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Expression of a Carrot Antifreeze Protein Gene in Escherichia coli
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作者 Ma Xinyu Shen Xin Lu Cunfu 《Forestry Studies in China》 CAS 2003年第4期22-25,共4页
The recombinant expression vector pET43.1b-AFP, which contains full encoding region of a carrot 36 kD antifreeze protein (AFP) gene was constructed. The recombinant was transformed into expression host carrying T7 RNA... The recombinant expression vector pET43.1b-AFP, which contains full encoding region of a carrot 36 kD antifreeze protein (AFP) gene was constructed. The recombinant was transformed into expression host carrying T7 RNA polymerase gene (DE3 lysogen) and induced by 1 mmol稬-1 IPTG (isopropyl--D-thiogalactoside) to express 110 kD polypeptide of AFP fusion protein. The analysis of product solubility revealed that pET43.1b-AFP was predominately soluble, and the expressed amount reached the maximum after the IPTG treatment for 3 h. 展开更多
关键词 antifreeze protein (afp) fusion protein induced expression polymerase chain reaction antifreeze protein gene
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美洲拟鲽抗冻蛋白基因遗传转化草莓的研究 被引量:2
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作者 孙瑞芬 李天然 +4 位作者 安玉麟 李堃 石慧芹 牛素清 赵京惠 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期423-428,共6页
以草莓品种星都2号和全明星的无菌苗叶盘和叶柄基部为外植体,采用携带美洲拟鲽编码pre、pro和mature3种抗冻蛋白(AFP)基因的双元载体系统的根癌农杆菌进行转化,获得7个Km抗性株系。经PCR扩增及PCR-Southern杂交检测,6个株系呈阳性,结果... 以草莓品种星都2号和全明星的无菌苗叶盘和叶柄基部为外植体,采用携带美洲拟鲽编码pre、pro和mature3种抗冻蛋白(AFP)基因的双元载体系统的根癌农杆菌进行转化,获得7个Km抗性株系。经PCR扩增及PCR-Southern杂交检测,6个株系呈阳性,结果表明,编码pre、pro和mature的AFP基因分别整合到了星都2号和全明星染色体DNA中,其中获得pre、pro和mature转星都2号株系各1个,转化率分别为1.56%、1.49%和1.67%;mature基因转全明星株系3个,转化率为4.05%。 展开更多
关键词 草莓 美洲拟鲽 抗冻蛋白(afp)基因 遗传转化 PCR-Southern杂交
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两种色型黄粉虫抗冻蛋白cDNA克隆、序列分析与表达分析 被引量:2
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作者 黄琼 胡杰 +3 位作者 周定刚 王勤 杨伟 朱天辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期659-667,共9页
产生抗冻蛋白(antifreeze proteins,AFPs)是大多数昆虫抵抗低温的一个重要策略。为给黄粉虫Tenebriomolitotr耐寒机理研究提供参考,本研究采用RT-PCR、5'RACE和3'RACE法克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的抗冻蛋白基因Tm-afp,分... 产生抗冻蛋白(antifreeze proteins,AFPs)是大多数昆虫抵抗低温的一个重要策略。为给黄粉虫Tenebriomolitotr耐寒机理研究提供参考,本研究采用RT-PCR、5'RACE和3'RACE法克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的抗冻蛋白基因Tm-afp,分析了其基因序列及所编码的氨基酸序列,并检测了其在这两种色型间的mRNA水平差异。结果表明:从黄、黑两种色型黄粉虫幼虫克隆出的Tm-afp cDNA全长分别为579bp和588bp,它们包含一个20bp的5'端非翻译区、一个402bp的开放阅读框和一个变异较大的3'端非翻译区,其碱基序列一致性为95%。由于这两个抗冻蛋白基因编码的蛋白成熟肽存在两个氨基酸差异:第35位(D→E)和130位(T→S),因此将其判定为黄粉虫抗冻蛋白基因Tm-afp的两个异构体,并分别命名为Tm-afp-1和Tm-afp-2。Tm-afp-1和Tm-afp-2编码的抗冻蛋白异构体(分别为Tm-afp-1和Tm-afp-2)信号肽之间有3个氨基酸差异:第2位(G→A)、9位(S→T)和27位(Y→N);其成熟肽的第一个氨基酸为谷氨酰胺,含8个高度保守的12aa短串联重复序列,每个重复序列的第2位和第8位为半胱氨酸。此外,Tm-afp-1和Tm-afp-2均属富含苏氨酸和半胱氨酸的昆虫抗冻蛋白,其二级结构均由大量的β-折叠和无规则卷曲组成,三级结构为8个特殊的右手β-螺旋,每一圈螺旋由12个氨基酸组成;在β-螺旋的一个侧面规则排列着由保守XCT形成的β折叠片层。同时,低温可以诱导黄、黑两种色型黄粉虫Tm-afp的表达,但长时间低温诱导下黑色型黄粉虫幼虫的Tm-afp表达量显著高于黄色型黄粉虫幼虫Tm-afp表达量。结果提示,黄粉虫种内不同色型间,抗冻蛋白基因Tm-afp可能存在多种异构体,并且黑色型黄粉虫Tm-afp比黄色型黄粉虫Tm-afp对低温的应答更强烈。这一研究结果为进一步探索黄粉虫的耐寒性机理提供了有益参考。 展开更多
关键词 黄粉虫 色型 抗冻蛋白 基因异构体 序列分析 MRNA表达
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抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究 被引量:4
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作者 李天然 张剑峰 李旭刚 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1998年第1期144-146,共3页
抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究@李天然,张剑峰,李旭刚¥内蒙古大学生物学系甜菜,抗冷冻蛋白(AFP)基因,遗传转化,根癌农杆菌,PCR扩增抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究李天然,张剑峰,李旭刚(内蒙古大学生物学系,010... 抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究@李天然,张剑峰,李旭刚¥内蒙古大学生物学系甜菜,抗冷冻蛋白(AFP)基因,遗传转化,根癌农杆菌,PCR扩增抗冷冻蛋白基因转化甜菜的研究李天然,张剑峰,李旭刚(内蒙古大学生物学系,010021,呼和浩特)StudyonTran... 展开更多
关键词 甜菜 遗传转化 根癌农杆菌 抗冷冻蛋白基因
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胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆及其在E.coli中的表达 被引量:9
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作者 范云 刘兵 +2 位作者 王宏斌 王树启 王金发 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期52-55,共4页
对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析 ,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在相对分子质量 36 0 0 0附近有一条蛋白带的差别。由此推测实验的胡萝卜品种在冷诱导过程中有抗冻蛋白 (AFP)表达。根据相关... 对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析 ,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在相对分子质量 36 0 0 0附近有一条蛋白带的差别。由此推测实验的胡萝卜品种在冷诱导过程中有抗冻蛋白 (AFP)表达。根据相关的研究结果设计引物 ,以胡萝卜幼苗基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增得到了长 10 99bp的抗冻蛋白基因。测序结果表明其与GenBank公布的afp序列仅有 3个碱基的差别。将此抗冻蛋白基因克隆进大肠杆菌表达载体pGEX4T1,在IPTG的诱导下表达出了含有AFP的约 6 0 0 0 0的融合蛋白 。 展开更多
关键词 胡萝卜 冷诱导 抗冻蛋白基因 afp基因 基因克隆 基因表达 大肠杆菌 植物抗寒性
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