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中国国内首次检测到犬细小病毒CPV-2c 被引量:44
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作者 张仁舟 杨松涛 +2 位作者 冯昊 崔苌盛 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第4期246-249,275,共5页
目的分析犬细小病毒(CPV)流行毒株的分子生物学特征,研究犬细小病毒遗传进化规律,了解CPV流行毒株现状。方法收集CPV阳性犬粪PCR扩增CPV-2c后进行RFLP分析,并进行病毒结构蛋白VP2基因的克隆、测序并进行序列分析。结果经RFLP分析及序列... 目的分析犬细小病毒(CPV)流行毒株的分子生物学特征,研究犬细小病毒遗传进化规律,了解CPV流行毒株现状。方法收集CPV阳性犬粪PCR扩增CPV-2c后进行RFLP分析,并进行病毒结构蛋白VP2基因的克隆、测序并进行序列分析。结果经RFLP分析及序列测定,2份样品均为CPV-2c阳性,序列分析显示CPV-06/09及CPV-07/09VP2序列与国外CPV-2c的基因序列同源性在99%以上。进化分析表明CPV-06/09及CPV-07/09在进化树中形成一个独立的分支,不同国家的CPV-2c存在一定的差异。结论通过RFLP分析及测序证实2份犬粪便样品为CPV-2c阳性,首次在我国检测到CPV-2c。系统进化树显示两分离株CPV-2c与国外CPV-2c有所差异,可能是传入我国的CPV-2c在向适应地区条件的方向进化,也可能是我国已有CPV变异。 展开更多
关键词 犬细小病毒 CPV-2c vp2基因
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犬细小病毒基因型的调查 被引量:37
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作者 谢之景 夏咸柱 +3 位作者 扈荣良 赵忠鹏 高玉伟 黄耕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期421-424,共4页
采用 PCR方法扩增了 13株犬细小病毒 ( canine parvovirus,CPV) VP2基因的 2个片段 ,通过序列测定和 DNAS-tar软件分析 ,结果显示 ,我国的 CPV分离株也存在基因变异现象 ,除发现 CPV- 2、CPV - 2 a、CPV- 2 b突变株外 ,还发现在 CPV- 2 ... 采用 PCR方法扩增了 13株犬细小病毒 ( canine parvovirus,CPV) VP2基因的 2个片段 ,通过序列测定和 DNAS-tar软件分析 ,结果显示 ,我国的 CPV分离株也存在基因变异现象 ,除发现 CPV- 2、CPV - 2 a、CPV- 2 b突变株外 ,还发现在 CPV- 2 a基础上进一步进化产生的 2个新的变异株。在我国 ,CPV- 2曾在 2 0世纪 80年代早期流行 ,但 1986年后分离到的 CPV以 CPV- 2 a为主 ,在 2 0 0 2年送检的 8份病料中分离到 4株 CPV- 2 a和 4株 CPV- 2 b。PV/貉 / CC/ 1/ 86在CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 30 0 G→ S替换 ,PV/犬 / JL / 1/ 0 2在 CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 5 6 4 S→ N替换 ,其确切的生物学意义尚不清楚。我国的 CPV分离株与参考毒株的核酸同源性超过 98% ,没有形成明显的中国CPV分支 。 展开更多
关键词 犬细小病毒 基因型 进化 变异
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犬细小病毒VP2基因的比较及分型研究 被引量:25
3
作者 邱薇 范泉水 +6 位作者 李作生 杨美峰 郑颖 尹惠琼 王双印 李江 夏咸柱 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期69-72,共4页
为查明我国CPV的流行变异情况及为进一步的免疫研究奠定基础,对我国不同地区分离到的9株细小病毒毒株进行了VP2基因的扩增和序列分析,并与CPV的参考毒株进行了比较分型, 9 株CPV 中有6 株属CPV 2a,3株属CPV 2b,但未分离到CPV 2c变异株,... 为查明我国CPV的流行变异情况及为进一步的免疫研究奠定基础,对我国不同地区分离到的9株细小病毒毒株进行了VP2基因的扩增和序列分析,并与CPV的参考毒株进行了比较分型, 9 株CPV 中有6 株属CPV 2a,3株属CPV 2b,但未分离到CPV 2c变异株,结果表明我国目前仍以CPV 2a流行为主。 展开更多
关键词 vp2基因 犬细小病毒 分型 CPV 免疫研究 序列分析 病毒毒株 参考毒株 变异株 流行 分离
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犬细小病毒分离株VP2基因的克隆与序列分析 被引量:23
