山核桃叶总黄酮诱导人多发性骨髓瘤U266细胞株凋亡作用研究 被引量：3

1

作者 翟斡 沈嫣婧 +1 位作者 沈一平 丁志山 《甘肃中医学院学报》 2014年第2期7-11,共5页

目的研究山核桃叶总黄酮诱导人多发性骨髓瘤(U266)细胞株凋亡的作用及其作用机制。方法体外培养U266细胞,CCK-8比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术定量分析细胞凋亡程度,Western Blot分析不同浓度总黄酮对U266细胞蛋白激酶B(Akt)和p-Ak... 目的研究山核桃叶总黄酮诱导人多发性骨髓瘤(U266)细胞株凋亡的作用及其作用机制。方法体外培养U266细胞,CCK-8比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术定量分析细胞凋亡程度,Western Blot分析不同浓度总黄酮对U266细胞蛋白激酶B(Akt)和p-Akt蛋白表达的影响。结果山核桃叶总黄酮以浓度依赖性方式显著诱导U266细胞株凋亡并抑制p-Akt蛋白的表达。结论山核桃叶总黄酮诱导U266细胞凋亡的作用与其抑制Akt磷酸化相关。 展开更多

关键词 人多发性骨髓瘤 u266细胞株 山核桃叶总黄酮 凋亡 蛋白激酶B P-AKT

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多发性骨髓瘤患者DLC-1基因甲基化及三氧化二砷诱导DLC-1基因去甲基化的研究 被引量：5

2

作者 付海英 沈建箴 吴淡森 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第36期2816-2821,共6页

目的探讨人多发性骨髓瘤（MM）肝癌缺失基因1（DLC-1）启动子区CpG岛甲基化情况，以及三氧化二砷（As2O3）诱导DLC-1基因的去甲基化作用。方法采用甲基特异性PCR法（MSP）定性检测2008至2012年来自福建医科大学附属协和医院血液内科的52... 目的探讨人多发性骨髓瘤（MM）肝癌缺失基因1（DLC-1）启动子区CpG岛甲基化情况，以及三氧化二砷（As2O3）诱导DLC-1基因的去甲基化作用。方法采用甲基特异性PCR法（MSP）定性检测2008至2012年来自福建医科大学附属协和医院血液内科的52例MM患者DIC基因甲基化状态，反转录（RT）-PCR检测MM患者和人骨髓瘤U266细胞系DLC-1基因的表达情况；采用重亚硫酸盐测序PCR（BSP）法定量检测As203作用前、后人骨髓瘤细胞株U266其DLC-1基因的甲基化状态；荧光定量PCR检测U266细胞用药前、后DLC-1基因、DNA甲基转移酶基因（DNMTl、DNMT3a、DNMT3b）mRNA的表达变化。结果MM患者DLC-1基因的甲基化比例为71.15％（37／52）。U266细胞DLC-1基因呈甲基化，DLC-1基因不表达；经0.5、1.0、2.0pμmol／L As203作用后72h U266细胞DLC-1基因甲基化率由95.38％下降至63.07％、30.00％及7.69％；荧光定量PCR检测经0.5、1.0、2.0pμmol／L As2O3作用后72hU266细胞DLC-1基因mRNA表达与未加药组相比分别为其（1.60±0.09）、（3.66±0.17）、（5.29±0.15）倍，而DNMTl、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA表达下调（均P〈0.05）。结论DLC-1基因甲基化在MM患者中较为常见，这可能为MM的诊断和治疗提供借鉴；As2O3可诱导DLC-1基因去甲基化，使DLC-1基因表达上调，恢复其活性，为MM去甲基化治疗提供新思路。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 甲基化 DLC-1基因 三氧化二砷 u266细胞系

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组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其逆转耐药的机制研究 被引量：3

