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Adenovirus-mediated gene delivery:Potential applications for gene and cell-based therapies in the new era of personalized medicine 被引量:24
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作者 Cody S.Lee Elliot S.Bishop +19 位作者 Ruyi Zhang Xinyi Yu Evan M.Farina Shujuan Yan Chen Zhao Zongyue Zeng Yi Shu Xingye Wu Jiayan Lei Yasha Li Wenwen Zhang Chao Yang Ke Wu Ying Wu Sherwin Ho Aravind Athiviraham Michael J.Lee Jennifer Moriatis Wolf Russell R.Reid Tong-Chuan He 《Genes & Diseases》 SCIE 2017年第2期43-63,共21页
With rapid advances in understanding molecular pathogenesis of human diseases in the era of genome sciences and systems biology,it is anticipated that increasing numbers of therapeutic genes or targets will become ava... With rapid advances in understanding molecular pathogenesis of human diseases in the era of genome sciences and systems biology,it is anticipated that increasing numbers of therapeutic genes or targets will become available for targeted therapies.Despite numerous setbacks,efficacious gene and/or cell-based therapies still hold the great promise to revolutionize the clinical management of human diseases.It is wildly recognized that poor gene delivery is the limiting factor for most in vivo gene therapies.There has been a long-lasting interest in using viral vectors,especially adenoviral vectors,to deliver therapeutic genes for the past two decades.Among all currently available viral vectors,adenovirus is the most efficient gene delivery system in a broad range of cell and tissue types.The applications of adenoviral vectors in gene delivery have greatly increased in number and efficiency since their initial development.In fact,among over 2000 gene therapy clinical trials approved worldwide since 1989,a significant portion of the trials have utilized adenoviral vectors.This review aims to provide a comprehensive overview on the characteristics of adenoviral vectors,including adenoviral biology,approaches to engineering adenoviral vectors,and their applications in clinical and preclinical studies with an emphasis in the areas of cancer treatment,vaccination and regenerative medicine.Current challenges and future directions regarding the use of adenoviral vectors are also discussed.It is expected that the continued improvements in adenoviral vectors should provide great opportunities for cell and gene therapies to live up to its enormous potential in personalized medicine. 展开更多
关键词 adenovirUS adenoviral vector Cell therapy Gene transfer Gene therapy Oncolytic virus Regenerative medicine Vaccine development
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BMP-2基因转染的人骨髓基质干细胞复合PLA/PCL支架体外构建组织工程骨 被引量:13
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作者 李建军 杨绍娟 +6 位作者 卜丽莎 高申 张文岚 崔亚南 王宏 刘建国 徐莘香 《骨与关节损伤杂志》 2004年第3期177-180,共4页
目的 用人骨形态发生蛋白 2腺病毒表达载体 (Ad -BMP - 2 )转染的人骨髓基质干细胞 (hBMSC) ,复合PLA/PCL(聚乳酸 /聚己内酯 )生物降解支架体外构建组织工程骨。方法 用Ad -BMP - 2转染体外培养的成人BMSC ,免疫组化、原位杂交染色和... 目的 用人骨形态发生蛋白 2腺病毒表达载体 (Ad -BMP - 2 )转染的人骨髓基质干细胞 (hBMSC) ,复合PLA/PCL(聚乳酸 /聚己内酯 )生物降解支架体外构建组织工程骨。方法 用Ad -BMP - 2转染体外培养的成人BMSC ,免疫组化、原位杂交染色和蛋白印迹方法检测细胞BMP - 2的表达 ,并通过流式细胞仪和ALP活性检测分析其对细胞增殖、分化的影响。然后将转染后细胞接种到PLA/PCL支架上 ,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 转染后 ,hBMP - 2基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达 ;S期细胞比例和ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀 ,伸展良好。结论 Ad-BMP - 2可高效转染hBMSC ,且促进细胞增殖及成骨转化。转染后细胞在PLA/PCL上生长良好 ,BMP - 展开更多
