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沃柑溃疡病病原菌分离鉴定及防治药剂筛选 被引量:19
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作者 赵洪涛 陈东奎 +7 位作者 陈香玲 欧智涛 黄其椿 张兰 李果果 刘要鑫 叶云峰 付岗 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2703-2712,共10页
【目的】明确广西南宁沃柑溃疡病病原菌种类,筛选田间能抑制该病害的药效,为当地沃柑溃疡病的防治提供依据。【方法】采用组织分离法对病原菌进行分离和纯化培养,根据柯赫氏法则进行验证,通过形态学、16S r DNA序列分析与构建系统发育... 【目的】明确广西南宁沃柑溃疡病病原菌种类,筛选田间能抑制该病害的药效,为当地沃柑溃疡病的防治提供依据。【方法】采用组织分离法对病原菌进行分离和纯化培养,根据柯赫氏法则进行验证,通过形态学、16S r DNA序列分析与构建系统发育进化树相结合的方法对病原菌进行鉴定。选用14种药剂,采用平板对峙法测定不同药剂对沃柑溃疡病病原菌的室内毒力;选取室内毒力测定具有一定抑菌效果的药剂进行田间防治效果试验。【结果】确定广西南宁沃柑溃疡病病原为柑桔黄单胞柑桔亚种(Xanthomonas citri subsp. citri),系A菌系。室内毒力测定结果显示,供试的14种药剂中只有80%代森锰锌可湿性粉剂、200亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂、1.6%噻霉酮涂抹剂、1.8%辛菌胺醋酸盐水剂和3%中生菌素可湿性粉剂等5种药剂对柑橘溃疡病病原菌表现出一定的抑制效果,在500、1000、2000、4000和8000倍稀释浓度下,80%代森锰锌可湿性粉剂的抑菌效果最好,抑菌率为77.4%、75.2%、64.7%、63.0%和58.3%,有效中浓度(EC50)较低,为49.09 mg/L;200亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂的抑菌率为73.5%、67.4%、64.5%、61.5%和51.2%,EC50较高,为81.47 mg/L。田间药效试验结果表明,200亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂和1.6%噻霉酮涂抹剂对沃柑溃疡病有较好的防治效果,防效分别为73.45%和71.07%。【结论】从广西南宁分离出的沃柑溃疡病病原菌为强致病性柑桔黄单胞柑桔亚种A菌系,田间可选择200亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌进行生物防治。 展开更多
关键词 沃柑 溃疡病 柑桔黄单胞柑桔亚种 病原鉴定 药剂筛选 广西南宁
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柑橘内生真菌的分离鉴定及其发酵产物对柑橘溃疡病菌的抑制活性 被引量:12
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作者 颜桢灵 陈洁萍 +6 位作者 农小霞 李鑫 骆海玉 韦柳柳 阮家欢 关祥媛 陆莎 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1196-1208,共13页
本研究从柑橘抗病品种的健康植株不同组织中分离纯化和鉴定内生真菌,并测定其发酵产物对柑橘溃疡病菌的抑制活性,以明确柑橘抗病品种中内生真菌的组成及其产抗柑橘溃疡病菌活性代谢产物的潜力,为柑橘溃疡病抗菌剂的开发奠定基础。该研... 本研究从柑橘抗病品种的健康植株不同组织中分离纯化和鉴定内生真菌,并测定其发酵产物对柑橘溃疡病菌的抑制活性,以明确柑橘抗病品种中内生真菌的组成及其产抗柑橘溃疡病菌活性代谢产物的潜力,为柑橘溃疡病抗菌剂的开发奠定基础。该研究通过组织培养法分离内生真菌,采用形态学和分子生物学方法对其进行鉴定;基于前期的拮抗预试验结果,选取代表性菌株进行发酵培养,通过乙酸乙酯浸提、真空抽滤、旋转蒸发浓缩制备粗提物;采用带毒平板涂布法测定不同菌株发酵产物乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的抑制活性。结果表明:(1)共分离得到72株内生真菌,归为2门(Ascomycota、Basidiomycota)、14个属,其中优势属为刺盘孢属(Colletotrichum)、球座菌属(Guignardia)、链格孢属(Alternaria)和镰刀菌属(Fusarium)。(2)不同柑橘品种中内生真菌多样性指数为温州蜜柑(桂林)>沙糖桔(桂林)>沙糖桔(梧州)。(3)不同组织中内生真菌多样性变化因地理位置差异而有所不同,采自桂林的温州蜜柑和沙糖桔均为叶片中的内生真菌的多样性高于枝条,而采自梧州的沙糖桔为叶片中的多样性低于枝条,并且采自梧州的柑橘样品与采自桂林的柑橘样品中的内生真菌相似性低。(4)测定了30株内生真菌乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的抑制活性,其中29株菌株表现出不同程度抑制活性。不同柑橘品种中的优势属的MIC介于0.3125~10 mg·mL^(-1)之间,特有属的MIC介于0.156~5 mg·mL^(-1),共有属镰刀菌属的MIC介于0.3125~2.5 mg·mL^(-1)之间。研究结果表明柑橘抗病品种中内生真菌具有丰富多样性,并且其发酵提取物普遍对柑橘溃疡病菌具有抑制作用。特有属抑菌活性总体优于优势属,共有属镰刀菌属在不同柑橘抗病品种中均具有显著抑菌效果。 展开更多