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作者 杨玲 徐向明 +3 位作者 殷俊 宗卫峰 陈璐 李厚达 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 2002年第3期12-14,共3页
以犬细小病毒 (Canine parvovirus,CPV)扬州分离株病毒的 DNA为模板 ,根据基因库 CPV-d序列设计合成了VP2基因的 1对特异引物 ,进行聚合酶链式反应 ,扩增出约 1 .7kb的片段 ,按常规方法克隆进 p UC1 8载体 ,经 Eco R 和Sal 双酶切筛选... 以犬细小病毒 (Canine parvovirus,CPV)扬州分离株病毒的 DNA为模板 ,根据基因库 CPV-d序列设计合成了VP2基因的 1对特异引物 ,进行聚合酶链式反应 ,扩增出约 1 .7kb的片段 ,按常规方法克隆进 p UC1 8载体 ,经 Eco R 和Sal 双酶切筛选到阳性质粒 ,进一步对该片段进行序列分析。结果表明 :所扩增基因片段长度为 1 740 bp,与美国参考株 CPV-d (type 2 )、CPV-1 5 (type 2 a)、CPV-3 9(type 2 b)相比较 ,核苷酸同源性分别高达 99.5 %、99.7%、99.7%。 展开更多
关键词 细小病毒 分离株 vp2基因 克隆 序列分析
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犬细小病毒国内外流行病学研究进展 被引量:22
5
作者 孙明洁 董国英 +1 位作者 张雪竹 胡桂学 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1035-1039,共5页
犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)已流行近40年,由于VP2基因不断变异,产生了多种变异毒株并广泛流行于全世界,给CPV的防控带来巨大挑战。因此,本文以CPV的起源进化、变异毒株的突变特点及CPV变异株在国内外流行特点进行综述分析,以期... 犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)已流行近40年,由于VP2基因不断变异,产生了多种变异毒株并广泛流行于全世界,给CPV的防控带来巨大挑战。因此,本文以CPV的起源进化、变异毒株的突变特点及CPV变异株在国内外流行特点进行综述分析,以期阐明CPV流行态势,为有效的精准防控提供支持。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2基因 CPV变异株 全球流行特点
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犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量:17
6
作者 李慕瑶 姜骞 +3 位作者 刘家森 司昌德 韩凌霞 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期218-222,共5页
根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具... 根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为15.8 ng/孔,血清的最佳稀释倍数为1∶100,建立了检测CPV血清抗体的间接ELISA方法。 展开更多
关键词 vp2基因 原核表达 纯化 间接ELISA
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近期引起免疫失败的传染性腔上囊病病毒VP2基因的分子特征 被引量:17
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作者 王永山 欧阳伟 +5 位作者 潘群兴 范红结 张海彬 王忠灿 唐雨德 谭维国 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1013-1019,共7页
用RT-PCR方法从2007年12月在安徽境内发生的两起传染性腔上囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡腔上囊组织样品AH1与AH2中扩增出了传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2基因。序列分析表明,AH1与AH2病毒VP2基因长度均为1 350 nt,编码450 aa,七肽基序均... 用RT-PCR方法从2007年12月在安徽境内发生的两起传染性腔上囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡腔上囊组织样品AH1与AH2中扩增出了传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2基因。