关键词 腺病毒 骨形态发生蛋白 骨髓基质干细胞 基因治疗 组织工程骨 基因转染 流式细胞仪
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Construction of recombinant adenoviral vector carrying human tissue inhibitor of metalloproteinase-1 gene and its expression in vitro 被引量:11
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《Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International》 SCIE CAS 2005年第2期259-264,共6页
关键词 tissue INHIBITOR of METALLOPROTEINASE HEPATOCELLULAR carcinoma RECOMBINANT adenoviral vector GENE therapy
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重组腺病毒介导IFN-γ基因转染的巨噬细胞的体外免疫效应功能分析 被引量:12
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作者 雷虹 曹雪涛 +2 位作者 于益芝 章卫平 周正芳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期131-134,共4页
巨噬细胞既是免疫效应细胞又是抗原提呈细胞,为研究IFN-γ基因转染的巨噬细胞过继回输疗法,以重组腺病毒为载体将小鼠IFN-γcDNA转染入小鼠腹腔巨噬细胞,观察了对其体外免疫功能的影响,结果表明,IFN-γ基因转染1... 巨噬细胞既是免疫效应细胞又是抗原提呈细胞,为研究IFN-γ基因转染的巨噬细胞过继回输疗法,以重组腺病毒为载体将小鼠IFN-γcDNA转染入小鼠腹腔巨噬细胞,观察了对其体外免疫功能的影响,结果表明,IFN-γ基因转染18h后巨噬细胞上清中存在高水平IFN-γ,IFN-γ基因转染的巨噬细胞杀伤活性显著增高,其分泌TNF、IL-1、NO的水平均有不同程度的升高,表明重组腺病毒载体能将IFN-γ基因成功地转染入巨噬细胞并增强巨噬细胞免疫效应功能。 展开更多
关键词 Γ-干扰素 基因转染 巨噬细胞 腺病毒载体 免疫
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转染BMP-2基因的兔BMSCs种植PLA/PCL支架体外构建组织工程骨 被引量:12
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作者 卜丽莎 李建军 +5 位作者 高申 杨绍娟 张文岚 崔亚南 刘建国 徐莘香 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2004年第9期677-679,共3页
目的 :用腺病毒载体将人骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )基因导入兔骨髓基质干细胞 (BMSCs) ,种植PLA/PCL (聚乳酸 /聚己内酯 )支架体外构建组织工程骨。方法 :蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达 ,流式细胞仪和ALP活性检测分析基因转染... 目的 :用腺病毒载体将人骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )基因导入兔骨髓基质干细胞 (BMSCs) ,种植PLA/PCL (聚乳酸 /聚己内酯 )支架体外构建组织工程骨。方法 :蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达 ,流式细胞仪和ALP活性检测分析基因转染对细胞增殖分化的影响。然后将转染后细胞接种到PLA/PCL支架上 ,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 :转染后 ,BMSCs表达BMP 2 ,S期细胞比例和ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀 ,伸展良好。结论 :BMP 2基因转染BMSCs ,可促进细胞增殖分化。转染后细胞在PLA/PCL支架上生长良好 ,BMP 2基因治疗的组织工程骨构建成功。 展开更多
关键词 腺病毒 骨形态发生蛋白 骨髓基质干细胞 组织工程骨
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人骨形态发生蛋白_2腺病毒表达载体转染人骨髓基质干细胞和对其增殖及分化的影响 被引量:13
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作者 李建军 崔亚楠 +3 位作者 韩东 王宏 刘建国 徐莘香 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2004年第1期60-62,共3页
目的 :研究人骨形态发生蛋白 2腺病毒表达载体 (Ad BMP 2 )转染人骨髓基质干细胞 (hBMSC)对其增殖及分化的影响。方法 :利用免疫组化、原位杂交染色和蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达。流式细胞仪和ALP活性测定分析BMP 2基因转染... 目的 :研究人骨形态发生蛋白 2腺病毒表达载体 (Ad BMP 2 )转染人骨髓基质干细胞 (hBMSC)对其增殖及分化的影响。方法 :利用免疫组化、原位杂交染色和蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达。流式细胞仪和ALP活性测定分析BMP 2基因转染对细胞增殖、分化的影响。结果 :转染后 ,hBMP 2基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达。蛋白印迹法检测到培养液中有BMP 2蛋白阳性表达 ,S期细胞比例和ALP活性明显增高。结论 :Ad BMP 2可高效转染hBMSC ,且促进细胞增殖和成骨转化。 展开更多
关键词 腺病毒 骨形态发生蛋白2 骨髓基质干细胞 基因转染 人骨 细胞增殖 细胞分化
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腺病毒介导的脑源性神经营养因子表达对大鼠损伤脊髓轴突的保护作用 被引量:10