关键词 柑橘内生真菌 柑橘溃疡病菌 乙酸乙酯提取物 最低抑制浓度
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柑橘溃疡病综合防控技术研究进展 被引量:8
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作者 王晓宇 彭埃天 +2 位作者 宋晓兵 黄峰 崔一平 《中国农学通报》 2021年第31期106-111,共6页
为更好地防控柑橘溃疡病,全面了解柑橘溃疡病的病原、寄主的抗病机制及防控技术,本文对柑橘溃疡病的病原及寄主抗病机制进行归纳,并从检验检疫、抗病品种、化学防治、生物防治、植物源杀菌剂、病虫草综合防治等方面,对柑橘溃疡病的防控... 为更好地防控柑橘溃疡病,全面了解柑橘溃疡病的病原、寄主的抗病机制及防控技术,本文对柑橘溃疡病的病原及寄主抗病机制进行归纳,并从检验检疫、抗病品种、化学防治、生物防治、植物源杀菌剂、病虫草综合防治等方面,对柑橘溃疡病的防控技术进行概述。目前,柑橘溃疡病在国内的发生呈蔓延趋势,其病原为柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp.citri),病原菌主要从气孔、伤口等处侵入植株,叶片气孔密度及表层蜡质与植株抗性之间存在相关性。病害防控技术研究集中在化学防治、抗病品种、生物防治及植物源杀菌剂等方面,在检验检疫及病虫草综合防治方面的研究较少。当前,柑橘溃疡病的防治仍以化学防治为主,未见免疫品种,建议在非疫区实行严格的检验检疫,严防柑橘溃疡病的传入;在已发病地区进行综合防治,科学用药,减少化学药剂的使用量。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 防控技术 柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种 抗病机制 毒力因子
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柑橘溃疡病菌的侵染过程及噻森铜对溃疡病的防治效果 被引量:7
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作者 杨贵兵 韩健 +3 位作者 李文星 金燕 马先锋 邓子牛 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期322-331,共10页
为高效精准防治柑橘溃疡病,本研究对不同成熟度柑橘叶片接种溃疡病菌Xanthomonas citri subsp.citri后的发病情况进行观察,并在显微镜下观察溃疡病菌侵染叶片的过程,并对不同浓度、不同施用方法下噻森铜的室内防治效果和田间防治效果进... 为高效精准防治柑橘溃疡病,本研究对不同成熟度柑橘叶片接种溃疡病菌Xanthomonas citri subsp.citri后的发病情况进行观察,并在显微镜下观察溃疡病菌侵染叶片的过程,并对不同浓度、不同施用方法下噻森铜的室内防治效果和田间防治效果进行测定,对施用噻森铜后土壤、叶片和果实中的残留进行测定。结果表明,溃疡病菌可侵染柑橘嫩叶、幼叶和未成熟叶,其在叶片上附着2~4 d既已进入寄主组织内部。15 mL/株和20 mL/株噻森铜灌根15 d接种溃疡病菌的防治效果显著,而噻森铜10 mL/株灌根的防治效果略差,对照植株严重发病。萌芽前15~20 d噻森铜灌根浓度为60、75和90 mL/株时,每株病叶数分别为3.9、3.9和3.7个,每株病斑数分别为8.4、8.5和8.5个,病果率分别为9.4%、11.5%和9.6%,3个浓度处理之间差异不显著,但均显著低于对照。萌芽前喷施500倍噻森铜处理的每株病斑数为16.1个,与灌根60 mL/株噻森铜处理的每株病斑数差异不显著,但均显著低于对照;喷施噻森铜处理的病果率为16.8%,显著高于灌根60 mL/株噻森铜处理的,且两者均显著低于对照。萌芽前噻森铜不同施用方法的土壤、叶片和果实中铜离子含量均与常规管理的无显著差异。总之,萌芽前灌根或喷雾噻森铜可以克服生产上因萌芽不整齐和雨水带来的不利影响,进而有效防治柑橘溃疡病。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病菌 侵染 噻森铜 防治效果 残留
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柑橘溃疡病菌一个单功能域反应调控蛋白的功能研究
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作者 李瑞芳 刘倩倩 +3 位作者 姚姿婷 贤小勇 陆光涛 朱桂宁 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期535-543,共9页
