圆斑蝰蛇泰国亚种(Vipera russe lli siamensis)蛇毒凝血因子激活剂的纯化及部分特性研究 被引量：9

1

作者 杨丽娟 刘广芬 王晴川 《福建医科大学学报》 2002年第3期242-246,共5页

目的　从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒中分离纯化凝血 因子 (F )激活剂并研究其部分特性。　方法　采用离子交换柱层析和凝胶过滤等方法进行分离纯化 ,以血液凝固时间及发色底物 (S- 2 2 2 2 )进行活性鉴定和温度、p H值、蛋白酶抑制剂对活性... 目的　从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒中分离纯化凝血 因子 (F )激活剂并研究其部分特性。　方法　采用离子交换柱层析和凝胶过滤等方法进行分离纯化 ,以血液凝固时间及发色底物 (S- 2 2 2 2 )进行活性鉴定和温度、p H值、蛋白酶抑制剂对活性的影响 ,SDS- PAGE进行分子量、等电点及纯度测定 ,苯酚 -硫酸法及间苯二酚 -盐酸法测定糖含量。　结果　所得促凝组分 1 能特异性地活化牛 F ,从而水解 S- 2 2 2 2酰胺键。SDS- PAGE呈现单一蛋白带 ,分子量为 6 1.1± 1.5 k D(还原 ) ,6 0 .4± 1.9k D(非还原 )。等电点为 p H=8.0 0± 0 .0 6。含中性己糖 12 .4 %±0 .5 % ,唾液酸 0 .12 %± 0 .0 2 %。在 5 0℃以下稳定 ,最适 p H为 7.0～ 8.2。可被金属蛋白酶抑制剂 EDTA- Na2 完全抑制 ,二硫苏糖醇 (DTT)及 L -半胱氨酸部分抑制 ,不受胰蛋白酶抑制剂抑肽酶抑制。　结论　从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒分离纯化的 F 激活剂是一种碱性糖蛋白 ,属于 Ca2 + 依赖性的金属蛋白酶。 展开更多

关键词 圆斑蝰蛇 泰国亚种 凝血X因子激活剂 钙调蛋白 离子交换柱层析 凝胶过滤 金属蛋白酶

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Viperin通过胆固醇影响禽传染性支气管炎病毒复制

2

作者 任丽娜 张愉 +4 位作者 张桃妮 卢彦澎 张冰莎 黄鉴妮 磨美兰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期9-19,共11页

Viperin是一种干扰素诱导因子,具有广泛的抗病毒作用。为探究Viperin是否通过胆固醇发挥抗禽传染性支气管炎病毒(IBV)的作用,本试验通过消耗或添加细胞膜胆固醇,分析胆固醇对IBV复制的影响;并分别在细胞中过表达和干扰表达Viperin,评估V... Viperin是一种干扰素诱导因子,具有广泛的抗病毒作用。为探究Viperin是否通过胆固醇发挥抗禽传染性支气管炎病毒(IBV)的作用,本试验通过消耗或添加细胞膜胆固醇,分析胆固醇对IBV复制的影响;并分别在细胞中过表达和干扰表达Viperin,评估Viperin对细胞胆固醇含量和IBV复制的影响,并分析Viperin、胆固醇含量和IBV复制三者之间的关系。结果显示,在IBV感染后48 h,与IBV感染组相比较,使用5.0和10.0 mmol/L甲基-β-环糊精(MβCD)消耗细胞膜胆固醇后IBV复制被极显著抑制(P<0.001),添加5.0 mg/mL外源性胆固醇后IBV复制被极显著促进(P<0.001),消耗细胞膜胆固醇后再添加外源性胆固醇,IBV复制被抑制后恢复至接近正常水平(P>0.05);在IBV感染后24和48 h,与IBV感染组相比较,过表达Viperin可极显著降低细胞中胆固醇含量(P<0.001),并极显著抑制IBV复制(P<0.001);在IBV感染后6和48 h,与IBV感染组相比较,干扰表达Viperin可显著提高细胞中胆固醇含量(P<0.05或P<0.001);在IBV感染后24 h,与IBV感染组相比较,干扰表达Viperin可极显著促进IBV复制(P<0.001);在IBV感染后48 h,与IBV感染组相比较,过表达Viperin后再添加外源性胆固醇可恢复IBV复制(P>0.05)。结果表明,细胞膜中胆固醇水平与IBV复制密切相关,且Viperin可通过调节细胞胆固醇抑制IBV复制。本试验为寻找IBV新的抗病毒靶点提供理论依据和新思路。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 viperin 胆固醇

