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核酶M1GS-T6对HCMV UL97基因RNA片段体外切割作用 被引量：2
1
作者 张欣 李弘剑 +3 位作者 李月琴 何华坤 邹奕 周天鸿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期327-331,共5页
目的:研究M1GS核酶对HCMV UL97 mRNA的体外切割作用。方法:针对HCMV UL97 mRNA T6位点设计与之互补的引导序列(Guide Sequence,GS),将其共价结合至大肠杆菌核酶P催化亚基(M1 RNA)的3′末端,构建M1GS-T6核酶,并用其对UL97基因亚克隆片段... 目的:研究M1GS核酶对HCMV UL97 mRNA的体外切割作用。方法:针对HCMV UL97 mRNA T6位点设计与之互补的引导序列(Guide Sequence,GS),将其共价结合至大肠杆菌核酶P催化亚基(M1 RNA)的3′末端,构建M1GS-T6核酶,并用其对UL97基因亚克隆片段转录产物进行体外靶向切割实验。结果:核酶M1GS-T6具备特异性切割靶分子UL97mRNA的能力。结论:核酶M1GS-T6具备特异性切割活性,为进一步研究HCMV病毒基因功能和治疗提供了新的途径。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒(HCMV) ul97 核酶P M1GS-T6
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HCMV UL97 mRNA序列特异性M1GS的构建及其体外切割活性研究(英文) 被引量：1
2
作者 张文军 李弘剑 +4 位作者 李月琴 何华坤 唐冬生 张欣 周天鸿 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1205-1212,共8页
HCMVUL97基因编码一种蛋白激酶,该酶参与调控病毒DNA的复制和衣壳的形成,且序列异常保守,可作为抗HCMV治疗的重要靶位。基于HCMVUL97mRNAT3位点附近的序列,设计一段与该位点互补的引导序列(GuideSequence,GS),并将其与大肠杆菌核酶P催... HCMVUL97基因编码一种蛋白激酶,该酶参与调控病毒DNA的复制和衣壳的形成,且序列异常保守,可作为抗HCMV治疗的重要靶位。基于HCMVUL97mRNAT3位点附近的序列,设计一段与该位点互补的引导序列(GuideSequence,GS),并将其与大肠杆菌核酶P催化亚基(M1RNA)的3′末端共价连接,构建了一种序列特异性的M1GS(M1-T3)。体外实验证实,所构建的M1-T3可与UL97mRNA的T3位点特异性结合并产生有效的切割作用。进一步研究M1-T3的结构与其对底物片段靶向切割活性的关系,结果发现在M1RNA与GS之间增加一段88核苷酸桥连序列的M1-T3(即M1-T3*),其靶向切割活性大大增强。此外,去除M1-T33′末端的CCA序列,其靶向切割活性将基本丧失。上述结果表明,这段桥连序列和3′末端的CCA序列是M1-T3重要的结构元件。这不仅有助于阐明M1GS与其底物的相互作用机制,同时也为进一步评价M1-T3在体内对UL97基因表达及病毒复制的抑制活性奠定了基础。 展开更多
关键词 核酶P(RNase P) M1GS 人巨细胞病毒 ul97
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应用非标记探针高分辨率熔解曲线技术检测人巨细胞病毒UL97基因H520Q突变
3
作者 赵晓涛 夏长胜 +4 位作者 孙媛媛 王启 于波 邵勇 张正 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第3期322-326,共5页
目的建立非标记探针高分辨率熔解曲线分析技术(HRMA)检测人巨细胞病毒(HCMV)UL97基因H520Q突变。方法构建HCMV UL97野生型以及H520Q突变质粒,非标记探针HRMA分型技术检测H520Q突变。结果直接从PCR产物得到的熔解曲线峰形无法区分野生型... 目的建立非标记探针高分辨率熔解曲线分析技术(HRMA)检测人巨细胞病毒(HCMV)UL97基因H520Q突变。方法构建HCMV UL97野生型以及H520Q突变质粒,非标记探针HRMA分型技术检测H520Q突变。结果直接从PCR产物得到的熔解曲线峰形无法区分野生型及H520Q突变型,应用非标记探针HRMA技术可以明显增加实验的敏感性及准确性,可成功区分从野生型到含有不同量的H520Q突变的基因型。结论非标记探针HRMA技术是一个敏感、经济的检测H520Q突变的基因分型方法。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒(HCMV) ul97 高分辨率熔解曲线技术(HRMA)
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巨细胞病毒UL97基因突变类型的分析