由柑橘黄单胞柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcci)引起的柑橘溃疡病是我国柑橘生产上的一种重要病害。我们在前期研究中发现,Xcci广西菌株N8中有一个与306菌株的XAC3126同源的基因,可能参与调控病原菌的致病性。预测该基因编... 由柑橘黄单胞柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcci)引起的柑橘溃疡病是我国柑橘生产上的一种重要病害。我们在前期研究中发现,Xcci广西菌株N8中有一个与306菌株的XAC3126同源的基因,可能参与调控病原菌的致病性。预测该基因编码一个单功能反应调控蛋白。为明确该基因的生物学功能,本研究对该基因进行缺失突变和功能互补,获得了相应的缺失突变体和互补菌株。致病性测定发现,该基因缺失导致Xcci在柑橘上的致病性显著下降,并且其胞外多糖产量、运动性,以及生物膜形成能力均显著降低,而互补菌株的这些表型恢复至野生型水平。进一步通过RT-qPCR分析该基因缺失对Xcci运动性相关基因及胞外多糖相关基因转录的影响,发现相比野生型菌株,缺失突变体在丰富培养基NB中培养时,这些基因的表达均下降,表明该基因的产物是通过调控多种致病因子的表达来影响病原菌在柑橘上的致病性。据此,我们将该基因命名为embR(Extracellular polysaccharide,motility and biofilm formation related regulator)。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病菌 单功能域反应调控蛋白 致病力 调控 表达
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柑橘溃疡病菌环介导等温扩增快速检测技术研究 被引量:6
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作者 顾渊 岑铭松 +1 位作者 马海杰 李红叶 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期113-118,共6页
环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测已用于基层植物检验检疫中的疑似样品检测诊断。柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri)是重要的检疫性病害,根据柑橘溃疡病菌基因组中一段保守序列设计LAM... 环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测已用于基层植物检验检疫中的疑似样品检测诊断。柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri)是重要的检疫性病害,根据柑橘溃疡病菌基因组中一段保守序列设计LAMP引物,建立了柑橘溃疡病菌的LAMP检测方法。该LAMP检测方法只对柑橘溃疡病菌DNA和柑橘溃疡病病斑总DNA进行扩增,而对非靶标菌DNA和非靶标病斑总DNA不发生扩增,特异性与PCR一致。该LAMP检测方法最低可检出100 pg的纯柑橘溃疡病菌DNA和最低每微升4个细菌,灵敏度均比PCR高了1 250倍。LAMP检测法能很好地区分症状极易混淆的柑橘溃疡病和疮痂病。该试验建立的柑橘溃疡病菌LAMP检测方法具有简单、快速、灵敏和特异等优点,可在条件相对简陋的实验室应用。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 病害检测 环介导等温扩增(LAMP) 常规PCR
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壳聚糖和2株芽孢杆菌对柑橘溃疡病菌的杀菌效果评价 被引量:5
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作者 岑铭松 顾渊 +4 位作者 马海杰 李红叶 尉吉乾 张莉丽 徐文 《植物检疫》 北大核心 2017年第5期15-20,共6页
柑橘溃疡病是重要的柑橘细菌性病害,为探明壳聚糖和枯草芽孢杆菌对柑橘溃疡病的防治潜力,本文用平板菌落计数法评价了3种粘度壳聚糖对柑橘溃疡病菌的杀菌效果,以改良的纸碟法测定2株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵液对柑橘溃疡病... 柑橘溃疡病是重要的柑橘细菌性病害,为探明壳聚糖和枯草芽孢杆菌对柑橘溃疡病的防治潜力,本文用平板菌落计数法评价了3种粘度壳聚糖对柑橘溃疡病菌的杀菌效果,以改良的纸碟法测定2株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵液对柑橘溃疡病菌的抑菌效果。综合处理0.5 h、3 h和6 h的结果显示,3种粘度壳聚糖对柑橘溃疡病的杀菌强弱依次为:粘度12>粘度100>粘度20。枯草芽孢杆菌菌株BS 101和54-6在YPG培养基中有氧发酵3 d产生发酵液原液的抑菌圈直径分别为3.45 cm和3.21 cm,比0.1 g/mL氨苄青霉素的抑菌圈分别大45%和35%。可见,发酵液中存在对溃疡病菌高度有效的成分。因此,认为粘度12的壳聚糖和芽孢杆菌菌株BS 101和54-6具有防治柑橘溃疡病的潜力。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病菌 壳聚糖 枯草芽孢杆菌 发酵液 抑菌效果
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柑橘溃疡病防治药剂的联合施用及减量化研究 被引量:3
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作者 刘丹丹 王鹤 高文静 《广西科学》 CAS 北大核心 2022年第2期360-367,共8页
