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铜绿假单胞菌lasR基因反义肽核酸序列筛选及其抑制生物被膜形成的研究 被引量:2
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作者 张峰领 安琳 +9 位作者 李进 李发科 徐欢 罗杰 杨成 蒋文斌 雷国勤 汪超 周琳 鲁卫平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期529-535,共7页
目的筛选靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸序列,探讨其对铜绿假单胞菌的生物被膜形成能力的影响。方法针对铜绿假单胞菌lasR基因设计4条反义寡核苷酸序列,利用斑点杂交筛选出与lasR基因结合最佳的反义寡核苷酸序列,以此合成与穿膜... 目的筛选靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸序列,探讨其对铜绿假单胞菌的生物被膜形成能力的影响。方法针对铜绿假单胞菌lasR基因设计4条反义寡核苷酸序列,利用斑点杂交筛选出与lasR基因结合最佳的反义寡核苷酸序列,以此合成与穿膜肽连接的肽-肽核酸序列。分别用不同浓度的肽-肽核酸导入铜绿假单胞菌生物被膜模式菌PAO1中,测定不同时相点细菌生长光密度[D(600)]值并进行菌落计数,观察肽-肽核酸对其生长的抑制作用。利用光学显微镜和扫描电镜观察生物被膜形成情况。q PCR方法检测lasR mRNA表达。结果斑点杂交实验结果显示:4条反义寡核苷酸序列中3条有杂交信号产生,其中第1条序列信号最强,以此为基础合成反义肽核酸。不同浓度的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌表现出不同程度的体外抗菌活性,且随着浓度增加,抗菌活性增强。结论有效筛选出高效反义核苷酸序列,经筛选出的靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸对铜绿假单胞菌的生长及生物被膜形成能力有明显抑制作用,同时抑制lasR mRNA的表达。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 lasR基因 反义肽核酸 生物被膜
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Ki67反义多肽核酸抑制肾癌生长的体外及动物实验研究 被引量:3
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作者 郑骏年 孙晓青 +6 位作者 陈家存 孙亚峰 温儒民 薛松 吴松 刘俊杰 胡书群 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期149-151,165,共4页
为研究肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(AS-PNAs)对人肾癌细胞的体内外抑制作用.将AS-PNAs(10.0μmol/L)转染人肾癌786-0细胞,采用免疫组化、Western印迹技术检测Ki67表达;3H-TdR掺入试验检测细胞增殖;免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。裸鼠... 为研究肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(AS-PNAs)对人肾癌细胞的体内外抑制作用.将AS-PNAs(10.0μmol/L)转染人肾癌786-0细胞,采用免疫组化、Western印迹技术检测Ki67表达;3H-TdR掺入试验检测细胞增殖;免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。裸鼠移植瘤内注射AS-PNAs(10.0μmol/L)连续4d后,第3、6、12天处死小鼠,取瘤组织检测肿瘤体积、Ki67表达、细胞凋亡。结果发现,AS-PNAs处理组786-0细胞Ki67表达明显降低,3H-TdR掺入率明显降低,细胞凋亡率明显增加,与随机PNAs对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。动物实验AS-PNAs处理组小鼠肿瘤体积明显缩小,Ki-67抗原表达明显降低,细胞凋亡明显增加,与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。Ki67基囚AS-PNAs在体外及动物体内均有抑制增殖、促进凋亡作用,是一种有前途的反义治疗药物。 展开更多
关键词 肾细胞癌 KI67基因 反义肽核酸 凋亡 裸鼠
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反义肽核酸技术在临床医学中的应用研究现状 被引量:1
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作者 颜艳 李兰英 《国际内科学杂志》 CAS 2007年第4期247-248,F0003-F0004,共4页
肽核酸是一核酸类似物,是核酸中的糖-磷酸主链被一合成的肽链所取代,最终形成一种非手性的、不带电荷的类似物。与核酸分子相比,肽核酸有更高的稳定性、碱基特异性。配体-受体、连接带正电荷基团如赖氨酸或精氨酸残基或核定位信号肽等... 肽核酸是一核酸类似物,是核酸中的糖-磷酸主链被一合成的肽链所取代,最终形成一种非手性的、不带电荷的类似物。与核酸分子相比,肽核酸有更高的稳定性、碱基特异性。配体-受体、连接带正电荷基团如赖氨酸或精氨酸残基或核定位信号肽等可以提高肽核酸的通透性。肽核酸在分子生物学和诊断学域有广泛应用。活体外研究显示肽核酸可以抑制目的基因的转录和翻译,因此其反义形式也可应用于临床疾病的治疗。 展开更多