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作者 沈岳 廖维宏 +5 位作者 王国强 李芳 伍亚民 龙在云 李应玉 陈恒胜 《第三军医大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期146-149,共4页
目的 :研究腺病毒介导的脑源性神经营养因子(BDNF)基因在大鼠损伤脊髓内的表达规律 ,观察外源性BDNF对损伤脊髓的作用。方法 :利用激光束描记位移的重力打击装置 ,制备可靠的定量损伤模型 ;以直接注射法将带有BDNF基因表达框的复制缺陷... 目的 :研究腺病毒介导的脑源性神经营养因子(BDNF)基因在大鼠损伤脊髓内的表达规律 ,观察外源性BDNF对损伤脊髓的作用。方法 :利用激光束描记位移的重力打击装置 ,制备可靠的定量损伤模型 ;以直接注射法将带有BDNF基因表达框的复制缺陷重组腺病毒载体直接转移至大鼠损伤脊髓 ,用X Gal染色检测基因转移有效性 ,并观察损伤轴突计量形态学改变 ,损伤脊髓BDNFmRNA表达 ,BDNF和神经中丝(Neurofilament,NF)免疫组化活性的改变。结果 :腺病毒载体直接引入脊髓可有效地感染脊髓组织和表达报告基因。直接转染BDNF腺病毒载体可明显减少伤后两周轴突丧失 ;同时 ,NF免疫反应阳性的轴突较正常增多。结论 :实验性腺病毒介导的BDNF基因损伤脊髓转移是可行的。在基因直接转移局部外源性BDNF过表达对神经具有保护作用 ,可减少轴突丧失 ,促进神经元骨架蛋白的修复。这种双重作用可能在脊髓损伤治疗中有重要的价值。 展开更多
关键词 疹髓损伤 腺病毒载体 基因治疗 大鼠 BDNF
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Gene therapy: light is finally in the tunnel 被引量:9
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作者 Huibi Cao Robert S.Molday Jim Hu 《Protein & Cell》 SCIE CSCD 2011年第12期973-989,共17页
After two decades of ups and downs,gene therapy has recently achieved a milestone in treating patients with Leber’s congenital amaurosis(LCA).LCA is a group of inherited blinding diseases with retinal degeneration an... After two decades of ups and downs,gene therapy has recently achieved a milestone in treating patients with Leber’s congenital amaurosis(LCA).LCA is a group of inherited blinding diseases with retinal degeneration and severe vision loss in early infancy.Mutations in several genes,including RPE65,cause the disease.Using adenoassociated virus as a vector,three independent teams of investigators have recently shown that RPE65 can be delivered to retinal pigment epithelial cells of LCA patients by subretinal injections resulting in clinical benefits without side effects.However,considering the whole field of gene therapy,there are still major obstacles to clinical applications for other diseases.These obstacles include innate and immune barriers to vector delivery,toxicity of vectors and the lack of sustained therapeutic gene expression.Therefore,new strategies are needed to overcome these hurdles for achieving safe and effective gene therapy.In this article,we shall review the major advancements over the past two decades and,using lung gene therapy as an example,discuss the current obstacles and possible solutions to provide a roadmap for future gene therapy research. 展开更多
关键词 gene therapy TRANSGENES viral vector non-viral vector helper-dependent adenoviral vector adenoassociated virus LENTIVIRUS cystic fibrosis transmembrane conductance regulator(CFTR) host immune responses
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腺病毒载体携带人TRAIL基因治疗H446小细胞肺癌的体外实验研究 被引量:9
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作者 刘永靖 陈飞虎 +3 位作者 于奇 韩继彪 苏长青 钱其军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期755-759,共5页
