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利用Gateway克隆技术大规模克隆拟南芥转录因子 被引量:19
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作者 梅文倩 宋文强 +2 位作者 潘怡 巩威 朱玉贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第3期358-364,共7页
随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体... 随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体和宿主没有依赖性。本文利用Gateway大规模克隆技术将16个拟南芥转录因子的ORF克隆入植物表达载pPTV和酵母表达载体pYTV中,酵母融合表达实验和West-ern-blot检测证明了该克隆途径的可行性,并且得到的His-Tag融合蛋白,为拟南芥转录因子的大规模蛋白质组学研究奠定了良好的基础,同时基因序列的聚类分析为将来进一步的功能研究提供了有利信息。 展开更多
关键词 Gateway克隆技术 拟南芥 转录因子 聚类分析 功能基因组
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四种梅毒血清学检测方法的实验室评价 被引量:19
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作者 于柏峰 林永前 刘冰 《中国热带医学》 CAS 2003年第6期825-826,共2页
目的 比较四种梅毒血清学实验诊断方法的准确性及在临床的应用价值。 方法 应用甲苯胺红不加热血清试验 (TRUST) ,梅毒密螺旋体血凝试验 (TPHA) ,梅毒酶联免疫吸附试验 (TP~ELISA)及梅毒抗体蛋白印记法(Western -blot)检测 2 5 0例... 目的 比较四种梅毒血清学实验诊断方法的准确性及在临床的应用价值。 方法 应用甲苯胺红不加热血清试验 (TRUST) ,梅毒密螺旋体血凝试验 (TPHA) ,梅毒酶联免疫吸附试验 (TP~ELISA)及梅毒抗体蛋白印记法(Western -blot)检测 2 5 0例患者血清。 结果 TRUST方法特异性及灵敏度较低 ;Western -blot特异性为 10 0 % ,但敏感性较差 ;TPHA与ELISA两种方法在检测梅毒抗体时灵敏度与特异性都比较好 ,而且相当接近。 结论 ELISA法因其准确性及方法学的优势 。 展开更多
关键词 梅毒 血清学检测 实验室评价 甲苯胺红 梅毒密螺旋体血凝试验
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针灸对急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达的影响 被引量:17
3
作者 陈金生 宫庆娟 +4 位作者 黄秋兰 罗秀英 越宇 黄乔东 卢振和 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第15期2562-2565,共4页
目的:观察针灸对急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达的影响,初步探讨其治疗带状疱疹的机制。方法:选择急性带状疱疹患者25例,随机分为药物治疗组(P组,n=13)和针灸治疗组(A组,n=12),选择12例正常人作为对照。P组采用抗病毒、营养神经和镇痛... 目的:观察针灸对急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达的影响,初步探讨其治疗带状疱疹的机制。方法:选择急性带状疱疹患者25例,随机分为药物治疗组(P组,n=13)和针灸治疗组(A组,n=12),选择12例正常人作为对照。P组采用抗病毒、营养神经和镇痛药物治疗,A组在相同药物治疗基础上加针灸治疗。比较两组患者治疗前、治疗后7 d VAS评分和皮疹愈合时间;Western-blot法检测c-FLIP表达,比较正常对照组与急性带状疱疹患者及两组患者治疗前、后血液c-FLIP表达情况。结果:两组患者治疗后VAS评分较治疗前均明显减少(P<0.01),治疗后组间VAS评分比较差异无统计学意义,A组皮疹愈合时间短于P组(P<0.01);急性带状疱疹患者c-FLIP表达比正常人表达明显降低(P<0.01),A组治疗后较治疗前表达升高(P<0.01),P组治疗前、后表达无明显变化。结论:针灸可以调节急性带状疱疹患者血液c-FLIP表达,促进皮疹愈合。这可能是针灸治疗带状疱疹的细胞免疫机制之一。 展开更多
关键词 针灸疗法 疱疹 带状 C-FLIP 细胞免疫 western-blot
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嗜水气单胞菌单克隆抗体的制备及特性分析 被引量:11
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作者 陈红燕 林天龙 +2 位作者 陈日升 杨金先 陈强 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期121-125,共5页