3

作者 张灵 马艳萍 贾谷 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期926-931,共6页

目的探讨新一代组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589单药或联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤（MM）细胞增殖的影响及其机制。方法以MM细胞系U266细胞及地塞米松耐药细胞系MM1R细胞为对象，不同浓度LBH589或LBH589与硼替佐米联合作用... 目的探讨新一代组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589单药或联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤（MM）细胞增殖的影响及其机制。方法以MM细胞系U266细胞及地塞米松耐药细胞系MM1R细胞为对象，不同浓度LBH589或LBH589与硼替佐米联合作用上述细胞后，采用MTF法检测对细胞增殖的抑制作用，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率的变化，Westernblot分析组蛋白H4乙酰化程度及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）、Bcl—X蛋白表达水平的变化；实时荧光定量PCR分析caspase-3、APAF-1以及TOSO基因表达水平的变化。结果不同浓度LBH589（0、10、20、50nmol／L）单药及其50nmol／LLBH589与硼替佐米（10、20nmol／L）联合均能够抑制U266和MM1R细胞增殖，呈剂量和时间依赖性，且LBH589与硼替佐米联合组抑制作用均较单药组明显（P值均〈0．05）；MM1R细胞G0／G1期比例分别为36．60％、46．50％、51．40％、57．10％、75．48％、79．73％，凋亡率分别为5．27％、31．41％、39．78％、44．07％、73．60％、83．27％，作用呈剂量依赖性，且LBH589与硼替佐米联合组作用均较两者单药组明显（P值均〈0．05）；MM1R细胞组蛋白H4乙酰化程度和PARP蛋白表达水平逐渐上调，而Bcl-X蛋白表达水平则逐渐下调，变化呈剂量依赖性（P值均〈0．05）；MMlR细胞caspase-3、APAF-1基因表达水平逐渐上调，而TOSO基因表达水平则逐渐下调，变化呈剂量和时间依赖性（P值均〈0．05）。结论LBH589能够抑制MM细胞增殖，阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡，对耐药细胞具有抗耐药作用，同时与硼替佐米联合应用对MM细胞有协同作用，其作用机制及逆转耐药机制涉及多个基因的表达变化。 展开更多

关键词 组蛋白脱乙酰基酶抑制剂 细胞系 u266细胞 MM1R 抗药 组蛋白乙酰化

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环氧合酶-2对多发性骨髓瘤细胞血管内皮生长因子表达的调节作用 被引量：2

4

作者 赵建宝 陈琛 《实用癌症杂志》 2011年第3期245-249,共5页

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞中环氧合酶-2(COX-2)对血管内皮生长因子(VEGF)表达的调控作用及其临床意义。方法应用人淋巴细胞分离液提取43例多发性骨髓瘤患者骨髓中的单个核细胞,Western blotting(WB)方法检测COX-2及VEGF的蛋白表达,... 目的探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞中环氧合酶-2(COX-2)对血管内皮生长因子(VEGF)表达的调控作用及其临床意义。方法应用人淋巴细胞分离液提取43例多发性骨髓瘤患者骨髓中的单个核细胞,Western blotting(WB)方法检测COX-2及VEGF的蛋白表达,分析其与MM的国际分期系统(ISS)分期、预后的相关性;RT-PCR方法检测多发性骨髓瘤U266细胞COX-2及VEGF mRNA的表达;MTT方法检测COX-2特异性抑制剂对多发性骨髓瘤U266细胞的生长抑制效应。结果多发性骨髓瘤细胞患者COX-2及VEGF过度表达,与ISS分期及预后密切相关;年龄、β2-微球蛋白(β2-MG)、血钙(Ca)及骨髓中浆细胞百分比(BMPC)等预后指标与COX-2的相关系数分别为0.692,0.791,0.571及0.856,与VEGF的相关系数分别为0.731,0.645,0.511及0.823;应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用于U266细胞48 h,VEGF mRNA及蛋白的表达明显下调,与未处理组相比,统计学差异显著(P<0.01)。结论 COX-2与VEGF高表达于多发性骨髓瘤患者,与疾病的ISS分期及预后密切相关,干预COX-2可部分下调VEGF的表达,COX-2可望成为多发性骨髓瘤治疗的靶点。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 u266细胞株 环氧合酶-2 血管内皮生长因子

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马钱子碱经死亡受体途径诱导人类多发性骨髓瘤U266细胞凋亡 被引量：2