目的评价携带人TRAIL基因的腺病毒载体对人小细胞肺癌细胞株H446的基因治疗功效。方法构建的携带人TRAIL基因的腺病毒Ad-hTRAIL,感染人小细胞肺癌细胞株H446以及人正常肝细胞株WRL-68,人正常成纤维细胞株MRC-5,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)... 目的评价携带人TRAIL基因的腺病毒载体对人小细胞肺癌细胞株H446的基因治疗功效。方法构建的携带人TRAIL基因的腺病毒Ad-hTRAIL,感染人小细胞肺癌细胞株H446以及人正常肝细胞株WRL-68,人正常成纤维细胞株MRC-5,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肿瘤细胞的效能,流式细胞术(FCM)检测Ad-hTRAIL对细胞早期凋亡的影响,并进行RT-PCR、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL mRNA和TRAIL蛋白的表达量。结果携带人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒Ad-hTRAIL对H446细胞的感染效率较高;感染72h后H446、WRL-68、MRC-5细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为32.02、17.08、16.89μg.L-1,在MOI=1.0时,Ad-hTRAIL即可引起H446细胞明显凋亡;而在MOI=100时对正常细胞WRL-68、MRC-5也没有明显杀伤作用。结论Ad-hTRAIL能够强烈诱导小细胞肺癌细胞H446凋亡而对正常肝细胞及成纤维细胞无明显抑制作用,Ad-hTRAIL在小细胞肺癌的基因治疗方面有潜在的应用前景。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 基因治疗 腺病毒 TRAIL 凋亡
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腺病毒介导的肿瘤血管靶向的体外自杀基因治疗研究 被引量:5
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作者 徐舲飞 许德华 +3 位作者 戈凯 郑仲承 孙兰英 刘新垣 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第3期171-174,共4页
本工作在血管内皮细胞中分别建立了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统,用于抑制实体肿瘤中血管生成的研究.构建含自杀基因的重组腺病毒AdCMVtk和AdCMVcd,滴度均1×10^(12)pfu/ml.病毒感染小鼠血管内皮细胞lGll(MOI=100),并鉴定自... 本工作在血管内皮细胞中分别建立了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统,用于抑制实体肿瘤中血管生成的研究.构建含自杀基因的重组腺病毒AdCMVtk和AdCMVcd,滴度均1×10^(12)pfu/ml.病毒感染小鼠血管内皮细胞lGll(MOI=100),并鉴定自杀基因的表达,测定原药对它们的杀伤.生长抑制试验表明,GCV对lGll/Ad-tk细胞杀伤的IG_(50)为0.2μmol/ L,5-FC对lGll/Ad-cd细胞杀伤的IC_(50)为20μmol/L.电镜下显示被原药杀伤的血管内皮细胞有明显的细胞凋亡现象.同时混合细胞实验证明两系统均存在明显的旁杀伤效应.从而在体外水平证明了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统杀伤增生血管内皮细胞的有效性. 展开更多
关键词 血管内皮细胞 腺病毒 载体 自杀基因 肿瘤
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抑制FoxO1基因表达的siRNA重组腺病毒载体的构建及功能鉴定 被引量:7
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作者 卢忠燕 甘立霞 +3 位作者 王哲 何凤田 邹全明 曹廷兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第23期2215-2218,共4页
目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细... 目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染293细胞,包装得到含si-FoxO1的重组腺病毒,体外转染人肝癌细胞系HepG2,Westernblot检测FoxO1蛋白表达水平的变化。结果成功构建针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,该重组腺病毒能显著抑制HepG2细胞中FoxO1蛋白的表达(P<0.01)。结论成功构建了针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,能有效抑制HepG2细胞中FoxO1的表达。 展开更多
关键词 FOXO1 SIRNA 腺病毒载体 HEPG2细胞
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Construction of a bicistronic recombinant adenoviral vector for human interleukin-10 and enhanced green fluorescent protein expression in bone marrow mesenchymal stem cells 被引量:7
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作者 LIN Jian-qing LIN Cai-zhu +2 位作者 LIN Xian-zhong ZENG Kai GAO You-guang 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2012年第1期102-108,共7页
Background Human interleukin-10 (hlL-10) is a cytokine synthesis inhibitory factor,which is involved in various immune responses.The purpose of this study was to construct an adenoviral vector carrying the hlL-10 ge... Background Human interleukin-10 (hlL-10) is a cytokine synthesis inhibitory factor,which is involved in various immune responses.The purpose of this study was to construct an adenoviral vector carrying the hlL-10 gene for expression of biologically active hlL-10 in rat bone marrow mesenchymal stem cells (rMSCs).Methods A pSNAV2.0-hlL10 plasmid was used as a template to obtain a hlL-10 cDNA fragment that was subcloned by restriction enzyme digestion and ligation into a