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重组人干细胞因子生物学活性测定的质量控制研究 被引量：9
1
作者 王军志 赵阳 +1 位作者 陈国庆 饶春明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期294-296,共3页
目的 :建立干细胞因子 (stemcellfactor,SCF)体外生物学活性测定方法 ,用于该制品生物学效价测定。方法 :应用类原巨核细胞白血病细胞系的UT 7细胞株 ,比较不同细胞浓度、培养时间等条件下应用MTT染色的效果 ,确定最佳实验条件 ,并用国... 目的 :建立干细胞因子 (stemcellfactor,SCF)体外生物学活性测定方法 ,用于该制品生物学效价测定。方法 :应用类原巨核细胞白血病细胞系的UT 7细胞株 ,比较不同细胞浓度、培养时间等条件下应用MTT染色的效果 ,确定最佳实验条件 ,并用国家参考品校正SCF效价。结果 :UT 7细胞对SCF的反应存在量 效关系 ,并确定了最佳测定条件和剂量范围 ,效价测定重复性好 ,结果准确、客观 ,并用于重组SCF新生物制品的效价测定。结论 :已建立的UT 7细胞依赖株测定SCF生物学活性的方法可用于SCF的生物学活性的常规评价。 展开更多
关键词 重组人干细胞因子 效价 ut-7细胞 生物学活性 质量控制 rhSCF 造血干细胞移植
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重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41^+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞 被引量：4
2
作者 石小玉 李文林 +3 位作者 梁朝 张际青 赵林 李红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期212-218,共7页
目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin ... 目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin - 5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser2 2 2A)MEK 1基因克隆产物 ,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后 ,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD4 1+ 细胞的获取和细胞培养 :从脐带血分离的CD34+ 细胞通过TPO诱导表达CD4 1,FACS分离CD4 1+ 细胞。高糖DMEM培养液培养NIH 3T3和MDA -MB - 4 35细胞 ,U937细胞培养在RPMI- 16 4 0培养液 ,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株 ,Iscove’smodifiedDulbeco’s培养液中加入GM -CSF。③测定病毒滴度 :逆转录病毒载体转入包装细胞 2 93,36h后收集病毒上清液 ,感染NIH3T3细胞 ,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD4 1+ 、UT7、U937和MDA -MB - 4 35细胞 ,Westernblot检测基因产物的表达。结果 :2 93细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒 :3 1× 10 7,高滴度EC1- 4pMSCV病毒 :1 0×10 8。用稀释 8倍的病毒转染基因 ,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞 (转染阳性细胞 )分别是 6 0 73%、 展开更多
关键词 基因转染 小鼠干细胞逆转录病毒 CD41^+细胞 ut7细胞 U937细胞 MDA-MB-435细胞
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重组人促红细胞生成素生物学活性细胞学测定方法的建立 被引量：1
3
作者 朱佩娟 《海峡药学》 2019年第1期22-24,共3页
目的建立重组人促红细胞生成素生物学活性细胞学的测定方法。方法通过MTT比色法考察rhEPO对UT-7/EPO细胞增殖的促进作用,从而反映rh EPO的生物学活性。结果 rh EPO在0.005～100ng·mL-1浓度范围内对细胞的增殖具有促进作用;优化后... 目的建立重组人促红细胞生成素生物学活性细胞学的测定方法。方法通过MTT比色法考察rhEPO对UT-7/EPO细胞增殖的促进作用,从而反映rh EPO的生物学活性。结果 rh EPO在0.005～100ng·mL-1浓度范围内对细胞的增殖具有促进作用;优化后的试验参数为:rhEPO起始浓度100ng·mL-1,3倍稀释,10个梯度;细胞上板密度5×105个/mL;细胞与rh EPO共培养48h。利用优化后的试验参数建立rhEPO活性曲线,结果表明rh EPO浓度与吸光值相关性良好;曲线斜率的RSD为2.6%,DC50的RSD为6.5%,表明该方法有很好的重复性。结论成功建立并优化rh EPO生物学活性的细胞学测定方法,该方法有很好的重复性,可应用于rh EPO的生物学活性检测。 展开更多
关键词 重组人促红细胞生成素 生物学活性 ut-7/EPO细胞
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重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP的构建及其对UT-7/Epo细胞感染效率的检测 被引量：1
4
作者 刘雪莉 宋敬东 +3 位作者 郭小娟 王敏 曾茁壮 洪涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期862-865,共4页