序列分析表明,AH1与AH2病毒VP2基因长度均为1 350 nt,编码450 aa,七肽基序均为S-W-S-A-S-G-S,在222、253、256、279、284、294和299位上的氨基酸残基分别是A、QI、、D、AI、和S,具有IBDV强毒的分子特征,AH1和AH2感染的20日龄雏鸡产生明显IBD病变,死亡率为25%(1/4)。同源性分析表明,26个血清Ⅰ型IBDV毒株VP2基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为90.7%~99.6%和95.5%~100%,不同IBDV毒株VP2基因的七肽基序、特征性氨基酸残基以及高变区的亲水性有差异。在进化树上,26个血清Ⅰ型IBDV毒株可分为数组,其中的15个中国分离IBDV毒株不在同组,毒株之间的亲缘关系与分离地区或分离时间没有明显的联系。AH1和AH2与现行商品疫苗毒株B87的VP2基因核苷酸序列的差异率分别为5.3%和5.2%,这也进一步佐证了IBDV野毒VP2基因变异所引起的毒力变化和VP2抗原表位的漂移是导致当前IBD疫苗免疫预防失败的主要原因。 展开更多
关键词 传染性腔上囊病病毒 序列分析 vp2基因 分子特征
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家蚕表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的免疫原性初步研究(英文) 被引量:11
8
作者 于涟 宋坤华 +2 位作者 张耀洲 黄耀伟 李建荣 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CSCD 北大核心 2000年第1期9-16,共8页
在家蚕培养细胞及幼蚕中表达传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)主要宿主保护性抗原 VP2蛋白的基础上 ,初步研究了该表达产物的免疫原性 .Western免疫印迹和 ELISA均检测到春蚕和秋蚕中的 VP2蛋白活性 .含 VP2的春蚕蚕血制成的注射疫苗皮下注射... 在家蚕培养细胞及幼蚕中表达传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)主要宿主保护性抗原 VP2蛋白的基础上 ,初步研究了该表达产物的免疫原性 .Western免疫印迹和 ELISA均检测到春蚕和秋蚕中的 VP2蛋白活性 .含 VP2的春蚕蚕血制成的注射疫苗皮下注射 18日龄非免疫鸡 ,两周后二免 ;含 VP2的秋蚕蚕血冻干制成口服疫苗 ,隔天喂服 18日龄非免疫鸡 .于首免后第 10 ,13,2 1,2 8,37日分别采血 ,第 37日攻毒 .病毒血清中和试验显示注射组及口服组的中和抗体滴度最高可达 1∶ 42 11.3和 1∶ 3118.9,攻毒结果显示它们对 IBDV中国标准强毒株 BC6/85的攻击保护率为 10 0 %和 80 %.以上研究表明家蚕表达的 VP2蛋白具有良好的免疫原性 ,从而为开发实用化低成本的疫苗打下了扎实基础 . 展开更多
关键词 家蚕 IBDV vp2基因 重组疫苗 免疫原性 表达系统
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猪细小病毒VP_2基因的克隆、测序与原核表达 被引量:15
9
作者 赵俊龙 陈焕春 +2 位作者 吕建强 肖少波 周复春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期195-198,共4页
利用PCR技术从猪细小病毒的RFDNA模板中扩增了含有VP2 全基因的 2 0kb的基因片段 ,将PCR产物克隆至 pMD18 T载体 ,利用双脱氧末端终止法测定了VP2 全基因的核苷酸序列。将所得的核苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与GenBank中的相应序... 利用PCR技术从猪细小病毒的RFDNA模板中扩增了含有VP2 全基因的 2 0kb的基因片段 ,将PCR产物克隆至 pMD18 T载体 ,利用双脱氧末端终止法测定了VP2 全基因的核苷酸序列。将所得的核苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与GenBank中的相应序列进行同源性比较 ,同源性均在 99%以上 ,从而说明该蛋白的碱基序列和氨基酸序列均具有高度的保守性。将VP2 全基因分别克隆入原核表达载体pET15 (b)、pET17(b)和 pET2 8(b)构建成表达质粒 pET15bVP2 、pET17bVP2 和 pET2 8bVP2 ;将含有VP2 基因起始位点至EcoRⅠ切点间的 0 8kb片段克隆入 pET17(b)中构建成表达质粒 pET17bVP2 f。利用上述四种质粒转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导后SDS PAGE检测表达情况 ,结果发现 pET17bVP2 f质粒在 45kD处有一特异性表达带 ,而其它几种质粒均未看到特异性表达带 ,推测VP2 基因 3′端的某些结构可能对VP2 全基因的表达有一定影响。这一结果对研究VP2 基因的结构与功能具有重要意义。 展开更多