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小鼠抗病毒基因viperin的原核表达及其抗原性探索 被引量：6

3

作者 唐海波 钟桃珍 +8 位作者 罗扬 邢杏伟 钟一治 廖芳 马净 李晓宁 廖素环 梁晶晶 罗廷荣 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期63-68,共6页

Viperin是一种由Ⅰ型和Ⅱ型干扰素诱导的宿主蛋白,在进化上高度保守。本研究以小鼠脑组织为原材料,通过RT-PCR扩增得到包括完整open reading frame(ORF)的1 155 bp的viperin基因序列,成功亚克隆并构建了原核表达载体pET-32a-vip,将其转... Viperin是一种由Ⅰ型和Ⅱ型干扰素诱导的宿主蛋白,在进化上高度保守。本研究以小鼠脑组织为原材料,通过RT-PCR扩增得到包括完整open reading frame(ORF)的1 155 bp的viperin基因序列,成功亚克隆并构建了原核表达载体pET-32a-vip,将其转化到大肠杆菌Rosetta中进行原核表达。结果表明:原核表达的重组蛋白viperin主要以包涵体的形式表达,用镍离子亲和层析法获得纯度较高的viperin蛋白,为探讨原核表达的viperin抗原特性,将纯化的viperin蛋白免疫4周龄昆明小鼠,制备得到抗viperin多克隆抗体。经Western blot和IFA检测,该抗体能与真核细胞自然表达的viperin反应,特异性良好且效价高,表明原核表达的viperin具有良好的抗原性。获得的多克隆抗体为进一步研究viperin的抗病毒生物学功能奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 viperin 原核表达 抗原性 小鼠

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猪源Viperin蛋白抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒感染MARC-145细胞 被引量：5

4

作者 方剑玉 白娟 +3 位作者 郭小参 白献晓 朱文豪 姜平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期216-223,共8页

为了研究干扰素刺激基因Viperin对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抗病毒作用,本研究构建了猪源Viperin基因(sViperin)pCI-sVIP表达载体,并在MARC-145细胞上观察了其对PRRSV复制的抑制作用。结果为:过表达sViperin蛋白可以抑制PRRSV在MARC-14... 为了研究干扰素刺激基因Viperin对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抗病毒作用,本研究构建了猪源Viperin基因(sViperin)pCI-sVIP表达载体,并在MARC-145细胞上观察了其对PRRSV复制的抑制作用。结果为:过表达sViperin蛋白可以抑制PRRSV在MARC-145细胞上的复制,且具有剂量依赖作用。sViperin蛋白抑制了病毒的入胞,但其对病毒的装配和释放没有影响作用。共聚焦实验证明sViperin蛋白主要定位于内质网等细胞器。sViperin蛋白和PRRSV GP5、N蛋白在细胞内存在共定位现象。CO-IP实验证明sViperin蛋白可以和PRRSV N蛋白存在相互作用。该研究为该病毒新型抗病毒药物研究奠定了重要基础。 展开更多

关键词 PRRSV viperin 抗病毒作用

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抗病毒免疫因子Viperin的研究进展 被引量：4

5

作者 朱春辉 汤艳东 +1 位作者 徐方 周建华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期91-96,共6页

先天免疫因子Viperin是一种功能与内质网相关的抗病毒蛋白,可被干扰素、多种病毒、细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)和poly(I:C)等诱导表达。Viperin通过与病毒蛋白和某些细胞内蛋白的相互作用抑制病毒增殖,具有广谱抗病毒活性。在... 先天免疫因子Viperin是一种功能与内质网相关的抗病毒蛋白,可被干扰素、多种病毒、细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)和poly(I:C)等诱导表达。Viperin通过与病毒蛋白和某些细胞内蛋白的相互作用抑制病毒增殖,具有广谱抗病毒活性。在与宿主相互作用的长期进化过程中,某些病毒能够抑制细胞内Viperin的表达,逃逸其抗病毒功能。除抗病毒作用外,Viperin还具有其他一些生物学功能。近年来有关Viperin的研究,特别是在其抗病毒机理方面,进展较快,本文结合自身研究体会,就其基本特性和研究状况做一介绍。 展开更多

