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结直癌组织中GP-96肽复合物的提取纯化和体外免疫效应
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作者 卢驰 冯茂辉 +5 位作者 谢伟 余佳莉 段丽 吴红艳 谢辉 汪付兵 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1648-1651,共4页
目的建立从人结直癌组织中提取gp-96肽复合物方法，并检测体外免疫效应。方法采取三步蛋白纯化法，即硫酸铵沉淀法、ConA亲和层析法、阴离子交换蛋白亲和层析法，从10例结直癌组织提取、纯化gp-96肽复合物；SDS—PAGE和Westernblot鉴定g... 目的建立从人结直癌组织中提取gp-96肽复合物方法，并检测体外免疫效应。方法采取三步蛋白纯化法，即硫酸铵沉淀法、ConA亲和层析法、阴离子交换蛋白亲和层析法，从10例结直癌组织提取、纯化gp-96肽复合物；SDS—PAGE和Westernblot鉴定gp-96肽复合物；检测GP-96肽复合物的体外免疫效应。结果该方法提取的蛋白质经SDS—PAGE和Westernblot鉴定，证实是gp-96肽复合物，蛋白质得率为50μg／g；体外免疫效应分析：肿瘤组中gp96肽复合物组肿瘤坏死因子（r11NF）-α浓度为（801．54±109．25）ng／L，与阳性对照组（509．17±65．34）ng／L、阴性对照组（156．19±32．08）ng／L比较明显升高，差异有统计学意义（P〈0．01）；健康人对照组与肿瘤组比较，gp96肽复合物组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。肿瘤组中gp96肽复合物组IL-10浓度为（95．71±17．55）ng／L，与阳性对照组（334．55±69．00）ng／L、阴性对照组（205．75±42．04）ng／L比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；健康人对照组和肿瘤组比较，gp96肽复合物组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论使用该方法提取结直癌组织中gp-96肽复合物具有操作简单、重复性好、获得率高、体外免疫效应强等特点。 展开更多
关键词 gp-96 肿瘤多肽复合物 免疫 结直肠癌
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HSP70-肝癌抗原肽复合物修饰DC瘤苗对CIK细胞增殖活性及表型变化的影响 被引量：1
2
作者 潘洁 宋慧东 +1 位作者 王巧瑜 萧间开 《新医学》 2020年第2期117-120,共4页
目的研究热休克蛋白70(HSP70)-肝癌抗原肽(SMMC7721人肝癌细胞株)复合物修饰的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的增殖活性及表型的影响。方法获取健康供者的外周血单个核细胞(PBMC),培养2 h,贴壁细胞诱导分化DC,非贴壁细... 目的研究热休克蛋白70(HSP70)-肝癌抗原肽(SMMC7721人肝癌细胞株)复合物修饰的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的增殖活性及表型的影响。方法获取健康供者的外周血单个核细胞(PBMC),培养2 h,贴壁细胞诱导分化DC,非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞,DC生长第7日开始负载HSP70(A组)、肝癌抗原肽(B组)、HSP70-肝癌抗原肽复合物(C组),另设单纯DC组(D组),流式细胞检测CD80、CD86的表达,体外构建HSP70-抗原肽复合物-DC瘤苗,并将其和CIK细胞按1∶10的比例混合培养5 d,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖能力,以流式细胞仪检测DC及CIK细胞膜表面分子表达。结果 HSP70-肝癌抗原肽复合物可促进DC成熟,DC表面分子CD86、CD80在C组表达均较D组高(P均<0.01)。HSP70-肝癌抗原肽复合物-DC瘤苗可明显刺激CIK细胞的增殖。HSP70-肝癌抗原肽复合物-DC瘤苗与CIK共培养可使CIK细胞CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+的表达提高,与单纯培养CIK细胞比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 HSP70-肝癌抗原肽复合物能提高DC表面分子CD80、CD86等表达,诱导DC的成熟,HSP70-抗原肽复合物-DC瘤苗与CIK细胞共培养可明显增加CIK细胞的增殖活性,提高CIK细胞CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+的表达。 展开更多
关键词 热休克蛋白70-肝癌抗原肽复合物 热休克蛋白70 树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 免疫治疗
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