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苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1518的插入突变体库的构建及芽胞萌发突变株的筛选 被引量:6
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作者 巫益鸣 阮丽芳 +2 位作者 彭东海 刘国强 孙明 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期577-581,共5页
通过携带Mini-Tn10转座子的温度敏感性质粒载体pIC333构建了苏云金芽胞杆菌YBT-1518菌株的插入突变体库。从突变体库中筛选得到1株芽胞不能在萌发剂L-丙氨酸诱导下萌发的突变株(命名为MA1),进一步的试验表明该突变株菌株的芽胞在其他氨... 通过携带Mini-Tn10转座子的温度敏感性质粒载体pIC333构建了苏云金芽胞杆菌YBT-1518菌株的插入突变体库。从突变体库中筛选得到1株芽胞不能在萌发剂L-丙氨酸诱导下萌发的突变株(命名为MA1),进一步的试验表明该突变株菌株的芽胞在其他氨基酸L-苯丙氨酸、L-缬氨酸和L-亮氨酸以及糖类萌发剂葡萄糖、果糖和蔗糖的诱导下也都不能萌发,表明MA1很可能属于新型的芽胞萌发缺陷突变株。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 转座子 突变体库 L-丙氨酸 芽胞萌发
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普城沙雷氏菌ACCC 02146产灵菌红素调控基因的鉴定
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作者 丁霞飞 贾宪波 +2 位作者 林陈强 庄振宏 陈济琛 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期485-496,共12页
【目的】鉴定影响普城沙雷氏菌ACCC 02146产灵菌红素能力的基因,构建ACCC 02146的转座子突变体文库,为进一步研究普城沙雷氏菌ACCC 02146灵菌红素合成机制奠定基础。【方法】采用平板划线法从菌种保藏中心购买菌株和实验室保藏菌株中获... 【目的】鉴定影响普城沙雷氏菌ACCC 02146产灵菌红素能力的基因,构建ACCC 02146的转座子突变体文库,为进一步研究普城沙雷氏菌ACCC 02146灵菌红素合成机制奠定基础。【方法】采用平板划线法从菌种保藏中心购买菌株和实验室保藏菌株中获得15株产灵菌红素的菌株。采用16S rRNA基因测序法鉴定各菌株,邻接建树将其分类,并比较不同类别菌株灵菌红素合成基因簇启动子序列差异,观察各菌株产色能力。对16S rDNA序列和灵菌红素合成基因簇启动子序列均有异于其他菌株的普城沙雷氏菌ACCC 02146合成灵菌红素的调控基因展开研究。构建ACCC 02146的转座子突变体文库,筛选出产色能力明显改变的克隆子并鉴定出对应的转座子插入突变基因。【结果】该突变体文库中有74个突变体表现出产灵菌红素能力的变化。其中25个突变体转座子插入发生在pigA、pigB、pigC、pigD和pigH等5个灵菌红素合成簇基因上,49个突变体转座子插入基因为灵菌红素合成基因簇之外的基因。在鉴定到的产色能力改变的突变体中,麦芽糖O-乙酰基转移酶基因突变菌株有6个,二氢乳清酸脱氢酶基因突变菌株有4个,MarR家族转录因子SlyA基因突变体有3个,winged helix家族的双组分转录调控因子RstA基因突变体有3个,H-醌氧化还原酶亚基I基因突变菌株有3个,NADH-醌氧化还原酶G链基因突变菌株有3个,肽基脯氨酰异构酶B基因突变菌株有3个,其他突变基因对应的克隆子数量为1~2个。【结论】在沙雷氏菌中,除了灵菌红素合成簇基因调控灵菌红素合成,推测灵菌红素合成簇外编码相关酶、转录调控因子和一些结构蛋白的基因通过直接或间接途径在不同程度上调控了灵菌红素的合成。 展开更多
关键词 沙雷氏菌 灵菌红素 转座子 突变体库 调控基因
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用转座子TnYLB-1构建枯草芽孢杆菌EDR4突变体库 被引量:4
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作者 陈永轩 王娜娜 +3 位作者 高小宁 秦虎强 黄丽丽 韩青梅 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期123-129,共7页