5

作者 李志华 马艳萍 +1 位作者 王艺华 冯静 《白血病．淋巴瘤》 CAS 2010年第12期724-727,731,共5页

目的 探讨马钱子碱诱导人类多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的机制.方法 通过MTT法、流式细胞术、RT-PCR法检测及形态学观察马钱子碱诱导人类多发性骨髓瘤U266细胞株凋亡的途径.结果 马钱子碱诱导U266的凋亡呈时间和浓度依赖性,48 h IC50 0.16... 目的 探讨马钱子碱诱导人类多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的机制.方法 通过MTT法、流式细胞术、RT-PCR法检测及形态学观察马钱子碱诱导人类多发性骨髓瘤U266细胞株凋亡的途径.结果 马钱子碱诱导U266的凋亡呈时间和浓度依赖性,48 h IC50 0.16 mg/ml.Hoechst 33258染色后在荧光显微镜下观察到明显的凋亡小体.Rhodamine 123染色后流式细胞术检测马钱子碱不同浓度下线粒体膜电位的变化差异无统计学意义（P＞0.05）.RT-PCR检测到马钱子碱作用12、24、48 h后Caspase-3表达量增加,其灰度值（0.2597±0.020）、（0.5488±0.016）、（0.6205±0.006）、（0.6533±0.009）（P＞0.05）;分别加入Caspase-8与Caspase-9的特异抑制剂z-IETD-fmk、z-LEHD-fmk后检测Caspase-3的表达变化,其灰度值分别为（0.7118±0.006）、（0.2637±0.003）（P＜0.01）;（0.7182±0.004）、（0.7195±0.003）（P=0.836）,提示Caspase-8被激活.结论 在0.4 mg/ml浓度范围内,马钱子碱具有诱导U266细胞凋亡作用,激活Caspase-8经死亡受体途径诱导U266细胞株凋亡. 展开更多

关键词 马钱子碱 u266细胞株 细胞凋亡

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硼替佐米对人类多发性骨髓瘤细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响 被引量：1

6

作者 黄灵娟 马艳萍 +1 位作者 杨薏蓉 杨林花 《白血病．淋巴瘤》 CAS 2010年第3期166-168,共3页

目的 探讨硼替佐米对人类多发性骨髓瘤（MM）细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响.方法 采用RT-PCR技术研究经不同浓度的硼替佐米作用于U266细胞4 h后其内HSP-90mRNA表达情况的变化.结果 随着硼替佐米浓度的增加,其MM细胞中HSP-90α的... 目的 探讨硼替佐米对人类多发性骨髓瘤（MM）细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响.方法 采用RT-PCR技术研究经不同浓度的硼替佐米作用于U266细胞4 h后其内HSP-90mRNA表达情况的变化.结果 随着硼替佐米浓度的增加,其MM细胞中HSP-90α的mRNA表达量逐渐增加.由低浓度组到高浓度组（0、50、100、150、200 nmol/L）所对应的HSP-90α的灰度值分别为0.343±0.017、0.505±0.039、0.640±0.029、0.760±0.059、0.963±0.054;两两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.浓度由低到高组对应HSP-90β的灰度值分别为0.610±0.022、0.765±0.050、0.645±0.052、0.770±0.059、0.790±0.027,而HSP-90β的灰度值0 nmol/L组与50、150、200nmol/L组之间差异有统计学意义（P〈0.05）.50、100 nmol/L浓度组对应的HSP-90β的灰度值不同（P〈0.05）.100 nmol/L组与150、200 nmol/L组对应的HSP-90β的灰度值差异有统计学意义（P〈0.05）.HSP-90β的mRNA表达量增加趋势不很明显,但总体差异仍具统计学意义（P〈0.05）.结论 硼替佐米可以上调HSP-90的分子水平的表达,并且以上调HSp-90α的表达为主. 展开更多

关键词 肿瘤 实验性 多发性骨髓瘤 细胞系 肿瘤 u266细胞 HSP-90热休克蛋白质类

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异硫氰酸苯己酯降低U266细胞株p16基因甲基化的研究 被引量：1

7

作者 陈宝安 寿倍明 +11 位作者 周冬蕊 丁家华 高冲 孙耘玉 王骏 程坚 赵刚 宋慧慧 鲍文 刘德龙 马旭东 陆祖宏 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期1060-1063,共4页

