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稳定表达HBsAg的P815细胞株的建立及鉴定 被引量:3
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作者 周凤娟 戴建新 +1 位作者 胡振林 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期384-386,共3页
目的:筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株,为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法:用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体,并通过脂质体转染 P815细胞,G418筛选。结果:构建了... 目的:筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株,为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法:用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体,并通过脂质体转染 P815细胞,G418筛选。结果:构建了重组质粒pcDNA3-HBsAg(S),转染细胞及其培养上清中均可检测到HBsAg(S)的存在,PCR扩增也证实HBSAg(S)基因已稳定整合于p815细胞的染色体中。结论:获得了稳定表达HBsAg的P815细胞株,为今后在小鼠体内检测乙肝DNA疫苗激发的CTL反应奠定了基础。 展开更多
关键词 乙肝DNA疫苗 体外细胞感染 PCR方法 乙型肝炎表面抗原 adr亚型 P815细株
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Adr亚型乙型肝炎病毒转染细胞模型的构建 被引量:2
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作者 赵艳芳 闫永平 +5 位作者 张磊 王安辉 苏海霞 门可 张景霞 徐德忠 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1066-1068,共3页
目的建立乙型肝炎病毒(HBV)复制状态的细胞模型。方法利用分子亚克隆技术,将9600bp的adr亚型HBV全基因克隆至pcDNA3的EcoRI和HindIII位点构建pcDNA3-3HBV,通过脂质体介导的方法转染HepG2细胞,G418筛选。结果成功构建了质粒pcDNA3-3HBV,... 目的建立乙型肝炎病毒(HBV)复制状态的细胞模型。方法利用分子亚克隆技术,将9600bp的adr亚型HBV全基因克隆至pcDNA3的EcoRI和HindIII位点构建pcDNA3-3HBV,通过脂质体介导的方法转染HepG2细胞,G418筛选。结果成功构建了质粒pcDNA3-3HBV,稳定转染后培养上清,ELISA检测结果显示,HBsAg、HBeAg阳性,且PCR检测前S/S基因阳性。PCR证实转染细胞中有HBV cccDNA存在,RT-PCR证实HBV S基因mRNA的表达。结论重组质粒pcDNA3-3HBV能在HepG2细胞中表达、转录、复制。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 adr亚型 真核表达质粒 转染 基因表达
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adr亚型HBsAg冻干实验参考品的制备与检测 被引量:2
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作者 李津 洪云 +6 位作者 张国强 王昌华 许毅 张德有 冯素英 汪和睦 赵铠 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第11期847-850,共4页
目的制备用于检测重组酵母表达的adr亚型HBsAg含量的实验参考品。方法重组酵母表达的adr亚型HBsAg溶液经纯化后,经3家实验室联合标定蛋白含量,准确稀释并加入保护剂,使抗原最终含量为10μg/ml,分装安瓿后,冷冻干燥熔封,制备成adr亚型实... 目的制备用于检测重组酵母表达的adr亚型HBsAg含量的实验参考品。方法重组酵母表达的adr亚型HBsAg溶液经纯化后,经3家实验室联合标定蛋白含量,准确稀释并加入保护剂,使抗原最终含量为10μg/ml,分装安瓿后,冷冻干燥熔封,制备成adr亚型实验参考品。再由不同实验室用不同试剂和不同方法,以联合标定的蛋白含量为定量标准,分别验证冻干参考品中adr亚型HBsAg含量及37℃放置不同时间的稳定性。并以adw亚型HBsAg标准作为定量标准,检测adr亚型参考品中HBsAg含量。结果所制备的adr亚型冻干参考品分装准确均匀;以联合标定蛋白含量为标准,不同实验室分别以珠式EIA法和RIA法所测的adr亚型冻干参考品HBsAg含量与目标含量相近,各支参考品间差异小;adr亚型冻干实验参考品37℃放置2~10周后质量稳定。以adw亚型HBsAg参考品为定量标准,所测定adr亚型冻干参考品HBsAg含量,比实际含量约高出0.6倍。结论冻干adr亚型HBsAg实验参考品可用于重组酵母表达adr亚型HBsAg的定量检测。不同亚型HBsAg检测需用各自亚型的参考品作为定量标准。 展开更多
关键词 adr亚型 HBSAG 参考品 冷冻干燥 重组酵母 稳定性
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Adr亚型HBV转染人胎盘滋养层细胞株的体外研究 被引量:1
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作者 张磊 邵晨 +6 位作者 赵艳芳 张景霞 马向东 邵中军 门可 闫永平 徐德忠 《中国全科医学》 CAS CSCD 2008年第1期28-30,共3页
