利用乳酸乳球菌AcmA表面展示β-1,3-1,4-葡聚糖酶 被引量：10

1

作者 李小华 黄新凤 +1 位作者 邵小虎 李林 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期89-94,共6页

采用PCR扩增乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)MB191菌株的全长肽聚糖水解酶基因acmA,通过C-末端融合构建了与绿色荧光基因gfp的融合基因acmA-gfp,再连接于表达载体pMG36k上后得到可组成型表达AcmA-GFP融合蛋白的重组质粒pMB137,然后将该... 采用PCR扩增乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)MB191菌株的全长肽聚糖水解酶基因acmA,通过C-末端融合构建了与绿色荧光基因gfp的融合基因acmA-gfp,再连接于表达载体pMG36k上后得到可组成型表达AcmA-GFP融合蛋白的重组质粒pMB137,然后将该质粒电转化导入到乳酸乳球菌AS1.2829中获得重组菌MB137。经SDS-PAGE检测,重组菌MB137可表达预期的分子量约74kD的蛋白质。Western blotting、细胞分级分离组分的荧光活性测定和特异GFP二抗标记的流式细胞仪检测证实GFP被成功锚定在重组菌细胞表面,被锚定蛋白约占总表达融合蛋白的35%。进一步通过从枯草芽胞杆菌BF7658基因组中扩增去信号肽序列的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因gls,来取代pMB137中的gfp,得到携带融合基因acmA-gls的重组质粒pMB138,经导入到乳酸乳球菌AS1.2829后得到重组菌MB138,其全细胞β-1,3-1,4-葡聚糖水解酶的活性约为12U/mL菌液,明显高于对照菌株。 展开更多

关键词 细胞表面展示 N-乙酰胞壁质酶 葡聚糖酶 全细胞催化剂

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固定化E.Coli JM109(pBR322-MAT)细胞催化合成S-腺苷蛋氨酸 被引量：9

2

作者 牛卫宁 左晓佳 +2 位作者 尚晓娅 丁焰 钦传光 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期38-41,43,共5页

通过PCR从大肠杆菌(E.Coli-K12)基因组DNA中扩增出甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)基因,构建了能高效表达MAT的重组大肠杆菌E.ColiJM109(pBR322-MAT)。选择海藻酸钙(CA)凝胶包埋固定化重组大肠杆菌,研究发现最佳ρ(CA)为20g/L的水溶液,最适细... 通过PCR从大肠杆菌(E.Coli-K12)基因组DNA中扩增出甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)基因,构建了能高效表达MAT的重组大肠杆菌E.ColiJM109(pBR322-MAT)。选择海藻酸钙(CA)凝胶包埋固定化重组大肠杆菌,研究发现最佳ρ(CA)为20g/L的水溶液,最适细胞包埋量为0.15 g(湿细胞)/mL(凝胶),连续反应5批次后固定化细胞酶活力为初始最高酶活力的91%。对于固定化细胞催化合成SAM,在最佳条件下底物ATP的转化率超过95%。 展开更多

关键词 固定化细胞 S-腺苷蛋氨酸 重组细胞 大肠杆菌 全细胞催化

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生物酶法制备生物柴油研究综述 被引量：8

3

作者 郑青荷 《江西林业科技》 2012年第1期59-61,共3页

就生物酶法制备生物柴油的研究现状进行了扼要概括,探讨了固定化脂肪酶法、液体酶法和全细胞催化法制备生物柴油的最新工艺进展。

关键词 生物酶 生物柴油 固定化脂肪酶 液体酶 全细胞

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疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的表面展示及酶学性质 被引量：6

4

作者 代敏 纪昌涛 +4 位作者 汪小锋 智晓燕 邵化 徐莉 闫云君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期857-865,共9页

