期刊文献+
共找到302篇文章
< 1 2 16 >
每页显示 20 50 100
病毒诱导的基因沉默(VIGS)研究进展 被引量:33
1
作者 宋震 李中安 周常勇 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1885-1894,共10页
病毒诱导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是一种RNA介导的植物抗病毒机制,近年来已被用作研究植物基因功能的反向遗传学手段。与转基因、基因敲除、反义抑制等基因功能研究方法相比,VIGS技术研究周期短,不需要遗传转化,... 病毒诱导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是一种RNA介导的植物抗病毒机制,近年来已被用作研究植物基因功能的反向遗传学手段。与转基因、基因敲除、反义抑制等基因功能研究方法相比,VIGS技术研究周期短,不需要遗传转化,具有低成本、高通量等优势。因此,VIGS已被广泛应用于植物抗病抗逆、生长发育以及代谢调控等生理途径相关基因的功能鉴定。综述了VIGS的机制、技术发展、沉默效率的影响因素及其在植物基因功能鉴定中的应用,并对VIGS在植物性状改良及植物保护方面的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 vigs 功能基因组学 病毒载体
原文传递
植物转基因沉默研究进展 被引量:11
2
作者 程海鹏 朱睦元 +1 位作者 金伟 边红武 《生物工程进展》 CSCD 2001年第6期47-49,42,共4页
随着转基因技术在植物中的广泛应用 ,转基因沉默受到越来越多的重视。转基因沉默可发生在转录和转录后两种水平 ,其基本特征就是依赖于同源的重复序列。转基因的重复拷贝间 ,转基因与同源的内源基因间及RNA病毒与同源转基因间都会发生... 随着转基因技术在植物中的广泛应用 ,转基因沉默受到越来越多的重视。转基因沉默可发生在转录和转录后两种水平 ,其基本特征就是依赖于同源的重复序列。转基因的重复拷贝间 ,转基因与同源的内源基因间及RNA病毒与同源转基因间都会发生基因沉默。可能有不同的机制导致转基因沉默 。 展开更多
关键词 植物 转基因沉默 RMD vigs
下载PDF
叶用莴苣热激蛋白基因LsHsp70-2711的克隆及高温胁迫下的功能分析 被引量:21
3
作者 李雅博 李婷 +1 位作者 韩莹琰 范双喜 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1486-1494,共9页
【目的】通过克隆Hsp70相关基因,并利用VIGS分析叶用莴苣热胁迫下Hsp70表达量和形态变化,为解析热激蛋白基因Hsp70在高温胁迫下的响应机制及分子机理奠定基础。【方法】通过同源克隆及RACE技术,获得叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-2711的cDNA... 【目的】通过克隆Hsp70相关基因,并利用VIGS分析叶用莴苣热胁迫下Hsp70表达量和形态变化,为解析热激蛋白基因Hsp70在高温胁迫下的响应机制及分子机理奠定基础。【方法】通过同源克隆及RACE技术,获得叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-2711的cDNA全长序列,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析该基因在不同温度和不同高温时间下的叶用莴苣热敏品种‘P-S11’和耐热品种‘G-S59’的表达差异,确定基因和高温的相关性。根据VIGS技术,构建p TRV-LsHsp702711瞬时沉默载体,转化农杆菌GV1301,注射法侵染叶用莴苣叶片,三周后经PCR鉴定得到阳性植株。对照组和阳性组在基因表达和形态上进行对比,对照植株和阳性植株热胁迫和干旱处理后再次分析LsHsp70-2711的表达特性,观测形态变化。【结果】LsHsp70-2711 cDNA全长为2 226 bp,开放阅读框为2 154 bp,编码718个氨基酸,与拟南芥(NP_187864.1)、番茄(NP_001266213.1)、水母雪莲花(AAB99745.1)等物种的Hsp70同源性达到80%以上,证明此基因属于Hsp70家族。根据qRT-PCR结果,高温胁迫下该基因在两个品种中的表达均上调,在耐热品种中总体表达水平均高于热敏品种,耐热品种LsHsp70-2711的表达量最大值出现在42℃、60 min,37℃、60 min时热敏品种基因表达量达最大值,且在42℃高温下热敏品种‘P-S11’中基因表达随着胁迫时间的增加受到抑制,而耐热品种‘G-S59’则能长时间保持较高的表达水平,此结果和田间两品种间耐热差异表现相符合。亚细胞定位显示,LsHsp70-2711主要在细胞质中。将构建好的载体侵入叶用莴苣,鉴定后获得阳性植株。由定量PCR结果可知,未进行胁迫处理的阳性植株与对照株相比,LsHsp70-2711表达量下降,茎长明显增长。热胁迫和干旱处理后的阳性植株LsHsp70-2711表达量显著低于对照植株,高温处理对LsHsp70-2711的影响大于干旱胁迫。【结论】LsHsp70-2711属于Hsp70基因家� 展开更多