为明确采样地病原菌菌系,测定药剂对该病原菌的毒力,通过探究药剂联合抑菌方式,寻求药剂的减量化施用,以降低其对环境及人体的危害。采用平板划线法分离病原菌,结合形态学观察、生理生化特征及16S rDNA方法鉴定病原菌;应用浑浊度法测定... 为明确采样地病原菌菌系,测定药剂对该病原菌的毒力,通过探究药剂联合抑菌方式,寻求药剂的减量化施用,以降低其对环境及人体的危害。采用平板划线法分离病原菌,结合形态学观察、生理生化特征及16S rDNA方法鉴定病原菌;应用浑浊度法测定药剂对病原菌的毒力,利用回归分析获得毒力方程;通过药剂联合抑菌试验,采用分光光度法测定药剂与菌体互作后,获得病原菌生长的动态变化。病原菌为柑橘黄单胞菌柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp.citri),A菌系。20%噻菌铜悬浮剂、20%松脂酸铜悬浮剂、78%波尔·锰锌可湿性粉剂、12%中生菌素可湿性粉剂、80%乙蒜素乳油、0.5%靓果安水剂半数有效浓度(EC_(50))值分别为26.60μg/mL、18.80μg/mL、3.39μg/mL、3.01μg/mL、0.32μg/mL、0.0041μg/mL。联合抑菌试验结果表明,加药时间≤48 h,0.5%靓果安水剂的防治效果最明显。48 h后,80%乙蒜素乳油的防治效果显著高于其他防治药剂,但72 h后其防治效果下降。优先施用0.5%靓果安水剂,48 h后施用80%乙蒜素乳油,120 h后重新施用0.5%靓果安水剂的施药方式,既对防治柑橘溃疡病有利,又能减少环境污染,减轻药剂对食品安全与生物健康等方面的不利影响。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 黄单胞菌柑橘亚种 药剂 毒力 环境污染
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柑橘溃疡病菌抗铜相关基因copA和copB的克隆及原核表达 被引量:3
9
作者 王君 叶刚 +2 位作者 马燕侠 王国平 洪霓 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期247-252,共6页
以柑橘溃疡病菌DNA为模板,对抗铜相关基因copA和copB进行了PCR扩增和克隆,获得了大小分别为1 782 bp和1 095 bp的目标片段。构建了这2个基因的原核表达载体(pET-copA和pET-copB),并在大肠杆菌[Escherichia coliBL21(DE3)]中成功诱导表... 以柑橘溃疡病菌DNA为模板,对抗铜相关基因copA和copB进行了PCR扩增和克隆,获得了大小分别为1 782 bp和1 095 bp的目标片段。构建了这2个基因的原核表达载体(pET-copA和pET-copB),并在大肠杆菌[Escherichia coliBL21(DE3)]中成功诱导表达。利用原核表达的融合蛋白免疫大耳白兔,制备了抗copA和copB原核表达蛋白的多克隆抗体。用间接ELISA法测定了所制备的多克隆抗体的效价均为1∶6 400。用所制备的抗体分别对copA和copB的原核表达产物进行Western blot分析的结果显示,在相应位置产生了较强的免疫反应条带,表明所制备抗体能特异性地与相应的抗原发生免疫反应。 展开更多
关键词 抗铜基因 PCR 原核表达 WESTERN BLOT 柑橘溃疡病菌
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柑橘溃疡病菌胞外蛋白水解酶对其致病力的作用 被引量:3
10
作者 徐鑫焱 李艳娇 +1 位作者 户勋 邹华松 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第1期1-9,共9页
采用异源表达方法从柑橘黄单胞柑橘亚种(Xcc)中国菌株Xcc 29-1中鉴定出6个编码胞外蛋白水解酶的基因.运用同源重组方法将6个编码基因全部敲除,得到胞外蛋白水解酶缺失突变体,对其致病力、形成生物膜的能力和生长繁殖速度进行检测.结果显... 采用异源表达方法从柑橘黄单胞柑橘亚种(Xcc)中国菌株Xcc 29-1中鉴定出6个编码胞外蛋白水解酶的基因.运用同源重组方法将6个编码基因全部敲除,得到胞外蛋白水解酶缺失突变体,对其致病力、形成生物膜的能力和生长繁殖速度进行检测.结果显示,蛋白水解酶突变体在柑橘上的致病力减弱,并且附着到试管壁的细菌数量显著减少,形成生物膜的能力下降.在野生型菌株中过表达蛋白水解酶后,形成的溃疡病斑水渍状程度加大,在柑橘中的繁殖速度变快;在柑橘叶片中,6个胞外蛋白水解酶基因的转录水平都增强表达.这些结果表明Xcc的胞外蛋白水解酶是一个重要的致病因子. 展开更多
关键词 柑橘黄单胞柑橘亚种 胞外蛋白水解酶 致病力 生物膜
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柑桔溃疡病菌检测用阳性物质的制备研究
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作者 骆卫峰 赵晓丽 +5 位作者 宫凤影 高文娜 郑春生 王强 乔彩霞 边勇 《中国口岸科学技术》 2022年第S02期24-29,共6页
本研究通过培养阳性菌株,提取其核酸后制备了一种柑桔溃疡病菌检测用阳性物质,该阳性物质为冻干样品,具有均匀、稳定、易于保存、可常温运输的优点.对制备阳性物质进行了均匀性检测、稳定性检测以及协同实验.检测结果表明,所制备阳性物... 本研究通过培养阳性菌株,提取其核酸后制备了一种柑桔溃疡病菌检测用阳性物质,该阳性物质为冻干样品,具有均匀、稳定、易于保存、可常温运输的优点.对制备阳性物质进行了均匀性检测、稳定性检测以及协同实验.检测结果表明,所制备阳性物质的均匀性和稳定性良好,可用于柑桔溃疡病菌检测技术的质量控制、检测试剂的验证和评价以及实验室能力验证活动. 展开更多
