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阳离子脂质体的转染机制及转染效率影响因素 被引量：24
1
作者 陈彦祥 乔卫红 +1 位作者 刘栋良 李宗石 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期776-780,共5页
阳离子脂质体是一种非常具有发展前景的基因载体。简要介绍了阳离子脂质体的结构特点;着重讨论了阳离子脂质体作为基因载体时介导基因转移的机制以及在转染过程中对基因转染效率产生影响的主要因素。
关键词 阳离子脂质体 基因治疗 转染机制 转染效率
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壳聚糖及其衍生物基因载体的研究进展 被引量：15
2
作者 黄进 汪世龙 +2 位作者 孙晓宇 李文哲 姚思德 《高分子通报》 CAS CSCD 2006年第1期65-69,共5页
壳聚糖是一种天然的生物可降解性,生物相容性好而且安全无毒的多糖,因而它成为基因治疗载体研究的热点。本文就近年来壳聚糖及其衍生物作为基因载体转染的研究进展和现状作简要的综述,并对转染率的影响因素如壳聚糖的分子量、粒径、脱... 壳聚糖是一种天然的生物可降解性,生物相容性好而且安全无毒的多糖,因而它成为基因治疗载体研究的热点。本文就近年来壳聚糖及其衍生物作为基因载体转染的研究进展和现状作简要的综述,并对转染率的影响因素如壳聚糖的分子量、粒径、脱乙酰度等进行着重介绍。 展开更多
关键词 壳聚糖 纳米粒 非病毒载体 转染率
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pEGFP-N1质粒转染乳鼠心肌细胞的分布及效率 被引量：7
3
作者 冯红 徐文琳 +1 位作者 战锐 钱令嘉 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期112-114,i004,共4页
目的 :研究 pEGFP N1质粒转染心肌细胞的分布及效率。 方法 :培养乳鼠心肌细胞 ,根据乳鼠心肌细胞的不同生长时间 (1～ 3d)进行 pEGFP N1质粒转染心肌细胞的实验研究。 结果 :乳鼠心肌细胞生长 1d时 ,pEGFP N1质粒转染心肌细胞的效率显... 目的 :研究 pEGFP N1质粒转染心肌细胞的分布及效率。 方法 :培养乳鼠心肌细胞 ,根据乳鼠心肌细胞的不同生长时间 (1～ 3d)进行 pEGFP N1质粒转染心肌细胞的实验研究。 结果 :乳鼠心肌细胞生长 1d时 ,pEGFP N1质粒转染心肌细胞的效率显著高于乳鼠心肌细胞生长 2d、3d时 ;pEGFP N1质粒转染心肌细胞后EGFP均匀地充满胞浆和胞核。结论 :pEGFP N1质粒转染乳鼠心肌细胞的效率与心肌细胞的生长期有关 ;EGFP在心肌细胞中均匀分布于胞浆和胞核。 展开更多
关键词 pEGFP-N1质粒 转染 心肌细胞 分布 转染效率
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经导管动脉注入脂质体介导的p53基因治疗肝癌的实验研究 被引量：14
4
作者 朱光宇 卢勤 +7 位作者 滕皋军 魏晓莹 郭金和 余辉 邓钢 何仕诚 方文 李国昭 《介入放射学杂志》 CSCD 2007年第2期109-114,共6页
目的以兔VX2肝癌模型为对象,探讨经导管动脉注入脂质体介导的p53基因治疗肝癌的可行性及转染和表达情况。方法将pCMV-myc-p53质粒、阳离子脂质体LipofectAMINE以及pCMV-myc- p53和LipofectAMINE的复合体分别注入兔VX2肝癌模型的肿瘤供... 目的以兔VX2肝癌模型为对象,探讨经导管动脉注入脂质体介导的p53基因治疗肝癌的可行性及转染和表达情况。方法将pCMV-myc-p53质粒、阳离子脂质体LipofectAMINE以及pCMV-myc- p53和LipofectAMINE的复合体分别注入兔VX2肝癌模型的肿瘤供血动脉,并提取肿瘤组织蛋白,采用蛋白印迹法及免疫组化检测基因转染及其表达。以不同量的pCMV-myc-p53与LipofectAMINE形成的复合体分别注入兔VX2肝癌模型的肿瘤供血动脉内,同法检测基因的转染及其表达。结果脂质体介导的p53基因经动脉途径成功转染了兔VX2肝癌模型的肿瘤组织并进行表达,其转染效率明显高于单纯基因导入,基因的量与转染效率之间存在量效关系。结论经动脉途径导入脂质体介导的p53基因治疗肝癌是可行、有效的,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 P53基因 脂质体 转染效率 肝癌 放射学 介入性
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用脂质体法转染 COS-7 细胞条件的优化 被引量：10
5
作者 胡志远 邢桂春 贺福初 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1997年第2期125-127,共3页
现有的多种真核细胞基因转染方法存在繁琐和效率低的问题，我们利用脂质体包裹的方法，以瞬时表达系统中最常用的ＣＯＳ－７细胞为靶，观察了影响转染效率的多种因素，优化了转染条件。