关键词 叶用莴苣 HSP70 基因克隆 高温胁迫 基因沉默
下载PDF
茄子SmMsrA基因VIGS表达载体的构建及表达分析 被引量:16
4
作者 赵祯 刘富中 +3 位作者 张映 齐东霞 陈钰辉 连勇 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1495-1504,共10页
利用RT-PCR从茄子单性结实品系D-10中获得甲硫氨酸亚砜还原酶A基因(Sm Msr A)的编码区。通过Gateway同源重组技术,构建了3个分别含Sm Msr A基因不同片段的烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(VIGS)表达载体p TRV2-Sm... 利用RT-PCR从茄子单性结实品系D-10中获得甲硫氨酸亚砜还原酶A基因(Sm Msr A)的编码区。通过Gateway同源重组技术,构建了3个分别含Sm Msr A基因不同片段的烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(VIGS)表达载体p TRV2-Sm Msr Ai。表达载体转入农杆菌GV3101后,用注射压迫法侵染茄子叶片。采用表型观察、TRV病毒分子检测和q RT-PCR技术,评价构建的VIGS体系对Sm Msr A基因的沉默效果。结果表明,报告基因PDS沉默后叶片呈现明显的光漂白现象,Sm Msr A基因沉默后叶片呈花叶状,果实变小,叶片和果实中的Sm Msr A基因的表达量明显降低,表明Sm Msr A基因是正向调控茄子果实发育的相关基因。 展开更多
关键词 茄子 SmMsrA基因 vigs GATEWAY技术 果实发育
原文传递
植物瞬间表达系统与功能基因组学研究 被引量:14
5
作者 王华忠 陈雅平 陈佩度 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期367-374,共8页
结构基因组学和功能基因组学的发展使特定植物基因组和转录组序列的获取更为方便和快捷。随之而来的是对各种基因和调控序列的功能注释,探索植物生长和发育的遗传机理。表达和调控表达是遗传物质的自身语言和动态属性,因此通过植物细胞... 结构基因组学和功能基因组学的发展使特定植物基因组和转录组序列的获取更为方便和快捷。随之而来的是对各种基因和调控序列的功能注释,探索植物生长和发育的遗传机理。表达和调控表达是遗传物质的自身语言和动态属性,因此通过植物细胞内表达来分析目标基因和序列的表达和调控行为是功能分析的主要立足点。除创造转基因植株外,近几年来植物细胞瞬间表达系统得到了广泛的使用,与基因重排、病毒诱导基因沉默和RNA干扰等新兴技术的结合使其在植物功能基因组研究中扮演了越来越重要的角色。 展开更多
关键词 瞬间表达 农杆菌渗透法 RNA干扰 病毒诱导基因沉默
下载PDF
基于牡丹类黄酮糖基转移酶基因建立VIGS技术体系 被引量:13
6
作者 舒庆艳 朱瑾 +5 位作者 门思琦 郝青 王倩玉 刘政安 曾秀丽 王亮生 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期168-176,共9页
牡丹(Paeonia suffruticosa Andrews)花色的化学基础研究较为深入,但因其无遗传转化体系,导致花色相关基因的功能验证只能利用其他植物进行旁证。利用保守区段长分别为413和418 bp的牡丹花瓣类黄酮糖基转移酶基因PsUF3GT和PsUF5GT,通过V... 牡丹(Paeonia suffruticosa Andrews)花色的化学基础研究较为深入,但因其无遗传转化体系,导致花色相关基因的功能验证只能利用其他植物进行旁证。利用保守区段长分别为413和418 bp的牡丹花瓣类黄酮糖基转移酶基因PsUF3GT和PsUF5GT,通过VIGS表达载体,采用二因素三水平的试验体系对目的基因进行沉默。结果表明,PsUF3GT和PsUF5GT的表达量在花斑中(盛开期花瓣,真空抽滤15 min)和非斑中(蕾期花瓣,真空抽滤10 min)分别比空载体处理的花斑中(盛开期花瓣,真空抽滤10 min)和非斑中(蕾期花瓣,真空抽滤15 min)降低了65.0%和85.0%;花斑中总花青苷含量分别降低了24.2%和28.2%,尤其是盛开期花瓣(真空抽滤15 min)处理后3G型糖苷降低了92.2%,蕾期花瓣(真空抽滤10 min)处理后3G5G型糖苷降低了54.9%。由此获得了沉默PsUF3GT和PsUF5GT的适宜体系:以盛开期或者花蕾期带花柄的花朵为材料,抽真空渗透10~15 min后,置于去离子水中暗培养1 d(8℃,湿度60%);之后转移至23~25℃、湿度60%的环境,光照培养3 d后可用于检测和分析。本研究中建立的VIGS体系可有效沉默花瓣中的内源基因,为牡丹基因功能验证及其花色形成的分子机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牡丹 花色 vigs 类黄酮糖基转移酶基因(UFGT) 功能验证