关键词 柑桔溃疡病菌 阳性物质 核酸 质量控制
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利用EMS诱变获得抗溃疡病甜橙突变体的研究 被引量:1
12
作者 罗丽 李益 +2 位作者 葛红娟 谢玉明 邓子牛 《湖南农业科学》 2015年第3期1-4,共4页
研究以大红甜橙实生苗上胚轴为试材,采用甲基磺酸乙酯(EMS)对其节间茎段进行诱变处理,通过用不同浓度溃疡病菌粗提物进行离体筛选,以确定适宜的抗溃疡病选择压,并获得抗溃疡病突变体材料。结果表明,以1.8%的EMS溶液浸泡节间茎段2 h可获... 研究以大红甜橙实生苗上胚轴为试材,采用甲基磺酸乙酯(EMS)对其节间茎段进行诱变处理,通过用不同浓度溃疡病菌粗提物进行离体筛选,以确定适宜的抗溃疡病选择压,并获得抗溃疡病突变体材料。结果表明,以1.8%的EMS溶液浸泡节间茎段2 h可获得"半致死"效应;溃疡病菌粗提物浓度为4%时为适宜的抗病选择压。对1 030个再生不定芽进行两次不连续离体筛选,再经离体接种溃疡病菌鉴定后获得35个抗性芽,成活率为3.4%。该试验初步获得抗溃疡病粗提物的大红甜橙突变体株系23株,为后续进一步研究提供材料基础。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 甲基磺酸乙酯 粗提物 抗病突变体 离体筛选
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柑橘溃疡病菌gpd1基因在致病性中的功能分析 被引量:1
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作者 葛宗灿 阎依超 +5 位作者 张翠萍 李生樟 杨瑞环 李逸朗 陈功友 邹丽芳 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期670-680,共11页
甘油作为微生物重要的能量来源及抗逆因子,对其生存具有重要作用。gpd1基因编码甘油-3-磷酸脱氢酶(glycerol-3-phosphate dehydrogenase,G3PDH),是甘油合成代谢途径中关键的限速酶。本研究分析了gpd1基因在柑橘溃疡病菌(Xanthomonas cit... 甘油作为微生物重要的能量来源及抗逆因子,对其生存具有重要作用。gpd1基因编码甘油-3-磷酸脱氢酶(glycerol-3-phosphate dehydrogenase,G3PDH),是甘油合成代谢途径中关键的限速酶。本研究分析了gpd1基因在柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)致病性中的功能。对Xcc强毒菌株Xcc021和弱毒菌株Xcc049E分别进行了gpd1的缺失突变,发现gpd1缺失仅影响强毒菌株Xcc021在感病柑橘寄主上的毒性以及gpd1缺失影响Xcc在营养贫乏培养基中的生长能力,功能互补子能够恢复毒性和生长能力至野生型水平。其他毒性相关表型显示:与野生型Xcc021相比,gpd1突变体菌体的沉降能力增加,游动性降低,生物膜形成能力增强,功能互补子能够恢复这些表型至野生型水平。这表明gpd1基因在强毒菌株中是重要的毒性因子,其涉及的甘油代谢途径可能在强弱毒菌株对于寄主柑橘的毒性具有不同的作用。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病菌 gpd1基因 毒性 生物膜 细菌游动性
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基于微卫星技术的赣南脐橙溃疡病菌遗传多样性分析
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作者 赖爱萍 易龙 +2 位作者 黄爱军 苏华楠 赵培娅 《中国南方果树》 北大核心 2016年第2期28-32,37,共6页
在赣南18个县(市、区)收集到508份柑桔溃疡病菌样品,采用已报道的柑桔溃疡病菌A菌系306菌株(GenBankAccessionno.AE008923)基因组上的14个SSR位点分析遗传多样性。从14个SSR位点中,筛选出用于赣南地区溃疡病菌种群多样性研究的SS... 在赣南18个县(市、区)收集到508份柑桔溃疡病菌样品,采用已报道的柑桔溃疡病菌A菌系306菌株(GenBankAccessionno.AE008923)基因组上的14个SSR位点分析遗传多样性。从14个SSR位点中,筛选出用于赣南地区溃疡病菌种群多样性研究的SSR位点7个(XL1、XL2、XL3、XL4、XL5、XL8和XL7),测试得到的Nei’s基因多样性指数在0.66-O.83之间。通过这7个位点分析赣南不同地域的样品发现,大余县样品的遗传多态性最高,定南县样品的遗传多态性最低。采用Structure3.25和PowerMarker2.3.4软件聚类分析发现,赣南18县(市、区)的柑桔溃疡病菌样品分成两个组群,且某些县(区)群体结构构成单一。其中,信丰、定南和章贡区样品群体属于同一组群,兴国和会昌样品群体属于另一组群,其他县(区)样品群体则是由两个组群菌株按不同比例混合构成。 展开更多
关键词 赣南 柑桔黄单胞菌柑桔亚种 遗传多样性 微卫星技术
