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TGF-β1基因修饰诱导脂肪干细胞成软骨分化的实验研究 被引量：9
1
作者 王洪林 闵繁红 +4 位作者 王岩峰 谢永 张金刚 栾洪佳 侯旭东 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第17期1347-1350,共4页
[目的]本研究通过选择对软骨细胞ECM合成具有促进作用的TGF-β1转染脂肪干细胞(ADSCs),观察转染后目的基因的稳定表达和对软骨细胞外基质(ECM)的两种重要组分:Ⅱ型胶原(typeⅡcollage,ColⅡ)和ag-grecan的合成,为构建新型的组织工程软... [目的]本研究通过选择对软骨细胞ECM合成具有促进作用的TGF-β1转染脂肪干细胞(ADSCs),观察转染后目的基因的稳定表达和对软骨细胞外基质(ECM)的两种重要组分:Ⅱ型胶原(typeⅡcollage,ColⅡ)和ag-grecan的合成,为构建新型的组织工程软骨提供实验依据。[方法]TGF-β1基因转染脂肪干细胞及阳性细胞克隆株的筛选;RT-PCR检测TGF-β1、纤连蛋白(fibronectin,FN)、ColⅡ、Aggrecan的表达;Western-blot检测TGF-β1。[结果]RT-PCR结果显示:实验组(TGF-β1稳定转染组)的TGF-β1、FN、ColⅡ、Aggrecan的表达较空染组和正常对照组均明显增多(P<0.01);Western blot检测实验组(TGF-β1稳定转染组)TGF-β1蛋白的表达较空染组和正常对照组均明显增多(P<0.01)。[结论]成功分离培养脂肪干细胞;以脂质体介导法将TGF-β1目的基因成功转染ADSCs,转染后成软骨分化的特异性细胞外基质增多,表明转染TGF-β1基因可以促使ADSCs向软骨细胞方向分化,从而为软骨组织工程提供新的思路和方法。 展开更多
关键词 转化生长因子β1(TGF-β1) 脂肪干细胞(adscs) 基因转染 RT—PCR Western—blot
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IGF-1和动态微环境对脂肪干细胞向心肌细胞分化作用的研究 被引量：4
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作者 朱艳霞 刘天庆 +2 位作者 宋克东 马学虎 崔占峰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1553-1561,共9页
体外组织工程模型中,生物化学和机械信号对心肌再生起着很重要的促进作用,对人胰岛素样生长因子(IGF-1)和三维动态微环境对脂肪干细胞向心肌细胞分化过程中的促进作用进行了研究.带有IGF-1基因的质粒整合到胶原-壳聚糖支架中,脂肪干细... 体外组织工程模型中,生物化学和机械信号对心肌再生起着很重要的促进作用,对人胰岛素样生长因子(IGF-1)和三维动态微环境对脂肪干细胞向心肌细胞分化过程中的促进作用进行了研究.带有IGF-1基因的质粒整合到胶原-壳聚糖支架中,脂肪干细胞接种到整合质粒的支架内,未整合质粒的支架作为对照组,心肌细胞培养基作为分化培养基,转瓶生物反应器提供动态微环境.经2周分化培养后,检测质粒在支架内释放及表达情况、细胞在支架内的活性以及心肌功能性蛋白和基因的表达.结果表明:动态微环境能促进质粒DNA的释放和转染;IGF-1可促进脂肪干细胞在胶原-壳聚糖支架内增殖以及向心肌细胞分化;动态微环境可加强IGF-1的促增殖分化作用.因此,IGF-1和动态微环境能独立或相互促进脂肪干细胞在胶原-壳聚糖支架内活性,动态微环境还可强化IGF-1对脂肪干细胞的促分化作用.对体外构建工程化心肌组织进行心肌再生研究有着重要的指导意义. 展开更多
关键词 脂肪干细胞 心肌细胞 支架 IGF-1 反应器 组织工程
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发育期牙根端复合体细胞条件培养液对脂肪干细胞增殖、分化的影响 被引量：3
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作者 郑桂婷 徐燕 +1 位作者 赵璇 沈继龙 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2014年第6期331-337,共7页
目的:初步探讨发育期根端复合体(developing apical complex,DAC)条件培养基(DAC conditioned medium,DACCM)对脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)增殖和分化的影响。方法:取出生20 d SD大鼠分离其下颌磨牙DAC,并采... 目的:初步探讨发育期根端复合体(developing apical complex,DAC)条件培养基(DAC conditioned medium,DACCM)对脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSCs)增殖和分化的影响。方法:取出生20 d SD大鼠分离其下颌磨牙DAC,并采用组织块联合酶消化法培养DAC细胞;经HE、免疫组化染色鉴定DAC后,收集原代培养的DAC细胞上清,分别用过滤和不过滤的方式制备不同条件培养基并用其对ADSCs进行培养;分别于培养3、5、7 d各时间点,MTT法检测ADSCs增殖能力;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒及反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ADSCs的ALP蛋白活性及其基因的表达水平。结果:免疫组化染色显示,培养的DAC细胞CK-14、vimentin均为阳性表达;DACCM-未滤培养组ADSCs的增殖活性、ALP蛋白活性以及ALP基因表达水平均高于单纯α-MEM培养组和DACCM-过滤培养组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:不经过滤的DAC细胞上清制备的条件培养基对ADSCs增殖、分化的促进作用更明显。 展开更多
关键词 根端复合体 脂肪干细胞 条件培养液 增殖 分化
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心肌样微环境诱导脂肪干细胞分化的研究 被引量：4
4
作者 朱艳霞 刘天庆 +2 位作者 宋克东 马学虎 崔占峰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期624-632,共9页
微环境在促进干细胞分化过程中起着重要的作用,研究心肌样微环境介导脂肪干细胞向心肌细胞分化有重要意义.将脂肪干细胞与心肌细胞直接或通过细胞培养小室间接共培养,检测脂肪干细胞的分化情况.对于直接共培养体系,采用绿色荧光蛋白CFS... 微环境在促进干细胞分化过程中起着重要的作用,研究心肌样微环境介导脂肪干细胞向心肌细胞分化有重要意义.将脂肪干细胞与心肌细胞直接或通过细胞培养小室间接共培养,检测脂肪干细胞的分化情况.对于直接共培养体系,采用绿色荧光蛋白CFSE对脂肪干细胞进行标记,然后与心肌细胞以1:5混合后进行直接共培养,2周后,通过流式细胞仪分选分化的脂肪干细胞,并检测其分化情况.检测方法包括:扫描电镜和透射电镜观察细胞的超微结构;免疫细胞化学检测心肌特异性肌球蛋白重链(MHC)、肌钙蛋白(TnⅠ)和连接蛋白(Cx43);Western blot定量分析;RT-PCR检测心脏特异性转录因子mRNA的表达.结果表明,分化的脂肪干细胞呈现心肌样超微结构,并表达心肌特异性蛋白和转录因子,并且直接共培养体系中分化的脂肪干细胞其表达率明显高于间接共培养体系中的表达率.因此,在心肌样微环境中,除了可溶性细胞因子对分化起作用以外,心肌细胞产生的机械牵拉对脂肪干细胞向心肌细胞分化也起着重要的作用. 展开更多
关键词 脂肪干细胞 心肌细胞 共培养 肌钙蛋白 连接蛋白
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