原文传递
VIGS:植物功能基因组学研究的革命 被引量:13
7
作者 姚丹青 张微微 +3 位作者 原丽华 潘俊松 何欢乐 蔡润 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期155-161,共7页
病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术是一种RNA介导的抗病毒防御反应机制,目前在植物反向遗传学领域已经表现出巨大的潜力。VIGS技术不仅优于传统的植物转基因技术,方法简便,高效耐用,而且具有高通量特性。在功能... 病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术是一种RNA介导的抗病毒防御反应机制,目前在植物反向遗传学领域已经表现出巨大的潜力。VIGS技术不仅优于传统的植物转基因技术,方法简便,高效耐用,而且具有高通量特性。在功能基因组学领域的研究中,这些优越性已经使VIGS技术成为最具吸引力的首选技术手段。目前,VIGS体系应用最成功的植物是病毒学家常用的模式植物-本氏烟草(Nicotiana benthamiana),与此同时,也在努力改良VIGS技术,使其能够在包括单子叶植物在内的其它物种中得到广泛应用。我们讨论的重点是针对利用VIGS技术来确定基因功能,该技术已经在抗病性,逆境胁迫,细胞信号传导以及次生代谢生物合成途径研究中显示出相关基因功能的多样性,并随之构建出一系列新的相关模型。 展开更多
关键词 vigs 病毒载体 基因沉默 功能基因组学
下载PDF
植物中病毒诱导基因沉默技术的研究与应用进展 被引量:13
8
作者 李姣 于宗霞 冯宝民 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1537-1542,共6页
为了给植物研究中病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术的应用提供相关理论参考。本综述通过查阅近几年来相关的国内外文献,从VIGS的技术原理、调控机制、影响因素、应用研究等方面进行归纳和总结。VIGS是通过检测细胞质中病毒的RNA序列,并且... 为了给植物研究中病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术的应用提供相关理论参考。本综述通过查阅近几年来相关的国内外文献,从VIGS的技术原理、调控机制、影响因素、应用研究等方面进行归纳和总结。VIGS是通过检测细胞质中病毒的RNA序列,并且对它进行降解的过程,该技术属于RNA介导的,基因转录后沉默的植物抗病毒机制,如今VIGS已经成功地应用于各种模式植物和农作物中的基因功能的正反向研究。现在随着高通量测序技术的不断发展,VIGS技术必将成为大批量基因快速功能鉴定的重要工具之一。 展开更多
关键词 vigs 原理 影响因素 应用
原文传递
利用VIGS技术研究草莓FaMYB5的功能 被引量:12
9
作者 王玲 汤浩茹 +3 位作者 王小蓉 陈清 江雷雨 林源秀 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期33-42,共10页
以‘丰香’草莓(Fragaria×ananassa‘Toyonaka’)为材料,采用病毒诱导的基因沉默技术(Virus-induced Gene Silencing,VIGS)对果实中类黄酮化合物代谢相关转录因子基因FaMYB5进行沉默,并对沉默后果实类黄酮化合物代谢途径相关的结... 以‘丰香’草莓(Fragaria×ananassa‘Toyonaka’)为材料,采用病毒诱导的基因沉默技术(Virus-induced Gene Silencing,VIGS)对果实中类黄酮化合物代谢相关转录因子基因FaMYB5进行沉默,并对沉默后果实类黄酮化合物代谢途径相关的结构基因和其他转录因子基因表达量进行半定量RT-PCR及RT-qPCR分析。并分别采用HPLC和香草醛—硫酸比色法对沉默后果实中花青素苷和原花青素含量进行测定。成功构建了pTRV2-FaMYB5的VIGS沉默载体,并建立了草莓果实VIGS沉默体系,FaMYB5基因沉默效率达60%;FaMYB5基因沉默处理与阴性对照相比,草莓类黄酮化合物代谢途径相关结构基因和转录因子表达量均发生改变,其中FaMYB9、FaLAR、FaDFR、FaANR表达量显著增加,从而导致果实中原花青素含量增加;而花青素合成相关基因FaANS的表达量减少1/2,FaMYB10表达量变化并不显著。此外,bHLH家族的转录因子基因FabHLH3和FabHLH3Δ随着FaMYB5的沉默表达量显著下降,而FaGL3显著升高。结果进一步证明FaMYB5转录因子对草莓类黄酮化合物代谢途径中的原花青素合成途径起负调控作用。 展开更多
关键词 草莓 vigs FaMYB5 负调控类黄酮代谢
原文传递
The WRKY transcription factor PlWRKY65 enhances the resistance of Paeonia lactiflora(herbaceous peony)to Alternaria tenuissima 被引量:13