关键词 viperin 抗病毒蛋白 细胞膜 宿主蛋白 相互作用

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稳定表达猪Viperin的PK-15细胞系的构建与鉴定 被引量：4

6

作者 李文良 毛立 +3 位作者 杨蕾蕾 郝飞 张纹纹 江杰元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期128-132,共5页

为了探讨先天免疫效应因子Viperin的抗病毒作用,从猪外周血单核细胞中成功扩增了猪Viperin基因完整阅读框,克隆到真核表达载体p EGFP-C1中构建重组表达质粒p EGFP-Vi。阳性质粒经PCR、酶切和测序鉴定后通过脂质体Lipofectamine 2000介... 为了探讨先天免疫效应因子Viperin的抗病毒作用,从猪外周血单核细胞中成功扩增了猪Viperin基因完整阅读框,克隆到真核表达载体p EGFP-C1中构建重组表达质粒p EGFP-Vi。阳性质粒经PCR、酶切和测序鉴定后通过脂质体Lipofectamine 2000介导转染PK-15细胞,荧光显微镜观察发现融合蛋白质EGFP-Viperin定位于细胞质中,不同于对照质粒EGFP在细胞中的均匀分布。共聚焦检测结果表明,重组蛋白质主要定位于细胞的内质网上。Western blot检测结果表明,猪Viperin蛋白质在PK-15细胞中以融合蛋白质的形式稳定表达,分子量约为7.0×104。 展开更多

关键词 猪 viperin PK-15细胞系 表达

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扬子鳄Viperin基因的遗传衍化分析及表达量的测定 被引量：3

7

作者 胡智博 李林俐 费荣梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期182-188,共7页

为研究扬子鳄Viperin基因的序列结构以及生物学功能,通过提取成年扬子鳄外周血液中的m RNA,经反转录得到c DNA,设计引物,对得到的c DNA进行PCR扩增,连接至p MD19-T载体上构建重组质粒,对PCR鉴定呈阳性的质粒进行序列测定,并进行进化树... 为研究扬子鳄Viperin基因的序列结构以及生物学功能,通过提取成年扬子鳄外周血液中的m RNA,经反转录得到c DNA,设计引物,对得到的c DNA进行PCR扩增,连接至p MD19-T载体上构建重组质粒,对PCR鉴定呈阳性的质粒进行序列测定,并进行进化树分析、同源性分析以及结构和功能预测,同时对扬子鳄不同组织中Viperin的表达水平进行测定和分析。结果显示,扬子鳄Viperin基因的完整ORF序列为1 011 bp,共编码336个氨基酸,前18个氨基酸为信号肽。成熟蛋白的分子质量为38 ku,等电点为8.72。三级结构显示,该蛋白主要由8段α螺旋,8段β折叠组成,与经典Viperin的结构一致。通过同源性和进化树分析,扬子鳄Viperin基因与湾鳄的同源性最高,为96.4%,在进化树中处于同一分支。Viperin在血液中表达量最高,在肌肉组织中表达量最低。本试验结果为扬子鳄Viperin基因的表达调控机制和功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 viperin 扬子鳄 序列分析

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Viperin在抗病毒免疫中的作用研究进展 被引量：3

8

作者 芦冬 黄金海 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期90-95,共6页

病毒感染激活宿主细胞先天性免疫信号通路级联反应,通过产生干扰素、抗病毒蛋白等来限制病毒复制和防止感染。Viperin是一种在物种间相对保守、参与先天性免疫的内质网相关抗病毒蛋白,通过与病毒蛋白、某些细胞内蛋白的相互作用调节信... 病毒感染激活宿主细胞先天性免疫信号通路级联反应,通过产生干扰素、抗病毒蛋白等来限制病毒复制和防止感染。Viperin是一种在物种间相对保守、参与先天性免疫的内质网相关抗病毒蛋白,通过与病毒蛋白、某些细胞内蛋白的相互作用调节信号转导过程,发挥抑制多种病毒增殖的广谱抗病毒作用。目前,对Viperin蛋白发挥抗病毒和免疫调节作用的功能域、作为自由基SAM酶家族成员发挥作用的机制有了新的认识,但对Viperin能够在不同病毒感染细胞内发挥广泛作用的确切机制仍不是很清楚。论文就Viperin的基本生物学特性、发挥不同抗病毒机制的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 抗病毒蛋白 viperin 宿主细胞蛋白 相互作用

