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广西巴马小型猪Presenilin-2基因真核表达载体的构建及其在小鼠N2a细胞中的表达验证 被引量：8
1
作者 吴延军 陈秋明 +5 位作者 杨秀荣 兰干球 张名媛 李艳君 郭亚芬 蒋钦杨 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期267-271,共5页
本研究的目的是构建广西巴马小型猪Presenilin-2真核表达载体并在细胞水平对其进行验证。利用RT-PCR的方法扩增并克隆Presenilin-2基因,再将Presenilin-2亚克隆到p EGFP-N1,通过脂质体转染方法将p EGFP-PS2-N1转至N2a细胞,48 h后在荧光... 本研究的目的是构建广西巴马小型猪Presenilin-2真核表达载体并在细胞水平对其进行验证。利用RT-PCR的方法扩增并克隆Presenilin-2基因,再将Presenilin-2亚克隆到p EGFP-N1,通过脂质体转染方法将p EGFP-PS2-N1转至N2a细胞,48 h后在荧光显微镜下观察细胞是否表达绿色荧光蛋白。结果显示,本研究成功构建了阅读框架正确的广西巴马小型猪Presenilin-2基因真核表达载体,转染p EGFP-PS2-N1后,N2a细胞有绿色荧光蛋白的表达。该研究将为下一步研究Presenilin-2基因的功能和生产转Presenilin-2基因猪奠定基础。 展开更多
关键词 广西巴马小型猪 Presenilin-2基因 N2A细胞 阿尔茨海默病 转基因猪
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广西巴马小型猪SAP真核表达载体的构建及胚胎水平表达 被引量：1
2
作者 张笠 黄玥萌 +4 位作者 吴延军 司景磊 兰干球 郭亚芬 蒋钦杨 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期53-57,共5页
本研究的目的是构建广西巴马小型猪SAP真核表达载体并在胚胎水平对其进行验证。利用RT-PCR技术扩增并克隆SAP基因,再用T4连接酶将其连入P-Dsred-N1载体,构建P-Dsred-N1-SAP载体,并通过胞质注射生产转SAP的猪胚胎。结果表明,本研究成功... 本研究的目的是构建广西巴马小型猪SAP真核表达载体并在胚胎水平对其进行验证。利用RT-PCR技术扩增并克隆SAP基因,再用T4连接酶将其连入P-Dsred-N1载体,构建P-Dsred-N1-SAP载体,并通过胞质注射生产转SAP的猪胚胎。结果表明,本研究成功构建了P-Dsred-N1-SAP重组载体,经胞质注射后在胚胎发育早期和囊胚期均有红色荧光表达。本研究为下一步研究SAP基因的功能和生产转SAP基因猪奠定基础。 展开更多
关键词 广西巴马小型猪 血液淀粉样P物质(SAP) 重组质粒 胞质注射 转基因猪
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广西巴马小型猪ABCA1基因真核表达载体的构建与鉴定
3
作者 黄玥萌 张笠 +2 位作者 郭亚芬 蒋钦杨 兰干球 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1347-1351,共5页
本研究目的是克隆广西巴马小型猪ABCA1基因CDs序列并构建真核表达载体。利用RT-PCR技术从广西巴马小型猪肝脏组织中扩增出ABCA1基因编码序列,直接插入至pEGFP-N1真核表达载体的KpnⅠ酶切位点,构建出重组质粒。之后将重组质粒pEGFP-N1-AB... 本研究目的是克隆广西巴马小型猪ABCA1基因CDs序列并构建真核表达载体。利用RT-PCR技术从广西巴马小型猪肝脏组织中扩增出ABCA1基因编码序列,直接插入至pEGFP-N1真核表达载体的KpnⅠ酶切位点,构建出重组质粒。之后将重组质粒pEGFP-N1-ABCA1转染PK15细胞,并于24 h、48 h后观察细胞荧光表达情况。收集转染48 h后的PK15细胞通过qRT-PCR检测ABCA1 mRNA相对表达量。结果表明:本实验成功构建了广西巴马小型猪ABCA1基因真核表达载体,重组质粒pEGFP-N1-ABCA1转染PK15细胞后,有绿色荧光蛋白表达,且与转染pEGFP-N1和空白组相比,pEGFP-N1-ABCA1转染组的ABCA1 mRNA表达量显著提高。本研究为下一步研究ABCA1基因的功能和调控及生产转ABCA1基因广西巴马小型猪奠定基础。 展开更多
关键词 广西巴马小型猪 ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1) PK15 pEGFP-N1载体 转基因猪
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