目的研究不同血流切应力(fluid shear stress, FSS)对内皮细胞平面细胞极性通路(planar cell polarity, PCP)的调节作用,进一步探讨FSS、PCP信号通路以及纤毛发生之间的关系。方法建立可调控FSS的流体动力学细胞培养模型,qPCR以及免疫...目的研究不同血流切应力(fluid shear stress, FSS)对内皮细胞平面细胞极性通路(planar cell polarity, PCP)的调节作用,进一步探讨FSS、PCP信号通路以及纤毛发生之间的关系。方法建立可调控FSS的流体动力学细胞培养模型,qPCR以及免疫荧光检测不同FSS作用下PCP信号通路核心蛋白Dvl2及纤毛装配蛋白IFT88的mRNA表达与细胞定位以及两者的共定位,Western bolt (WB)检测不同FSS作用18 h时Dvl2蛋白表达。结果 qPCR结果显示,与1.5 Pa比较,Dvl2 mRNA的表达量在0.1 Pa FSS作用6 h和18 h时均升高(P<0.05)、12 h时显著升高(P<0.01);IFT88 mRNA表达量在0.1 Pa FSS作用18 h时显著升高(P<0.01)。WB结果显示,与0 h比较,Dvl2蛋白的表达在0.1 Pa FSS作用18 h时升高(P<0.05),在1.5 Pa FSS作用18 h时显著降低(P<0.05);与1.5 Pa FSS比较,Dvl2蛋白的表达在0.1 Pa FSS作用18 h时升高(P<0.05)。免疫荧光结果显示,Dvl2蛋白阳性表达随FSS作用时间的增加增多,且逐渐聚集于细胞核周边一点;IFT88蛋白阳性表达在0.1 Pa FSS作用下逐渐由细胞核向细胞质转移并聚集为一点,1.5 Pa FSS作用下逐渐减少且解聚;蛋白Dvl2、IFT88在0.1 Pa FSS作用下均定位于细胞的同一位置,在1.5 Pa FSS作用18 h内均定位于细胞的同一位置,18 h后由于蛋白IFT88发生解聚,未观察到共定位。结论层流FSS作用能够抑制PCP信号通路的转导并阻碍纤毛发生,低FSS促进其转导,且PCP信号通路可能通过Dvl2调控FSS诱导的初级纤毛发生。展开更多
目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫...目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测EV-A71在HUVECs中的复制和增殖,用免疫荧光双染色技术观察三种细胞骨架在EV-A71感染后的变化。结果 EV-A71能够有效感染HUVECs,且感染后24 h在细胞内复制达到高峰。病毒感染后微丝骨架完全解聚,微管骨架排列方式发生改变,而中间纤维结构模糊不清;同时检测到微管及中间纤维与病毒抗原共存。结论 EV-A71可以感染HUVECs并在其内有效复制增殖,同时诱导HUVECs三种细胞骨架发生改变,提示细胞骨架可能参与EV-A71感染HUVECs的过程。展开更多
文摘目的研究不同血流切应力(fluid shear stress, FSS)对内皮细胞平面细胞极性通路(planar cell polarity, PCP)的调节作用,进一步探讨FSS、PCP信号通路以及纤毛发生之间的关系。方法建立可调控FSS的流体动力学细胞培养模型,qPCR以及免疫荧光检测不同FSS作用下PCP信号通路核心蛋白Dvl2及纤毛装配蛋白IFT88的mRNA表达与细胞定位以及两者的共定位,Western bolt (WB)检测不同FSS作用18 h时Dvl2蛋白表达。结果 qPCR结果显示,与1.5 Pa比较,Dvl2 mRNA的表达量在0.1 Pa FSS作用6 h和18 h时均升高(P<0.05)、12 h时显著升高(P<0.01);IFT88 mRNA表达量在0.1 Pa FSS作用18 h时显著升高(P<0.01)。WB结果显示,与0 h比较,Dvl2蛋白的表达在0.1 Pa FSS作用18 h时升高(P<0.05),在1.5 Pa FSS作用18 h时显著降低(P<0.05);与1.5 Pa FSS比较,Dvl2蛋白的表达在0.1 Pa FSS作用18 h时升高(P<0.05)。免疫荧光结果显示,Dvl2蛋白阳性表达随FSS作用时间的增加增多,且逐渐聚集于细胞核周边一点;IFT88蛋白阳性表达在0.1 Pa FSS作用下逐渐由细胞核向细胞质转移并聚集为一点,1.5 Pa FSS作用下逐渐减少且解聚;蛋白Dvl2、IFT88在0.1 Pa FSS作用下均定位于细胞的同一位置,在1.5 Pa FSS作用18 h内均定位于细胞的同一位置,18 h后由于蛋白IFT88发生解聚,未观察到共定位。结论层流FSS作用能够抑制PCP信号通路的转导并阻碍纤毛发生,低FSS促进其转导,且PCP信号通路可能通过Dvl2调控FSS诱导的初级纤毛发生。
文摘目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测EV-A71在HUVECs中的复制和增殖,用免疫荧光双染色技术观察三种细胞骨架在EV-A71感染后的变化。结果 EV-A71能够有效感染HUVECs,且感染后24 h在细胞内复制达到高峰。病毒感染后微丝骨架完全解聚,微管骨架排列方式发生改变,而中间纤维结构模糊不清;同时检测到微管及中间纤维与病毒抗原共存。结论 EV-A71可以感染HUVECs并在其内有效复制增殖,同时诱导HUVECs三种细胞骨架发生改变,提示细胞骨架可能参与EV-A71感染HUVECs的过程。