【目的】构建疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)在毕赤酵母GS115中的细胞表面展示体系,筛选展示成功且酶活力及展示率较高的重组子作为全细胞催化剂,并研究其酶学性质。【方法】克隆TLL基因tll,以酿酒酵母细... 【目的】构建疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)在毕赤酵母GS115中的细胞表面展示体系,筛选展示成功且酶活力及展示率较高的重组子作为全细胞催化剂,并研究其酶学性质。【方法】克隆TLL基因tll,以酿酒酵母细胞壁蛋白Sed1p为锚定蛋白,构建表面展示载体pPICZαA-TLS。重组载体经SacⅠ线性化后转入毕赤酵母GS115中,经三丁酸甘油酯平板检测及摇甁发酵筛选获得高酶活力的毕赤酵母重组子,采用抗FLAG标签一抗和R-PE荧光素标记的二抗处理细胞后,进行荧光显微镜检测和流式细胞仪分析,并考察全细胞催化剂的最适反应温度和pH、金属离子耐受性等酶学性质。【结果】成功构建TLL毕赤酵母细胞表面展示体系,筛选到1株具有三丁酸甘油酯和橄榄油水解活力的克隆子,经1%的甲醇诱导发酵120 h后,水解橄榄油酶活力达257.8 U/g干细胞。经抗体处理后的重组菌发酵细胞在荧光显微镜下呈现强烈的红色荧光,流式细胞仪分析结果也证实脂肪酶被成功展示在酵母细胞表面,展示率达98.36%。展示的TLL作为全细胞催化剂水解对硝基苯酚丁酸酯(pNPB)的最适温度为30℃,最适pH为8.0,且具备良好的热稳定性和有机溶剂耐受性;K+、Ca2+、Mg2+对其有微弱的激活作用,Mn2+、Ni2+则有微弱的抑制作用,Cu2+的抑制作用较强,而EDTA、SDS、Tween 20对酶活力影响不明显。【结论】首次将TLL脂肪酶成功展示在毕赤酵母细胞表面,获得具有较高水解活力和良好酶学特性的全细胞催化剂,为表面展示TLL脂肪酶的规模化应用奠定了技术基础。 展开更多

关键词 疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶 毕赤酵母 表面展示 全细胞催化剂 酶学性质

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大肠杆菌全细胞转化联产L-2-氨基丁酸和D-葡萄糖酸 被引量：5

5

作者 张蔡喆 杨套伟 +4 位作者 周俊平 郑俊贤 徐美娟 张显 饶志明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2028-2034,共7页

以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主,构建两株分别表达L-苏氨酸脱氨酶(LTD,基因来源大肠杆菌)和共表达亮氨酸脱氢酶(LDH,来源蜡样芽孢杆菌)/葡萄糖脱氢酶(GDH,来源枯草芽孢杆菌)的重组大肠杆菌,在此基础上,构建了一种以L-苏氨酸和D-葡萄糖... 以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主,构建两株分别表达L-苏氨酸脱氨酶(LTD,基因来源大肠杆菌)和共表达亮氨酸脱氢酶(LDH,来源蜡样芽孢杆菌)/葡萄糖脱氢酶(GDH,来源枯草芽孢杆菌)的重组大肠杆菌,在此基础上,构建了一种以L-苏氨酸和D-葡萄糖为底物联产L-2-氨基丁酸(L-ABA)和D-葡萄糖酸的全细胞转化系统。通过转化条件(温度、p H、细胞通透性和菌体量)优化,并采用分批补料策略,164 g/L L-苏氨酸和248 g/L D-葡萄糖最终转化得到141.6 g/L的L-ABA和269.4 g/L的D-葡萄糖酸,时空得率分别达到7.1 g/(L?h)和13.5 g/(L?h),得率超过99%。本研究使用价格低廉的大宗化学品高效率生产出有较高附加值的产物,全细胞转化系统无需额外添加昂贵的辅酶,更适用于工业化生产。 展开更多

关键词 全细胞转化 L-2-氨基丁酸 D-葡萄糖酸 脱氨酶 脱氢酶

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利用N-乙酰葡糖胺糖苷酶在乳酸乳球菌表面展示超氧化物歧化酶 被引量：4