pDC316-IRES-EGFP-lacZ alpha plasmid carrying an enhanced green fluorescent protein (EGFP) marker gene.The pDC316-hlL-10-IRES-EGFP plasmid was linearized by Pmel digestion and used to transfect HEK293 packaging cells using the adenovirus packaging system AdMax.Virus particles were amplified by repeatedly infecting HEK293 cells with the seed virus and then purified by ion exchange.After the number of virus particles and titer was determined,rMSCs were infected with the adenoviral vector.The infection rate was determined by fluorescence microscopy and flow cytometry,and hlL-10 protein expression in rMSCs was measured by Western blotting.Results The virus particle concentration,OD260/280 value and virus titer of the amplified and purified recombinant adenovirus were 3.2×1011 VP/ml,approximately 2.0,and 1.1×1010 TCID50/ml,respectively.Bright green fluorescence was observed by fluorescence microscopy and flow cytometry in the recombinant adenovirus-infected rMSCs.GFP expression was considered the multiplicity of infection (MOI) and was time-dependent.The infection rate was 92.9% at 100 MOI.Conclusions A bicistrenic recombinant adenoviral vector for hlL-10 and EGFP gene expression were successfully constructed.The infection rate of rMSCs by the adenovirus was high (92.9% at 100 MOI) and the target gene hlL-10 was highly expressed in cells.The present study provides an experimental basis for further research of immunosuppressive therapy using hlL-10.The expression level of hlL-10 protein as detected by Western blotting was also MOI- an 展开更多
关键词 human interleukin-10 adenoviral vector bone marrow mesenchymal stem cells
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骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体在成骨过程中与血管内皮细胞生长因子关系 被引量:5
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作者 韩冬 李建军 +2 位作者 孙鸿斌 李春雨 王悦书 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期698-701,共4页
[目的]探讨骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体(A recombinant adenoviral vector carrying the human BMP-2 gene,Ad-BMP-2)在成骨过程中和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)相互关系。[方法]应用人骨形态... [目的]探讨骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体(A recombinant adenoviral vector carrying the human BMP-2 gene,Ad-BMP-2)在成骨过程中和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)相互关系。[方法]应用人骨形态发生蛋白-2腺病毒载体体外感染兔骨髓间质干细胞(bone marrow stem cells,BMSC),感染后观察BMP-2、VEGF和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达及钙结节形成。同时将30μl Ad-BMP-2行裸鼠左后肢肌组织内注射,术后20 d取材,免疫组化和原位杂交法观察BMP-2与VEGF体内表达情况。30μlβ半乳糖苷酶腺病毒载体(Adβgal)右后肢肌内注射作为对照。[结果]BMSC被Ad-BMP-2感染后,向成骨细胞分化,上调VEGF的表达。在体内成骨过程中,BMP-2在软骨细胞、成骨细胞和再生骨组织周围单核细胞表达阳性,VEGF在软骨细胞、成骨细胞和血管内皮细胞均表达阳性。[结论]BMP-2和VEGF两者协调一致,互为促进,完成了骨组织的发生。 展开更多
关键词 腺病毒 骨形态发生蛋白 血管内皮细胞生长因子 基因
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Inhibition of KIT RNAi mediated with adenovirus in gastrointestinal stromal tumor xenograft 被引量:6
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作者 Tian-Bao Wang Wen-Sheng Huang +2 位作者 Wei-Hao Lin HanPing Shi Wen-Guang Dong 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2010年第40期5122-5129,共8页