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超量表达CsGH3.6通过抑制生长素信号转导增强柑橘溃疡病抗性 被引量:8
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作者 邹修平 龙俊宏 +3 位作者 彭爱红 陈敏 龙琴 陈善春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第21期3806-3818,共13页
【背景】由柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)引起的柑橘溃疡病是柑橘生产上最具毁灭性的一种病害。植物生长素在调控柑橘溃疡病菌引起的寄主侵染部位脓疱形成中起重要作用。生长素早期响应基因GH3通过酰基化... 【背景】由柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)引起的柑橘溃疡病是柑橘生产上最具毁灭性的一种病害。植物生长素在调控柑橘溃疡病菌引起的寄主侵染部位脓疱形成中起重要作用。生长素早期响应基因GH3通过酰基化吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid,IAA)调控植物激素动态平衡。前期研究发现柑橘CsGH3.6在调控生长素响应溃疡病侵染中起着重要作用。【目的】通过对超量表达CsGH3.6转基因晚锦橙的抗病性、植株表型、细胞和激素变化进行分析,利用RNA-Seq解析CsGH3.6调控的信号通路,探明CsGH3.6调控激素动态平衡影响柑橘溃疡病抗性的内在机制。【方法】利用针刺法对离体转基因叶片接种溃疡病菌Xcc,统计接种第10天时病斑面积和病情指数,以野生型为对照,评价转基因植株的抗性水平;提取感病前后叶片内源激素,利用高效液相色谱技术(high performance liquid chromatography,HPLC)检测转基因植株中激素含量变化;温室中观察转基因植株表型变化;通过测量叶片纵径、横径和厚度分析转基因植株叶型变化特征;制备叶片表皮切片,显微观察表皮细胞和气孔,并统计转基因植株表皮细胞长度和气孔密度;采用RNA-Seq测序技术研究转基因植株转录组变化情况,并利用Nr、Nt、Pfam、COG、SwissProt和gene ontology(GO)数据库注释基因功能,进一步利用KEEG数据库和MapMan软件解析超量表达CsGH3.6影响的重要基因、功能和途径,阐明CsGH3.6调控柑橘溃疡病抗性的分子机制。【结果】超量表达CsGH3.6显著增强转基因植株的溃疡病抗性;转基因植株分枝增多且下垂,叶片向上卷曲,变小,颜色浅;转基因植株气孔密度增加,表皮细胞变短;激素含量分析显示,转基因植株自由生长素(IAA)和茉莉酸(jasmonic acid,JA)含量显著降低,而水杨酸(salicylic acid,SA)含量显著增加;转录组测序分析表明,超量表达CsGH3.6显著抑� 展开更多
关键词 柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种 柑橘溃疡病 生长素 CsGH3.6 抗病性
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柠檬叶片溃疡病菌的分离鉴定及室内防治药剂筛选 被引量:5
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作者 李亚 蔡永军 +3 位作者 余沁涵 孔少连 周晓晴 张颖荷 《中国农学通报》 2021年第24期146-153,共8页
为了明确湛江地区柑橘溃疡病的病原类型并筛选出高效的防治药剂。以柠檬病叶为材料,用组织分离法对病样进行病原菌分离鉴定后,通过抑菌圈法测定了5种常用药剂对该病原菌的室内毒力。典型菌株zlm1908在NA培养基上菌落呈蜡黄色,圆形,全缘... 为了明确湛江地区柑橘溃疡病的病原类型并筛选出高效的防治药剂。以柠檬病叶为材料,用组织分离法对病样进行病原菌分离鉴定后,通过抑菌圈法测定了5种常用药剂对该病原菌的室内毒力。典型菌株zlm1908在NA培养基上菌落呈蜡黄色,圆形,全缘,有光泽,微隆起,黏稠,回接健康柠檬叶片后能产生明显的溃疡病斑,结合生理生化反应特点和特异性引物扩增序列分析确定菌株zlm1908为柑橘黄单胞柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)。5种药剂对菌株zlm1908的EC50值分别为18.45 g/L、14.99 g/L、5.28 g/L、14.60 g/L和32.81 g/L。从EC50的大小可以看出5种杀菌剂中枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,其次为中生菌素,碱式硫酸铜和氢氧化铜,氯溴异氰尿酸抑制作用最弱。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病菌 病原鉴定 杀菌剂 毒力测定
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利用激光共聚焦扫描显微镜对溃疡病菌侵染柑橘叶片的实时观察 被引量:5
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作者 赵亚 马先锋 +3 位作者 肖翠 刘利平 李娜 邓子牛 《激光生物学报》 CAS 2017年第2期143-150,共8页