利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了AHYT 1和AH105012株嗜水气单胞菌的菌体单抗,筛选出11个能稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的细胞株,并对这些单抗进行了特性分析。经单抗类型测定,这些单抗分属IgM、IgG2α2个亚类,且均具有ELISA反应特... 利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了AHYT 1和AH105012株嗜水气单胞菌的菌体单抗,筛选出11个能稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的细胞株,并对这些单抗进行了特性分析。经单抗类型测定,这些单抗分属IgM、IgG2α2个亚类,且均具有ELISA反应特性,腹水抗体效价在1∶104~1∶106,其中单抗4G4、2H4、GH9具有免疫荧光特性。ELISA特异性分析结果表明,4G4、2H4、FA4、GH9、CF2为嗜水气单胞菌血清型特异性单抗,4G4、2H4识别同一种血清型的嗜水气单胞菌分离株,而FA4、GH9、CF2却识别另外一种血清型的嗜水气单胞菌,并且与其他血清型的嗜水气单胞菌、温和气单胞菌以及鳗弧菌、爱德华氏菌、克鲁氏耶尔森菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌均不反应。Western blot结果表明,单抗4G4、2H4、FA4所针对的抗原是菌体脂多糖(LPS),且它们所识别的LPS抗原表位不同。菌体单抗研究结果表明,4G4、2H4和GH93株单抗可应用于嗜水气单胞菌的诊断和血清分型。本研究目的旨为建立一种快速诊断鱼类嗜水气单胞菌病的方法和血清分型方法。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 单克隆抗体 制备 特性分析 抗体效价 诊断 血清分型 鱼类
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蟹类主要过敏原的模拟肠胃液消化及其对过敏原活性的影响 被引量:13
5
作者 黄园园 刘光明 +3 位作者 周利亘 张凌晶 苏文金 曹敏杰 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期15-22,共8页
目的:通过模拟肠胃液消化试验,分析锯缘青蟹肌肉中过敏原(原肌球蛋白)的消化特性以及消化对过敏蛋白致敏性的影响。方法:采用美国药典提供的模拟胃、肠液配方,测定青蟹原肌球蛋白和肌原纤维蛋白在体外模拟肠胃环境中的消化稳定性。以十... 目的:通过模拟肠胃液消化试验,分析锯缘青蟹肌肉中过敏原(原肌球蛋白)的消化特性以及消化对过敏蛋白致敏性的影响。方法:采用美国药典提供的模拟胃、肠液配方,测定青蟹原肌球蛋白和肌原纤维蛋白在体外模拟肠胃环境中的消化稳定性。以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Western-blot)进行分析。结果:在模拟胃液反应中,非过敏原蛋白尤其是肌球蛋白重链和肌动蛋白等被胃蛋白酶快速降解,而原肌球蛋白在60min时仍未被完全分解。在模拟肠液反应中,相对于致敏蛋白,肌球蛋白重链、肌动蛋白等非过敏蛋白在较短的时间内被分解,原肌球蛋白尽管120min后几乎被完全分解,但会产生一些较稳定的蛋白降解片段。以免疫印迹法检测过敏患者血清,结果分子质量为34kDa的原肌球蛋白降解产物仍具有过敏原性。结论:蟹类过敏蛋白相对于非过敏蛋白具有较高的消化稳定性,而且其高分子质量降解产物仍可能引起过敏反应。 展开更多
关键词 锯缘青蟹 模拟肠胃液 原肌球蛋白 SDS—PAGE western-blot
原文传递
细粒棘球蚴重组抗原B的表达提取及其血清学检测初探 被引量:9
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作者 卢晓梅 温浩 +2 位作者 Alison FS 付玉才 Craig PS 《地方病通报》 2001年第3期14-16,共3页
用基因工程技术制备出的细粒棘球绦虫重组抗原 B( r Ag B)表达载体 ,经诱导表达、亲和层析纯化获得具生物活性的重组蛋白质 r Ag B,用 Western- Blot法检测病人血清。结果显示 r Ag B敏感性为 91.6% ( 4 4/48) ,特异性为 93 .8% ( 3 0 /... 用基因工程技术制备出的细粒棘球绦虫重组抗原 B( r Ag B)表达载体 ,经诱导表达、亲和层析纯化获得具生物活性的重组蛋白质 r Ag B,用 Western- Blot法检测病人血清。结果显示 r Ag B敏感性为 91.6% ( 4 4/48) ,特异性为 93 .8% ( 3 0 /3 2 ) ,其中 10例泡球蚴 ( AE)病人及 10例肿瘤病人血清均无交叉反应。说明 r Ag B具有较高的敏感性及特异性 ,可用于包虫病的常规血清学诊断 ,r Ag B在宿主菌 JM10 9内稳定表达 ,因此可在实验室内大量制备用于血清学诊断的 r Ag B。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 棘球蚴病 包虫病 重组抗原B western-blot 血清学试验