6

作者 黄新凤 李小华 李林 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期992-998,共7页

分别将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因(acmA)的信号肽序列(ss)、C-末端结构域(cA)及全长基因,与来自大肠杆菌(Escherichiacoli)的超氧化物歧化酶(SOD)基因sod构建成融合基因ss-cA-sod和acmA-sod,并连接于表达载... 分别将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因(acmA)的信号肽序列(ss)、C-末端结构域(cA)及全长基因,与来自大肠杆菌(Escherichiacoli)的超氧化物歧化酶(SOD)基因sod构建成融合基因ss-cA-sod和acmA-sod,并连接于表达载体pMG36K,然后导入乳酸乳球菌ATCC11454菌株,获得了能在细胞表面展示SOD的重组工程菌MB193和MB194。经SDS-PAGE验证,重组菌MB193和MB194可分别表达产生分子量约为46和64kD的融合酶蛋白cA-SOD和AcmA-SOD。通过黄嘌呤氧化酶法测定MB193和MB194菌株的全细胞Mn-SOD酶活力分别为(2.63±0.51)U/mL和(3.51±0.64)U/mL,明显高于仅在细胞内表达产生SOD的对照重组菌MB192的酶活性(1.53±0.38)U/mL,且表达融合酶AcmA-SOD的重组菌MB194具有最大的表面展示效率(56.4%)。 展开更多

关键词 细胞表面展示系统 N-乙酰葡糖胺糖苷酶 超氧化物歧化酶 全细胞催化剂

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三酶级联催化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸 被引量：4

7

作者 付妍 张君轩 +5 位作者 付雪蓉 解雨晨 任泓宇 刘佳 陈修来 刘立明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期782-791,共10页

L-2-氨基丁酸(L-ABA)是一种重要的化工原材料和手性医药中间体,为了实现L-ABA的高效生产,本研究在大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)中分别表达大肠杆菌来源的苏氨酸脱氨酶(Threonine deaminase,TD)、苏云金芽孢杆菌来源的亮氨酸脱氢酶(... L-2-氨基丁酸(L-ABA)是一种重要的化工原材料和手性医药中间体,为了实现L-ABA的高效生产,本研究在大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)中分别表达大肠杆菌来源的苏氨酸脱氨酶(Threonine deaminase,TD)、苏云金芽孢杆菌来源的亮氨酸脱氢酶(Leucine dehydrogenase,LDH)和博伊丁假丝酵母来源的甲酸脱氢酶(Formatedehydrogenase,FDH),构建体外级联酶催化反应实现L-苏氨酸向L-ABA的转化,体系中TD、LDH和FDH添加最适比例为1∶1∶0.2。为了简化生产工艺,将3种酶在一株菌E. coli 3FT+L中共表达并实现上述配比,在30 L发酵罐中用E. coli 3FT+L全细胞转化12 h,L-ABA的产量为68.5 g/L,底物L-苏氨酸的摩尔转化率达到99.0%。该工艺路线绿色高效,为未来大规模生产L-ABA提供借鉴。 展开更多

关键词 L-2-氨基丁酸 三酶级联 共表达重组菌 全细胞转化 L-苏氨酸

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酶法生产1,4-环己烷二甲胺

8

作者 韩业挺 何志震 +4 位作者 魏婉清 宋伟 刘立明 朱萌 吴静 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1882-1894,共13页

1,4-环己烷二甲胺(1,4-cyclohexanedimethylamine,1,4-BAC)作为重要的生物基材料单体,被广泛应用于有机合成、医药、化工和材料等多个领域。目前主要采用化学法合成,存在金属催化剂价格昂贵、反应条件苛刻和安全隐患等问题,亟须寻找更... 1,4-环己烷二甲胺(1,4-cyclohexanedimethylamine,1,4-BAC)作为重要的生物基材料单体,被广泛应用于有机合成、医药、化工和材料等多个领域。目前主要采用化学法合成,存在金属催化剂价格昂贵、反应条件苛刻和安全隐患等问题,亟须寻找更环保的合成替代方法。本研究利用大肠杆菌(Escherichia coli)来源的转氨酶(transaminase,Ec TA)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)来源的谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,Sc Glu-DH)和博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)来源的甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase,Cb FDH)成功构建了双菌三酶级联转化1,4-环己烷二甲醛生成1,4-环己烷二甲胺的路径。基于结构指导下的蛋白质工程改造,获得了有益突变体Ec TAF91Y,其比酶活和kcat/Km较野生型分别提升了2.2倍和1.9倍。通过重组菌株的构建和反应条件的优化,在最优条件下40 g/L底物可生成(27.4±0.9)g/L产物,摩尔转化率为67.5%±2.1%。 展开更多