关键词 猪细小病毒 vp2基因 基因克隆 序列分析 原核表达
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一株内源性猪细小病毒的分离与鉴定 被引量:12
10
作者 李昌文 仇华吉 +5 位作者 童光志 田志军 王玉春 韩孝成 刘红全 董齐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期90-93,共4页
本研究从不明病毒污染的PK15细胞培养物中分离到了一株猪细小病毒,从形态学、血清学、分子生物学几个方面对其进行了鉴定,同时克隆了该毒株VP2基因,并测定了其核苷酸序列。将该毒株命名为SY-99株。
关键词 猪细小病毒 内源性病毒 PK15细胞系 vp2基因
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猪细小病毒SC-1株VP2基因的克隆及生物信息学分析 被引量:12
11
作者 罗燕 郭万柱 +1 位作者 刘艳丽 殷华平 《动物医学进展》 CSCD 2005年第8期87-91,共5页
根据PPV NADL-2株基因组序列设计了一对引物,以复制型DNA为模板,通过PCR 扩增出长约2.0 kb的DNA片段,将其插入克隆载体质粒pUC19,构建重组质粒pPVP2,测序显示PPV-SC-1 VP2基因全长1 740 bp,共编码579个氨基酸.多序列比对结果显示,猪细... 根据PPV NADL-2株基因组序列设计了一对引物,以复制型DNA为模板,通过PCR 扩增出长约2.0 kb的DNA片段,将其插入克隆载体质粒pUC19,构建重组质粒pPVP2,测序显示PPV-SC-1 VP2基因全长1 740 bp,共编码579个氨基酸.多序列比对结果显示,猪细小病毒VP2基因保守性强,仅存在个别的差异;密码子偏向性分析结果表明,PPV-SC-1 VP2基因在同一氨基酸的不同密码子的选择上存在一定的偏向性,并且与PPV-SC-1 NS1在密码子的偏向性上具有相同的属性,主要偏向于使用以A结尾的密码子;氨基酸疏水性分析表明,PPV-SC-1 VP2蛋白在77~82、291~304、362~373、400~411、465~477等位点存在较明显的亲水区段;跨膜区结构分析显示该蛋白不存在显著意义的跨膜区;分析该蛋白的抗原位点可能位于60~68、81~88、266~275、351~357、398~404位点处. 展开更多
关键词 猪细小病毒 猪细小病毒SC1 vp2基因 克隆 生物信息学
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DNA免疫诱导SPF鸡对传染性法氏囊病的免疫保护反应 被引量:10
12
作者 步志高 赵晓岩 +3 位作者 刘长军 王笑梅 于康震 徐宜为 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第5期325-328,共4页
传染性法氏囊病病毒 (IBDV)D78株VP2基因插入真核表达质粒pCICMV启动子下游多克隆位点 ,构成pCIVP2用于 3周龄SPF雏鸡DNA免疫。试验鸡每羽腿部肌肉注射pCIVP2 10 0 μg,2周后加强免疫一次 ;二免 2周后 ,人工感染vvIBDVG株。结果 ,两次... 传染性法氏囊病病毒 (IBDV)D78株VP2基因插入真核表达质粒pCICMV启动子下游多克隆位点 ,构成pCIVP2用于 3周龄SPF雏鸡DNA免疫。试验鸡每羽腿部肌肉注射pCIVP2 10 0 μg,2周后加强免疫一次 ;二免 2周后 ,人工感染vvIBDVG株。结果 ,两次免疫后血清中和抗体试验组为阳性而对照组为阴性 ;试验组攻毒后发病 11/ 11,攻毒后 1周存活 10 / 11,所有存活鸡法氏囊较正常中度或轻度萎缩 ;对照组发病 6 / 6 ,病死 5 / 6 ,存活 1/ 6 ;存活鸡法氏囊较正常严重萎缩。组织病理学观察表明 ,无论法氏囊淋巴滤泡面积还是其中的淋巴细胞数量 ,免疫试验组都要远远大于或多于免疫对照组。结果表明 ,VP2基因DNA免疫可诱导SPF鸡产生中和抗体 ,并形成对IBDV超强毒株致死攻击的免疫保护 ,虽不能阻止临床发病及法氏囊病理损伤发生 ,但有可能减缓法氏囊病理损伤程度。 展开更多
关键词 DNA免疫 vp2基因 传染性法氏囊病病毒
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传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用 被引量:17
13
作者 欧阳伟 王永山 +2 位作者 周宇 张海彬 唐雨德 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期595-603,共9页