为筛选枯草芽孢杆菌EDR4拮抗相关基因,利用转座子TnYLB-1构建该菌株的插入突变体库。通过对种子液OD600值、转接培养液Ⅰ继续培养OD600值及转接培养液Ⅱ后的孵育时间3因素设计正交试验,转化过程中加入pMarA质粒的不同量及质粒与感受态... 为筛选枯草芽孢杆菌EDR4拮抗相关基因,利用转座子TnYLB-1构建该菌株的插入突变体库。通过对种子液OD600值、转接培养液Ⅰ继续培养OD600值及转接培养液Ⅱ后的孵育时间3因素设计正交试验,转化过程中加入pMarA质粒的不同量及质粒与感受态细胞共培养的不同时间研究2因素对转化效率的影响,确定pMarA对EDR4的转化体系。通过50℃高温诱导培养产生EDR4的插入突变体,挑取单菌落2 756个,构建EDR4的插入突变体库,随机挑选14株突变体经PCR检测转座子TnYLB-1序列,发现转座子已成功插入到EDR4基因组中;进一步通过Southern杂交验证,发现转座子TnYLB-1主要以单拷贝形式随机插入,也有部分多拷贝插入。此突变体库的建立可为以后筛选该菌株拮抗相关基因等研究奠定基础。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 转化 转座子TnYLB-1 pMarA质粒 转座诱变 突变体库
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枯草芽胞杆菌9407TnYLB-1转座子突变体库的构建 被引量:4
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作者 范海燕 汝津江 +3 位作者 高坦坦 杨旸 王琦 李燕 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2016年第18期2082-2086,共5页
枯草芽胞杆菌9407(B9407)是1株对苹果轮纹病具有显著防效的生防菌株。为深入研究该菌株防病的分子机制,利用携带转座子TnYLB-1的温敏型质粒pMarA构建了B9407的突变体库。通过电击转化将pMarA转化至B9407,经过30℃培养,37℃转座诱变,50... 枯草芽胞杆菌9407(B9407)是1株对苹果轮纹病具有显著防效的生防菌株。为深入研究该菌株防病的分子机制,利用携带转座子TnYLB-1的温敏型质粒pMarA构建了B9407的突变体库。通过电击转化将pMarA转化至B9407,经过30℃培养,37℃转座诱变,50℃进行pMarA质粒消除,最后通过抗性筛选,获得3 500个转座子插入突变的单克隆,构建了B9407的突变体库。该转座子TnYLB-1的转座效率达到2.4×10-3,pMarA的质粒消除率达97.3%。随机挑选12株突变子进行PCR及Southern blotting杂交,结果表明:转座子TnYLB-1能够随机插入到B9407基因组上,大于90%的突变子为转座子单拷贝插入。B9407TnYLB-1转座子突变体库的构建为筛选和研究影响该菌株生防功能相关的基因并揭示其生防机制奠定了基础。 展开更多
关键词 植物病理学 枯草芽胞杆菌9407 转座子TnYLB-1 pMarA质粒 转座诱变 突变体库
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金葡菌转座子测序文库的构建及促蛋白酶的活性基因鉴定
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作者 周莉 詹佳欢 +3 位作者 于圣铭 余阳 陈开森 罗东 《实验与检验医学》 CAS 2023年第6期675-680,686,共7页
背景金黄色葡萄球菌能产生多种蛋白酶引起侵袭性感染,转座子测序技术是发掘基因功能的有力工具,从基因组层面分析促进金葡菌蛋白酶活性基因对其预防及治疗具有重要作用。目的构建能用于转座子测序的突变文库,筛选及鉴定促进蛋白水解活... 背景金黄色葡萄球菌能产生多种蛋白酶引起侵袭性感染,转座子测序技术是发掘基因功能的有力工具,从基因组层面分析促进金葡菌蛋白酶活性基因对其预防及治疗具有重要作用。目的构建能用于转座子测序的突变文库,筛选及鉴定促进蛋白水解活性基因。方法采用基因合成及无缝克隆技术构建带有mariner转座酶的质粒pSATn,并使用脱水四环素红霉素诱导转座并富集形成突变文库。通过牛奶平板对金葡菌蛋白酶水解活性相关基因进行筛选并使用半随机PCR对转座子插入位点进行鉴定。结果成功构建转座子末端均带有MmeⅠ酶切位点金葡菌转座子突变文库,共筛选出26株蛋白酶缺陷克隆菌株,涉及22个基因。其中,新基因pde2转座子插入株显示蛋白水解活性减弱,生物被膜形成能力显著增强,大蜡螟幼虫致死能力显著降低的特征。结论本研究构建的转座子突变文库为后续转座子测序技术的开展奠定基础,为了解金葡菌蛋白水解活性调控的分子基础提供了新的见解,新筛选的基因pde2有望成为控制金黄色葡萄球菌感染的新靶标。 展开更多
关键词 转座子测序 突变文库 胞外蛋白酶 pApA水解酶