本研究探讨异硫氰酸苯己酯对p16基因高甲基化的多发性骨髓瘤U266细胞株是否有去甲基化的作用。用异硫氰酸苯己酯0、5、10μmol/L孵育U266细胞株,提取DNA备用。用亚硫酸氢盐处理正常人基因组DNA,并以此为模板进行PCR扩增。设计1组特殊荧... 本研究探讨异硫氰酸苯己酯对p16基因高甲基化的多发性骨髓瘤U266细胞株是否有去甲基化的作用。用异硫氰酸苯己酯0、5、10μmol/L孵育U266细胞株,提取DNA备用。用亚硫酸氢盐处理正常人基因组DNA,并以此为模板进行PCR扩增。设计1组特殊荧光标记探针以构建1种检测p16基因启动子区3个CpG位点甲基化改变的芯片,特殊荧光标记探针包括1对非甲基化探针和甲基化探针,检测相邻的3个CpG位点甲基化的程度。采用基因芯片的方法,将完全未甲基化的DNA和完全甲基化的DNA混合后制成标准曲线,将U266细胞株样本处理后点在芯片上与标准曲线进行比较后得出定量检测的结果。结果表明:芯片上探针的可重复性和精确性很好,0、5、10μmol/L异硫氰酸苯己酯处理后的U266细胞株p16基因的甲基化程度分别为78.2%、61.7%、54.8%。结论:异硫氰酸苯己酯可以降低U266细胞株p16基因甲基化的程度。 展开更多

关键词 异硫氰酸苯己酯 u266细胞株 P16基因甲基化 基因芯片

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组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对U266细胞增殖的影响

8

作者 马健 赵名 +1 位作者 于晓妉 王志红 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第4期565-567,共3页

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤细胞U266增殖的影响。方法将不同浓度的MS-275以不同时间作用于U266细胞,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞... 目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤细胞U266增殖的影响。方法将不同浓度的MS-275以不同时间作用于U266细胞,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western Blot检测P21、Cdk4、Acetyl-histone H3及PARP等的蛋白表达。结果MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期,细胞发生明显变化。出现P21表达增加,Cdk4表达下降,同时出现PARP的裂解。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275具有抑制人骨髓瘤细胞U266增殖作用,使细胞阻滞在G0/G1期,最终诱导U266细胞凋亡。 展开更多

关键词 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 多发性骨髓瘤 细胞系 u266 MS-275 细胞增殖

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U266细胞在组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导下凋亡观察

9

作者 马健 赵名 +1 位作者 于晓妉 王志红 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第9期835-838,共4页

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响.方法:台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏—姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;West-ernBlot检测凋亡信号通路... 目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响.方法:台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏—姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;West-ernBlot检测凋亡信号通路中Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymer-ase,PARP]裂解情况.结果:MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期.MS-275作用48h的IC50为1.39μmol/L;2μmol/LMS-275作用细胞24h后,G0/G1期64.57%;36h占82.20%.瑞氏—姬姆萨染色显示细胞发生明显变化.WesternBlot检测表明MS-275作用U266细胞后,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9被裂解活化,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶发生剪切,细胞发生凋亡.结论:MS-275可抑制细胞增殖,并使细胞阻滞在G0/G1期,通过激活细胞内外2条凋亡级联信号通路诱导U266细胞凋亡. 展开更多

关键词 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 多发性骨髓瘤 细胞系u266 MS-275 凋亡

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HSP27介导多发性骨髓瘤细胞诱导硼替佐米耐药的机制研究

10

作者 苏杰 杨小静 周雪 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 北大核心 2021年第10期779-784,共6页

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266中热休克蛋白27(HSP27)诱导硼替佐米(BTZ)耐药的机制研究。方法BTZ浓度逐步递增诱导建立耐药细胞株(U266/BTZ),细胞计数试剂盒(CCK8)法检测耐药细胞株的耐药性;实时荧光定量PCR及蛋白印迹法检测BTZ... 目的探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266中热休克蛋白27(HSP27)诱导硼替佐米(BTZ)耐药的机制研究。方法BTZ浓度逐步递增诱导建立耐药细胞株(U266/BTZ),细胞计数试剂盒(CCK8)法检测耐药细胞株的耐药性;实时荧光定量PCR及蛋白印迹法检测BTZ处理前后U266及U266/BTZ细胞中HSP27的表达;采用HSP27-siRNA干扰U266/BTZ细胞中HSP27表达,实时荧光定量PCR及蛋白印迹法进一步分析HSP27-siRNA干扰后对细胞凋亡以及内质网应激的影响,包括cl-Caspase3、cl-Caspase8、cl-Caspase9。结果CCK8结果显示,U266/BTZ细胞株能够对多种药物产生细胞耐药性。BTZ暴露显著上调U266以及U266/BTZ细胞中HSP27 mRNA和蛋白表达(P均<0.01);HSP27-siRNA干扰能够显著下调HSP27的表达;HSP27-siRNA干扰能够增强BTZ诱导的U266/BTZ细胞凋亡,增加活化Caspase3、Caspase8和Caspase9蛋白表达水平(P均<0.01)。结论HSP27介导的MM耐药是通过抑制内质网应激,从而减少骨髓瘤细胞凋亡导致。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 u266细胞株 热休克蛋白27 硼替佐米 耐药