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桂枝茯苓胶囊对体外人宫颈癌Hela细胞抑制作用及机理研究 被引量:12
7
作者 黄燕芬 董改霞 +1 位作者 柴慧 袁小凤 《中华中医药学刊》 CAS 2010年第4期774-777,共4页
目的:研究桂枝茯苓胶囊对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用和作用机理的初步研究。方法:MTT比色法观察桂枝茯苓胶囊对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用;免疫组化检测Fas、Fas-L、Bcl-2基因的表达;western-blot和RT-PCR检测对人宫... 目的:研究桂枝茯苓胶囊对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用和作用机理的初步研究。方法:MTT比色法观察桂枝茯苓胶囊对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用;免疫组化检测Fas、Fas-L、Bcl-2基因的表达;western-blot和RT-PCR检测对人宫颈癌Hela细胞Caspase-3蛋白和Caspase-3MRNA的表达影响;DNA-Ladder检测凋亡条带。结果:桂枝茯苓胶囊对人宫颈癌Hela细胞有明显的抑制作用(P<0.01);桂枝茯苓胶囊能促进Fas、Fas-L表达,抑制Bcl-2的表达;能增加Hela细胞Capase-3的蛋白表达;琼脂糖凝胶电泳中呈现典型的"阶梯状"图谱。结论:桂枝茯苓胶囊有体外抗肿瘤作用,其机制可能是通过促进Fas、Fas-L表达、抑制bcl-2的表达;增加Capase-3的表达实现的。 展开更多
关键词 桂枝茯苓胶囊 宫颈癌Hela细腻 MTT westernblot 免疫组化
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TGF-β1基因修饰诱导脂肪干细胞成软骨分化的实验研究 被引量:9
8
作者 王洪林 闵繁红 +4 位作者 王岩峰 谢永 张金刚 栾洪佳 侯旭东 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第17期1347-1350,共4页
[目的]本研究通过选择对软骨细胞ECM合成具有促进作用的TGF-β1转染脂肪干细胞(ADSCs),观察转染后目的基因的稳定表达和对软骨细胞外基质(ECM)的两种重要组分:Ⅱ型胶原(typeⅡcollage,ColⅡ)和ag-grecan的合成,为构建新型的组织工程软... [目的]本研究通过选择对软骨细胞ECM合成具有促进作用的TGF-β1转染脂肪干细胞(ADSCs),观察转染后目的基因的稳定表达和对软骨细胞外基质(ECM)的两种重要组分:Ⅱ型胶原(typeⅡcollage,ColⅡ)和ag-grecan的合成,为构建新型的组织工程软骨提供实验依据。[方法]TGF-β1基因转染脂肪干细胞及阳性细胞克隆株的筛选;RT-PCR检测TGF-β1、纤连蛋白(fibronectin,FN)、ColⅡ、Aggrecan的表达;Western-blot检测TGF-β1。[结果]RT-PCR结果显示:实验组(TGF-β1稳定转染组)的TGF-β1、FN、ColⅡ、Aggrecan的表达较空染组和正常对照组均明显增多(P<0.01);Western blot检测实验组(TGF-β1稳定转染组)TGF-β1蛋白的表达较空染组和正常对照组均明显增多(P<0.01)。[结论]成功分离培养脂肪干细胞;以脂质体介导法将TGF-β1目的基因成功转染ADSCs,转染后成软骨分化的特异性细胞外基质增多,表明转染TGF-β1基因可以促使ADSCs向软骨细胞方向分化,从而为软骨组织工程提供新的思路和方法。 展开更多
关键词 转化生长因子β1(TGF-β1) 脂肪干细胞(ADSCs) 基因转染 RT—PCR westernblot
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致病性嗜水气单胞菌气溶素基因的克隆与高效表达 被引量:10
9
作者 卢强 李连瑞 +3 位作者 付宝权 吴秀萍 石建平 刘明远 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期21-23,共3页
根据 Gen Bank中致病性嗜水气单胞菌气溶素 (Aer)基因的序列设计引物 ,以国内嗜水气单胞菌分离株为模板 ,扩增出 Aer基因的全长序列。经 T载体克隆和序列测定 ,证实克隆了国内分离株的不含信号肽的 Aer全长基因。将该基因以正确的读码... 根据 Gen Bank中致病性嗜水气单胞菌气溶素 (Aer)基因的序列设计引物 ,以国内嗜水气单胞菌分离株为模板 ,扩增出 Aer基因的全长序列。经 T载体克隆和序列测定 ,证实克隆了国内分离株的不含信号肽的 Aer全长基因。将该基因以正确的读码框架与表达载体 p ET2 8b连接 ,经 IPTG诱导、SDS- PAGE检测 ,外源基因获得高效表达。诱导 4 h的培养物中 ,融合蛋白的表达占菌体总蛋白含量的 4 8.5 7%。 Western-印迹结果显示 ,利用纯化包涵体制备的兔抗血清可以很好地识别嗜水气单胞菌产生的天然毒素 。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 气溶素 表达 western-印迹法