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Viperin介导细胞抗病毒效应研究进展 被引量：2

9

作者 余影影 钟自富 +1 位作者 朱启运 徐帅 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第4期68-73,共6页

先天性免疫是宿主抵抗外来病原入侵的第一道防线,是免疫系统的重要组成成分。Viperin是受干扰素(interferon,IFN)等多种因素诱导的抗病毒蛋白。Viperin可以通过介导信号转导、控制细胞代谢、调控IFN水平等多种途径来抑制DNA病毒、RNA病... 先天性免疫是宿主抵抗外来病原入侵的第一道防线,是免疫系统的重要组成成分。Viperin是受干扰素(interferon,IFN)等多种因素诱导的抗病毒蛋白。Viperin可以通过介导信号转导、控制细胞代谢、调控IFN水平等多种途径来抑制DNA病毒、RNA病毒以及细菌等多种病原微生物的增殖,同时参与调节温度并影响巨噬细胞的极化及细胞因子的分泌等。由于Viperin是一种新近发现的信号蛋白,其具体的抗病毒机制尚未明确。近年来随着分子生物学技术的发展,对该蛋白的研究引起了广泛关注并取得了较大进展。本文仅就Viperin的结构功能、抗病毒机制、调控机制等几个方面进行阐述,为Viperin的深入研究提供参考。 展开更多

关键词 viperin 先天性免疫 抗病毒效应 信号转导

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抗病毒蛋白Viperin对细胞自噬相关蛋白的影响

10

作者 魏玉婷 刘善虑 +3 位作者 张博 房家立 王荃 苗春晖 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第2期32-36,共5页

为了探究抗病毒蛋白Viperin对细胞自噬过程的影响以及该生物功能与物种间正向选择的相关性,利用分子生物学方法在人肾脏上皮细胞HEK293及肺癌细胞A549中过表达灵长类动物的Viperin,通过免疫荧光、Western blotting等方法检测Viperin对... 为了探究抗病毒蛋白Viperin对细胞自噬过程的影响以及该生物功能与物种间正向选择的相关性,利用分子生物学方法在人肾脏上皮细胞HEK293及肺癌细胞A549中过表达灵长类动物的Viperin,通过免疫荧光、Western blotting等方法检测Viperin对自噬相关蛋白表达的影响.结果表明:人类Viperin在HEK293细胞中的过表达诱导了胞内LC3由Ⅰ型向Ⅱ型的转化,且mCherry-GFP-LC3介导的胞内自噬体的形成量增加.自噬过程中的核心蛋白Beclin 1表达量明显增加,而敲低Beclin 1能减弱Viperin对自噬的诱导作用.同人类的Viperin相比,多种非人类灵长类动物的Viperin诱导LC3脂化的效果更强,Beclin 1的增加量更多,这表明抗病毒蛋白Viperin的生物学功能可能与灵长类动物进化中的正向选择过程相关. 展开更多

关键词 viperin LC3脂化 细胞自噬 抗病毒蛋白 Beclin 1

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病毒拟似物Poly(I：C)诱导人卵巢颗粒细胞病毒反应蛋白viperin表达 被引量：1

11

作者 王波 吴英 +3 位作者 方玉莹 陈丹青 吕时铭 高玉平 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第8期1069-1073,共5页