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塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

11

作者 张柳波 王建宁 +2 位作者 侯艳秋 宋敏 孟庆奇 《中国临床研究》 CAS 2011年第9期767-770,共4页

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机... 目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度>40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。 展开更多

关键词 塞来昔布 环氧化酶-2 u266细胞株 多发性骨髓瘤 凋亡 CASPASE-3

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三氧化二砷诱导U266细胞p16基因重新表达 被引量：11

12

作者 黎金庆 李渊 +1 位作者 石永进 武淑兰 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期626-630,共5页

背景与目的:DNA甲基化调节基因表达,且与肿瘤发生相关,干扰抑癌基因甲基化可能成为防治肿瘤的新途径。细胞内砷代谢和DNA甲基化都需要S-腺苷蛋氨酸作为甲基供体。本文拟探讨三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)诱导因高甲基化失活的抑癌... 背景与目的:DNA甲基化调节基因表达,且与肿瘤发生相关,干扰抑癌基因甲基化可能成为防治肿瘤的新途径。细胞内砷代谢和DNA甲基化都需要S-腺苷蛋氨酸作为甲基供体。本文拟探讨三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)诱导因高甲基化失活的抑癌基因p16重新表达的可能性及其机制。方法:以p16基因高甲基化失活的人骨髓瘤细胞系U266为研究对象,经不同浓度As2O3处理后,采用限制性内切酶HpaⅡ及其同裂酶MspⅠ结合PCR技术,检测基因组DNA及p16基因甲基化状态;RT-PCR技术检测p16基因和DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferases,DNMTs)mRNA表达;Westernblot技术检测P16蛋白表达。结果:(1)U266细胞具有p16基因高甲基化并失表达的特点,即基因组DNA经MspⅠ酶切后电泳呈“涂抹”现象,而经HpaⅡ酶切后与未经酶切的DNA一样均呈单一条带;经MspⅠ酶切后的DNA不能经PCR扩增出p16基因产物,而HpaⅡ酶切后的DNA与未经酶切的DNA一样均能扩增出340bp的p16基因产物;RT-PCR法检测U266细胞无p16mRNA产物,Westernblot检测也未见P16蛋白带。(2)0.5～2.0μmol/LAs2O3处理后的U266细胞DNA经HpaⅡ酶切后电泳呈“涂抹”现象,也不再能扩增出p16基因产物。1.0μmol/L和2.0μmol/LAs2O3处理的U266细胞还扩增出p16基因mRNA产物;Westernblot也检测到P16蛋? 展开更多

关键词 DNA甲基化 三氧化二砷 P16 人骨髓瘤细胞系u266

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脱乙酰化酶抑制剂与去甲基化制剂联合诱导U266细胞凋亡和p16基因重新表达 被引量：3

13

作者 杜红玲 戚豫 +2 位作者 石永进 卜定方 武淑兰 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1057-1061,共5页

背景与目的:DNA甲基化调节基因表达与组蛋白脱乙酰化的作用密切相关,针对这两大途径用药,观察对肿瘤细胞的影响是有意义的。本文探讨脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(sodiumphenylbutyrate,SPB)联合去甲基化制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-... 背景与目的:DNA甲基化调节基因表达与组蛋白脱乙酰化的作用密切相关,针对这两大途径用药,观察对肿瘤细胞的影响是有意义的。本文探讨脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(sodiumphenylbutyrate,SPB)联合去甲基化制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理人骨髓瘤细胞系U266诱导高甲基化失活的p16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法:通过透射电镜、DNA梯形条带及流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR和Westernblot检测p16表达水平。结果:单用5-Aza-CdR(1μmol/L)或SPB(1mmol/L)及两药联合诱导的细胞凋亡率分别是15.09%,89.19%和85.18%。单用5-Aza-CdR或SPB对细胞G1期无影响,单用SPB使G2/M期细胞比例增高,联合用药发生明显的G1期阻滞,且出现亚G1期峰达50%。单用PB不能诱导U266细胞p16的表达,单用5-Aza-CdR可诱导p16重新表达,两药联合明显增强p16表达水平。结论:PB与5-Aza-CdR协同可显著诱导U266细胞p16重新表达,细胞阻滞在G1期,并使细胞凋亡发生的时相不同于单独用药组。 展开更多

