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miR-663通过靶向TGF-β1调控羊驼黑色素细胞的黑色素生成 被引量：8
1
作者 贾小云 金雷皓 +3 位作者 苗潋涓 丁娜 范瑞文 董常生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期165-173,共9页
【目的】预测和验证羊驼TGF-β1是mi R-663的靶基因之一,并对mi R-663介导的TGF-β1在黑色素生成过程中的作用进行研究。【方法】利用Targetscan、RNAhybrid和RNA22在线预测mi R-663的靶基因,并对靶基因3′UTR区可能的mi R-663的作用位... 【目的】预测和验证羊驼TGF-β1是mi R-663的靶基因之一,并对mi R-663介导的TGF-β1在黑色素生成过程中的作用进行研究。【方法】利用Targetscan、RNAhybrid和RNA22在线预测mi R-663的靶基因,并对靶基因3′UTR区可能的mi R-663的作用位点进行分析。利用DNAMAN软件分析比对羊驼、人和牛等哺乳动物TGF-β1-3′UTR区的相似性。利用SacⅠ和XbaⅠ将羊驼TGF-β1基因的3′UTR区插入pmir GLO构建双荧光报告载体pmir GLO-TGF-β1-3′UTR并与mi R-663 mimic共转染293T细胞,通过测定荧光素酶活性来验证mi R-663的直接靶基因是TGF-β1。在羊驼黑色素细胞中通过转染mi R-663 mimic来过表达mi R-663,并利用q RT-PCR和Western blotting检测mi R-663过表达后细胞中TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7和β-catenin分别在m RNA和蛋白水平的变化及黑色素含量的变化。【结果】软件预测显示mi R-663有68个保守的靶基因,包含74个保守的靶位点和44个非保守靶位点。TGF-β1是mi R-663的靶基因之一,且已被证明与毛囊发育和黑色素生成相关。不同物种的TGF-β1基因的3′UTR区相似性较高且均存在多个保守的mi R-663靶位点。克隆了羊驼TGF-β1基因3′UTR区发现存在3个保守的mi R-663靶位点。成功构建包含3个mi R-663作用位点的pmir GLO-TGF-β1-3′UTR双荧光报告载体并与mi R-663 mimic共转染293T细胞。双荧光素酶报告基因检测结果显示:与对照组相比,试验组pmir GLO-TGF-β1-3′UTR+mi R-663 mimic荧光素酶活性下调31.01%,表明TGF-β1是mi R-663直接的靶基因。在羊驼黑色素细胞中转染mi R-663 mimic后:mi R-663表达量上调334倍,TGF-β1、β-catenin、Smad4基因的表达量分别下调89%、41%、34%;TGF-β1蛋白表达量下降了21%,β-catenin蛋白表达量无明显差异;黑色素细胞中的黑色素含量下降42%。【结论】TGF-β1是mi R-663的直接靶基因。mi R-663通过调控TGF-β1的表达而影响TGF-β/Smad和Wnt信号通路,进而影响羊驼黑� 展开更多
关键词 羊驼黑色素细胞 双荧光素酶报告载体 黑色素 miR-663 TGF-Β1
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羊驼黑色素细胞培养中支原体污染初探 被引量：3
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作者 蔡永强 李园 +4 位作者 刘文艳 朱芷葳 李慧锋 李宏 张利环 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期34-37,293,共5页
为了研究山西农业大学生命科学学院细胞工程实验室(本实验室)培养的羊驼黑色素细胞是否存在支原体污染,试验首先通过文献数据库中支原体污染相关文献检索,了解支原体污染在目前科研领域中的影响,然后采用细胞培养法、光学显微镜观察检... 为了研究山西农业大学生命科学学院细胞工程实验室(本实验室)培养的羊驼黑色素细胞是否存在支原体污染,试验首先通过文献数据库中支原体污染相关文献检索,了解支原体污染在目前科研领域中的影响,然后采用细胞培养法、光学显微镜观察检测实验室冻存的部分羊驼黑色素细胞的生长状态。结果表明:文献报道中支原体污染情况比较严重,其中与细胞培养相关的占14%~20%;本实验室冻存的细胞中部分细胞确实存在支原体污染。分析主要原因是实验人员操作不当、自身携带的人源支原体掉入培养液中引起污染。 展开更多
关键词 细胞培养 支原体污染 羊驼黑色素细胞 显微镜观察 实验操作
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miR-411a-3p抑制羊驼黑色素细胞黑色素的生成 被引量：2
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作者 李佳晟 孙晓江 +6 位作者 胡帅鹏 姬凯元 刘博 刘学贤 杨姗姗 张俊珍 范瑞文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期931-938,共8页
microRNA-411a-3p(miR-411a-3p)在不同毛色羊驼皮肤中差异表达,提示其可能在毛色形成中起调控作用。为证明miR-411a-3p在羊驼皮毛黑色素形成中的作用,本研究通过生物信息学预测及靶基因搜索,发现胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)是miR-411a... microRNA-411a-3p(miR-411a-3p)在不同毛色羊驼皮肤中差异表达,提示其可能在毛色形成中起调控作用。为证明miR-411a-3p在羊驼皮毛黑色素形成中的作用,本研究通过生物信息学预测及靶基因搜索,发现胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)是miR-411a-3p的靶基因,继而构建了含Igf1r mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因载体。报告基因转染结合报告酶活性测定证明,Igf1r是miR-411a-3p的靶基因。原位杂交显示,miR-411a-3p主要在羊驼黑色素细胞胞质中表达,提示其可能在黑色素细胞中具有重要作用。qRT-PCR揭示,棕色和黑色羊驼皮肤中miR-411a-3p表达量明显低于白色羊驼。qRT-PCR联合蛋白质印迹分析显示,在羊驼黑色素细胞过表达miR-411a-3p,伴随Igf1r下调,小眼畸形相关转录因子(Mitf)依赖的毛色基因酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸酶相关蛋白-2(Tyrp2)及黑色素表达水平明显下调。上述结果提示,miR-411a-3p可通过靶向抑制Igf1r负调控羊驼黑色素黑色素合成。该结果将加深我们对羊驼毛色形成机制的认识。 展开更多
关键词 miR-411a-3p 胰岛素样生长因子1受体基因 小眼畸形相关转录因子基因 mitf活化的酪氨酸酶基因 黑色素细胞 黑色素
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