关键词 1 4-环己烷二甲胺 三酶级联 蛋白质工程改造 全细胞转化 1 4-环己烷二甲醛

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异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达重组枯草芽孢杆菌的构建 被引量：3

9

作者 王亚盟 班睿 +1 位作者 刘露 申雨 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期54-65,共12页

【目的】构建异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达的重组枯草芽孢杆菌,探讨其作为全细胞催化剂合成D-对羟基苯甘氨酸的可行性。【方法】采用P_(aco)表达盒表达D-海因酶基因hyd或sd1,采用P_(AE)表达盒表达N-氨甲酰水解酶基因adc。分别以... 【目的】构建异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达的重组枯草芽孢杆菌,探讨其作为全细胞催化剂合成D-对羟基苯甘氨酸的可行性。【方法】采用P_(aco)表达盒表达D-海因酶基因hyd或sd1,采用P_(AE)表达盒表达N-氨甲酰水解酶基因adc。分别以质粒pHP13和pUB110为载体,构建D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达质粒pHCS、pHCY和pUCS。在受体菌中整合表达了acoR和sigL基因,敲除了skf和sdp基因。将共表达质粒分别转化不同的受体菌,通过测定全细胞催化活性,表征D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达的效果。【结果】带有质粒pHCY和pHCS的重组菌,全细胞催化活性分别为0.21 U/mL和0.31 U/mL。整合表达acoR和sigL基因以及高拷贝质粒pUCS,使全细胞催化活性达到1.0 U/mL。【结论】异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶在枯草芽孢杆菌中能够正确表达。基因拷贝数、acoR和sigL基因表达水平,及skf和sdp基因缺失对重组菌的催化活性具有显著影响。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 D-海因酶 N-氨甲酰水解酶 全细胞催化剂 D-对羟基苯甘氨酸

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毕赤酵母表面展示麦芽三糖生成酶全细胞催化制备麦芽三糖 被引量：2

10

作者 钱玲 郑一文 +1 位作者 林影 郑穗平 《食品科技》 CAS 北大核心 2020年第5期1-7,共7页

通过表面展示技术,得到一种不需纯化、能多次重复利用且成本较低的全细胞催化剂,用于制备麦芽三糖。以毕赤酵母细胞GPI型壁蛋白Gcw61p作为锚定蛋白,将Thermobifida fusca NTU22来源的麦芽三糖生成酶表面展示在巴斯德毕赤酵母细胞壁上,... 通过表面展示技术,得到一种不需纯化、能多次重复利用且成本较低的全细胞催化剂,用于制备麦芽三糖。以毕赤酵母细胞GPI型壁蛋白Gcw61p作为锚定蛋白,将Thermobifida fusca NTU22来源的麦芽三糖生成酶表面展示在巴斯德毕赤酵母细胞壁上,发酵冻干制成全细胞催化剂,测定酶活并分析其酶学性质及重复利用性。结果表明,表面展示菌株生长情况正常,酶活为260 U/g;最适温度为55℃,55℃保温1 h仍有95%残余酶活;最适pH为6.0;全细胞催化剂在重复利用3次的条件下,残余酶活还剩80%。在此基础上探究了全细胞催化剂用于制备麦芽三糖,结果表明,当底物为30%麦芽糊精时,糊精转化率为60.13%,麦芽三糖占比50.24%。研究结果为麦芽三糖的制备提供了一种思路。 展开更多