4
作者 罗妙玲 徐韫健 李秋霞 《检验医学与临床》 CAS 2020年第10期1348-1350,1354,共4页
目的通过基因测序分析巨细胞病毒(CMV)的UL97基因突变情况,指导临床用药。方法回顾性分析2018年6-12月进行CMV检测的患者情况,分析CMV阳性率在不同标本的分布,并选取CMV拷贝数>1 000copy/mL的标本30例,进行UL97基因片段PCR扩增,对扩... 目的通过基因测序分析巨细胞病毒(CMV)的UL97基因突变情况,指导临床用药。方法回顾性分析2018年6-12月进行CMV检测的患者情况,分析CMV阳性率在不同标本的分布,并选取CMV拷贝数>1 000copy/mL的标本30例,进行UL97基因片段PCR扩增,对扩增产物进行测序,与CMV标准毒株AD169序列比对,参照国内外报道的耐药相关的热点突变,判定耐药基因突变类型。结果痰标本CMV阳性率检出率最高,达43.57%(210/482),器官移植后患者CMV阳性率最高,为25.00%(22/88);序列分析发现8例移植患者标本发生了UL97基因氨基酸的替代,其中有5例为3个月持续在其血中发现高载量的CMV。结论CMV感染患者UL97基因的检测有助于发现耐药突变,从而有效指导临床用药。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 移植 耐药基因 ul97
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人巨细胞病毒临床低传代病毒株UL97基因的克隆与分析 被引量：2
5
作者 王波 李月琴 +4 位作者 田传军 张纯青 苏运贞 何华坤 周天鸿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期694-699,共6页
分离人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代GZ02病毒株,并根据GenBank提供的实验室标 准病毒株HCMV AD169磷酸转移酶基因UL97 DNA序列及有关文献设计引物,从HCMY GZ02病毒 株基因组DNA中通过PER扩增UL97基因,并克隆至pGEM3Z质粒载体．重组质粒... 分离人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代GZ02病毒株,并根据GenBank提供的实验室标 准病毒株HCMV AD169磷酸转移酶基因UL97 DNA序列及有关文献设计引物,从HCMY GZ02病毒 株基因组DNA中通过PER扩增UL97基因,并克隆至pGEM3Z质粒载体．重组质粒经测序鉴定,发 现HCMV GZ02病毒株UL97基因序列保守区域与HCMV AD169 UL97长度完全一致,但发生G205A、 G761A、T823C、T1173C、T1282C、T1334C、T2106C等7个位点的碱基突变,涉及到编码氨基酸E69K, S275P,CA28R和F445S位点发生改变． 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 野生型 ul97基因 突变 克隆 序列分析
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人巨细胞病毒耐药性的研究进展 被引量：2
6
作者 罗丹 方峰 《医药导报》 CAS 2007年第1期49-51,共3页
抗人巨细胞病毒(HCMV)的治疗药物主要有更昔洛韦(GCV)、膦甲酸钠(FOS)和西多福韦(CDV)。但近年来,其耐药株呈增多趋势,主要的耐药机制为病毒UL97基因和UL54基因发生了突变。根据耐药株出现的时间和高危因素,可采用表型和基因型方法进行... 抗人巨细胞病毒(HCMV)的治疗药物主要有更昔洛韦(GCV)、膦甲酸钠(FOS)和西多福韦(CDV)。但近年来,其耐药株呈增多趋势,主要的耐药机制为病毒UL97基因和UL54基因发生了突变。根据耐药株出现的时间和高危因素,可采用表型和基因型方法进行检测,以利于HCMV感染的及时监测并采取相应的处理措施。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 耐药 ul97基因 ul54基因 表型检测 基因型检测
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人巨细胞病毒对更昔洛韦耐受性的基因型鉴别方法的建立和应用 被引量：1
7
作者 曹国君 章莉 +3 位作者 华丽 张玥 方风琴 季育华 《检验医学》 CAS 北大核心 2009年第9期642-645,共4页