目的探讨病毒拟似物对人卵巢颗粒细胞病毒反应蛋白表达的影响,明确颗粒细胞在卵巢病毒感染时的反应。方法将原代培养的人卵巢颗粒细胞分为对照组、病毒拟似物Poly(I:C)处理组、卵泡刺激素(FSH)处理组。CCK8法测定细胞增殖活力、real-tim... 目的探讨病毒拟似物对人卵巢颗粒细胞病毒反应蛋白表达的影响,明确颗粒细胞在卵巢病毒感染时的反应。方法将原代培养的人卵巢颗粒细胞分为对照组、病毒拟似物Poly(I:C)处理组、卵泡刺激素(FSH)处理组。CCK8法测定细胞增殖活力、real-time PCR法测定干扰素-β(IFN-β)、viperin mRNA表达,Western blot法测定viperin蛋白表达。结果原代接种培养5 d后,FSH可诱导颗粒细胞增殖(P<0.05),Poly(I:C)10μg/m L对细胞增殖活力无显著影响。Poly(I:C)刺激后24 h内诱导IFN-β、viperin mRNA表达明显上调,其中IFN-β于刺激后2 h表达水平达到峰值(P<0.05),viperin于刺激后8 h达到峰值(P<0.05),刺激后24 h,两者mRNA表达水平均回归刺激前水平。Poly(I:C)诱导颗粒细胞viperin蛋白表达,水平随Poly(I:C)浓度上升。结论病毒拟似物能够诱导颗粒细胞表达病毒反应蛋白viperin。 展开更多

关键词 颗粒细胞 viperin 病毒感染 干扰素-Β

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青鱼Viperin是一种抗病毒蛋白质（英文） 被引量：1

12

作者 田彧 陈慧 +3 位作者 周旻昱 李俊 肖俊 冯浩 《生命科学研究》 CAS CSCD 2018年第4期259-270,共12页

在脊椎动物中viperin已被证明是一种能抵御大多数DNA和RNA病毒的抗病毒蛋白质。本文克隆及鉴定了青鱼viperin。青鱼viperin(bc Viperin)的c DNA由1 828个核苷酸组成,编码360个氨基酸。预测的bc Viperin蛋白包含N端低保守的两性α-螺旋... 在脊椎动物中viperin已被证明是一种能抵御大多数DNA和RNA病毒的抗病毒蛋白质。本文克隆及鉴定了青鱼viperin。青鱼viperin(bc Viperin)的c DNA由1 828个核苷酸组成,编码360个氨基酸。预测的bc Viperin蛋白包含N端低保守的两性α-螺旋结构域、中间自由基S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)结构域及高保守C端结构域。bc Viperin m RNA在青鱼心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肠、肌肉、皮肤和鳃等组织中均有表达。在草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)和鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)感染后,bc Viperin m RNA在上述组织中的表达水平提高。在青鱼尾鳍(Mylopharyngodon piceus fin,MPF)细胞中,bc Viperin m RNA表达水平同样会在GCRV和SVCV感染后发生上升。蛋白质免疫印迹表明bc Viperin蛋白的相对分子质量约为42 k D;He La和EPC细胞中的免疫荧光染色实验表明bc Viperin是细胞质蛋白。编码bc Viperin的质粒在EPC细胞中过表达后能够显著提高细胞抵御SVCV和GCRV的抗病毒能力。以上研究表明bc Viperin是青鱼天然免疫过程中重要的抗病毒蛋白质。 展开更多

关键词 青鱼 viperin 天然免疫 鲤春病毒血症病毒(SVCV) 草鱼呼肠孤病毒(GCRV)

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Viperin与病毒感染的研究进展

13

作者 贾楠楠 唐井玉 +1 位作者 刘光清 孟春春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1253-1260,共8页

干扰素诱导的内质网相关抑制病毒蛋白(Viperin)是一种常见的干扰素诱导蛋白,可抑制多种病毒的增殖。研究证实Viperin是一种多功能的、膜靶向的抗病毒蛋白,其每个结构域都扮演着不同的病毒特异性角色。此外其表达不仅局限于依赖干扰素通... 干扰素诱导的内质网相关抑制病毒蛋白(Viperin)是一种常见的干扰素诱导蛋白,可抑制多种病毒的增殖。研究证实Viperin是一种多功能的、膜靶向的抗病毒蛋白,其每个结构域都扮演着不同的病毒特异性角色。此外其表达不仅局限于依赖干扰素通路调控,还具有鲜明的多样性来源特征。有趣的是,Viperin还可被多种被病毒利用来促进病毒自身的增殖。为更好的了解其功能,本文从Viperin的结构特征、产生机制、抑制病毒复制和促进病毒复制等方面最新的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 viperin 结构特征 表达调控 抗病毒作用 促病毒作用