柑橘溃疡病对柑橘产业造成了巨大损失,而研究柑橘与溃疡病菌的互作关系以及柑橘的感病和抗病性均需要观察溃疡病菌在柑橘寄主中的侵染和定殖过程。激光共聚焦扫描显微镜不仅可以观察活细胞,活组织的动态代谢过程,而且可以获得三维图像,... 柑橘溃疡病对柑橘产业造成了巨大损失,而研究柑橘与溃疡病菌的互作关系以及柑橘的感病和抗病性均需要观察溃疡病菌在柑橘寄主中的侵染和定殖过程。激光共聚焦扫描显微镜不仅可以观察活细胞,活组织的动态代谢过程,而且可以获得三维图像,对于病原菌在柑橘植物组织内的繁殖和致病机制研究具有重要意义。但是,选择适宜的植物材料和制片方法对激光共聚焦扫描显微镜的观察效果影响很大。本文对激光共聚焦扫描显微镜所观察的材料在其处理和观察方法上加以改进,获得了质量更好的图片和实验结果,也使得实验更为方便快捷。激光共聚焦扫描显微观察还在瞬时表达分析中得到应用,提高了柑橘瞬时表达分析的效果。通过将切片和压片相结合观察到溃疡病菌在不同时间点对柑橘叶片的侵染情况,而通过3D建模能观察到柑橘叶片不同组织层面中的病菌数量和病菌位置,为研究溃疡病菌在叶片中的定殖方式和入侵数量提供了前期基础。 展开更多
关键词 激光共聚焦显微镜 柑橘溃疡病菌 入侵
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柑橘Rboh家族鉴定及其对激素和柑橘溃疡病的响应 被引量:5
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作者 秦秀娟 祁静静 +3 位作者 窦万福 陈善春 何永睿 李强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第20期4189-4203,共15页
【目的】活性氧(reactive oxygen species,ROS)是植物抗病反应中重要的信号分子,而Rboh是参与活性氧产生的关键酶之一。本研究通过鉴定和分析柑橘全基因组中Rboh基因家族生物信息学特性、生物胁迫相关植物激素和溃疡病菌(Xanthomonas ci... 【目的】活性氧(reactive oxygen species,ROS)是植物抗病反应中重要的信号分子,而Rboh是参与活性氧产生的关键酶之一。本研究通过鉴定和分析柑橘全基因组中Rboh基因家族生物信息学特性、生物胁迫相关植物激素和溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)侵染诱导下表达模式,为研究Rboh基因家族与柑橘抗溃疡病过程的相关性,进一步研究和利用柑橘Rboh基因打下基础。【方法】利用过氧化物酶数据库RedOxiBase和柑橘(甜橙)CAP数据库获得柑橘Rboh家族序列信息;利用生物信息学软件对CsRboh进行理化性质、系统进化关系、染色体定位、基因结构、蛋白功能结构域、保守基序和启动子元件系统分析。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析植物激素水杨酸(salicylic acid,SA)、茉莉酸(jasmonic acid,JA)、脱落酸(abscisic acid,ABA)和溃疡病菌处理下CsRboh表达模式。【结果】鉴定得到7个柑橘Rboh家族成员(CsRboh01—CsRboh07),其编码蛋白包含784—946个不等的氨基酸残基,等电点(PI)分布在8.67—9.40,主要定位于细胞膜结构和细胞质。根据系统进化树可将柑橘Rboh家族划分为I—IV 4个亚家族。CsRboh家族基因不均匀分布在甜橙的5条染色体,均含有典型的呼吸爆发NADPH氧化酶结构域(NADPHOx)、铁还原酶跨膜组件(Ferricreduct)、FAD结合结构域(FADbinding)和铁还原酶NAD结合结构域(NADbinding)4个功能结构域。CsRboh家族各基因的启动子区域含不同激素响应元件,数目和类型各有差异。qRT-PCR结果显示CsRboh基因家族各成员可响应激素和溃疡病菌诱导,在不同激素和溃疡病菌处理下感病品种晚锦橙和抗病品种四季橘中表达模式具有差异。结合系统进化树聚类分析、同源基因功能研究及其启动子区域顺式作用元件分析发现,CsRboh02、CsRboh04和CsRboh06在抗、感两个品种中受柑橘溃疡病菌诱导表现出明显不同的表达趋势和表达量。【结论 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 Rboh家族 柑橘溃疡病菌 水杨酸 茉莉酸
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转录因子CsWRKY61对柑橘溃疡病抗性的影响 被引量:4
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作者 龙琴 杜美霞 +3 位作者 龙俊宏 何永睿 邹修平 陈善春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1556-1571,共16页