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玉米Mutator转座子突变体库研究进展 被引量:3
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作者 李见坤 郑军 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期238-244,共7页
Mutator转座子以其高的正向突变率、倾向插入基因富含区和低拷贝序列区等独特的遗传特性,使其在玉米基因功能的研究以及突变体库的构建中发挥了重要的作用。本文从群体大小、群体优缺点以及利用途径等方面对Mutator介导的玉米突变体库... Mutator转座子以其高的正向突变率、倾向插入基因富含区和低拷贝序列区等独特的遗传特性,使其在玉米基因功能的研究以及突变体库的构建中发挥了重要的作用。本文从群体大小、群体优缺点以及利用途径等方面对Mutator介导的玉米突变体库作了详细的介绍,以期能为我国玉米基础研究工作者提供启示和借鉴。 展开更多
关键词 玉米 Mu转座子 突变体 突变体库
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TEAseq-based identification of 35,696 Dissociation insertional mutations facilitates functional genomic studies in maize 被引量:2
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作者 Mingjie Lyu Huafeng Liu +7 位作者 Joram Kiriga Waititu Ying Sun Huan Wang Junjie Fu Yanhui Chen Jun Liu Lixia Ku Xiliu Cheng 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2021年第11期961-971,共11页
In plants,transposable element(TE)-triggered mutants are important resources for functional genomic studies.However,conventional approaches for genome-wide identification of TE insertion sites are costly and laborious... In plants,transposable element(TE)-triggered mutants are important resources for functional genomic studies.However,conventional approaches for genome-wide identification of TE insertion sites are costly and laborious.This study developed a novel,rapid,and high-throughput TE insertion site identification workflow based on next-generation sequencing and named it Transposable Element Amplicon Sequencing(TEAseq).Using TEAseq,we systemically profiled the Dissociation(Ds)insertion sites in 1606 independent Ds insertional mutants in advanced backcross generation using K17 as background.The Ac-containing individuals were excluded for getting rid of the potential somatic insertions.We characterized 35,696 germinal Ds insertions tagging 10,323 genes,representing approximately 23.3%of the total genes in the maize genome.The insertion sites were presented in chromosomal hotspots around the ancestral Ds loci,and insertions