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茶树花蕾14-3-3蛋白基因的分子克隆及差异表达分析 被引量:11
10
作者 余梅 江昌俊 +4 位作者 房婉萍 叶爱华 王朝霞 李叶云 朱林 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期2983-2991,共9页
【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达,了解茶树花蕾的发育机理,利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到... 【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达,了解茶树花蕾的发育机理,利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到花蕾发育晚期阶段特异表达的、在花蕾发育中可能起重要作用的14-3-3基因,通过RT-PCR和Western-blot方法研究该基因转录水平和蛋白质表达水平的特点。【结果】在测定的大约1110个茶树花蕾cDNA片段中,122个(10.9%)是差异性表达的,其中87个在发育晚期特异表达,包括茶树14-3-3蛋白基因(GenBank登录号:DQ444463),其全长为1072bp,包含1个由783个核苷酸组成的ORF,编码260个氨基酸,5′非翻译区和3′非翻译区分别有67和222个核苷酸,该基因与其它植物的14-3-3蛋白基因在核苷酸序列和推导的氨基酸序列方面均有着比较高的相似性。RT-PCR和Western-blot分析表明该基因在茶树的晚期发育花蕾中特异表达。【结论】14-3-3蛋白仅存在于茶树发育晚期的花蕾中。cDNA-AFLP技术能用于茶树花蕾不同发育时期的基因分离研究。 展开更多
关键词 茶树 差异表达基因 14-3-3蛋白 CDNA-AFLP western-blot
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新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:8
11
作者 赵干 马纪 +2 位作者 杨长庚 薛娜 张富春 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第2期25-27,共3页
目的:利用酵母Pichia pastoris 蛋白表达系统,表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白。方法:根据新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白(MPAFP5)基因序列设计引物,并分别在5’引物和3’引物中引入了EcoRI和SalI酶切位点,经PCR扩增MPAFP5基因成熟肽序列后与pG... 目的:利用酵母Pichia pastoris 蛋白表达系统,表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白。方法:根据新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白(MPAFP5)基因序列设计引物,并分别在5’引物和3’引物中引入了EcoRI和SalI酶切位点,经PCR扩增MPAFP5基因成熟肽序列后与pGEX4T-1载体相连,再将MPAFP5从pGEX4T-1 载体上切下亚克隆至穿梭质粒pGAPZαA上,获得的重组穿梭质粒pGAPZαA-MPAFP5,经线性化后采用电转化法将重组穿梭质粒转入酵母细胞SMD1168内,Zeocin+筛选鉴定重组子,小瓶发酵后取上清作SDS-PAGE检测,并用Western-blot检测表达蛋白的正确性。结果:MPAFP5成功地在酵母表达系统获得表达,Western-blot检测表明表达产物为准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白。结论:酵母表达系统能够高效表达准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白,为高密度发酵大量生产抗冻蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 准噶尔小胸鳖甲 抗冻蛋白 分泌表达 western-blot
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HSP60、HSP70、HSP90α在结直肠癌组织中的表达及其与病理组织学分级的关系 被引量:9
12
作者 张文利 高雪芹 +2 位作者 韩金祥 王国强 岳龙涛 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期612-618,共7页