【背景】柑橘溃疡病(citrus bacterial canker,CBC)是世界柑橘产业上危害最严重的病害之一,由柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)引起,在国内外被列为检疫对象。由于柑橘分子病理研究相对滞后,导致可供利用的... 【背景】柑橘溃疡病(citrus bacterial canker,CBC)是世界柑橘产业上危害最严重的病害之一,由柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)引起,在国内外被列为检疫对象。由于柑橘分子病理研究相对滞后,导致可供利用的抗性基因资源相对匮乏。WRKY转录因子参与植物抵御生物和非生物胁迫反应,前期研究发现柑橘WRKY转录因子可能在调控寄主抗病反应中起着重要作用。【目的】通过对超量表达CsWRKY50、CsWRKY61和CsWRKY72转基因晚锦橙(Citrus sinensis)的溃疡病抗性进行评价,明确这些基因在柑橘响应溃疡病菌侵染中的生物学功能和抗病育种价值。进一步利用RNA-Seq解析CsWRKY61调控的信号通路。【方法】利用农杆菌介导法进行柑橘遗传转化,获得超量表达CsWRKY50、CsWRKY61和CsWRKY72的晚锦橙;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析转基因植株中目的基因的表达水平以及拷贝数;以非转基因植株为对照,采用离体针刺接种评价转基因植株对溃疡病的抗性;通过比较超量表达CsWRKY61和野生型植株的转录组测序结果,探究CsWRKY61提高柑橘溃疡病抗性的内在机制。【结果】分别构建了CAMV 35S启动子控制CsWRKY50、CsWRKY61和CsWRKY72表达的植物表达载体,通过GUS组织化学染色和PCR鉴定分别获得了6、8和6株转基因晚锦橙。转基因植株中目的基因的表达量有不同程度的提高,大部分转基因植株中外源基因的拷贝数为1,只有超量表达CsWRKY61的转基因植株溃疡病抗性显著增强,其病斑面积明显小于野生型植株,而超量表达CsWRKY50和CsWRKY72的转基因植株抗病性与野生型相比无明显差异。转录组分析结果显示,超量表达CsWRKY61的转基因植株中生物胁迫相关途径(包括病原入侵的感知、活性氧爆发、转录因子、防御基因、激素、细胞壁和次生代谢等)和信号转导相关途径(主要是激酶受体)均被显著激活。【结论� 展开更多
关键词 柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种 柑橘溃疡病 CsWRKY61 超量表达 抗病性 转录组测序
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GST pull-down联合LC-MS/MS筛选柑橘抗溃疡病转录因子CsBZIP40的互作蛋白 被引量:4
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作者 窦万福 祁静静 +7 位作者 胡安华 陈善春 彭爱红 许兰珍 雷天刚 姚利晓 何永睿 李强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期2243-2255,共13页
【目的】CsBZIP40是一个与溃疡病抗性相关的转录因子,本研究旨在筛选转录因子CsBZIP40在响应柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)侵染过程中的互作蛋白,对CsBZIP40的互作网络进行分析,为柑橘抗溃疡病的分子育种提供理论... 【目的】CsBZIP40是一个与溃疡病抗性相关的转录因子,本研究旨在筛选转录因子CsBZIP40在响应柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)侵染过程中的互作蛋白,对CsBZIP40的互作网络进行分析,为柑橘抗溃疡病的分子育种提供理论依据。【方法】采用GST pull-down技术筛选柑橘在溃疡病菌侵染过程中CsBZIP40的互作蛋白。首先,构建带有GST标签的CsBZIP40蛋白融合表达载体,经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达、纯化后获得GST-CsBZIP40融合蛋白作为诱饵蛋白;然后,将GST-CsBZIP40融合蛋白固定在谷胱甘肽亲和磁珠上,用固定在亲和磁珠的GST-CsBZIP40诱饵蛋白与接种溃疡病菌或LB培养基后柑橘叶片总蛋白进行孵育,与GST-CsBZIP40诱饵蛋白结合的蛋白复合物洗脱收集后进行SDS-PAGE凝胶电泳验证。将验证成功的样品洗脱液进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测,鉴定出未侵染和侵染状态下CsBZIP40的互作蛋白,将检测到的蛋白利用甜橙基因组数据库进行注释,筛选出在溃疡病菌侵染过程中与CsBZIP40特异结合的蛋白,并进行GO、KEGG和互作网络分析。【结果】过表达CsBZIP40的转基因植株表型正常,与对照植株无明显差异。过表达CsBZIP40的转基因植株溃疡病抗性评价中病斑面积、病情指数均显著小于野生型植株,分别为野生型的45%和54%。以该转基因植株为材料成功提取出侵染溃疡病菌后和未接种溃疡病菌状态下的柑橘叶片总蛋白。成功构建出GST-CsBZIP40诱饵蛋白表达载体,诱导表达纯化出GST-BZIP40诱饵蛋白。利用GST-CsBZIP40诱饵蛋白从侵染溃疡病菌后柑橘总蛋白和未接菌柑橘总蛋白中成功钓取蛋白,并用LC-MS/MS检测。经过比对、注释和筛选,在柑橘溃疡病菌侵染过程中与GST-BZIP40特异结合的蛋白有53个,这些蛋白参与多个分子功能和通路。在这53个蛋白中,有6个蛋白(Cs1g02310、Cs3g05280、Cs3g23950、Cs6g13880、Cs7g1213 展开更多
关键词 柑橘 柑橘溃疡病 柑橘溃疡病菌 BZIP GST pull-down 互作蛋白
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