将近期引起传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒p... 将近期引起传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应,抗原效价达到1.6×103;用Western blotting分析,在53kDa处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒,在感染细胞中发现了"包涵体样"结构。用HisTrap HP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原,建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物,免疫2周龄SPF鸡,一次免疫14d后,ELISA检测抗体效价为8×102,中和抗体效价为1106,攻毒实验的存活率为30%;二次免疫14d后,ELISA抗体效价为3.2×103,中和抗体效价为2536,存活率为100%。在实验观察7d内,重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化,法氏囊/体重比高于对照组(P<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 vp2基因 病毒样颗粒 包涵体样结构 间接ELISA 免疫实验
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Pathogenic Antigenic and Molecular Characterization of the Very Virulent Strain(Gx) of Infectious Bursal Disease Virus Isolated in China 被引量:15
14
作者 WANGXiao-mei FUChao-yang +4 位作者 GAOHong-lei SONGXiou-long ZENGXiang-wei ZHANGMan-fu WallaceBLlim 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2003年第5期566-572,共7页
The very virulent infectious bursal disease virus (vvIBDV) strain Gx was isolated from a poutl-try farm in Guangxi Province, China, during 1996. The mortality in the infected flock was 80% and occurred 5 days after im... The very virulent infectious bursal disease virus (vvIBDV) strain Gx was isolated from a poutl-try farm in Guangxi Province, China, during 1996. The mortality in the infected flock was 80% and occurred 5 days after immunization with serotype I IBD vaccine. The results of antigen-capture ELISA (AC-ELISA), pathogenicity testing, cloning and sequence analysis of the VP2 gene showed that the deduced amino acid sequence of strain Gx VP2 was the same as vvIBDV UK661, which is considered as a reference strain for European vvIBDVs. The antigenicity of the Gx strain was the same as an European vvIBDV strain 849. The EID50 of Gx virus was 10-8.25/0. 2 ml, and the mortality was 64% when 4 week-old SPF chickens were challenged at dosage of 2×10~3EID50. We have demonstrated that the IBDV strain Gx isolated in China is vvIBDV according to European standards. 展开更多
关键词 Infectious bursal disease Very virulent strain(Gx) PATHOGENICITY vp2 gene
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IL-2与猪细小病毒VP_2基因双表达载体的构建及免疫原性的研究 被引量:11
15
作者 崔保安 魏战勇 +4 位作者 王学斌 黄克和 金喜新 董振杰 郑兰兰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期425-430,共6页