关键词 脱乙酰化酶抑制剂 去甲基化制剂 细胞凋亡 人骨髓瘤细胞系u266 P16基因 苯丁酸钠 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 基因表达

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多发性骨髓瘤细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白7的基因表达及甲基化调控 被引量：8

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作者 刘文华 马艳萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期813-817,共5页

目的:研究多发性骨髓瘤细胞株U266中胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的表达及甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dc)对其增殖的影响。方法:体外培养多发性骨髓瘤细胞株U266,并以健康查体者的骨髓单个核细胞(N-BMMNC)作... 目的:研究多发性骨髓瘤细胞株U266中胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的表达及甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dc)对其增殖的影响。方法:体外培养多发性骨髓瘤细胞株U266,并以健康查体者的骨髓单个核细胞(N-BMMNC)作为正常对照,提取RNA,采用实时RT-PCR检测IGFBP7的表达,提取细胞DNA甲基化修饰后采用甲基化特异性PCR(MSP)分析其CpG岛的甲基化状态,不同浓度的甲基转移酶抑制剂5-aza-dc(5、10和20μmol/L)处理U266细胞株,在48 h收集细胞,用实时RT-PCR和蛋白印迹法检测各组IGFBP7 mRNA和蛋白表达,流式细胞术检测药物处理前后各组细胞的细胞凋亡及细胞周期。结果:U266细胞IGFBP7 mRNA表达较正常骨髓细胞降低;MSP检测显示U266 IGFBP7的启动子CpG岛明显甲基化;不同浓度的5-aza-dc处理U266细胞株48 h后,IGFBP7的mRNA表达呈剂量依赖性增高(r=0.952,P<0.05),IGFBP7蛋白表达呈剂量依赖性增高(r=0.983,P<0.05);随着药物浓度增高,U266在G_0/G_1期细胞逐渐增多(r=0.966),细胞凋亡率逐渐增加(r=0.958)。结论:U266细胞中IGFBP7 mRNA较N-BMMNC低表达,与CpG岛的异常甲基化相关,5-aza-dc可以使U266细胞中IGFBP7mRNA和蛋白表达恢复。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白7 多发性骨髓瘤 u266细胞株 5-氮杂-2’-脱氧胞苷

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组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导骨髓瘤细胞株U266凋亡过程中Survivin的表达 被引量：6

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作者 马健 赵名 +1 位作者 于晓妉 王志红 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期466-471,共6页

背景与目的:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)是一类具有抗肿瘤活性的新型药物,主要通过诱导细胞凋亡发挥作用。本实验研究HDACi(MS-275)对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖和凋亡的影响及其与Survivin表达的... 背景与目的:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)是一类具有抗肿瘤活性的新型药物,主要通过诱导细胞凋亡发挥作用。本实验研究HDACi(MS-275)对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖和凋亡的影响及其与Survivin表达的关系。方法:将不同浓度的MS-275作用于U266细胞不同时间后,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响;通过瑞氏-姬姆萨染色观察药物作用后细胞形态学的变化;用流式细胞仪分析细胞周期;用Western blot检测Survivin、P21和Cdk4等的蛋白表达,以及凋亡信号通路中Caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的裂解情况。结果:MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期。MS-275作用U266细胞48h时的IC50为1.39μmol/L;2μmol/L的MS-275作用U266细胞24h后,G0/G1期细胞占66.39%,36h后G0/G1期细胞占89.80%。瑞氏-姬姆萨染色显示细胞形态发生明显变化。Western blot检测结果显示,MS-275作用U266细胞后,Survivin和Cdk4表达下降,P21表达增加,Caspase3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切。结论:MS-275抑制人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖并诱导细胞凋亡,可能与下调Survivin蛋白的表达有关。 展开更多