AIM: To investigate a therapeutic method for gastrointestinal stromal tumor (GIST) based on KIT RNA interference (RNAi) with AdMax adenovirus. METHODS: KIT short hairpin RNA (shRNA), whose lateral sides were decorated... AIM: To investigate a therapeutic method for gastrointestinal stromal tumor (GIST) based on KIT RNA interference (RNAi) with AdMax adenovirus. METHODS: KIT short hairpin RNA (shRNA), whose lateral sides were decorated with restriction endonuclease sequences, was designed. T 4 DNA ligase catalyzed the joint of the KIT shRNA and the green fluorescent protein-containing PDC316-EGFP-U6 to form PDC316EGFP-U6-KIT. Homologous recombination of AdEGFPU6-KIT was performed with the AdMax system. Heterotopically transplanted GISTs were established in nude mice. AdEGFP-U6-KIT was intratumorally injected. The volume, inhibition ratio of tumor and CD117 expression of GIST graft tumor in nude mice were compared between test and control groups. RESULTS: The length of KIT shRNA was determined to be about 50bp by agarose electrophoresis. Gene se-quencing detected the designed KIT RNAi sequence in PDC316-EGFP-U6-KIT. After transfection with AdEGFPU6-KIT, 293 cells displayed green fluorescence. The physical and infective titers of AdEGFP-U6-KIT were 5 × 10 11 viral particles/mL and 5.67 × 10 7 plaque forming units/mL, respectively. The mean volume of the grafted tumor was significantly smaller in test mice than in control mice (75.3 ± 22.9 mm 3 vs 988.6 ± 30.5 mm 3 , t = -18.132, P < 0.05). The inhibition ratio of the tumors was 59.6% in the test group. CD117 positive expression was evident in two cases (20%) in the test group and 10 cases (100%) in the control group (χ 2 = 10.2083, P < 0.005). CONCLUSION: AdEGFP-U6-KIT is successfully constructed, and KIT RNAi mediated with Admax vector system can effectively inhibit the expression of the KIT gene and the growth of GIST in nude mice. 展开更多
关键词 Gastrointestinal stromal tumor RNA interference KIT adenoviral vector Nude mice
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腺病毒载体介导的LacZ基因在神经前体细胞的转染和表达 被引量:5
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作者 郭灵 谢瑶 +1 位作者 汪华侨 姚志彬 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期135-138,共4页
为了观察含报告基因 L ac Z的重组 5型腺病毒载体 ( Ad5CMVLac Z)在神经前体细胞转染和表达的量效关系并探讨用该载体构建基因修饰细胞的可能性 ,本研究用不同滴度 ( 1× 10 3~ 1× 10 1 0 PFU/ml)的 Ad5CMVLac Z转染体外培养... 为了观察含报告基因 L ac Z的重组 5型腺病毒载体 ( Ad5CMVLac Z)在神经前体细胞转染和表达的量效关系并探讨用该载体构建基因修饰细胞的可能性 ,本研究用不同滴度 ( 1× 10 3~ 1× 10 1 0 PFU/ml)的 Ad5CMVLac Z转染体外培养的 SD胎鼠(胎龄 12 d)海马神经前体细胞 ,用β-半乳糖苷酶 (β-gal)免疫组化反应检测转染效率。结果显示 :当病毒滴度为 1× 10 7时 ,转染率约为 5 0 % ,当滴度增加到 1× 10 1 0时 ,转染率达 10 0 %。Ad5CMVL ac Z在神经前体细胞的转染率具有滴度依赖性的量效关系。表明高滴度的 Ad5CMVLac Z成功地转染了大部分神经前体细胞 ,Lac Z基因也得到充分表达。提示神经前体细胞是该载体转染的适宜靶细胞 ,并有可能通过该载体转导目的基因 。 展开更多
关键词 腺病毒载体 LACZ基因 神经前体细胞 转染 表达 大鼠
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腺病毒介导的白介素10基因体外转导大鼠β_2m-/Thy-1^+骨髓源性肝干细胞 被引量:6
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作者 兰玲 陈源文 +2 位作者 孙超 孙巧玲 李定国 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2008年第1期22-26,共5页