关键词 毕赤酵母 表面展示 全细胞催化剂 麦芽三糖生成酶 麦芽三糖

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黑曲霉全细胞生物催化制备没食子酸丙酯的研究 被引量：2

11

作者 裴建军 姚凌菱 +1 位作者 李迅 赵林果 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第6期52-56,共5页

利用黑曲霉(Aspergillus niger)细胞作为全细胞生物催化剂,研究了催化没食子酸生成没食子酸丙酯的条件,探讨了有机溶剂、细胞预处理、底物浓度、反应时间和水分含量等因素在酶催化没食子酸丙酯合成中的影响,结果表明,苯是最佳溶剂,而菌... 利用黑曲霉(Aspergillus niger)细胞作为全细胞生物催化剂,研究了催化没食子酸生成没食子酸丙酯的条件,探讨了有机溶剂、细胞预处理、底物浓度、反应时间和水分含量等因素在酶催化没食子酸丙酯合成中的影响,结果表明,苯是最佳溶剂,而菌丝体的含水量在80%时得率最高。在此基础上,选择菌丝量、没食子酸浓度、正丙醇体积分数和反应时间进行了正交试验,在200 r/min、40℃的转化条件下得到的较佳催化组合为:25 mL锥形瓶中加入10 mL苯、0.5 g菌丝、7 mmol(0.012 7 g)没食子酸、7.3%(0.73 mL)正丙醇组成的有机催化体系中,反应18 h,没食子酸丙酯得率达到36.4%。该过程无需要纯化或者固定化酶,实现了没食子酸丙酯低成本、高得率的催化。 展开更多

关键词 没食子酸丙酯 全细胞催化剂 有机催化 黑曲霉

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发酵乳杆菌C6全细胞催化剂的制备及产D-塔格糖催化条件优化 被引量：1

12

作者 邱露 彭帅英 李昆太 《中国酿造》 CAS 北大核心 2023年第3期179-186,共8页

以L-阿拉伯糖异构酶产生菌发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)C6为全细胞催化剂,对其发酵制备工艺以及生物转化D-塔格糖的催化反应条件和细胞透性化学处理方式进行优化。结果表明,菌株C6以最优培养基配方(葡萄糖10 g/L,酵母浸粉20 g/L... 以L-阿拉伯糖异构酶产生菌发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)C6为全细胞催化剂,对其发酵制备工艺以及生物转化D-塔格糖的催化反应条件和细胞透性化学处理方式进行优化。结果表明,菌株C6以最优培养基配方(葡萄糖10 g/L,酵母浸粉20 g/L,蛋白胨20 g/L,无水乙酸钠10 g/L,MgSO_(4)·7H_(2)O 0.4 g/L,MnSO_(4)·2H_(2)O 0.05 g/L,K_(2)HPO_(4)0.4 g/L,L-阿拉伯糖3 g/L,ZnSO_(4)·7H_(2)O 0.04 g/L,生物素100μg/L,焦磷酸硫胺素400μg/L)在最优发酵条件(发酵温度37℃、初始pH值7.5、装液量70 mL/150 mL、接种量1%)下培养24 h,生物量(OD_(600 nm)值=1.25)和L-阿拉伯糖异构酶酶活(107.81 U/mL)较优化前分别提高了92.31%和116.44%;全细胞催化剂在优化的催化反应条件(反应温度60℃、反应pH值7.5、Mn^(2+)10 mmol/L、底物浓度0.5 mol/L、底物加入体积2 mL,反应时间24 h)及细胞透性处理(20%丙酮处理60 min)方式下,D-塔格糖产率达45.07%。 展开更多