背景与目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病的分子机制有待进一步阐明。目前,HSPs家族成员在某些恶性肿瘤的发生发展中的作用已有一些报道,但是这一家族成员HSP60、HSP70、HSP90α在结直肠癌组织中的表达还未见报道。本课题旨在... 背景与目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病的分子机制有待进一步阐明。目前,HSPs家族成员在某些恶性肿瘤的发生发展中的作用已有一些报道,但是这一家族成员HSP60、HSP70、HSP90α在结直肠癌组织中的表达还未见报道。本课题旨在研究结直肠癌组织中HSP60、HSP70、HSP90α的mRNA及其蛋白的表达,并分析其与病理分级的关系。方法:采用RT-PCR、免疫组化及Westernblot方法测定49例结直肠癌及其癌旁组织中HSP60、HSP70、HSP90α的表达;分析其与结直肠癌的病理组织学类型及分化程度的关系。结果:结直肠癌组织中HSP60、HSP70、HSP90αmRNA及蛋白的表达均显著高于相应的癌旁组织。癌组织较其癌旁组织HSP60、HSP70和HSP90α表达率及过表达率均有明显升高。在蛋白水平证明三种HSPs在癌组织中的表达明显高于癌旁组织。但是,HSP60、HSP70及HSP90α在结直肠癌高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌的表达率和过表达率差异均无统计学意义。Western-blot表明HSP60、HSP70、HSP90α在结直肠癌组织较癌旁组织中的表达也明显增高。结论:结直肠癌组织HSP60、HSP70、HSP90α三种基因的mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁组织,但是其与病理分级无相关关系。 展开更多
关键词 热休克蛋白 结直肠肿瘤 RT—PCR western blot 免疫组化 病理学
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实验性脑挫伤后caspase-1表达的研究 被引量:10
13
作者 陶陆阳 陈溪萍 +2 位作者 丁梅 李延阁 官大威 《法医学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期4-7,F003,共5页
目的阐明不同程度及不同时间脑挫伤后caspase-1表达的变化。方法应用免疫组织化学染色、Western-blotting和RT-PCR方法对48例实验性脑挫伤大鼠的脑组织进行了检验,同时以3例非脑挫伤和3例假手术的脑组织做对照。结果脑挫伤后1h caspase-... 目的阐明不同程度及不同时间脑挫伤后caspase-1表达的变化。方法应用免疫组织化学染色、Western-blotting和RT-PCR方法对48例实验性脑挫伤大鼠的脑组织进行了检验,同时以3例非脑挫伤和3例假手术的脑组织做对照。结果脑挫伤后1h caspase-1即有表达,24-48h达高峰,挫伤后两周caspase-1阳性细胞仍维持较高水平。阳性细胞多集中于挫伤区及周围带皮质和脑实质内海马区,不同程度脑挫伤各组之间阳性细胞面积存在差异;损伤组caspase-1酶原裂解增加;损伤组caspase-1mRNA表达量明显高于对照组;不同程度脑挫伤组之间于各个时间段caspase-1mRNA表达未见差异。 结论 Caspase-1表达增加,可辅助诊断1h-14d的脑挫伤,并可根据caspase-1阳性细胞面积的变化来确定脑挫伤程度,同时对判断挫伤时间方面也有一定的价值。caspase-1参与脑挫伤后的神经细胞凋亡。 展开更多
关键词 脑挫伤 CASPASE-1 免疫组织化学 western-blot RT-PCR 神经细胞 法医鉴定 细胞凋亡
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达氏鲟生长激素基因cDNA克隆、表达及免疫荧光定位研究 被引量:10
14
作者 单喜双 岳华梅 +3 位作者 陈细华 叶欢 杨晓鸽 李创举 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期307-314,共8页
为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone,GH)基因的功能,合成了达氏鲟垂体SMART c DNA,克隆得到GH全长c DNA序列。达氏鲟GH全长c DNA序列为1008 bp,由52 bp的5′端非编码区(Untranslated region,UTR)、编码214个氨... 为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone,GH)基因的功能,合成了达氏鲟垂体SMART c DNA,克隆得到GH全长c DNA序列。达氏鲟GH全长c DNA序列为1008 bp,由52 bp的5′端非编码区(Untranslated region,UTR)、编码214个氨基酸的645 bp开放阅读框(Open reading frame,ORF)和311 bp的3′UTR构成。运用GH氨基酸序列构建进化树分析发现,达氏鲟与两栖类、爬行类和哺乳类的一致性要高于真骨鱼类。实时荧光定量PCR结果表明,达氏鲟GH m RNA主要在垂体和下丘脑中表达,且垂体中GH的表达量约为下丘脑的110倍;Western-blot研究结果与q RT-PCR一致,仅在垂体和下丘脑中检测到生长激素蛋白,且垂体中GH的表达量远高于下丘脑。免疫荧光定位结果显示,GH主要定位于垂体中部,下丘脑中也有少量荧光信号;苏木精-伊红组织切片染色研究表明,GH主要是由嗜酸性的生长激素分泌细胞分泌。研究为深入研究脊椎动物生长激素基因的进化和人工养殖达氏鲟的生长调控提供了基础。 展开更多
