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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的克隆化研究 被引量：7
1
作者 王春花 成军 +5 位作者 郎振为 刘妍 王建军 杨倩 纪冬 党晓燕 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2003年第3期229-232,共4页
目的　应用抑制性消减杂交 (SSH)技术筛选乙型肝炎病毒 (HBV)X蛋白 (HBxAg)反式激活基因 ,克隆HBxAg反式激活相关靶基因。方法　以HBxAg表达质粒pcDNA3 .1(-) X转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1(-)为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,提... 目的　应用抑制性消减杂交 (SSH)技术筛选乙型肝炎病毒 (HBV)X蛋白 (HBxAg)反式激活基因 ,克隆HBxAg反式激活相关靶基因。方法　以HBxAg表达质粒pcDNA3 .1(-) X转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1(-)为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaI酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将产物与PGEM Teasy载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析 ,发现其中之一为未知基因片段 ,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性。通过序列同源性搜索比对 ,电子拼接成功 ,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷信号序列 ,初步确定新型基因序列。从转染了pcDNA3 .1(-) X的HepG2细胞提取总RNA ,以RT PCR技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序加以证实。结果　发现的新基因命名为XTP3 ,在GenBank中注册 ,注册号为AF490 2 5 2。XTP3基因的编码序列全长为 10 2 0个核苷酸(nt) ,编码产物由 3 40个氨基酸残基 (aa)组成。结论　应用抑制性消减杂交技术成功筛选与克隆HBxAg反式激活新型靶基因XTP3 。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 X蛋白 反式激活 xtp3 基因克隆化 真核表达载体 细胞转染
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应用抑制性消减杂交技术筛选XTP3的反式激活基因 被引量：3
2
作者 王春花 成军 +3 位作者 闫惠平 闫杰 石英 程胜禹 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期127-129,共3页
目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库 ,克隆XTP3反式激活相关基因。方法　以XTP3表达质粒pcDNA3 1(- ) XTP3转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ;制备转染后的细胞裂... 目的　应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库 ,克隆XTP3反式激活相关基因。方法　以XTP3表达质粒pcDNA3 1(- ) XTP3转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaⅠ酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果　文库扩增后得到 30个白色克隆 ,经菌落PCR分析 ,得到 2 3个 2 0 0～ 10 0 0bp插入片段。对所得片段测序 ,并进行同源性分析 ,共得到 2 0种已知基因序列和 2种未知功能基因序列 ,可能是XTP3反式激活靶基因。结论　成功构建了乙型肝炎病毒XTP3反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 克隆 xtp3 反式激活
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新基因XTP3反式激活基因TPA的克隆化研究 被引量：1
3
作者 杨艳杰 成军 +4 位作者 陈东风 张黎颖 王春花 吴煜 王建军 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2005年第5期277-279,283,共4页
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库,克隆XTP3反式激活相关基因。方法:依据我室构建的HBV X蛋白反式激活基因XTP3差异表达的cDNA消减文库,利用生物信息学技... 目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)反式激活基因XTP3的差异表达的cDNA消减文库,克隆XTP3反式激活相关基因。方法:依据我室构建的HBV X蛋白反式激活基因XTP3差异表达的cDNA消减文库,利用生物信息学技术获得新基因XTP3TPA的编码序列,对其可能的氨基酸序列进行分析比较,并对其进行克隆化研究。结果:发现了HBV XTP3反式激活作用的新的靶基因,命名为XTP3TPA。结论:这一发现为阐明HBV XTP3蛋白的反式激活作用及其机制开辟了新的研究方向。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 克隆 xtp3 反式激活 反式激活基因 克隆化研究 xtp3 新基因 乙型肝炎病毒(HBV) CDNA消减文库 TPA 反式激活相关基因 HBVX蛋白
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