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高比活木聚糖酶XYN-W及其突变体在酵母中的高效表达
被引量：
3
1
作者
罗建杰
王亚茹
+5 位作者
袁铁铮
柏映国
黄火清
罗会颖
姚斌
范云六
《中国农业科技导报》
CAS
CSCD
2010年第5期80-85,共6页
将来源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整合到毕赤酵母表达载体pPIC9上,通过电击转化得到重组转化子。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,木聚糖酶基因xyn-w得到了高效分泌表达,在5 L发酵罐中木聚糖酶蛋...
将来源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整合到毕赤酵母表达载体pPIC9上,通过电击转化得到重组转化子。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,木聚糖酶基因xyn-w得到了高效分泌表达,在5 L发酵罐中木聚糖酶蛋白表达量达到1 mg/mL,酶活性达到13 000 IU以上。XYN-W的C端57个氨基酸序列为连接序列和锚定区域,利用PCR方法将此段序列去除,得到截短的木聚糖酶序列xyn-m。用相同方法构建高效表达XYN-M蛋白的毕赤酵母工程菌株,表达产物经纯化后进行酶学性质测定,结果表明,其比活为19 856.6 IU/mg,Kcat值为4 433.8 s-1,与纯化的XYN-W蛋白(比活性13 795.3 IU/mg、Kcat值2 717.1 s-1)相比,分别提高了43.9%和63.2%。
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关键词
木聚糖酶
毕赤酵母
xyn
-
w
高效表达
比活性改良
下载PDF
职称材料
题名
高比活木聚糖酶XYN-W及其突变体在酵母中的高效表达
被引量：
3
1
作者
罗建杰
王亚茹
袁铁铮
柏映国
黄火清
罗会颖
姚斌
范云六
机构
中国农业科学院饲料研究所
中国农业科学院生物技术研究所
出处
《中国农业科技导报》
CAS
CSCD
2010年第5期80-85,共6页
基金
国家863计划项目(2007AA100601)
国家肉鸡产业技术体系(nycytx-42-G2-05)资助
文摘
将来源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整合到毕赤酵母表达载体pPIC9上,通过电击转化得到重组转化子。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,木聚糖酶基因xyn-w得到了高效分泌表达,在5 L发酵罐中木聚糖酶蛋白表达量达到1 mg/mL,酶活性达到13 000 IU以上。XYN-W的C端57个氨基酸序列为连接序列和锚定区域,利用PCR方法将此段序列去除,得到截短的木聚糖酶序列xyn-m。用相同方法构建高效表达XYN-M蛋白的毕赤酵母工程菌株,表达产物经纯化后进行酶学性质测定,结果表明,其比活为19 856.6 IU/mg,Kcat值为4 433.8 s-1,与纯化的XYN-W蛋白(比活性13 795.3 IU/mg、Kcat值2 717.1 s-1)相比,分别提高了43.9%和63.2%。
关键词
木聚糖酶
毕赤酵母
xyn
-
w
高效表达
比活性改良
Keywords
xylanase
Pichia pastoris
xyn
-
w
high-efficient expression
improvement of specific activity
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
高比活木聚糖酶XYN-W及其突变体在酵母中的高效表达
罗建杰
王亚茹
袁铁铮
柏映国
黄火清
罗会颖
姚斌
范云六
《中国农业科技导报》
CAS
CSCD
2010
3
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职称材料
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参考文献
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