关键词 肽核酸 反义肽核酸 反义技术
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EFFECT OF BcL-2 ANTISENSE DRUG WITH DIFFERENT STRUCTURE ON THE BIOLOGICAL FUNCTION OF K562 CELLS
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作者 雷小勇 张洹 何冬梅 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2004年第2期109-112,共4页
Objective: To study the differences and similarities of the antisense drugs with different structures on the biological functions of K562 cells. Methods: Cytotoxic effects were measured by use of a cell viability assa... Objective: To study the differences and similarities of the antisense drugs with different structures on the biological functions of K562 cells. Methods: Cytotoxic effects were measured by use of a cell viability assay. Flow cytometric analysis and agarose gel electrophoresis of DNA fragmentation were also performed. The expression level of protein was assayed by immunofluorescence using fluoresce isothiocyanate label. Results: PNA targeting the coding region of the Bcl-2 messenger RNA could effectively inhibit K562 cell viability, down-regulate the synthesis of the Bcl-2 protein and increase cell apoptosis. By 72 h after the Bcl-2 antisense PNA treatment, K562 cells showed more reduction in the level of Bcl-2 protein compared with cells treated with the antisense ODN. After treatment with 10 μmol/L of Bcl-2 antisense PNA or antisense ODN for 72 h, apoptotic rates of K562 cells were 13.15±1.13 and 11.72±1.12, respectively. Furthermore, there was significant difference in the percentage of apoptotic cells between antisense PNA group and antisense ODN group. Conclusion: The results suggest that antisense PNA targeting the coding region of Bcl-2 mRNA has better antisense effects than the antisense oligonucleotides on inducing apoptosis of K562 cells. Key words Bcl-2 - Antisense peptide nucleic acid - Antisense oligonucleotide - K562 cells - Apoptosis CLC number Q255 Foundation item: This work was supported by the Key Foundation of Science & Technology Program of Guangzhou (No.2001-Z-037-01), and the Nature Science Key Foundation of Guangdong Province (No. 021195).Biography: LEI Xiao-yong(1970–), male, associate professor, doctor of medicine, Institute of Pharmacy and Pharmacology, Nanhua University, majors in tumor pharmacology. 展开更多
关键词 BCL-2 antisense peptide nucleic acid antisense oligonucleotide K562 cells APOPTOSIS