10
作者 Xue Wang Junjie Li +3 位作者 Jing Guo Qian Qiao Xianfeng Guo Yan Ma 《Horticulture Research》 SCIE 2020年第1期2092-2103,共12页
In this study,the disease resistance gene PlWRKY65 was isolated from the leaves of Paeonia lactiflora and analyzed by bioinformatics methods,and the localization of the encoded protein was explored.Quantitative real-t... In this study,the disease resistance gene PlWRKY65 was isolated from the leaves of Paeonia lactiflora and analyzed by bioinformatics methods,and the localization of the encoded protein was explored.Quantitative real-time PCR(qRTPCR)was also used to explore the response of this gene to Alternaria tenuissima.The results showed that the gene sequence contained multiple cis-acting elements involved in the response to hormone signaling molecules belonging to the IIe subgroup of the WRKY family,and the encoded proteins were located in the nucleus.The PlWRKY65 gene has a positive regulatory effect on A.tenuissima infection.After silencing the PlWRKY65 gene via virus-induced gene silencing(VIGS),it was found that the gene-silenced plants were more sensitive to A.tenuissima infection than the wild plants,exhibiting more severe infection symptoms and different degrees of changes in the expression of the pathogenesis-related(PR)genes.In addition,we showed that the endogenous jasmonic acid(JA)content of P.lactiflora was increased in response to A.tenuissima infection,whereas the salicylic acid(SA)content decreased.After PlWRKY65 gene silencing,the levels of the two hormones changed accordingly,indicating that PlWRKY65,acting as a disease resistance-related transcriptional activator,exerts a regulatory effect on JA and SA signals.This study lays the foundation for functional research on WRKY genes in P.lactiflora and for the discovery of candidate disease resistance genes. 展开更多
关键词 GENES RESISTANCE vigs
下载PDF
本生烟NbSABP2和NbSAMT基因的克隆及VIGS表达载体构建 被引量:10
11
作者 朱峰 张萍 +1 位作者 林宏辉 席德慧 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期453-458,共6页