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抗病毒蛋白Viperin抑制猪瘟病毒在PK-15细胞上的复制 被引量：1

14

作者 李文良 毛立 +5 位作者 邓加武 郝飞 李基棕 杨蕾蕾 张纹纹 江杰元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期139-146,共8页

Viperin是一种抗病毒蛋白,具有广谱的抗病毒功能。为了研究猪源抗病毒蛋白Viperin对猪瘟病毒(CSFV)的抗病毒作用及机制,通过构建细胞系过表达或通过siRNA转染抑制Viperin表达,采用荧光定量RTPCR和病毒滴度测定检测CSFV增殖水平的变化;... Viperin是一种抗病毒蛋白,具有广谱的抗病毒功能。为了研究猪源抗病毒蛋白Viperin对猪瘟病毒(CSFV)的抗病毒作用及机制,通过构建细胞系过表达或通过siRNA转染抑制Viperin表达,采用荧光定量RTPCR和病毒滴度测定检测CSFV增殖水平的变化;检测培养上清和细胞中病毒含量的变化趋势,评价其对病毒释放的影响;进而通过共聚焦试验和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)试验检测Viperin与病毒E2蛋白的共定位与相互作用。与对照细胞相比,过表达Viperin蛋白可以显著抑制CSFV在PK-15细胞上的复制,在感染后24、48、72h,病毒基因水平和病毒滴度分别下降68.75%、83.61%、77.27%和68.75%、87.5%、80.39%。通过RNA干扰技术抑制Viperin在PK-Vi细胞中的表达后CSFV复制显著恢复(仍低于对照组)。培养上清和细胞中病毒含量均同等程度受到抑制,表明Viperin表达对病毒的释放没有影响。共聚焦试验证明Viperin蛋白与E2蛋白在细胞内存在共定位现象。免疫共沉淀试验证明Viperin蛋白与E2蛋白存在相互作用。该研究证实Viperin具有抗CSFV作用,该作用可能是通过与病毒E2蛋白相互作用实现的,这为CSFV与宿主免疫反应相互作用研究提供了理论基础。 展开更多

关键词 viperin 猪瘟病毒 抗病毒 共定位 相互作用

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乌鳢(Channa argus)干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子的克隆与特征分析 被引量：3

15

作者 贾伟章 周秀霞 +1 位作者 黄容 郭琼林 《自然科学进展》 北大核心 2007年第11期1481-1491,共11页

应用抑制差减杂交、末端快速扩增和基因步移技术,克隆并鉴定了乌鳢干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子序列.Viperin cDNA全长1474nt,包含1059nt的开放阅读框,编码352个氨基酸.除N末端70个氨基酸外,Viperin蛋白氨基酸序列在鱼类和... 应用抑制差减杂交、末端快速扩增和基因步移技术,克隆并鉴定了乌鳢干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子序列.Viperin cDNA全长1474nt,包含1059nt的开放阅读框,编码352个氨基酸.除N末端70个氨基酸外,Viperin蛋白氨基酸序列在鱼类和哺乳类具有高度的保守性.ISG15 cDNA全长758nt,包含468nt的开放阅读框,编码155个氨基酸,含有两个泛素样(UBL)结构域,C末端具有保守的UB偶联结构(LRGG).Viperin和ISG15启动子区存在保守的干扰素刺激反应元件(ISRE)和γ-干扰素激活序列(GAS).ISRE是干扰素刺激基因启动子区的重要特征,并与干扰素调控因子(IRF)1和IRF2的识别序列(IRF-E)部分重复;GAS参与介导II型干扰素激活基因的诱导转录.Viperin启动子区还包含保守的NF-κB结合位点,这是保守的NF-κB结合位点以一致的序列模式(GGGRNNYYCC)出现在鱼类干扰素刺激基因启动子区的首次报道.此外,Viperin和ISG15启动子尚存在TATA,CAAT,Sp1等转录因子结合位点.乌鳢ISG15基因5′非编码区含有单一的内含子,而Viperin基因5′非编码区未发现内含子.Viperin和ISG15mRNA主要表达在头肾、后肾、脾脏和鳃,肝脏中也有少量表达.体内干扰素诱导剂polyI:C刺激后,Viperin和ISG15基因在肝脏的表达水平明显增加. 展开更多