关键词 发酵乳杆菌C6 D-塔格糖 全细胞催化剂 D-塔格糖产率 透性化细胞

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不可降解塑料的全细胞催化降解及升级再造 被引量：2

13

作者 颜飞 董维亮 +1 位作者 崔球 刘亚君 《生物加工过程》 CAS 2022年第4期416-427,共12页

石油基塑料产量大、应用广,常见的种类有聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯等聚烯烃类塑料以及聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氨酯等聚酯类塑料。这些合成塑料分子量大、疏水性高,难以在自然环境中降解,因此大部分也被称作“不可降解塑料”。塑料的... 石油基塑料产量大、应用广,常见的种类有聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯等聚烯烃类塑料以及聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氨酯等聚酯类塑料。这些合成塑料分子量大、疏水性高,难以在自然环境中降解,因此大部分也被称作“不可降解塑料”。塑料的生物降解具有条件温和、应用潜力巨大的特点,塑料降解微生物和酶资源的挖掘以及新技术的开发方兴未艾,其中,基于全细胞催化降解与开环式升级再造技术受到越来越多的关注。本文介绍了国内外不可降解塑料全细胞催化转化技术的研究进展,阐述了对塑料废弃物天然全细胞降解体系和人工全细胞降解方法的开发情况,进而以聚对苯二甲酸乙二醇酯为例,探讨了塑料开环升级再造的技术策略,最后对塑料生物降解技术的研发方向和重点进行了讨论和展望。本文将为进一步开展塑料生物降解研究,挖掘塑料降解微生物资源,构建新型人工全细胞催化体系,最终实现不可降解塑料的高效降解和升级再造提供借鉴。 展开更多

关键词 生物降解 水解酶 聚对苯二甲酸乙二醇酯 嗜热底盘 全细胞催化剂 不可降解塑料

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具协同催化效应的毕赤酵母全细胞催化生物柴油制备 被引量：1

14

作者 李锚 贺珧珈 +2 位作者 徐莉 张后今 闫云君 《应用化工》 CAS CSCD 2014年第8期1403-1407,共5页

以表面共展示具协同催化效应的南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)与嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)重组毕赤酵母全细胞作为催化剂催化生物柴油制备,考察了生物柴油制备条件,并进行了初步... 以表面共展示具协同催化效应的南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)与嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)重组毕赤酵母全细胞作为催化剂催化生物柴油制备,考察了生物柴油制备条件,并进行了初步优化。结果表明,共展示CALB与TLL脂肪酶毕赤酵母全细胞在叔丁醇介质体系中可有效催化生物柴油制备。冻干酵母细胞量0.31 g/g油,醇油摩尔比4∶1,温度35℃,反应36 h,生物柴油得率达86.25%。 展开更多

关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 嗜热丝孢菌脂肪酶 表面展示 全细胞催化剂 生物柴油制备

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丝瓜络固定化米根霉催化光皮树油制备生物柴油 被引量：1

15

作者 纪淑兰 李迅 王飞 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第10期5381-5389,共9页

近年来,全细胞生物催化剂应用于生物柴油生产的研究引起了人们的极大关注,全细胞催化剂的制备过程可省去烦琐的酶纯化过程和降低催化剂的制备成本,且全细胞催化剂使用寿命较长。本研究对一株高产脂肪酶的米根霉进行了固定化研究,并将其... 近年来,全细胞生物催化剂应用于生物柴油生产的研究引起了人们的极大关注,全细胞催化剂的制备过程可省去烦琐的酶纯化过程和降低催化剂的制备成本,且全细胞催化剂使用寿命较长。本研究对一株高产脂肪酶的米根霉进行了固定化研究,并将其应用于生物柴油的制备。首先筛选不同的生物基固定化材料,探索其适宜的固定化条件,以获得的固定化米根霉作为全细胞催化剂催化光皮树油制备生物柴油,探讨了转酯化条件对生物柴油得率的影响。研究结果表明,丝瓜络作为固定化材料的固载率最高,以橄榄油作为碳源,多聚蛋白胨和NaNO作为复合氮源,获得的固定化细胞的固载率及脂肪酶活性最强。以丝瓜络固定化米根霉催化光皮树油,在含水量为10%、催化剂用量为12%的反应体系中,总醇油摩尔比为4∶1,甲醇分别在0h、10h、24h、40h以1∶1添加,甲酯得率可达94%以上。固定化全细胞重复使用6次后,转酯化效果依然保持在80%以上。 展开更多