目的研究腺病毒介导的白介素10(interleukin 10,IL-10)基因(AdIL-10)体外转导β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干细胞(bonemarrow-derived liver stem cell,BDLSC)的可行性。方法利用免疫磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法分选... 目的研究腺病毒介导的白介素10(interleukin 10,IL-10)基因(AdIL-10)体外转导β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干细胞(bonemarrow-derived liver stem cell,BDLSC)的可行性。方法利用免疫磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法分选大鼠β2m-/Thy-1+BDLSC,RT-PCR法鉴定其肝相关性表型的表达。AdIL-10转导BDLSC,根据腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达率测定转导效率,采用RT-PCR法和ELISA法分别检测IL-10的基因表达和蛋白分泌水平。采用MTT法和免疫荧光染色法分别检测腺病毒转导对BDLSC增殖能力和肝细胞样表型白蛋白(albumin,ALB)表达的影响。结果MASC法能成功分选纯化BDLSC,其在基因水平表达肝细胞样表型。AdIL-10转导BDLSC的效率呈剂量依赖性,最佳转染复数为500pfu/cell。AdIL-10修饰BDLSC高表达IL-10基因,且持续高浓度分泌IL-10蛋白至胞外。AdIL-10转导72h后,BDLSC仍保持正常的增殖能力和ALB表达。结论BDLSC是AdIL-10转导的适宜载体,为AdIL-10修饰BDLSC这一新型结合方式用于慢性肝病的治疗奠定了实践基础。 展开更多
关键词 骨髓源性肝干细胞 腺病毒载体 白介素10 基因转导
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人类神经生长因子β基因重组腺病毒载体的构建 被引量:7
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作者 王清秀 钟和英 +5 位作者 王家宁 黄永章 余开峰 周青山 马大青 姚尚龙 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2005年第4期431-434,共4页
目的:为研究人神经生长因子β(hNGFβ)基因对慢性神经病理性痛的治疗作用,构建人类神经生长因子β基因重组腺病毒载体。方法:将hNGFβ外源性核酸片段插入到pBluescriptⅡSK(+)的XmaⅠ与XbaⅠ位点,构建成pBluescriptⅡSK(+)hNGFβ,再将... 目的:为研究人神经生长因子β(hNGFβ)基因对慢性神经病理性痛的治疗作用,构建人类神经生长因子β基因重组腺病毒载体。方法:将hNGFβ外源性核酸片段插入到pBluescriptⅡSK(+)的XmaⅠ与XbaⅠ位点,构建成pBluescriptⅡSK(+)hNGFβ,再将其与腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV经KpnⅠ和NotⅠ双酶切后,构建成转移质粒pShuttleCMVhNGFβ,将该转移质粒经PmeⅠ酶切后,转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy1的感受态菌BJ5183,重组为pAdEasy1hNGFβ,经PCR鉴定后,LipoVec介导pAdEasy1hNGFβ转染AD293细胞,将透析纯化后的腺病毒采用紫外分光光度计进行滴度测定。并进行自动测序鉴定。结果:线性化的pShuttleCMVhNGFβ转化含pAdEasy1的感受态菌BJ5183,24h后获得了30%阳性重组质粒,经酶切得到一个大于20kb的大片段和一个4.5kb的特征性条带,PCR扩增出731bp片段。pAdeasy1hNGFβ经PacI酶切线性化后,转染Ad293细胞包装成表达hNGFβ的重组腺病毒。260nm处吸光值测病毒滴度为2.24×1012OPU·L-1。重组AdhNGFβ腺病毒质粒经上海基康生物技术有限公司自动测序鉴定为目的基因。结论:应用细菌内同源重组能快速构建AdhNGFβ,为hNGFβ基因在神经病理性痛中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 同源重组 腺病毒 基因 人类神经生长因子β AD293细胞
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腺病毒载体介导外源性端粒酶在组织工程种子细胞中的表达 被引量:6
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作者 李卿 陆峻泓 +4 位作者 王丹茹 苗春雷 王爱丽 刘伟 曹谊林 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期15-16,共2页
目的 通过腺病毒载体将外源性人端粒酶逆转录酶催化亚基 (hTERT)基因导入组织工程常用种子细胞中 ,探讨其对各细胞生存状况的影响。方法 取第 4代的猪耳软骨细胞、猪骨髓基质干细胞和人皮肤成纤维细胞 ,分别以Adeno hTERT和Adeno lac... 目的 通过腺病毒载体将外源性人端粒酶逆转录酶催化亚基 (hTERT)基因导入组织工程常用种子细胞中 ,探讨其对各细胞生存状况的影响。方法 取第 4代的猪耳软骨细胞、猪骨髓基质干细胞和人皮肤成纤维细胞 ,分别以Adeno hTERT和Adeno lacZ进行基因转染。 5d后 ,取各组细胞样品 ,以逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)和PCR 酶联免疫吸附法 (PCR ELISA)分别检测各自的hTERTmRNA表达及其hTERT的活性。各组hTERT转染细胞与对照细胞接种于 96孔板中 ,通过MTT法对细胞的生存和活力状况进行检测。结果 各组细胞经hTERT转染后 ,端粒酶的表达和活性均显著上升 (P <0 .0 1)。四甲基偶氮唑盐 (MTT)氧化反应结果显示hTERT转染的细胞中 ,细胞存活和活力状况显著高于对照组的细胞 (P <0 .0 1)。猪耳软骨细胞经hTERT转染后达到空白对照组细胞的 (12 1.75± 5 .3 7) % ;猪骨髓基质干细胞达 (12 5 .2 2± 2 .78) % ;人皮肤成纤维细胞达 (112 .5 7± 3 .99) %。结论 腺病毒载体介导的外源性hTERT基因在组织工程种子细胞中的表达 ,可以提高其在体外的扩增潜力 ,改善组织工程构建中种子细胞来源不足的情况。 展开更多
关键词 腺病毒载体 介导 外源性端粒酶 组织工程种子细胞 表达 基因转染 PCR-ELISA
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Suppression of human colon tumor growth by adenoviral vector-mediated NK4 expression in an athymic mouse model 被引量:6
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作者 Jian-Zheng Jie 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2007年第13期1938-1946,共9页