采用RT-PCR技术从本生烟中分别克隆获得水杨酸结合蛋白2(salicylic acid-bindingprotein2,SABP2)和水杨酸羧基转甲基酶(SA methyl transferase,SAMT)基因的全长序列.利用Gateway定向克隆系统,分别将SABP2和SAMT部分序列片段插入到烟草... 采用RT-PCR技术从本生烟中分别克隆获得水杨酸结合蛋白2(salicylic acid-bindingprotein2,SABP2)和水杨酸羧基转甲基酶(SA methyl transferase,SAMT)基因的全长序列.利用Gateway定向克隆系统,分别将SABP2和SAMT部分序列片段插入到烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)载体中,构建了重组病毒载体pTRV2-NbSABP2和pTRV2-NbSAMT.将重组载体转化农杆菌GV2260,通过TRV病毒诱导的基因沉默(virus-inducedgene silencing,VIGS)系统,分别抑制本生烟SABP2和SAMT基因的表达.与TRV2空载体相比,pTRV2-NbSABP2载体浸润的植株生长矮小,叶柄基部和叶脉褐化,叶片向下塌陷;pTRV2-NbSAMT载体浸润的植株生长正常,无明显的表型改变. 展开更多
关键词 本生烟 NbSABP2基因 NbSAMT基因 vigs 载体构建
原文传递
VIGS技术及其在棉花功能基因组研究中的应用进展 被引量:10
12
作者 张景霞 王芙蓉 +1 位作者 高阳 张军 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期469-473,共5页
病毒诱导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)是一种转录后基因沉默现象,是植物体内普遍存在的遗传免疫机制,现已被开发为快速、高效、高通量的反向遗传学技术,在植物基因功能研究中得到广泛应用。近年,利用VIGS技术进行棉... 病毒诱导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)是一种转录后基因沉默现象,是植物体内普遍存在的遗传免疫机制,现已被开发为快速、高效、高通量的反向遗传学技术,在植物基因功能研究中得到广泛应用。近年,利用VIGS技术进行棉花基因功能研究也取得了一定进展。本文对VIGS技术的发展、操作技术的优化进行了综述,尤其总结了VIGS技术在棉花抗病、品质改良、生长发育等基因鉴定和功能研究中的应用进展,并对其应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 棉花 vigs 基因功能 抗病基因 品质基因
下载PDF
茄子调控抗青枯病反应信号基因的筛选和鉴定 被引量:9
13
作者 肖熙鸥 蒋晶 +3 位作者 陈娜 雷建军 吕玲玲 曹必好 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1295-1304,共10页
以抗青枯病茄子自交系‘E-31’为材料,利用病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术沉默抗病材料中调控抗病相关的信号基因,研究其在茄子抗青枯病反应中的作用。q RT-PCR结果表明,与对照植株相比,VIGS诱导基因沉默植... 以抗青枯病茄子自交系‘E-31’为材料,利用病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术沉默抗病材料中调控抗病相关的信号基因,研究其在茄子抗青枯病反应中的作用。q RT-PCR结果表明,与对照植株相比,VIGS诱导基因沉默植株,目的基因的表达量均下降。MAPK级联途径相关基因MKK2和MAPK6,SA途径中的信号基因PAD4、NPR1、SGT1、TGA和Glu A,以及WRRY转录因子基因WRKY70沉默,接种青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)后植株出现不同程度的枯萎,而对照植株无变化。MAPK级联途径相关基因MAPK3和MAPK4,SA途径中的信号基因NDR1,ET途径中的信号基因EIN2和EIL1,JA途径信号基因JAR1沉默后,植株均未出现萎蔫症状。研究结果表明,MKK2、MAPK6、PAD4、NPR1、SGT1、TGA、Glu A和WRKY70等基因在茄子调控抗青枯病反应中起正调控作用,而MAPK3、MAPK4、NDR1、EIL1、EIN2和JAR1等基因可能未参与或起负调作用,推断茄子‘E-31’调控青枯病信号途径可能主要依赖于SA途径。 展开更多
关键词 茄子 青枯病 信号基因 SA vigs
原文传递
病毒诱导的基因沉默在番茄功能基因组学研究中的应用进展 被引量:9
14
作者 杨同文 武安泉 +1 位作者 盛东峰 李成伟 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期564-576,共13页
对近年来病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术在番茄果实发育、激素调控、植物—病原物互作、防御害虫及非生物胁迫应答相关基因功能研究方面的进展进行了综述。
关键词 番茄 vigs 果实发育 植物-病原物互作
原文传递
VIGS诱导MdHB-1沉默对苹果果实成熟的影响 被引量:9
15