occurred preferentially in gene body regions.Furthermore,we mapped a loss-of-function AGL2 gene using bulked segregant RNA-sequencing assay and proved that AGL2 is essential for seed development.We additionally established an open-access database named MEILAM for easy access to Ds insertional mutations.Overall,our results have provided an efficient workflow for TE insertion identification and rich sequence-indexed mutant resources for maize functional genomic studies. 展开更多
关键词 MAIZE Zea mays Insertion identification Ds transposon mutant library Next-generation sequencing Functional genomics
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选择性雌激素受体调节剂抑制变异链球菌的作用探究 被引量:1
8
作者 廖盛楠 吕炜桐 +4 位作者 唐权 马玗玟 刘力嘉 王亮 彭显 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期218-224,共7页
目的筛选小分子抗菌药物,探讨选择性雌激素受体调节剂(SERMs)对变异链球菌的抗菌作用及作用机制。方法采用微量稀释法,筛选426个美国食品药物管理局批准的小分子药物对变异链球菌的最低抑菌浓度,通过建立变异链球菌的随机突变体库,探究S... 目的筛选小分子抗菌药物,探讨选择性雌激素受体调节剂(SERMs)对变异链球菌的抗菌作用及作用机制。方法采用微量稀释法,筛选426个美国食品药物管理局批准的小分子药物对变异链球菌的最低抑菌浓度,通过建立变异链球菌的随机突变体库,探究SERMs作用于变异链球菌的靶点。结果小分子药物库中归属于SERMs的托瑞米芬、他莫昔芬、克罗米芬和雷洛昔芬对变异链球菌具有良好的抗菌作用。通过构建变异链球菌的突变体库,筛选发现了两个突变菌株对克罗米芬产生了抗性,对耐药株的基因序列的分析表明,转座子插入位点位于smu_546、smu_874的基因。结论托瑞米芬、他莫昔芬、克罗米芬、和雷洛昔芬等SERMs药物对变异链球菌有明显的抗菌作用,且克罗米芬的作用靶点可能位于smu_546、smu_874基因表达的蛋白上。 展开更多
关键词 变异链球菌 龋病 抗菌作用 突变体库
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超氧化物歧化酶与苏云金芽胞杆菌高温诱导产黑色素相关 被引量:1
9
作者 刘风侠 杨文君 +1 位作者 阮丽芳 孙明 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期39-43,共5页
为探讨苏云金芽胞杆菌高温诱导产黑色素机制,利用含mini-Tn10转座子载体pIC333构建苏云金芽胞杆菌油松亚种4CA1,随机插入突变体库,以寻找相关调控基因。通过高温诱导筛选得到1株在42℃产黑色素减弱的菌株;克隆得到mini-Tn10中断基因的... 为探讨苏云金芽胞杆菌高温诱导产黑色素机制,利用含mini-Tn10转座子载体pIC333构建苏云金芽胞杆菌油松亚种4CA1,随机插入突变体库,以寻找相关调控基因。通过高温诱导筛选得到1株在42℃产黑色素减弱的菌株;克隆得到mini-Tn10中断基因的部分序列,通过测序及同源性比对分析,确定中断基因为超氧化物歧化酶基因sodA2。 展开更多
关键词 黑色素 转座子 突变体库 超氧化物歧化酶(SOD) 苏云金芽胞杆菌
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大豆转座子的研究现状及应用前景 被引量:1
10
作者 刘宇原 付爱根 徐敏 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期512-518,共7页