AIM: To investigate the suppressive effects of adenoviral vector-mediated expression of NK4, an antagonist of hepatocyte growth factor (HGF), on human colon cancer in an athymic mouse model to explore the possibili... AIM: To investigate the suppressive effects of adenoviral vector-mediated expression of NK4, an antagonist of hepatocyte growth factor (HGF), on human colon cancer in an athymic mouse model to explore the possibility of applying NK4 to cancer gene therapy. METHODS: A human colon tumor model was developed by subcutaneous implantation of tumor tissue formed by LS174T cells grown in athymic mice. Fifteen tumorbearing mice were randomized into three groups (n= 5 in each group) at d 3 after tumor implantation and mice were injected intratumorally with phosphate-buffered saline (PBS) or with recombinant adenovirus expressing 13-galactosidase (Ad-LacZ) or NK4 (rvAdCMV/NK4) at a 6-d interval for total 5 injections in each mouse. Tumor sizes were measured during treatment to draw a tumor growth curve. At d 26 after the first treatment, all animals were sacrificed and the tumors were removed to immunohistochemically examine proliferating cell nuclear antigen (PCNA), microvessel density (represented by CD31), and apoptotic cells. In a separate experiment, 15 additional athymic mice were employed to develop a tumor metastasis model by intraperitoneal injection (ip) of LS174T cells. These mice were randomized into 3 groups (n = 5 in each group) at d 1 after injection and were treated by ip injection of PBS, or Ad-LacZ, or rvAdCMV/NK4 at a 6-d interval for total two injections in each mouse. All animals were sacrificed at d 14 and the numbers and weights of disseminated tumors within the abdominal cavity were measured. RESULTS: Growth of significantly suppressed human colon tumors were in the athymic mice treatedwith rvAdCMV/NK4 (2537.4± 892.3 mm^3) compared to those treated by either PBS (5175.2 ± 1228.6 mm^3) or Ad-LacZ (5578.8± 1955.7 mm^3) (P 〈 0.05). The tumor growth inhibition rate was as high as 51%. Immunohistochemical staining revealed a similar PCNA labeling index (75.1% ± 11.2% in PBS group vs 72.8% ± 7.6% in Ad-LacZ group vs 69.3% ± 9.4% in rvAdCMV 展开更多
关键词 Human colon cancer NK4 Hepatocytegrowth factor adenoviral vector Gene therapy
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eNOS基因转染预防静脉移植血管再狭窄 被引量:2
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作者 郑家豪 镡朝晖 +1 位作者 穆军升 朱洪生 《中国胸心血管外科临床杂志》 CAS 2003年第2期81-84,共4页
目的 应用含牛内皮型一氧化氮合成酶 (e NOS)基因重组腺病毒 (Ad5 CMVNOS )转染静脉移植血管 ,观察 e NOS基因预防静脉移植血管再狭窄的作用。 方法 将 2 1只杂种犬分为 3组 ,手术对照组、Ad5 CMVL ac- Z(含大肠杆菌 β半乳糖苷酶基... 目的 应用含牛内皮型一氧化氮合成酶 (e NOS)基因重组腺病毒 (Ad5 CMVNOS )转染静脉移植血管 ,观察 e NOS基因预防静脉移植血管再狭窄的作用。 方法 将 2 1只杂种犬分为 3组 ,手术对照组、Ad5 CMVL ac- Z(含大肠杆菌 β半乳糖苷酶基因重组腺病毒 )对照组和 Ad5 CMVNOS 干预组。在犬颈静脉、颈动脉旁路血管移植术中分别应用 Ad5 CMVNOS 病毒液或 Ad5 CMVL ac- Z病毒液常温浸泡法感染静脉移植血管 30分钟 ,术后 2 8天病理切片观测移植血管新内膜增生状况。 结果 与正常犬颈外静脉相比 ,手术对照组、Ad5 CMVL ac- Z对照组和Ad5 CMVNOS 干预组颈外静脉移植血管内膜 /中膜比较均有不同程度增加 (P<0 .0 5 ) ,但 Ad5 CMVNOS 组内膜 /中膜比显著低于另外 2个对照组 (P<0 .0 5 ) ,新内膜增生明显减轻。 结论  Ad5 CMVNOS 感染静脉旁路移植血管对预防再狭窄有一定作用。 展开更多
关键词 基因重组腺病毒 ENOS基因 内皮型一氧化氮合成酶 腺病毒载体 血管再狭窄 预防 静脉移植 转染
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