作者 温小红 姜永华 +1 位作者 周轲 任小林 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期113-119,共7页
为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,V... 为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,VIGS技术成功抑制果肉MdHB-1表达,使MdACO1表达量下调,果实的呼吸强度和乙烯释放速率受到显著抑制,果实硬度、可溶性固形物和可滴定酸质量分数的下降延缓。说明:MdHB-1不仅可以正向调控苹果果实MdACO1表达,还参与果实的成熟衰老过程。 展开更多
关键词 '澳洲青苹’苹果 vigs 转录因子MdHB-1 果实成熟
下载PDF
VIGS载体在蔬菜作物中的应用研究进展 被引量:11
16
作者 季娜娜 闵德栋 +2 位作者 邵淑君 李富军 张新华 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期810-816,共7页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是一种RNA介导的植物抗病毒机制,近年来在蔬菜作物基因功能的研究中,VIGS作为一种快速、高效、高通量的反向遗传学新技术发挥了重要作用。由于VIGS技术需要借助病毒载体来实现,... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是一种RNA介导的植物抗病毒机制,近年来在蔬菜作物基因功能的研究中,VIGS作为一种快速、高效、高通量的反向遗传学新技术发挥了重要作用。由于VIGS技术需要借助病毒载体来实现,所以选择适宜的病毒载体是在性状各异的蔬菜中成功构建VIGS体系的关键。本文介绍了在蔬菜作物中应用的VIGS载体及其在基因功能研究中的应用实例,并分析了病毒载体在诱导蔬菜作物基因沉默时存在的一些问题及解决方法。 展开更多
关键词 vigs 病毒载体 蔬菜 研究进展
原文传递
茄子SmWRKY65基因克隆及其对青枯病的抗性分析 被引量:8
17
作者 刘开 余炳伟 +2 位作者 李丹丹 陈娜 曹必好 《广东农业科学》 CAS 2021年第3期42-52,共11页
【目的】通过克隆SmWRKY65(Solanum melongena L.WRKY65)基因并分析其生物信息学与功能,以期探究SmWRKY65对茄子青枯病的响应情况。【方法】以茄子抗病植株(E-31)为试验材料、叶片cDNA为模板,通过PCR技术获得SmWRKY65基因,并利用ExPASy ... 【目的】通过克隆SmWRKY65(Solanum melongena L.WRKY65)基因并分析其生物信息学与功能,以期探究SmWRKY65对茄子青枯病的响应情况。【方法】以茄子抗病植株(E-31)为试验材料、叶片cDNA为模板,通过PCR技术获得SmWRKY65基因,并利用ExPASy ProtParam tool对其进行生物信息学分析。运用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)的方法对其不同组织部位与抗病、感病材料(E-32)中的响应情况进行分析;通过双酶切法构建亚细胞定位载体;运用病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术构建pTRV2-SmWRKY65载体并侵染茄子抗病植株。【结果】在茄子中成功克隆了SmWRKY65基因,该基因开放阅读框为834个核苷酸序列,编码277个氨基酸残基,在71~131区域具有1个含60个氨基酸的WRKY保守域,定位于细胞核中。时空表达分析发现,SmWRKY65在茄子根组织中的表达量最高,叶中次之,茎中最低;qRT-PCR分析表明,SmWRKY65在茄子抗病和感病材料中均响应青枯病菌的诱导上调表达;VIGS结果表明,与清水和pTRV2空载对照相比,接种青枯病菌后,pTRV2-SmWRKY65沉默植株的叶片表现出明显的萎蔫症状,结合qRT-PCR分析发现,pTRV2-SmWRKY65表达量较对照组明显下降。【结论】SmWRKY65在茄子抗病材料中的表达水平明显高于感病材料,且pTRV2-SmWRKY65植株与对照相比表现为易感症状,说明SmWRKY65沉默后茄子抗青枯病的能力下降,表明SmWRKY65可能涉及茄子青枯病抗性相关过程的调控。 展开更多
关键词 茄子 青枯病 WRKY转录因子 实时荧光定量PCR vigs
下载PDF
TRV介导的葡萄叶片VvANR基因瞬时表达分析 被引量:8
18
作者 杨波 刘海霞 +4 位作者 牛铁泉 张鹏飞 梁长梅 赵旗峰 温鹏飞 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期826-836,共11页