将白细胞介素-2基因和猪细小病毒VP2基因主要抗原区克隆至pCI-neo真核表达载体中,构建了pCIneo-IL2-VP2重组质粒,用脂质体将其转染到PK-15细胞中,利用免疫荧光方法检测在体外表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCIneo-IL2-VP2重组质粒、... 将白细胞介素-2基因和猪细小病毒VP2基因主要抗原区克隆至pCI-neo真核表达载体中,构建了pCIneo-IL2-VP2重组质粒,用脂质体将其转染到PK-15细胞中,利用免疫荧光方法检测在体外表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCIneo-IL2-VP2重组质粒、对照组pCI-neo和猪细小病毒活疫苗通过肌肉注射进行免疫,检测免疫小鼠的淋巴细胞转化功能,特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果显示,pCIneo-IL2-VP2在体外能够诱导PK-15细胞表达VP2蛋白,小鼠注射pCIneo-IL2-VP2质粒1周后能够诱导机体产生抗体,4周时达到峰值,与活疫苗对照组产生的抗体滴度、诱导T淋巴细胞增殖和诱导强的细胞毒性基本一致。试验表明,构建的pCIneo-IL2-VP2能够有效诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。 展开更多
关键词 猪细小病毒 vp2基因 IL-2 基因疫苗
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猪细小病毒SY-99株VP2基因的序列分析 被引量:10
16
作者 李昌文 仇华吉 +5 位作者 吴丹 刘红全 薛强 智海东 钱平 童光志 《动物医学进展》 CSCD 2001年第1期44-46,71,共4页
克隆并测定猪细小病毒 SY- 99株VP2基因 ,与 NADL- 2 ( 4 973)株、NADL- 2( 5 0 75 )株、Kresse株和 US- 1株 VP2基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行比较与分析 ,发现 PPV SY- 99株与 Kresse株 VP2基因核苷酸和氨基酸同一性最高 ,... 克隆并测定猪细小病毒 SY- 99株VP2基因 ,与 NADL- 2 ( 4 973)株、NADL- 2( 5 0 75 )株、Kresse株和 US- 1株 VP2基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行比较与分析 ,发现 PPV SY- 99株与 Kresse株 VP2基因核苷酸和氨基酸同一性最高 ,推测 SY-99株可能为一强毒株。 展开更多
关键词 猪细小病毒 vp2基因 序列分析
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传染性法氏囊病超强毒Gx株的致弱研究 被引量:12
17
作者 曾祥伟 王笑梅 +2 位作者 高宏雷 付朝阳 魏萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-144,共5页
本研究成功将鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDVGx株通过SPF鸡胚的快速培育及鸡胚成纤维细胞传代致弱 ,揭示了vvIBDV从超强毒力向弱毒力转化过程中 ,其主要结构蛋白VP2基因核苷酸及推导的氨基酸序列的变化规律。对不同代次细胞毒进行了序列... 本研究成功将鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDVGx株通过SPF鸡胚的快速培育及鸡胚成纤维细胞传代致弱 ,揭示了vvIBDV从超强毒力向弱毒力转化过程中 ,其主要结构蛋白VP2基因核苷酸及推导的氨基酸序列的变化规律。对不同代次细胞毒进行了序列分析 ,发现细胞毒在第 7代以前 ,VP2基因序列没有改变 ,与欧洲标准超强毒氨基酸同源性达 10 0 % ;细胞毒第 8代 ,有个别核苷酸发生了改变 ,但没有影响氨基酸序列 ;细胞毒第 9代是变化复杂的过渡代 ;10代毒VP2基因与欧洲标准弱毒Cu_1氨基酸序列同源性达 97% ;以后的细胞适应毒至 2 0代 ,其VP2基因序列不再改变。致病性实验表明原代毒对 4周龄SPF鸡致死率为 6 4 % ,细胞毒第 5代的致死率为 6 0 % ,而 2 0代毒对鸡无致病性 ,在鸡体内连续传代 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病超强毒 传代致弱 vp2 基因 VVIBDV Gx株
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鹅细小病毒vp2基因片段在原核系统中的表达及多克隆抗体的制备 被引量:9
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作者 侯秋莲 王静 +3 位作者 刘胜旺 孔宪刚 韩宗玺 冉多良 《中国病毒学》 CAS CSCD 2005年第4期383-387,共5页