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反义肽核酸的研究进展及应用
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作者 朱云娟 姚智 陆凤先 《国际内分泌代谢杂志》 2006年第1期35-36,39,共3页
反义肽核酸是人工合成的DNA类似物,与核酸分子比较,具有较高的水溶性、稳定性和碱基特异性,容易被细胞吸收。反义肽核酸与DNA形成的三联体结构可阻断基因的转录和翻译,还可通过抑制DNA引物的延伸而抑制基因的复制过程。反义肽核酸作为... 反义肽核酸是人工合成的DNA类似物,与核酸分子比较,具有较高的水溶性、稳定性和碱基特异性,容易被细胞吸收。反义肽核酸与DNA形成的三联体结构可阻断基因的转录和翻译,还可通过抑制DNA引物的延伸而抑制基因的复制过程。反义肽核酸作为第三代基因治疗制剂,已用于体外抑制肿瘤细胞的生长,以及细菌或病毒感染性疾病的治疗。另外,反义肽核酸还用于对免疫分子和细胞因子的研究,从而促进了器官移植和免疫学的发展。此外,作为一个有力的分子生物学工具,它还用于荧光原位杂交等技术,对于疾病的诊断、基因功能的研究有很重要的意义。 展开更多
关键词 肽核酸 反义肽核酸 基因治疗
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177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA的制备、鉴定及其对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖能力的影响 被引量:1
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作者 李佳 王政杰 +4 位作者 张磊 王英 黄欢 曹熠熠 庞华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期1954-1960,共7页
目的研究放射性镥核素(^177Lu)标记的结合转化激活因子(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 1,CITED1)mRNA反义肽核酸(antisense peptide nucleic acid,asPNA)即^177Lu-DOTA-anti-CITED1-... 目的研究放射性镥核素(^177Lu)标记的结合转化激活因子(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 1,CITED1)mRNA反义肽核酸(antisense peptide nucleic acid,asPNA)即^177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA的制备,鉴定标记物的理化性质并探讨其在人甲状腺乳头状癌K1细胞系中的摄取能力及细胞毒性作用。方法实时荧光定量PCR(RT-PCR)鉴定肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)的靶向特异性。通过间接标记法得到反义探针^177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA并测定其标记率,检测其体内外的稳定性。体外细胞实验测定反义探针的摄取能力及对K1细胞增殖能力影响。结果 RT-PCR显示反义肽核酸作用于K1细胞后能明显降低CITED1的表达;反义探针的放射化学纯度为(94.5±0.12)%,比活度为(8.7±0.53)MBq/μg,48 h的放射化学纯度仍大于90%;体外细胞摄取、滞留以及细胞增殖实验显示反义探针能被人K1细胞特异性摄取,且相较于未偶联的^177Lu和asPNA,^177Lu和asPNA偶联后联用具有显著的抗肿瘤细胞作用。结论成功制备了^177Lu标记的CITED1mRNA反义肽核酸探针,证实反义探针对K1细胞具有特异性、靶向性且反义探针的联合作用能有效降低细胞活力及增殖能力。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 CITED1 放射性核素镥 反义肽核酸
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靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸对树突状细胞凋亡的影响
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作者 董胜利 赵浩亮 +1 位作者 李高朋 贺杰峰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期679-682,共4页
目的研究靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸(PNA)对树突状细胞(DC)CCR7蛋白表达及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法体外培养大鼠骨髓来源的DC,脂多糖(LPS)诱导成熟。设计靶向CCR7 mRNA翻译起始区的反义PNA,以随机PNA和空白组为对照处... 目的研究靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸(PNA)对树突状细胞(DC)CCR7蛋白表达及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法体外培养大鼠骨髓来源的DC,脂多糖(LPS)诱导成熟。