关键词 干扰素 干扰素刺激基因(ISG) viperin ISG15 乌鳢

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Viperin抑制黄病毒属感染作用机制研究进展

16

作者 许淑娟 谢晶莹 冯若飞 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期90-94,共5页

Viperin是近年来发现的具有重要免疫活性的宿主蛋白之一,其在细胞内的表达在病毒感染或干扰素诱导后明显上升,显示出广泛的抗病毒活性。已证实它可以影响许多囊膜病毒在宿主细胞中的组装和释放,但在不同的病毒中所表现的具体抗病毒活性... Viperin是近年来发现的具有重要免疫活性的宿主蛋白之一,其在细胞内的表达在病毒感染或干扰素诱导后明显上升,显示出广泛的抗病毒活性。已证实它可以影响许多囊膜病毒在宿主细胞中的组装和释放,但在不同的病毒中所表现的具体抗病毒活性不同。黄病毒属病毒为单股正链具囊膜的RNA病毒,该种属病毒具有相似的结构特征。Viperin蛋白可以抑制多数黄病毒在细胞中的复制。就Viperin抗几种黄病毒属病毒作用机制进行综述,为相关研究提供参考。 展开更多

关键词 viperin 黄病毒 感染 囊膜 抑制作用

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Viperin蛋白可通过影响非结构蛋白与脂筏的关联抑制丙型肝炎病毒复制

17

作者 吴显芳 王珊珊 +2 位作者 潘婷婷 易志刚 袁正宏 《微生物与感染》 2009年第4期203-208,222,共7页

目前,对丙型肝炎病毒(HCV)感染患者主要采用以Ⅰ型干扰素为主的治疗方案,但干扰素抑制病毒的具体机制仍然不详。本研究通过实时聚合酶链反应(PCR)检测HCV的RNA水平,蛋白免疫印迹法检测HCV非结构蛋白的表达,以及膜飘浮实验检测非结构蛋... 目前,对丙型肝炎病毒(HCV)感染患者主要采用以Ⅰ型干扰素为主的治疗方案,但干扰素抑制病毒的具体机制仍然不详。本研究通过实时聚合酶链反应(PCR)检测HCV的RNA水平,蛋白免疫印迹法检测HCV非结构蛋白的表达,以及膜飘浮实验检测非结构蛋白与脂筏的关联性,探讨干扰素诱导蛋白Viperin抑制HCV复制的机制。结果显示,在体外HCV亚基因复制子及感染细胞模型中过量表达Viperin可显著降低细胞内HCV非结构蛋白的表达及RNA的水平。膜漂浮实验发现,过量表达的Viperin可通过干扰HCV非结构蛋白NS3、NS5A与细胞内脂筏膜的关联,使其对非离子去污剂敏感。进一步研究发现,与脂筏膜结构组成相关的法尼基合成酶(FPPS)可通过与Viperin相互作用,部分反转Viperin的抗HCV复制效应。以上结果提出一种新的干扰素抗HCV机制,即干扰素诱导蛋白Viperin可通过影响非结构蛋白与脂筏的关联,干扰HCV复制复合体的稳定性,从而抑制HCV复制。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 干扰素诱导蛋白 脂筏微结构 viperin

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猪Viperin基因丙酸诱导型载体构建及表达

18

作者 王晓婷 樊文杰 +3 位作者 查光明 郭豫杰 钟凯 李和平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期864-868,共5页

本试验以猪十二指肠cDNA为模板,通过PCR、酶切鉴定克隆Viperin基因,利用非酶连接技术将其连接丙酸诱导型表达载体pEX5,经丙酸钠诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting进行表达蛋白鉴定。结果显示,成功克隆了猪Viperin基因,包括完整开放... 本试验以猪十二指肠cDNA为模板,通过PCR、酶切鉴定克隆Viperin基因,利用非酶连接技术将其连接丙酸诱导型表达载体pEX5,经丙酸钠诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting进行表达蛋白鉴定。结果显示,成功克隆了猪Viperin基因,包括完整开放阅读框ORF,其长度为1 046bp,将扩增得到的序列成功连接到载体pEX5,构建了pEX5-Viperin;SDS-PAGE和Western-blotting。6×His-NusA-TEV-LIC-Viperin融合蛋白主要以包涵体形式表达,其相对分子质量约96 500。结果表明,pEX5-Viperin的成功构建,为后续猪Viperin蛋白的纯化,Viperin基因与病毒互作关系及信号通路调控机制的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 viperin 丙酸诱导型 载体构建 表达