关键词 达氏鲟 生长激素 q RT-PCR western-blot 荧光免疫组化
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Isolation and Molecular Characterization of High Molecular Weight Glutenin Subunit Genes 1Bx13 and 1By16 from Hexaploid Wheat 被引量:9
15
作者 Bin-Shuang Pang Xue-Yong Zhang 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2008年第3期329-337,共9页
The high molecular weight glutenin subunit (HMW-GS) pair 1Bx13+1By16 are recognized to positively correlate with bread-making quality; however, their molecular data remain unknown. In order to reveal the mechanism ... The high molecular weight glutenin subunit (HMW-GS) pair 1Bx13+1By16 are recognized to positively correlate with bread-making quality; however, their molecular data remain unknown. In order to reveal the mechanism by which 1By16 and 1Bx13 creates high quality, their open reading frames (ORFs) were amplified from common wheat Atlas66 and Jimai 20 using primers that were designed based on published sequences of HMW glutenin genes. The ORF of 1By16 was 2220bp, deduced into 738 amino acid residues with seven cysteines including 59 hexapeptides and 22 nanopeptides motifs. The ORF of 1Bx13 was 2385bp, deduced into 795 amino acid residues with four cysteines including 68 hexapeptides, 25 nanopeptides and six tripepUdes motifs. We found that 1By16 was the largest y-type HMW glutenin gene described to date in common wheat. The 1By16 had 36 amino acid residues inserted in the central repetitive domain compared with 1By15. Expression in bacteria and western-blot tests confirmed that the sequence cloned was the ORF of HMW-GS 1By16, and that 1Bx13 was one of the largest 1Bx genes that have been described so far in common wheat, exhibiting a hexapeptide (PGQGQQ) insertion in the end of central repetitive domain compared with 1Bx7. A phylogenetic tree based on the deduced full-length amino acid sequence alignment of the published HMW-GS genes showed that the 1By16 was clustered with Glu-1B-2, and that the 1Bx13 was clustered with Glu-1B-1 alleles. 展开更多
关键词 bacterial expression high molecular weight glutenin subunit 1Bx13 1By16 western-blot wheat.
