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牛分枝杆菌重组蛋白TB10.4对RAW264.7细胞TLR2表达和分布的影响 被引量：1
1
作者 刘淑清 李平俊 +3 位作者 鑫婷 侯绍华 朱鸿飞 贾红 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期83-90,共8页
为探讨牛分枝杆菌TB10.4蛋白与RAW264.7细胞的相互作用关系,表达纯化了rTB10.4,并采用IFN-γ释放试验和Western blot检测其细胞活性。使用不同剂量rTB10.4与RAW264.7细胞共孵育后,采用实时无标记动态细胞分析技术检测rTB10.4对RAW264.7... 为探讨牛分枝杆菌TB10.4蛋白与RAW264.7细胞的相互作用关系,表达纯化了rTB10.4,并采用IFN-γ释放试验和Western blot检测其细胞活性。使用不同剂量rTB10.4与RAW264.7细胞共孵育后,采用实时无标记动态细胞分析技术检测rTB10.4对RAW264.7细胞生长影响的最佳时间点和最佳剂量。在此基础上,采用量化流式细胞仪分析重组蛋白rTB10.4对RAW264.7细胞TLR2表达的影响。结果表明,获得的rTB10.4具有较强的T细胞和B细胞活性,rTB10.4对RAW264.7细胞的作用呈剂量依赖性,作用起效时间为12~24h,诱导作用在16~18h达到最大效应值。量化流式分析仪分析结果表明,rTB10.4刺激可显著增强RAW264.7细胞的细胞膜上TLR2的表达。 展开更多
关键词 TB10.4重组蛋白 牛分枝杆菌 RAW264.7细胞 动态实时细胞分析检测技术 TLR2
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基于细胞动态生物反应谱的抗肿瘤先导化合物筛选方法研究
2
作者 马丽娜 张乐乐 +6 位作者 熊吟 韩玉梅 章从恩 郜丹 马莉 鄢丹 肖小河 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期695-700,共6页
为弥补抗肿瘤活性评估常规断点检测法操作繁琐、灵敏度低等局限,尝试建立基于细胞动态生物反应谱的抗肿瘤先导化合物筛选新方法。依据活细胞具有电阻抗生物传感属性,以细胞指数、半数抑制浓度IC50和脱附曲线为评价指标,采用实时在线分... 为弥补抗肿瘤活性评估常规断点检测法操作繁琐、灵敏度低等局限,尝试建立基于细胞动态生物反应谱的抗肿瘤先导化合物筛选新方法。依据活细胞具有电阻抗生物传感属性,以细胞指数、半数抑制浓度IC50和脱附曲线为评价指标,采用实时在线分析技术动态监测模式药表柔比星、顺铂、卡铂对HepG2细胞生长的影响,并辅以CCK-8(cell counting kit-8)和显微监视佐证。结果显示,以细胞指数-作用时间关系表征的细胞动态生物反应谱可灵敏地反映模式药抑制HepG2细胞的动态特征效应信息,3种药物的IC50分别为(0.53±0.04)、(9.79±0.26)和(597.00±3.79)μg·mL-1,进一步发现3种药物的脱附曲线差异明显,提示其作用特征可能不同,这与常规检测方法及文献报道一致。研究表明,具有无标记、非侵入、实时动态等特点的细胞动态生物反应谱技术,可定性定量地表征3种药物对HepG2细胞作用的过程动态信息,反映不同药物作用特征性差异,有望为抗肿瘤先导化合物的发现及作用特点或机制阐释提供线索。 展开更多
关键词 先导化合物 活性评价 实时细胞电子传感系统
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牛分枝杆菌TB9.8蛋白的表达及其诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞因子的分泌
3
作者 刘淑清 贾红 +9 位作者 侯绍华 鑫婷 袁维峰 郭晓宇 张改梅 高新桃 李明 吴竞 董瑞凯 朱鸿飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期735-739,共5页
为研究牛分枝杆菌TB9.8蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7的生长及分泌细胞因子的影响,本研究将编码牛分枝杆菌TB9.8蛋白的基因克隆于pET-30a质粒中并在E.coli中进行表达。经SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白(rTB9.8)约9.8 ... 为研究牛分枝杆菌TB9.8蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7的生长及分泌细胞因子的影响,本研究将编码牛分枝杆菌TB9.8蛋白的基因克隆于pET-30a质粒中并在E.coli中进行表达。经SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白(rTB9.8)约9.8 ku,具有良好抗原性。以不同剂量的纯化rTB9.8刺激巨噬细胞RAW264.7,采用动态实时细胞检测技术分析rTB9.8对RAW264.7生长影响的最佳时间点和最佳剂量,结果表明rTB9.8可以在8 h^24 h对RAW264.7细胞的增殖产生明显的抑制作用。此外,rTB9.8能够显著诱导RAW264.7细胞表达TNF-α、IL-6和IL-12。本实验为进一步研究牛分枝杆菌rTB9.8与宿主细胞相互作用提供了实验依据。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 TB9.8 实时动态检测技术 细胞因子
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