为建立葡萄叶片TRV-VIGS系统,分析验证VvANR基因功能,本研究以烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导基因沉默表达载体pTRV2-ANR,采用真空侵染和主叶脉针孔注射法分别侵染葡萄幼嫩、成熟叶片,观察表型并测定原花青素含量,实时荧... 为建立葡萄叶片TRV-VIGS系统,分析验证VvANR基因功能,本研究以烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导基因沉默表达载体pTRV2-ANR,采用真空侵染和主叶脉针孔注射法分别侵染葡萄幼嫩、成熟叶片,观察表型并测定原花青素含量,实时荧光定量PCR测定被侵染叶片中VvANR及其相关基因表达。结果表明,真空侵染的幼嫩、成熟叶片分别于第6、第7天出现漂白,侵染15 d后,幼嫩叶片几乎全部漂白,成熟叶片大面积漂白。主叶脉针孔注射侵染的幼嫩、成熟叶片分别于第17、第19天出现漂白;侵染25 d后,幼嫩和成熟叶片发生全叶漂白,且漂白均沿主叶脉逐渐扩展至整个叶面;对照均未发生漂白现象。pTRV2-ANR侵染后叶片中原花青素含量极显著降低,VvANR基因表达量极显著降低,且原花青素生物合成相关基因VvLAR1、VvLAR2、VvMYBPA1、VvMYBPA2、VvUFGT表达量显著降低,除VvUFGT表达量呈显著差异外,其余均呈极显著差异;而VvANS、VvDFR表达量轻微上调,且与对照差异不显著。本研究建立了葡萄叶片VIGS体系,为基因功能快速验证提供了新方法;同时,揭示了葡萄叶片中原花青素含量、VvANR表达及与相关基因的关系,本研究为完善葡萄原花青素积累机制奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 葡萄(Vitis vinifera L.) 叶片 VvANR vigs 表达分析
下载PDF
棉花VIGS病毒载体的构建及其在抗病基因功能鉴定的应用 被引量:8
19
作者 李建平 郝晓燕 +6 位作者 李琴 高升旗 常晓春 陈勋基 足木热木.吐尔逊 陈果 黄全生 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1203-1208,共6页
【目的】利用农杆菌介导的VIGS基因沉默技术,研究陆地棉抗病相关基因在棉花抗黄萎病中的功能。【方法】利用分子生物学技术构建VIGS病毒载体,建立VIGS病毒诱导沉默体系;利用此体系将棉花中的一个钙依赖蛋白(CDPK)基因,通过农杆菌介导在... 【目的】利用农杆菌介导的VIGS基因沉默技术,研究陆地棉抗病相关基因在棉花抗黄萎病中的功能。【方法】利用分子生物学技术构建VIGS病毒载体,建立VIGS病毒诱导沉默体系;利用此体系将棉花中的一个钙依赖蛋白(CDPK)基因,通过农杆菌介导在陆地棉中沉默,根据此基因沉默植株在病原菌环境下的发病情况研究该基因在棉花抗病中的功能。【结果】利用包含有Gh CPK抗病基因片段的VIGS病毒载体的农杆菌侵染棉花子叶,病毒载体上的目的基因片段由RNA聚合酶识别并合成双链RNA(double stranded RNA,dsRNA),dsRNA由Dicer酶识别并于其它RNA形成RNA诱导的沉默复合体(RNA induced silencing complex,RISC),RISC对内源Gh CPK mRNA进行识别和切割作用,内源Gh CPK mRNA降解而发生基因沉默。Gh CPK基因沉默导致棉苗对黄萎病敏感性增加,证明Gh CPK基因参与调控棉花抗病功能。【结论】病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)能够快速有效的研究Gh CPKs基因在棉花抗病中的功能。 展开更多
关键词 棉花 钙依赖蛋白基因 vigs 黄萎病
下载PDF
病毒诱导的基因沉默技术实验教学设计和实践 被引量:8
20
作者 侯巧明 张立 +1 位作者 贺新强 丁琦 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2015年第9期191-193,共3页
病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术是近年发展起来研究植物基因功能的新方法。利用含有目的基因片段的病毒载体侵染植物,导致植物体内相应的功能基因表达受到抑制成为沉默基因,相应功能缺失,从而推测目的基因的功能。该文克隆了烟草番茄红... 病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术是近年发展起来研究植物基因功能的新方法。利用含有目的基因片段的病毒载体侵染植物,导致植物体内相应的功能基因表达受到抑制成为沉默基因,相应功能缺失,从而推测目的基因的功能。该文克隆了烟草番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,插入到烟草脆裂病毒载体(TRV)中,构建了pTRV-PDS的VIGS载体,转入农杆菌侵染烟草后成功沉默了PDS基因,使烟草叶片出现白化表型,成功建立了烟草VIGS体系。将VIGS这个当前生物学研究热点引入教学实验中,改革更新实验教学内容,有益于学生扩展科研思维。 展开更多
关键词 vigs RNAI 烟草脆裂病毒 番茄红素脱氢酶
下载PDF
上一页 1 2 16 下一页 到第
使用帮助 返回顶部