根据鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)中国分离株HG5/82基因序列,设计引物,利用PCR技术扩增出HG5/82株vp2基因,将其克隆到pMD18-T载体后,转化入感受态细胞TG1中增殖。筛选阳性质粒,将其与原核表达载体pPROEXTMHTb分别用NcoI酶切后回收... 根据鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)中国分离株HG5/82基因序列,设计引物,利用PCR技术扩增出HG5/82株vp2基因,将其克隆到pMD18-T载体后,转化入感受态细胞TG1中增殖。筛选阳性质粒,将其与原核表达载体pPROEXTMHTb分别用NcoI酶切后回收目的片断,进行定向连接,产物转化入感受态DH5α,重组质粒经酶切和测序证实目的基因正确克隆到表达载体的预期位点且插入方向正确,构建了含有HG5/82主要结构基因vp25’端969bp片段的原核表达载体。经IPTG诱导后表达出与预期大小相符的约36kDa的融合蛋白,表达形式为包涵体。薄层扫描结果表明表达产物约占菌体总蛋白的21.4%。包涵体通过6mol/L盐酸胍裂解后,利用镍离子亲和树脂进行纯化,用纯化的分子量为36kDa的融合蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗鹅细小病毒部分结构蛋白多克隆抗体。Westernblot分析表明该多克隆抗体与HG5/82毒株具有反应性,说明该融合蛋白具有抗原性。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 vp2基因 克隆 表达 多克隆抗体
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犬细小病毒VP2基因的遗传变异分析 被引量:14
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作者 易立 程世鹏 +2 位作者 闫喜军 王建科 罗彬 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期452-459,共8页
为了分析中国部分省市犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前CPV流行毒株现状,本项研究通过对2006-2008年武汉、南京和北京的宠物犬疑似犬细小病毒粪便样品进行检测,并对犬细... 为了分析中国部分省市犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前CPV流行毒株现状,本项研究通过对2006-2008年武汉、南京和北京的宠物犬疑似犬细小病毒粪便样品进行检测,并对犬细小病毒PCR阳性产物进行RFLP分析,未发现宠物犬感染猫细小病毒的现象。从PCR检测犬细小病毒阳性标本15份以及广泛使用的犬细小病毒疫苗2株中克隆犬细小病毒VP2基因并进行序列分析,结果显示:检测到的15株犬细小病毒均属于CPV-2a亚型;与GenBank中的其他CPV-2a亚型相比,其中14株犬细小病毒存在独特的Ile324变异,并且国内主要使用的两个犬细小病毒疫苗株均属于CPV-2型,但是与CPV-2型原型毒株CPV-b相比,VP2蛋白氨基酸序列已经发生改变。通过构建基于犬细小病毒VP2蛋白氨基酸序列的系统发生树,发现在我国主要城市的宠物犬中流行的犬细小病毒CPV-2a亚型毒株单独构成一簇,并且与2008年的韩国分离株K001关系紧密,而与早期其他地区的犬细小病毒CPV-2a亚型流行株距离较远。这提示犬细小病毒流行株的变异具有某种时间和空间相关性。本研究对犬细小病毒流行株的主要衣壳蛋白VP2的编码蛋白进行遗传变异分析,为更好地预防和控制犬细小病毒提供基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2基因 遗传变异
原文传递
含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建 被引量:11
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作者 罗燕 郭万柱 +5 位作者 徐志文 刘艳丽 殷华平 王新 王小玉 苟琳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1064-1068,共5页
将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察... 将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株(命名为SA215-B)DNA用BamHⅠ酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93 ku的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 猪细小病毒 vp2基因 EGFP 重组病毒
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