目的构建携带报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,并且研究该病毒对人白血病细胞UT-7/Epo的感染效率及其在细胞中的复制。方法先通过分子克隆技术构建重组腺病毒质粒pAd5F11pTPEGFP,然后利用脂质体转染法,将其转染至HE... 目的构建携带报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,并且研究该病毒对人白血病细胞UT-7/Epo的感染效率及其在细胞中的复制。方法先通过分子克隆技术构建重组腺病毒质粒pAd5F11pTPEGFP,然后利用脂质体转染法,将其转染至HEK293细胞包装出重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,经酶切和PCR鉴定正确后,扩增并纯化得到滴度较高的重组腺病毒。以空载体病毒Ad5GFP作为对照,将纯化的重组腺病毒感染UT-7/Epo细胞,经流式细胞仪检测在不同感染复数(MOI)下荧光阳性细胞比例,即为Ad5F11pTPEGFP病毒对UT-7/Epo细胞的感染效率,同时将冻融后的重组腺病毒感染的UT-7/Epo细胞上清感染HEK293细胞,48 h后观察GFP在HEK293细胞中的表达。结果成功制备了重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞的感染效率明显高于空载体对照病毒Ad5GFP,在MOI为200时,感染效率达98.2%,而空载体病毒在MOI为200时,对UT-7/Epo细胞的感染效率仅为29.7%。感染了重组腺病毒的UT-7/Epo细胞冻融上清感染新的HEK293细胞后,荧光显微镜下观察到GFP的表达。结论成功构建了重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞有较高的感染效率,并能在其中复制。 展开更多
关键词 重组腺病毒 端粒酶 纤维顶球 ut-7/Epo细胞
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UT-7/EPO细胞培养条件的优化及复壮
5
作者 宋婉莹 杨姝 +3 位作者 贾俊婷 马玉媛 赵福广 章金刚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第2期134-139,共6页
目的使复苏后处于衰亡状态的UT-7/EPO细胞恢复正常生长状态,并优化其生长密度。方法通过更换不同培养基(改良的RPMI1640、DMEM和IMDM培养基)、调整血清浓度(10%、15%和20%)、改变生长因子加量(1、3、5 U/ml)及将小鼠腹腔细胞作为饲养细... 目的使复苏后处于衰亡状态的UT-7/EPO细胞恢复正常生长状态,并优化其生长密度。方法通过更换不同培养基(改良的RPMI1640、DMEM和IMDM培养基)、调整血清浓度(10%、15%和20%)、改变生长因子加量(1、3、5 U/ml)及将小鼠腹腔细胞作为饲养细胞与UT-7/EPO细胞共培养,对UT-7/EPO细胞进行复壮。对恢复正常生长状态后的UT-7/EPO细胞,利用CCK-8法绘制细胞生长曲线,并根据生长曲线通过梯度密度培养确定UT-7/EPO细胞在不同培养器皿(48、24、12、6孔板及25 cm2细胞培养瓶)中的最适培养密度。将传代后第2天处于对数生长期的UT-7/EPO细胞冻存及复苏传代3次后,连续培养9 d,检测复壮后UT-7/EPO细胞的初步稳定性。将复壮后UT-7/EPO细胞分别用人源STR试剂及小鼠细胞STR位点进行鉴定。结果更换培养基、改变血清和生长因子加量均不能使衰亡的UT-7/EPO细胞的生长状态有明显改善;饲养细胞与UT-7/EPO细胞共培养可使UT-7/EPO细胞恢复正常生长状态;获得了UT-7/EPO细胞在不同培养器皿中的最适培养密度。复苏后的细胞生长状况良好,与未冻存前的生长状态及活力相当。人源STR位点检测结果显示,复壮后的UT-7/EPO细胞STR图谱均为单个或2等位基因峰,无其他人源细胞的污染;小鼠STR位点检测结果显示,复壮后的细胞未发现饲养细胞的污染。结论饲养细胞能够有效地使UT-7/EPO细胞复壮;最适的细胞生长密度能有效地使细胞维持在稳定、良好的生长状态。 展开更多
关键词 ut-7/EPO细胞 培养条件 优化 复壮
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新型重组人促红细胞生成素抗体中和活性检测方法的建立及其在毒理研究中的应用 被引量：1
6
作者 侯绪凤 靳征 姜非 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第10期1378-1382,共5页
目的建立新型重组人促红细胞生成素(Novel recombinant human erythropoietin,HuEPO)抗体中和活性的检测方法,并应用于毒理研究中样品的分析。方法通过考察新型rHuEPO对人UT7/EPO细胞增殖的促进作用及抗新型rHuEPO抗体(兔抗阳性血清)对... 目的建立新型重组人促红细胞生成素(Novel recombinant human erythropoietin,HuEPO)抗体中和活性的检测方法,并应用于毒理研究中样品的分析。方法通过考察新型rHuEPO对人UT7/EPO细胞增殖的促进作用及抗新型rHuEPO抗体(兔抗阳性血清)对该细胞增殖的抑制作用,建立抗新型rHuEPO抗体中和活性检测方法,并应用于毒理实验中对相关抗体血清中和活性的检测。结果新型rHuEPO对人UT7/EPO细胞的增殖具有促进作用,在0.125～128 ng/ml浓度范围内作用显著;抗新型rHuEPO抗体在10-1～10-4范围内对人UT7/EPO细胞的增殖具有明显的抑制作用,抑制曲线呈中和抗体性质。毒理实验中,抗新型rHuEPO抗体(SD大鼠血清)显著抑制人UT7/EPO细胞的增殖,且具有特异性;抗新型rHuEPO抗体(Beagle犬血清)对人UT7/EPO细胞的增殖无影响。结论成功建立了一种新型rHuEPO抗体中和活性检测方法,并成功应用于毒理实验样品分析,为新型rHuEPO在长期毒性实验中的免疫原性评价提供了一种有效的检测手段。 展开更多
关键词 新型重组人促红细胞生成素 中和抗体 人ut7/EPO细胞 毒理研究
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