大豆基因组中约有5万基因,大部分基因的功能处于未知状态。转座子插入突变体库的应用可以为解码大豆基因组中未知基因的功能提供研究平台,同时,也可以为创建有育种应用价值的大豆突变体种质资源库提供基础。大豆基因组中50%~60%的组分... 大豆基因组中约有5万基因,大部分基因的功能处于未知状态。转座子插入突变体库的应用可以为解码大豆基因组中未知基因的功能提供研究平台,同时,也可以为创建有育种应用价值的大豆突变体种质资源库提供基础。大豆基因组中50%~60%的组分为转座子,其中具有活性的且结构完整的转座子只有Tgm9。大豆转座子突变体库目前主要还是利用外源转座子来建立,但是开发并改进内源转座子,增加其跳跃能力及稳定性,可以成为构建突变体库的一个新方向。本文主要介绍了大豆基因组中发现的各种转座子及其特点,并且重点讨论了外源转座子和大豆内源转座子在大豆突变体库创建中的应用现状及应用前景。 展开更多
关键词 大豆 转座子 突变体库 功能基因组学
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玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库的构建
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作者 朱子薇 潘丽婷 +4 位作者 周义东 王燕霞 史建荣 洪青 徐剑宏 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期-,共7页
构建玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库,以期获得丢失玉米赤霉烯酮降解功能的突变子,克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因,阐明MQ01降解玉米赤霉烯酮的分子机制。将携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA电转化至玉米赤... 构建玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01突变体文库,以期获得丢失玉米赤霉烯酮降解功能的突变子,克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因,阐明MQ01降解玉米赤霉烯酮的分子机制。将携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA电转化至玉米赤霉烯酮降解菌Bacillus amyloliquefaciens MQ01中,50℃高温条件下,把穿梭载体pMarA上转座子TnYLB-1随机插入到菌株MQ01基因组中,获得转座子插入突变的阳性克隆,构建MQ01菌株的突变体文库,随机挑选突变子采用PCR和Southern杂交方法进行验证。本研究成功获得了3 000多个TnYLB-1转座子插入突变的阳性克隆,构建了B.amyloliquefaciens MQ01的突变子文库,结果显示TnYLB-1转座子以单拷贝的形式随机插入到B.amyloliquefaciens MQ01的基因组DNA中,从而可以从转座子突变文库中筛选丢失玉米赤霉烯酮降解功能的转座突变子,从菌株MQ01中克隆玉米赤霉烯酮降解酶基因。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 BacillusamyloliquefaciensMQ01 转座子突变 突变体文库
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Ac/Ds转座子系统及其在玉米突变体库构建中的应用
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作者 董雷 库丽霞 +1 位作者 陈彦惠 李平华 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期1-6,共6页
Ac/Ds转座子系统是研究玉米功能基因组学的重要工具。Ac/Ds转座子系统以其在基因组中的低拷贝、倾向插入基因外显子、可以在同一基因不同位点造成突变等独特优势,在构建玉米突变体库和进行基因功能鉴定方面具有重要应用前景。综述了Ac/D... Ac/Ds转座子系统是研究玉米功能基因组学的重要工具。Ac/Ds转座子系统以其在基因组中的低拷贝、倾向插入基因外显子、可以在同一基因不同位点造成突变等独特优势,在构建玉米突变体库和进行基因功能鉴定方面具有重要应用前景。综述了Ac/Ds转座子系统的插入特点、转座机制、在玉米突变体库构建中的应用以及我国玉米突变体库的现状,并对我国玉米Ac/Ds突变体库的研究提出展望。 展开更多
关键词 玉米 Ac/Ds转座子 突变体库
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牛支原体08M株突变体文库的构建及鉴定