关键词 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 MS-275 人骨髓瘤 u266细胞 SuRVIVIN 细胞凋亡

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甘草次酸诱导U266细胞凋亡及对Survivin表达的影响 被引量：5

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作者 徐淑梅 周蕾 +2 位作者 刘卓刚 陈博 李旸 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期652-655,共4页

本研究旨在观察甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)对人骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及survivin表达的影响。用MTT法检测GA对U266细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测不同浓度GA作用于U266细胞后细胞凋亡,细胞周期的变化;扫描电子显微镜观... 本研究旨在观察甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)对人骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及survivin表达的影响。用MTT法检测GA对U266细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测不同浓度GA作用于U266细胞后细胞凋亡,细胞周期的变化;扫描电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;实时定量PCR检测GA对U266细胞survivin基因表达的影响。结果表明:GA对U266细胞有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为时间和浓度依赖性;GA可以诱导U266细胞凋亡;扫描电子显微镜下可见核仁染色质边集,凝聚成块;GA可以诱导U266细胞周期阻滞于G0/G1期,表现为G0/G1期细胞比例升高,而G2/M及S期细胞比例下降。GA可以下调U266细胞survivin基因的表达,下调作用与浓度呈正相关。结论 :CA能抑制U266细胞增殖,呈浓度和时间依赖性,诱导其凋亡,其作用机理可能与细胞周期阻滞于G0/G1期和下调survivin基因表达有关。 展开更多

关键词 甘草次酸 人骨髓瘤细胞系u266 细胞凋亡 SuRVIVIN

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组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人骨髓瘤U266细胞生长的影响及其可能机制 被引量：1

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作者 马健 赵名 于晓妉 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期250-253,共4页

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）MS-275对人骨髓瘤细胞U266的凋亡抑制基因生存素（survivin）和核因子-κB（NF—κB）表达的影响。方法台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响；瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化；流式细... 目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）MS-275对人骨髓瘤细胞U266的凋亡抑制基因生存素（survivin）和核因子-κB（NF—κB）表达的影响。方法台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响；瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化；流式细胞仪分析细胞周期；Western blot检测survivin、p21、细胞周期依赖激酶4（CDK4）和NF—KB的抑制蛋白（IKB—α）等的表达，以及凋亡信号通路中caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶（PARP）裂解情况。结果MS-275抑制U266细胞增殖，阻断细胞周期于G0／G1期，呈时间-剂量依赖性。MS-275作用U266细胞48h的IC50为1．39μmol／L。2μmol／LMS-275作用U266细胞24h后，G0／G1期细胞所占比例为（64．57±4．09）％；作用36h后，G0／G1期细胞所占比例为（87．20±2．83）％；瑞氏-姬姆萨染色显示，U266细胞形态发生明显变化。Western blot检测表明，MS-275作用U266细胞后，survivin和CDK4表达下降，p21表达增加，IκB—α磷酸化水平受到明显抑制，caspase-3被裂解活化，其底物蛋白PARP发生剪切，细胞发生凋亡。结论MS-275可诱导人骨髓瘤细胞系U266凋亡，NF-KB信号通路阻断是凋亡发生的机制之一。 展开更多

关键词 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 人骨髓瘤细胞系u266 SuRVIVIN NF-ΚB 细胞凋亡

原文传递

三氧化二砷对人骨髓瘤细胞株U266作用的研究

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作者 孟建波 王金铠 +2 位作者 康素娴 杨彦 周晨光 《河北医药》 CAS 2009年第2期141-142,共2页

目的研究三氧化二砷(As2O3)对多发性骨髓瘤细胞株U266的作用。方法应用不同浓度的As2O3处理U266,采用细胞培养、流式细胞测定、原位杂交和酶联免疫吸附测定技术检测As2O3对U266的细胞活力、细胞凋亡、癌基因bcl-2表达和血管内皮细胞生... 目的研究三氧化二砷(As2O3)对多发性骨髓瘤细胞株U266的作用。方法应用不同浓度的As2O3处理U266,采用细胞培养、流式细胞测定、原位杂交和酶联免疫吸附测定技术检测As2O3对U266的细胞活力、细胞凋亡、癌基因bcl-2表达和血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌的影响。结果As2O3可抑制U266的细胞活力,诱导细胞凋亡,抑制细胞bcl-2表达和VEGF的合成,VEGF可部分阻断As2O3的作用。结论As2O3可以通过多种机制发挥抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 三氧化二砷 骨髓瘤细胞株u266 BCL-2 细胞凋亡 血管内皮细胞生长因子