关键词 全细胞催化剂 米根霉 丝瓜络 生物柴油 光皮树油

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全细胞生物催化麻疯树油制备生物柴油的研究 被引量：6

16

作者 李迅 李治林 +2 位作者 何晓云 王飞 蒋剑春 《现代化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第9期57-59,61,共4页

利用石油醚直接浸提法抽提得到含油率达到55·84%的麻疯树籽油作为原料,采用米根霉(Rhizopus oryzae)菌株和聚氨酯泡沫制备成固定化全细胞生物催化剂,通过对全细胞生物催化法制备生物柴油的主要工艺参数进行了优化,获得最佳工艺条件... 利用石油醚直接浸提法抽提得到含油率达到55·84%的麻疯树籽油作为原料,采用米根霉(Rhizopus oryzae)菌株和聚氨酯泡沫制备成固定化全细胞生物催化剂,通过对全细胞生物催化法制备生物柴油的主要工艺参数进行了优化,获得最佳工艺条件为:当甲酯化反应的醇油比为6:1,转酯化温度为35℃,转酯化体系中2%～20%质量分数的含水率,菌体量相当于油质量的4%,每12h加入一次甲醇的条件下转酯化效果最好,甲酯得率达到82·29%。同时固定化全细胞生物催化剂的重复使用性达4次,具有较高的催化性能。 展开更多

关键词 米根霉 麻疯树油 全细胞生物催化 生物柴油

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细胞表面显示技术在纤维素乙醇制备中的应用及挑战

17

作者 刘登 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期75-79,85,共6页

简单介绍了细胞表面显示技术的设计原理,归纳了细胞表面显示技术在纤维素乙醇生产中的技术优势和应用价值,重点讨论了细胞表面显示技术在纤维素乙醇制备中存在的技术障碍。最后,总结了细胞表面显示技术在纤维素乙醇生产中的实用意义,提... 简单介绍了细胞表面显示技术的设计原理,归纳了细胞表面显示技术在纤维素乙醇生产中的技术优势和应用价值,重点讨论了细胞表面显示技术在纤维素乙醇制备中存在的技术障碍。最后,总结了细胞表面显示技术在纤维素乙醇生产中的实用意义,提出了面临的问题并展望了其应用前景。 展开更多

关键词 纤维素乙醇 细胞表面显示技术 全细胞催化剂 酵母 综合生物工艺

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酿酒酵母表面展示NX1101蛋白酶全细胞催化剂制备火麻多肽

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作者 曲亚通 苏宇波 +7 位作者 王悦 高钢 赵浩含 陈佳 王晓飞 马智峰 朱爱国 陈继康 《中国麻业科学》 2024年第3期169-174,共6页

酶解法火麻肽制备具有安全性好、能耗低、营养损失小等优点。研究在综合脱脂火麻仁籽粕蛋白提取以及蛋白水解酶筛选的基础上,以穿梭质粒pYD1为表达载体,将源于牛肠道宏基因组文库中的蛋白水解酶NX1101锚定在酿酒酵母菌株(EYB100)表面,... 酶解法火麻肽制备具有安全性好、能耗低、营养损失小等优点。研究在综合脱脂火麻仁籽粕蛋白提取以及蛋白水解酶筛选的基础上,以穿梭质粒pYD1为表达载体,将源于牛肠道宏基因组文库中的蛋白水解酶NX1101锚定在酿酒酵母菌株(EYB100)表面,并以此重组菌株作为全细胞催化剂制备火麻多肽。酶学性质分析发现:该全细胞催化剂的最适反应pH值为8.0,在pH 8~10酶活稳定性较高,为耐碱性全细胞催化剂;其最适反应温度50℃,在50℃以下时酶活稳定性较高。脱脂火麻蛋白经表面展示表达NX1101的重组酵母全细胞催化剂酶解后,共获得1095个多肽,其中氨基酸数量≤10的短肽数量达140个。全细胞催化剂酶解效率相较常规酶解技术(以碱性蛋白酶粉剂为对照)增加6.5倍以上。 展开更多

关键词 火麻肽 蛋白水解酶 酶学性质 全细胞催化剂 表面展示

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全细胞催化剂pelB-Xln-DT构建及其在水解三七皂苷R1中的应用 被引量：2