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作者 季文恒 陈胜利 +4 位作者 郝华芳 李明霞 赵萍 王展慧 储岳峰 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第5期80-83,共4页
旨在使用转座子插入突变方法构建牛支原体08M株的突变体文库,为毒力相关基因的鉴定提供技术平台。测定了牛支原体08M株的浓度(颜色变化单位,CCU)和庆大霉素最低抑菌浓度(MIC)。应用电穿孔方法,将庆大霉素抗性质粒p ISM2062(携带有... 旨在使用转座子插入突变方法构建牛支原体08M株的突变体文库,为毒力相关基因的鉴定提供技术平台。测定了牛支原体08M株的浓度(颜色变化单位,CCU)和庆大霉素最低抑菌浓度(MIC)。应用电穿孔方法,将庆大霉素抗性质粒p ISM2062(携带有转座子Tn4001mod)导入牛支原体08M株感受态细胞内,经抗性平板筛选、液体培养及PCR鉴定,构建08M株的突变体文库。随机挑选10个克隆菌株传10代检测转座子稳定性,挑选2个克隆用Southern blot检测转座子是否存在多次插入。结果显示:08M株浓度为1.13×107CCU/m L,庆大霉素MIC为16 ng/μL;电转化p ISM2062的牛支原体08M株在抗性平板形成菌落445个,从中克隆培养成功380个,PCR鉴定结果显示存在Tn插入的菌株有263个,阳性率为69.21%(263/380);插入的转座子稳定传代,且无多次插入。本研究成功初步构建了牛支原体08M株的转座子插入突变体文库。 展开更多
关键词 牛支原体 转座子 突变体文库
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弗氏柠檬酸菌1,3-丙二醇合成的代谢工程研究
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作者 于越 郭文逸 +1 位作者 王居立 杨洪江 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期451-459,共9页
【目的】研究弗氏柠檬酸菌(Citrobacter freundii)1,3-丙二醇合成的代谢过程。【方法】构建甘油脱氢酶基因GSR-lac Z、1,3-丙二醇氧化还原酶基因PDO-lac Z和甘油脱水酶基因GL-lac Z等报告基因。在此基础上,构建3个相应的转座子突变文库... 【目的】研究弗氏柠檬酸菌(Citrobacter freundii)1,3-丙二醇合成的代谢过程。【方法】构建甘油脱氢酶基因GSR-lac Z、1,3-丙二醇氧化还原酶基因PDO-lac Z和甘油脱水酶基因GL-lac Z等报告基因。在此基础上,构建3个相应的转座子突变文库。【结果】筛选到6株突变子,其相应关键酶表达水平提高1-11倍,1,3-丙二醇产量提高幅度为3%-50%。对转座子插入位点分析显示,5株突变子插入位点均为β-内酰胺酶(CKO_02592)编码基因,1株突变子插入位点为二氢硫辛酰胺基转移酶(CKO_02433)编码基因。进一步分析发现,β-内酰胺酶基因突变显著提高甘油脱水酶和甘油脱氢酶的表达水平,而1,3-丙二醇氧化还原酶表达水平没有变化;二氢硫辛酰胺基转移酶基因突变显著提高1,3-丙二醇氧化还原酶表达水平,其他两种关键酶基因表达水平不变。【结论】β-内酰胺酶和二氢硫辛酰胺基转移酶基因能够分别影响1,3-丙二醇合成代谢途径关键酶的表达,为构建工程菌株打下基础。 展开更多
关键词 转录融合报告基因 转座子突变文库 弗氏柠檬酸菌 1 3-丙二醇
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鸭疫里氏杆菌转座子随机突变库的构建 被引量:2
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作者 倪欣涛 卢凤英 +6 位作者 苗双 朱寅玉 邢林林 俞慧 祁晶晶 王桂军 胡青海 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期351-355,共5页
通过接合转导的方法构建鸭疫里氏杆菌Yb2和CH3株的Tn4351转座子突变库,以便筛选和鉴定鸭疫里氏杆菌的功能基因。先将携带质粒pEP4351(含Tn4351转座子序列)的大肠杆菌BW19851(pEP4351)作为供体,与受体菌鸭疫里氏杆菌强毒株Yb2或CH3株进... 通过接合转导的方法构建鸭疫里氏杆菌Yb2和CH3株的Tn4351转座子突变库,以便筛选和鉴定鸭疫里氏杆菌的功能基因。先将携带质粒pEP4351(含Tn4351转座子序列)的大肠杆菌BW19851(pEP4351)作为供体,与受体菌鸭疫里氏杆菌强毒株Yb2或CH3株进行接合转导,使质粒pEP4351导入Yb2或CH3株细菌内,进而转座子Tn4351随机插入鸭疫里氏杆菌的基因组中,然后用含红霉素和卡那霉素的胰酶大豆琼脂平板进行阳性接合子的筛选。用PCR扩增鸭疫里氏杆菌16S rRNA基因和红霉素抗性基因EmF进行转座子插入突变株的鉴定,最终成功地构建了鸭疫里氏杆菌Yb2株和CH3株各包含3 100株和2 520株突变株的Tn4351转座子随机突变库,接合转导效率分别为1.7×10-6和3.9×10-6。转座子随机突变库的构建为下一步根据突变株表型的变异来筛选和鉴定鸭疫里氏杆菌的毒力相关等基因奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌 转座子随机突变库 接合转导