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烷化溶血磷脂对U266细胞作用的实验研究

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作者 黄春玲 陈志哲 +3 位作者 陈君敏 王少元 刘庭波 杨婷 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期370-375,共6页

为研究烷化溶血磷脂 (ET 1 8 OCH3 )对骨髓瘤细胞系U2 66的体外杀伤作用。通过台盼蓝拒染法和克隆形成率来反映ET 1 8 OCH3 对U2 66细胞的抗增殖效应 ;通过荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化 ,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解片段 ,流式细... 为研究烷化溶血磷脂 (ET 1 8 OCH3 )对骨髓瘤细胞系U2 66的体外杀伤作用。通过台盼蓝拒染法和克隆形成率来反映ET 1 8 OCH3 对U2 66细胞的抗增殖效应 ;通过荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化 ,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解片段 ,流式细胞仪作DNA倍体分析来观察ET 1 8 OCH3 诱导U2 66细胞凋亡的作用 ;通过RT PCR检测bcl 2、c mycmRNA水平 ,流式细胞仪检测Bcl 2、C myc蛋白的表达来初步探讨其相关的作用机制。结果显示 ,U2 66细胞经ET 1 8 OCH3 处理后细胞生长明显受抑 ,呈时间和剂量依赖性 ;荧光显微镜 ,电镜下观察均可见凋亡形态学改变 ,7.5μg/mlET 1 8 OCH3 作用 2 4小时后出现典型的DNA降解片段。流式细胞仪检测凋亡率为 1 7.53 % ;RT PCR显示bcl 2、c mycmRNA表达均随ET 1 8 OCH3 作用时间的增加而减弱 ,ET 1 8 OCH3 作用 2 4小时后 ,bcl 2、c mycmRNA分别减少了 86 %、72 % ;流式细胞仪检测Bcl 2蛋白、C myc蛋白分别减少了原来的 1 7%、60 %。研究结果表明 ,ET 1 8 OCH3 对U2 66细胞的生长具有明显的抑制作用 ,并可诱导细胞的凋亡 。 展开更多

关键词 烷化溶血磷脂 u266细胞 多发性骨髓瘤 细胞凋亡

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U266/BOR耐药细胞株的构建及其生物学活性鉴定

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作者 刘慧丽 阙文忠 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1722-1726,共5页

目的:建立人对硼替佐米(BOR)耐药的多发性骨髓瘤U266细胞株(U266/BOR),并检测其生物学特性。方法:应用小剂量诱导和剂量递增联合诱导法建立耐药细胞株U266/BOR;在倒置显微镜下观察细胞的形态;应用MTT法测定两种细胞的BOR半数抑制浓度(IC... 目的:建立人对硼替佐米(BOR)耐药的多发性骨髓瘤U266细胞株(U266/BOR),并检测其生物学特性。方法:应用小剂量诱导和剂量递增联合诱导法建立耐药细胞株U266/BOR;在倒置显微镜下观察细胞的形态;应用MTT法测定两种细胞的BOR半数抑制浓度(IC50)和耐药系数;绘制两种细胞的生长曲线并计算二者的倍增时间;流式细胞术检测两种细胞的细胞周期,RT-PCR法检测两种细胞的相关耐药基因mRNA水平。结果:成功建立了耐药系数为19.8的耐药细胞系U266/BOR;二者细胞形态上未见明显差别;U266/BOR较U266细胞生长缓慢,其G_0/G_1期比例增加,S期比例减少;U266/BOR细胞中耐药基因PTPROt、Beclin 1及PTEN的mRNA表达减少,而c-Maf的mRNA含量增加,但MDR1的mRNA表达量无明显差别。结论:成功构建人对BOR耐药的MM细胞株U266/BOR,为BOR耐药机制的深入研究提供了理想细胞模型。 展开更多

关键词 硼替佐米 u266/BOR耐药细胞株 生物学特性

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