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HIV-1 Vpu蛋白的原核表达、鉴定和纯化 被引量:1
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作者 隋洪帅 贾磊 +5 位作者 韩婧婉 孙长荣 李天一 刘永健 李敬云 李林 《生物技术通讯》 CAS 2013年第4期474-477,共4页
目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Vpu蛋白,为其功能及免疫学研究奠定基础。方法:PCR扩增Vpu基因,纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得表达工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,免疫印迹鉴定目... 目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Vpu蛋白,为其功能及免疫学研究奠定基础。方法:PCR扩增Vpu基因,纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得表达工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,免疫印迹鉴定目的蛋白,亲和层析纯化蛋白。结果:构建了HIV-1 Vpu蛋白的原核表达载体Vpu-pET32a,并在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白呈可溶性形式存在,免疫印迹检测显示为目的蛋白,经Ni-NTAAgarose纯化获得了高纯度的目的蛋白。结论:在原核表达系统中表达了可溶性HIV-1 Vpu蛋白,为进一步进行HIV-1 Vpu蛋白的免疫原性和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒Ⅰ型 vpu蛋白 原核表达
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江苏省1例HIV长期无进展者体内病毒的序列特征和溯源分析
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作者 李雷 傅更锋 +5 位作者 还锡萍 丁建平 周莹 胡海洋 郭宏雄 羊海涛 《中国艾滋病性病》 CAS 北大核心 2016年第9期683-686,共4页
目的分析感染艾滋病病毒1型(HIV-1)后长期无进展者体内病毒的序列特征,探讨影响艾滋病疾病进程的病毒学因素。方法HIV-1病毒载量用HIV-1 Monitor Version 1.5版本试剂在AmplicorCobas上检测;CD4+T淋巴细胞计数用multitest四色试剂在FASC... 目的分析感染艾滋病病毒1型(HIV-1)后长期无进展者体内病毒的序列特征,探讨影响艾滋病疾病进程的病毒学因素。方法HIV-1病毒载量用HIV-1 Monitor Version 1.5版本试剂在AmplicorCobas上检测;CD4+T淋巴细胞计数用multitest四色试剂在FASCalibur上进行计数;HIV-1近全长序列用三对引物扩增后进行测序,用ContigExpress软件进行序列编辑和拼接;HIV-1亚型用在线的REGA HIV-1Subtyping Tool-Version 3.0软件分析;HIV-1的溯源用BEAST软件包,采用贝叶斯马尔可夫链-蒙特卡罗(MCMC)算法构建系统进化树,推断该HIV-1毒株在中国最初的流行时间和地区;将HIV-1各蛋白的序列提交到至SWISS-MODEL蛋白质同源建模数据库(http://swissmodel.expasy.org/interactive),构建蛋白质结构。结果该感染者在潜伏期体内的病毒载量处于较低水平(4.32×103拷贝/mL),外周血中CD4+T淋巴细胞在感染10年后仍然高于500个/μL,该感染者感染的病毒为B亚型,最初于1992年左右在我国河南省流行。该病毒编码的Vpu与参考株HBX2编码的Vpu蛋白相比,结构存在显著的差异,这种差异可能影响该蛋白的功能。结论该感染者为长期无进展者,Vpu蛋白功能的部分丧失可能与疾病的长期无进展有关。 展开更多
关键词 艾滋病病毒1型 长期无进展者 vpu蛋白
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HIV-1 Vpu蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化
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作者 王娇 刘伟 +2 位作者 胡秦 李泽琳 曾毅 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第4期339-343,共5页
目的在毕赤酵母中表达并纯化人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)辅助调节蛋白Vpu。方法从质粒p CDNA3.1-vphu中PCR扩增vphu基因,插入毕赤酵母表达载体p PICZαA,构建重组表达质粒p PICZαA-vphu,转化巴斯... 目的在毕赤酵母中表达并纯化人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)辅助调节蛋白Vpu。方法从质粒p CDNA3.1-vphu中PCR扩增vphu基因,插入毕赤酵母表达载体p PICZαA,构建重组表达质粒p PICZαA-vphu,转化巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达带有6×His标签的重组Vpu蛋白。表达产物经Ni-Agarose 6×His标签纯化柱纯化。表达和纯化产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒p PICZαA-vphu经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约16 000,主要存在于细胞内;纯化后杂蛋白减少,与抗VPU抗体和抗His标签抗体均可结合,浓度为224μg/ml。结论利用毕赤酵母表达系统成功表达并纯化了HIV-1 Vpu蛋白,纯化的蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究其结构和功能以及靶点药物筛选模型的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1型 vpu蛋白 毕赤酵母 表达 纯化
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HIV辅助蛋白拮抗细胞限制因子机制研究进展
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作者 陈倩倩 徐庆刚 张驰宇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期84-90,共7页
抗病毒限制因子成为病毒学研究领域的热点。近些年陆续发现了4种HIV限制因子:APOBEC3G、Trim5α、Tetherin、SAMHD1。其中APOBEC3G、Tetherin、SAMHD1分别被HIV编码的辅助蛋白Vif、Vpu、Vpx所拮抗。这些辅助蛋白影响病毒的致病性和复制... 抗病毒限制因子成为病毒学研究领域的热点。近些年陆续发现了4种HIV限制因子:APOBEC3G、Trim5α、Tetherin、SAMHD1。其中APOBEC3G、Tetherin、SAMHD1分别被HIV编码的辅助蛋白Vif、Vpu、Vpx所拮抗。这些辅助蛋白影响病毒的致病性和复制能力,拮抗宿主内的天然抗病毒限制因子,使病毒能够成功的侵染宿主细胞。本文重点综述了这三种能拮抗宿主限制因子的HIV辅助蛋白的功能研究进展。 展开更多
关键词 HIV辅助蛋白 限制因子 VIF vpu VPX
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