA显著下调IL-4分泌,ALA显著上调LXA4分泌(P<0.05);ALA恢复SOD酶活力至正常水平,ALA、LA和DHA上调CAT酶活力。结论 PUFAs能够调节高糖对视网膜色素上皮细胞的损伤,抑制炎症反应发生可能是其主要的机制之一,氧化应激调控也发挥了一定作用。 展开更多
关键词 多不饱和脂肪酸 高糖 ARPE-19 炎症 氧化应激 视网膜
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