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水稻细菌性条斑病菌一个新基因与致病相关
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作者 黄胜 卢烨 +3 位作者 朱晓琳 潘俊霞 何勇强 姜伟 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第2期137-142,共6页
水稻细菌性条斑病菌是水稻的主要病原菌之一,其引发的水稻细菌性条斑病可造成水稻严重减产。利用广西分离株GX01作为建库出发菌株,采用EZ::Tn5转座子标签法构建GX01菌株的Tn5随机插入突变体库,其后利用针刺接种法在水稻上进行致病性试验... 水稻细菌性条斑病菌是水稻的主要病原菌之一,其引发的水稻细菌性条斑病可造成水稻严重减产。利用广西分离株GX01作为建库出发菌株,采用EZ::Tn5转座子标签法构建GX01菌株的Tn5随机插入突变体库,其后利用针刺接种法在水稻上进行致病性试验,筛选到1个致病性明显下降的突变体。TAIL-PCR定位该突变位点位于XOC3376,该基因的编码产物注释为假设蛋白。为了研究XOC3376的功能,对其进行表型检测及功能互补,结果表明其互补菌株的表型及致病力都能恢复到野生型的水平。本文为进一步研究水稻细菌性条斑病菌的致病相关基因的功能、阐明该病菌的致病机理奠定基础。 展开更多
关键词 水稻细菌性条斑病菌 EZ∷Tn5转座子 突变体库 致病相关基因
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利用mini-Tn10转座子文库筛选鳗弧菌M3表型发生变化的基因
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作者 李倩 李贵阳 +1 位作者 李杰 莫照兰 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2020年第5期160-167,共8页
为了寻找影响鳗弧菌(Vibrio anguillarum)表型变化的基因,本研究使用转座子mini-Tn10(pLOF/Kana)构建了鳗弧菌M3突变株文库,筛选影响表型变化的菌株及相关基因,证明这些表型变化的突变子与毒力存在一定的相关性。对M3突变文库的1152突... 为了寻找影响鳗弧菌(Vibrio anguillarum)表型变化的基因,本研究使用转座子mini-Tn10(pLOF/Kana)构建了鳗弧菌M3突变株文库,筛选影响表型变化的菌株及相关基因,证明这些表型变化的突变子与毒力存在一定的相关性。对M3突变文库的1152突变子进行筛选,获得泳动能力改变的突变子1个(编号为6G_1),酪蛋白酶活性发生改变的突变子3个(编号为5A_11、7B_12和7E_12),明胶酶活性发生改变的突变子1个(编号为7H_1),以及菌膜形成能力发生显著变化的突变子3个(编号为5E_2、6A_2和6E_12)。对转座子插入位点进一步分析显示,一个磷酸二酯酶相关基因突变引起泳动能力增强(P<0.05),leuD、rseB和thiQ突变引起酪蛋白酶活性显著减弱(P<0.05),potD突变引起明胶蛋白酶活性显著减弱(P<0.05),leuO、ilvH和grpB的突变引起菌膜形成能力明显减弱(P<0.05)。对这些表型变化的突变子进行毒力感染,发现野生型M3是6G_1突变子的半数致死剂量(Lethal dose 50%,LD50)的2.04倍,该突变子毒力相对增强。5A_11、7B_12和7E_12的突变子LD50分别为野生型M3的2.96、3.25和3.36倍。7H_1的LD50是野生型M3的1.25倍,5E_2、6A_2和6E_12的LD50分别为野生型M3的3.34、4.08和1.84倍,这些突变子毒力相对减弱。本研究结果为进一步阐明鳗弧菌的发病机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 鳗弧菌 mini-Tn10转座子 突变文库 表型 基因
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