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作者 李琦 童欣怡 +2 位作者 蒋玉洁 裴建军 赵林果 《林业工程学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期114-120,共7页

设计带有EcoRV和XhoI酶切位点的上下游引物PCR扩增嗜热菌Dictyoglomus thermophilum DSM 3960的GH39家族的β-木糖苷酶Xln-DT编码基因,利用基因拼接技术将其重组至p ET-20b质粒中pelB信号肽基因的下游,重组质粒转化大肠杆菌表达宿主Esch... 设计带有EcoRV和XhoI酶切位点的上下游引物PCR扩增嗜热菌Dictyoglomus thermophilum DSM 3960的GH39家族的β-木糖苷酶Xln-DT编码基因,利用基因拼接技术将其重组至p ET-20b质粒中pelB信号肽基因的下游,重组质粒转化大肠杆菌表达宿主Escherichia coli BL21,构建分泌融合表达型基因工程菌pelB-Xln-DT。经异苯基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,pelB-Xln-DT酶活为2.1 U/m L。粗酶液pelB-Xln-DT的最适温度为85℃,较原酶提高了10℃,最适p H为5.5,比原酶降低了0.5;pelB-Xln-DT在85℃下的热稳定性比原酶有了一定提高,保温1 h后酶活基本不变,保温2 h其剩余酶活为82.0%,而Xln-DT在85℃下保温1 h后其剩余酶活为70.4%;在p H 4.0~7.0的范围内,pelB-Xln-DT具有良好的p H稳定性。引入pelB信号肽后不但能够提高蛋白的可溶性表达,还能提高酶蛋白的热稳定性。以pelB-Xln-DT作为全细胞催化剂转化三七皂苷R1生成人参皂苷Rg1,研究了转化温度、转化时间、三七皂苷R1添加量、重复次数等因素对转化效率的影响。结果表明,全细胞催化剂用量1.0 U/m L,在温度37℃下,3 g/L的三七皂苷R1反应3 h后的摩尔转化率达到91.6%,重复利用10次后,转化率仍能达到46.7%,显示出pelB-Xln-DT良好的重复催化性能。 展开更多

关键词 全细胞催化剂 pelB信号肽 β⁃木糖苷酶 三七皂苷R1 人参皂苷RG1

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醋酸杆菌生物催化丙烯醛合成丙烯酸 被引量：2

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作者 王旭昌 宗红 +4 位作者 陆信曜 诸葛斌 方慧英 宋健 诸葛健 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期652-656,共5页

丙烯酸是一种重要的有机化工原料,主要用于合成树脂和丙烯酸酯,广泛应用于生产和生活的各方面.本文开展了利用微生物催化丙烯醛生产丙烯酸的研究.通过菌株筛选和ESI-MS验证,获得2株目的微生物,经鉴定比较发现Acetobacter sp.对丙烯醛的... 丙烯酸是一种重要的有机化工原料,主要用于合成树脂和丙烯酸酯,广泛应用于生产和生活的各方面.本文开展了利用微生物催化丙烯醛生产丙烯酸的研究.通过菌株筛选和ESI-MS验证,获得2株目的微生物,经鉴定比较发现Acetobacter sp.对丙烯醛的催化效率较高,在Acetobacter sp.细胞浓度15 g/L,初始底物浓度10 g/L,pH 6.8,30℃的条件下反应1 h,转化率可达88.0%,产物浓度达到11.32 g/L丙烯酸.同时,利用固定化细胞的方法提高反应对底物和产物的耐受性,经过2.5 h的反应,20 g/L的丙烯醛被催化成22.96 g/L丙烯酸,摩尔转化率为89.3%,固定化细胞重复利用6次后转化率仍可达到85.4%.利用Acetobacter sp.细胞催化生产丙烯酸,为丙烯酸的制备提供了一种新的可能. 展开更多

关键词 ACETOBACTER sp. 全细胞催化 丙烯醛 丙烯酸 固定化细胞

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