目的建立实验室检测人巨细胞病毒(HCMV)更昔洛韦(GCV)耐药的基因型分析的常规方法。方法采用巢式聚合酶链反应(PCR)直接扩增33例HCMV感染患者的外周血白细胞及前期实验同步获得的33例临床分离毒株的HCMV UL97基因片段,对扩增产物进行测... 目的建立实验室检测人巨细胞病毒(HCMV)更昔洛韦(GCV)耐药的基因型分析的常规方法。方法采用巢式聚合酶链反应(PCR)直接扩增33例HCMV感染患者的外周血白细胞及前期实验同步获得的33例临床分离毒株的HCMV UL97基因片段,对扩增产物进行测序,与HCMV标准毒株AD169序列比对,参照国外报道的耐药相关的热点突变,判定各临床分离毒株的耐药基因型。结果除有1株为HCMV UL97呈M460V突变型外,余32株同标准株AD169的序列一致。同一患者的分离毒株与外周血白细胞中测得HCMV UL97基因序列完全一致。结论建立的实验室检测HCMV耐药的基因型分析完全可以替代传统的耐药表型分析,前者无需分离活病毒,不仅需时短,而且相对安全,其技术要点更适宜临床推广应用。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 ul97基因 更昔洛韦 耐药 基因型
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人巨细胞病毒在免疫力低下人群中耐药研究新进展 被引量：1
8
作者 章莉 张玥 季育华 《检验医学》 CAS 北大核心 2009年第9期635-637,共3页
关键词 人巨细胞病毒 ul97基因 ul54基因 更昔洛韦 耐药
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器官移植后巨细胞病毒耐药的处理 被引量：2
9
作者 康一生 于立新 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第1期73-77,共5页
巨细胞病毒(CMV)感染是器官移植术后常见的并发症,其耐药发生亦非罕见,且易导致临床预后不良。CMV耐药的危险因素来源于宿主、病毒以及抗病毒药物等各个方面,产生耐药的原因则主要由于药物发挥活性的基因(UL97基因)或病毒复制的基因(UL5... 巨细胞病毒(CMV)感染是器官移植术后常见的并发症,其耐药发生亦非罕见,且易导致临床预后不良。CMV耐药的危险因素来源于宿主、病毒以及抗病毒药物等各个方面,产生耐药的原因则主要由于药物发挥活性的基因(UL97基因)或病毒复制的基因(UL54基因)发生突变所致。目前临床上诊断CMV耐药的手段相对缺乏,主要依靠检测病毒基因突变,并以此指导下一步的临床决策。UL97基因突变的临床措施可以将更昔洛韦更换为西多福韦或膦甲酸钠,而UL54基因突变则通常可以更换为膦甲酸钠。目前一些新型抗CMV药物如letermovir、maribavir、brincidofovir以及一些用于其他指征的药物如来氟米特、青蒿酯也为CMV耐药的治疗带来了新的曙光。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 器官移植 ul97基因突变 Letermovir Maribavir Brincidofovir
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DNA型EGS抑制HCMV UL97基因的表达及病毒复制
10
作者 刘琳 伍婧茹 张文军 《广东药科大学学报》 CAS 2018年第3期365-370,共6页
目的研究DNA型外部引导序列对人巨细胞病毒(HCMV)UL97基因的靶向抑制作用及抗病毒作用。方法借助计算机软件(RNAStructure4.5)模拟HCMV UL97 RNA的结构,选择二级结构相对简单且具备核糖核酸酶P(RNase P)底物一级结构序列特征的位点作为... 目的研究DNA型外部引导序列对人巨细胞病毒(HCMV)UL97基因的靶向抑制作用及抗病毒作用。方法借助计算机软件(RNAStructure4.5)模拟HCMV UL97 RNA的结构,选择二级结构相对简单且具备核糖核酸酶P(RNase P)底物一级结构序列特征的位点作为候选切割靶位,针对不同靶位设计并合成的DNA型EGS。将各EGS分别与体外转录的HCMV UL97 RNA及纯化的人RNase P体外混合,初步筛选具备靶向引导切割活性的EGS。进一步将体外有效的EGS转入HCMV感染的人胚肺成纤维细胞(HELF),通过Western与Northern印迹法检测EGS在宿主细胞内对靶基因表达的影响。此外,通过空斑试验测定病毒的生长曲线,测定EGS对病毒复制的影响。结果本文设计并合成了针对HCMV UL97基因6个不同靶位的DNA型EGS(EGS_(168)、EGS_(212)、EGS_(313)、EGS_(663)、EGS_(1580)和EGS_(1664))。体外切割试验证实,EGS_(212)、EGS_(313)、EGS_(663)和EGS_(1580)具有明显的靶向引导切割作用。在HCMV感染的宿主细胞中,EGS_(212)和EGS_(1580)均能够沉默病毒UL97基因的表达,并显著抑制病毒的复制,分别使病毒滴度降低高达约300倍和600倍。结论本研究成功获得两种具有抗HCMV潜力的DNA型EGS,为进一步研发新型抗HCMV核酸类药物奠定了基础。 展开更多
关键词 DNA型EGS 核糖核酸酶P ul97基因 人巨细胞病毒 抗病毒
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