原文传递
难治性癫痫患者脑组织内致痫灶与其周围组织P糖蛋白表达量的比较 被引量:9
16
作者 李建 姜德春 +3 位作者 张国君 蔡立新 朴月善 王育琴 《中国药物依赖性杂志》 CAS CSCD 2008年第3期182-186,共5页
目的:比较难治性癫痫患者手术切除脑组织致痫灶和灶旁组织P糖蛋白表达量的差异,探讨其在难治性癫痫发生过程中的作用,促进阐明难治性癫痫的耐药机制。方法:收集自2007年4月-2008年1月在首都医科大学宣武医院功能神经外科行"致痫灶... 目的:比较难治性癫痫患者手术切除脑组织致痫灶和灶旁组织P糖蛋白表达量的差异,探讨其在难治性癫痫发生过程中的作用,促进阐明难治性癫痫的耐药机制。方法:收集自2007年4月-2008年1月在首都医科大学宣武医院功能神经外科行"致痫灶切除术"的难治性癫痫患者,所有患者均在术前获得知情同意,术中使用神经电生理手段,区分致痫灶和灶旁组织;使用Western-blot蛋白分析技术定量检测P糖蛋白的表达量;用Image-J软件对蛋白条带进行分析,蛋白条带面积与灰度的乘积为分析指标;使用SPSS11·5进行配对t检验,分析其差异。结果:11例致痫灶内P糖蛋白与内参β-肌动蛋白(β-Actin)灰度和面积之积的比值(V-P/V-Actin)为0·69±s0·53,灶旁组织V-P/V-Actin为0·53±s0·39;P糖蛋白在致痫灶中表达量明显高于灶旁组织,P<0·05。结论:P糖蛋白在难治性癫痫患者脑组织致痫灶中的高表达,提示难治性癫痫耐药机制与P糖蛋白高表达相关。 展开更多
关键词 难治性癫痫 致痫灶 灶旁组织 P糖蛋白 western-blot
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鸭源呼肠孤病毒DRV-GZ株S2基因的序列分析及其表达 被引量:11
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作者 刘红 郁宏伟 +3 位作者 朱朝辉 吴志新 李苏芝 廖明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期224-228,共5页
采用RT-PCR方法从鸭源呼肠孤病毒DRV-GZ株中扩增出了S2基因片段,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,测序验证后转化入表达宿主菌RosettaTM2(DE3)plysS,进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达出相对分子质量约为50 000的重组融合蛋白,... 采用RT-PCR方法从鸭源呼肠孤病毒DRV-GZ株中扩增出了S2基因片段,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,测序验证后转化入表达宿主菌RosettaTM2(DE3)plysS,进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达出相对分子质量约为50 000的重组融合蛋白,在浓度为0.6 mmol/L的IPTG诱导4 h的情况下表达效果最好。表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。表达产物经Ni柱纯化后可得到纯度较高的目的蛋白。经Western-blot分析,所纯化的蛋白能与抗呼肠孤病毒DRV-GZ株阳性血清进行特异性的免疫印迹反应,证实表达的蛋白具有较好的反应原性。 展开更多
关键词 鸭源呼肠孤病毒 S2基因 克隆 原核表达 纯化 免疫印迹
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Runx3基因甲基化与大肠癌发生和转移的关系 被引量:11
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作者 袁权利 李华 +5 位作者 白净 王毅刚 刘建辉 李岩 杨琳 于柏龙 《中国综合临床》 北大核心 2007年第4期345-347,共3页
目的 探讨Runx3基因启动子甲基化与大肠癌发生发展过程的关系。方法 采用蛋白印迹技术(Western-Blot)检测30例大肠癌组织及肿瘤周围正常黏膜组织中Runx3mRNA的表达,同时用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Runx3基因启动子甲基化情况... 目的 探讨Runx3基因启动子甲基化与大肠癌发生发展过程的关系。方法 采用蛋白印迹技术(Western-Blot)检测30例大肠癌组织及肿瘤周围正常黏膜组织中Runx3mRNA的表达,同时用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果 30例大肠癌组织标本中Runx3基因的表达(6409.1042±298.2028)较肿瘤周围正常组织中表达明显下调(34565.3921±1108.2163),差异有统计学意义(P〈0.01)。正常黏膜组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化,30例大肠癌组织中有16例检测到Runx3基因启动子的甲基化,大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化率显著增高(P〈0.05)。大肠癌标本中Runx3蛋白的表达与其病理临床特征密切相关,在低分化和有淋巴结转移大肠癌组织标本中Runx3蛋白的表达显著下调(P〈0.05)。结论 Runx3基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,并且与大肠癌的发生发展密切相关。 展开更多