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马Viperin的抗EIAV功能初步研究及其重组腺病毒的构建

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作者 朱春辉 汤艳东 +6 位作者 那雷 付丽华 王雪峰 林跃智 杜承 周建华 徐方 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期346-349,共4页

Viperin是一种细胞内抗病毒蛋白,可以被I型干扰素、多聚I:C、脂多糖及多种病毒诱导表达,在细胞内主要定位在内质网和脂滴,具有广谱的抗病毒功能。为研究马Viperin(eViperin)在抗病毒感染中的作用,本研究应用RT-PCR从马巨噬细胞中扩增eVi... Viperin是一种细胞内抗病毒蛋白,可以被I型干扰素、多聚I:C、脂多糖及多种病毒诱导表达,在细胞内主要定位在内质网和脂滴,具有广谱的抗病毒功能。为研究马Viperin(eViperin)在抗病毒感染中的作用,本研究应用RT-PCR从马巨噬细胞中扩增eViperin基因,并将其克隆于真核表达载体pDC315中构建重组质粒pDC-eViperin-Flag,将重组质粒转染293T细胞,western blot检测结果表明eViperin在293T细胞中正确表达。将该重组表达质粒与表达马传染性贫血病毒(EIAV)Gag前体蛋白(Gag precursor,Pr55gag)的表达质粒共转染293T细胞,转染48 h后western blot检测,结果显示实验组细胞培养上清中的Pr55gag含量显著低于空白对照组,表明eViperin具有抑制EIAV释放的作用。此外,将该重组表达质粒与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,E3Cre共转染HEK293细胞,进一步构建拯救出表达eViperin的重组腺病毒,为研究eViperin的抗病毒功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 viperin 马 马传染性贫血病毒 重组腺病毒

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鲫抗病毒蛋白Viperin表达模式及启动子活性分析

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作者 王兵 黄伟康 +1 位作者 宋萍萍 吴建伟 《贵阳医学院学报》 CAS 2015年第12期1311-1317,共7页

目的:研究鲫抗病毒蛋白Viperin(Ca Viperin)的表达特征,分析其启动子区主要转录因子结合位点并验证启动子活性。方法:采用半定量PCR法检测鲫Viperin在紫外灭活和活GCRV病毒、Poly(I:C)、LPS、重组干扰素处理鲫CAB细胞后不同时间点在RNA... 目的:研究鲫抗病毒蛋白Viperin(Ca Viperin)的表达特征,分析其启动子区主要转录因子结合位点并验证启动子活性。方法:采用半定量PCR法检测鲫Viperin在紫外灭活和活GCRV病毒、Poly(I:C)、LPS、重组干扰素处理鲫CAB细胞后不同时间点在RNA水平的表达量;采用Genome walking法从鲫基因组中扩增出鲫Viperin启动子片段-1832/+23,采用p GL3Basic荧光素酶报告基因系统对启动子活性进行分析;在NCBI中选代表性物种(从鱼类到哺乳类)Viperin启动子序列,分析其主要转录因子结合元件ISRE和GAS,预测其受上游信号调控的保守性。结果:分析了紫外灭活或活GCRV病毒、Poly(I:C)、LPS、重组干扰素刺激鲫CAB细胞后Viperin表达的时序特征;成功克隆鲫Viperin启动子片段并构建报告基因表达质粒;分析并证实鲫Viperin启动子活性;从进化角度预测分析了Viperin基因受上游信号调节的保守性。结论:除LPS外,灭活或活GCRV病毒、Poly(I:C)、重组干扰素皆能诱导鲫Viperin转录;Viperin启动子区富含IFN信号诱导元件ISRE和GAS,且在不同物种间相对保守,因此推测Viperin基因受IFN及其上游信号诱导经由相对保守的信号通路。 展开更多

关键词 鲫 viperin 抗病毒蛋白 转录启动子

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