设计靶向CCR7 mRNA翻译起始区的反义PNA,以随机PNA和空白组为对照处理体外培养7d的未成熟DC,脂多糖诱导48h后收集成熟DC,免疫细胞化学染色法检测CCR7蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测磷酸化Akt和Akt蛋白表达。应用渥曼青霉素(wortmannin)抑制磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt信号通路进一步观察磷酸化Akt蛋白表达和细胞凋亡率的变化。结果反义PNA组DC CCR7蛋白表达明显低于随机PNA组和空白组,而细胞凋亡率却明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),Western blot检测显示反义PNA组Akt蛋白磷酸化水平明显低于随机PNA组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。DC经PI3K抑制剂预处理后,CCR7介导的Akt蛋白磷酸化及抗凋亡作用被阻断。结论CCR7反义PNA能够有效抑制体外培养的大鼠DC趋化因子受体CCR7的表达并导致其发生凋亡,其机制可能是阻断了CCR7介导P13K/Akt信号转导通路的活化。 展开更多
关键词 反义肽核酸 树突状细胞 趋化因子受体 凋亡 AKT
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反义肽核酸阻断CXCR3表达延长大鼠肝脏移植物存活期
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作者 肖亮 王海梁 +7 位作者 刘芳 宋少华 谢江平 张晓君 倪之嘉 傅宏 丁国善 傅志仁 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2009年第5期366-369,共4页
目的研究反义肽核酸(antisense peptide nucleic acid,asPNA)阻断CXC趋化因子受体3(CXCR3)表达延长大鼠肝脏移植物存活期的作用和机制,探讨asPNA技术治疗肝移植急性排斥反应(acute rejection,AR)的潜在临床价值。方法采用改良"二袖... 目的研究反义肽核酸(antisense peptide nucleic acid,asPNA)阻断CXC趋化因子受体3(CXCR3)表达延长大鼠肝脏移植物存活期的作用和机制,探讨asPNA技术治疗肝移植急性排斥反应(acute rejection,AR)的潜在临床价值。方法采用改良"二袖套"法建立大鼠原位肝移植模型。分为4组:肝移植急性排斥组,肝移植免疫抑制剂组,asPNA组,asPNA对照组。RT-PCR法检测T细胞内CXCR3-mRNA表达水平,Western-blotting免疫印迹法检测CXCR3蛋白表达水平,流式细胞仪测定外周血CD3+T细胞表面CXCR3表达水平。AR诊断参照Banff标准。结果asPNA在体外能有效抑制T细胞内CXCR3-mRNA和CXCR3蛋白表达水平;显著延长大鼠肝脏移植物存活期;asPNA组大鼠肝移植术后第7天外周血和肝脏细胞内CXCR3的表达较AR组及asPNA对照组明显减少(P<0.05),与FK506组呈现出类似的趋势。结论asPNA能有效抑制T细胞内CXCR3基因和蛋白表达水平,降低大鼠AR发生率并延长肝脏移植物存活期,具有潜在临床应用价值。 展开更多
关键词 反义肽核酸 肝脏移植 排斥反应 模型 动物 大鼠
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反义端粒酶PNA对肺癌细胞株生长的体外抑制作用 被引量:2
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作者 姚珂 闵家新 +1 位作者 张国强 余祖滨 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第3期196-198,共3页
目的 探讨反义端粒酶肽核酸 (PNA)片段对肺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用。方法 将人工合成的端粒酶反义PNA片段 ,应用脂质体转染法将反义端粒酶序列导入肺腺癌细胞株A5 49及小细胞癌细胞株NCI H44 6中 ,采用MTT法检测活... 目的 探讨反义端粒酶肽核酸 (PNA)片段对肺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用。方法 将人工合成的端粒酶反义PNA片段 ,应用脂质体转染法将反义端粒酶序列导入肺腺癌细胞株A5 49及小细胞癌细胞株NCI H44 6中 ,采用MTT法检测活细胞数 ,采用RT PCR ELLISA法检测端粒酶活性。结果 转染 72h后 ,A5 49、NCI H 44 6细胞株端粒酶活性 (A45 0值 )分别由 0 .5 82± 0 .0 3 9和 0 .5 71± 0 .0 43降低至 0 .2 94± 0 .0 48(P <0 .0 1)和 0 .2 76± 0 .0 5 1(P <0 .0 1) ;而两细胞株的活细胞数 (A5 80值 )分别由 0 .485± 0 .0 0 9和 0 .5 13± 0 .0 15降低至 0 .191± 0 .0 2 7(P <0 .0 1)和 0 .13 8± 0 .0 46(P <0 .0 1) ,细胞生长受到显著抑制。结论 反义端粒酶PNA片段具有抑制肺癌细胞株端粒酶活性的作用 。 展开更多
关键词 肺肿瘤 反义 端粒酶 肽核酸
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