关键词 大肠癌 RUNX3基因 蛋白印迹技术 DNA甲基化
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麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western-blot鉴定 被引量:8
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作者 戎芳 王胜华 +5 位作者 赵小光 郭亮 魏琴 唐琳 徐莺 陈放 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期206-209,共4页
The proteins from endosperm, root, stem, leaf, leafstalk of Jatropha curcas L. and their calli were hybridized to the seed toxin protein (curcin) of Jatropha curcas L. by western blot. The result showed that the curci... The proteins from endosperm, root, stem, leaf, leafstalk of Jatropha curcas L. and their calli were hybridized to the seed toxin protein (curcin) of Jatropha curcas L. by western blot. The result showed that the curcin was specifically expressed in the endosperm and its calli, while it was not detected in root, stem, leaf, and leafstalk of Jatropha curcas L. and their calli . This study indicated that calli induced from endosperm can be used to produce curcin. 展开更多
关键词 毒蛋白 愈伤组织 外植体 麻疯树 树种 种子 抗病虫能力 中毒 体动 抗癌药物
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犬瘟热病毒的结构多肽分析 被引量:7
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作者 江国托 闫庆生 +1 位作者 刘长明 卢景良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1995年第12期5-7,共3页
差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化经鸡胚成纤维细胞蚀斑克隆后的犬瘟热毒S_8毒株,采用SDS-PAEG电泳及Westernblot转印技术详细分析了犬瘟热病毒的结构多肽。回收凝胶中1条63Kd的蛋白带,经3种不同的蛋白酶... 差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化经鸡胚成纤维细胞蚀斑克隆后的犬瘟热毒S_8毒株,采用SDS-PAEG电泳及Westernblot转印技术详细分析了犬瘟热病毒的结构多肽。回收凝胶中1条63Kd的蛋白带,经3种不同的蛋白酶消化后,首次证明在犬瘟热病结构多肽中,融合蛋白F多肽的两个亚单位(F_1和F_2)是以胰蛋白酶的特异性水解位点精氨酸为桥梁连接形成F多肽的。试验结果表明,犬瘟热病毒主要包括L(200.5Kd)、HA(74Kd)、P(68Kd)、F(63Kd)、NP(56Kd)、M(35Kd)等6条结构多肽,同时下蛋白可在电泳中裂解成F_1(41Kd)和F_2(27Kd)2个亚单位。试验还发现其它3条分子量分别为52Kd、44Kd、32Kd的病毒蛋白成分,它们是否均为病毒的结构多肽仍需深入研究。 展开更多
关键词 犬病 瘟病 病毒 结构多肽 蛋白亚单位 电泳
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