目的通过转染adr亚型HBV-DNA,建立可复制HBV的人胎盘滋养层细胞(HPT-8)。方法采用脂质体介导的方法将重组真核表达质粒pcDNA3-3HBV转染人胎盘滋养层细胞,经G418筛选,通过ELISA、免疫组化、PCR等方法对转染细胞和培养上清分别进行检测。... 目的通过转染adr亚型HBV-DNA,建立可复制HBV的人胎盘滋养层细胞(HPT-8)。方法采用脂质体介导的方法将重组真核表达质粒pcDNA3-3HBV转染人胎盘滋养层细胞,经G418筛选,通过ELISA、免疫组化、PCR等方法对转染细胞和培养上清分别进行检测。结果HPT-8细胞稳定转染质粒pcDNA3-3HBV后,第1、2代转染细胞的培养上清ELISA检测显示HBsAg、HBeAg阳性,免疫组化检测显示转染细胞胞浆中HBsAg、HBcAg呈阳性信号,PCR检测培养上清中HBV-DNA呈阳性,荧光定量PCR检测其滴度达9×106拷贝/L,并且转染滋养细胞中有HBV-rcDNA和HBV-cccDNA存在。结论重组质粒pcDNA3-3HBV能在人滋养层细胞中表达、转录、复制。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 滋养层细胞 adr亚型 转染
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adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体的制备
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作者 马锐 张国强 +6 位作者 李津 张德有 王曦 张小刚 王远征 魏静 赵铠 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期544-547,共4页
目的制备adr和adw亚型乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)单克隆抗体,并用其区分两亚型HBsAg。方法利用杂交瘤细胞融合技术制备adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体,采用间接ELISA法进行筛选;优化鉴别试验抗原包被剂量,并对H... 目的制备adr和adw亚型乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)单克隆抗体,并用其区分两亚型HBsAg。方法利用杂交瘤细胞融合技术制备adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体,采用间接ELISA法进行筛选;优化鉴别试验抗原包被剂量,并对HBsAg亚型鉴别试验进行验证。结果共获得抗两亚型HBsAg的单克隆抗体7株;鉴别试验抗原的最佳包被剂量为10μg;1H6和4D3株单抗检测2份编盲adw亚型HBsAg样品的adwA450/adrA450值均大于2,判定其为adw亚型;1E9株单抗检测2份编盲adr亚型HBsAg样品adrA450/adwA450值均大于2,判定其为adr亚型;3A5株单抗检测4份编盲样品的adrA450/adwA450值和adwA450/adrA450值均小于2,未能区分两亚型HBsAg。结论抗adr亚型单抗1E9株及抗adw亚型单抗1H6株和4D3株可用于adr亚型汉逊酵母乙肝疫苗研制过程中HBsAg亚型的鉴别。 展开更多
关键词 乙型肝炎表面抗原 adr亚型 adw亚型 单克隆抗体
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Adr亚型HBV中蛋白基因的T载体克隆及序列分析
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作者 赵秀英 黄德庄 +2 位作者 阎惠平 贺丽香 罗朝霞 《首都医科大学学报》 CAS 1999年第4期272-274,共3页
构建含适当限制酶切位点的adr 亚型乙肝病毒(HBV) 中蛋白基因克隆,比较分析序列变化,用作HBV 疫苗表达及诊断试剂的研究。患者血清经蛋白酶K 消化,再以酚氯仿抽提,对提取物进行PCR 扩增。回收PCR 阳性产物,经... 构建含适当限制酶切位点的adr 亚型乙肝病毒(HBV) 中蛋白基因克隆,比较分析序列变化,用作HBV 疫苗表达及诊断试剂的研究。患者血清经蛋白酶K 消化,再以酚氯仿抽提,对提取物进行PCR 扩增。回收PCR 阳性产物,经琼脂糖酶消化后直接克隆至T 载体。转化后提取质粒经PCR 及酶切鉴定,再行序列分析。结果:10 份血清提取物的PCR 有3 份获阳性产物,分别经T 载体克隆后转化DH10b 菌,3 株阳性克隆经酶切及序列分析显示同属于adr 亚型,与国内已发表序列的同源性大于99 .6 % 。提示该克隆是用作HBsAg 蛋白表达或探针标记研究的理想克隆。 展开更多
关键词 T载体 乙型肝炎 HBV 蛋白基因 克隆
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DETERMINATION OF THE COMPLETE NUCLEOTIDE SEQUENCE OF HBV adr NC-1 DNA
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作者 琦祖和 阎珺 +4 位作者 熊伟军 袁建刚 宋松 薛常青 蔡良琬 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1989年第9期1082-1086,共5页
On the basis of sequencing the large DNA-fragments which have been inserted intoM_(13)mp_8, we design a simple strategy to determine the complete nucleotide sequence of HBVadr NC-1 DNA with chain termination method. T... On the basis of sequencing the large DNA-fragments which have been inserted intoM_(13)mp_8, we design a simple strategy to determine the complete nucleotide sequence of HBVadr NC-1 DNA with chain termination method. The whole genome is 3195 nucleotides long.Five reading frames are observed. The gene location and organization are shown. 展开更多
关键词 HBV adr NC-1 (hepatitis B VIRUS adr subtype NC-1 strain) cuttingreligation procedure map CLONING sequence
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