关键词 瞬时表达 COS-7细胞 转染效率 脂质体
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壳聚糖纳米粒作为基因载体的研究:粒径对转染效率的影响 被引量：11
6
作者 杨晓容 宗莉 袁喜英 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期774-779,共6页
研究粒径对壳聚糖（chitosan，CS）纳米粒介导的转染效率的影响。通过调整CS溶液加入质粒基因（plasmid DNA，pDNA）溶液的速度和涡旋时间制备250，580和1300nm粒径pDNA/CS纳米粒，研究粒径对CS介导的细胞转染效率的影响。为深入探讨粒... 研究粒径对壳聚糖（chitosan，CS）纳米粒介导的转染效率的影响。通过调整CS溶液加入质粒基因（plasmid DNA，pDNA）溶液的速度和涡旋时间制备250，580和1300nm粒径pDNA/CS纳米粒，研究粒径对CS介导的细胞转染效率的影响。为深入探讨粒径对转染效率的影响，考察了3种粒径pDNA/CS纳米粒的药剂学性质，对抗核酸酶作用和细胞对纳米粒的吸附和摄取行为。结果表明：本文制备的3种粒径纳米粒的药剂学性质和凝聚pDNA的能力等特性基本无差别，均能有效保护pDNA免受核酸酶降解；在HEK293细胞中的转染效率无显著差异；与细胞共孵育4h，流式细胞仪测定的三者细胞摄取率与摄取量相似；荧光显微图像显示3种粒径纳米粒均以小聚集体形式吸附于细胞表面，激光扫描共聚焦显微图像显示直径约为2μm小聚集体较易被细胞内吞入胞。因此粒径在250-1300nm中对壳聚糖纳米粒介导的细胞转染率基本无影响。 展开更多
关键词 壳聚糖 纳米粒 PDNA 粒径 转染效率
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三种转染试剂对PEF细胞与BHK细胞转染效率的比较 被引量：10
7
作者 张文智 李亚 +1 位作者 王鹏雁 陈创夫 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期753-758,共6页
【目的】比较三种转染试剂对原代细胞和传代细胞的转染效率,选择合适的转染试剂。【方法】以EGFP为报告基因,分别用脂质体、磷酸钙、罗氏试剂转染PEF细胞和BHK细胞。通过改变转染试剂和质粒DNA的剂量,利用流式细胞仪分析转染效率,从而... 【目的】比较三种转染试剂对原代细胞和传代细胞的转染效率,选择合适的转染试剂。【方法】以EGFP为报告基因,分别用脂质体、磷酸钙、罗氏试剂转染PEF细胞和BHK细胞。通过改变转染试剂和质粒DNA的剂量,利用流式细胞仪分析转染效率,从而确定最佳的转染试剂。【结果】对于PEF细胞,脂质体和磷酸钙转染效果不理想,细胞死亡率高,绿色荧光表达量少。罗氏转染试剂相对较好,细胞死亡率低,并且保持原有细胞形态。对于传代细胞BHK细胞而言,各转染试剂均可达到理想转染效果。【结论】不同的细胞对转染试剂的选择也不同,传代细胞BHK用脂质体即可达到理想的效果。利用罗氏试剂可以提高转染效率,但不明显。而对于原代细胞PEF,脂质体与磷酸钙试剂的转染效率很低。相比较而言,罗氏转染试剂效果更好些,细胞毒性小,转染率在10%～12%。 展开更多
关键词 转染 效率 猪胚胎成纤维细胞 仓鼠肾细胞
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阳离子脂质体基因载体的细胞转染研究 被引量：9
8
作者 姜云霞 王冰 +5 位作者 崔韶晖 赵轶男 杨宝灵 段艳 王秀武 张树彪 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第17期7862-7864,共3页
研究阳离子脂质体在不同细胞中的转染效率及毒性。首先采用DNA延滞实验研究Lipofectamine2000、DOTAP转染试剂与DNA的结合能力。然后选用绿色荧光蛋白的质粒pGFP-N2作为报告基因模型和转染试剂制成复合物后转染Hela7、721、HT29细胞,比... 研究阳离子脂质体在不同细胞中的转染效率及毒性。首先采用DNA延滞实验研究Lipofectamine2000、DOTAP转染试剂与DNA的结合能力。然后选用绿色荧光蛋白的质粒pGFP-N2作为报告基因模型和转染试剂制成复合物后转染Hela7、721、HT29细胞,比较多种因素对转染的影响。最后使用MTT比色法分析Lipofectamine2000、DOTAP转染试剂对细胞的毒性。随着复合物中转染试剂比例的增加,Lipofectamine2000、DOTAP与DNA结合能力逐渐增强。Lipofectamine2000在Hela细胞转染最高效率约72%;在7721、HT29细胞转染效率较低,DOTAP在3种细胞的转染效率都很低;在转染效率最高时2种转染试剂的细胞存活率均在90%以上。对商品化的转染试剂研究和讨论以期为阳离子类脂非病毒载体的研究提供参考。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 转染效率 MTT
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葡聚糖-精胺阳离子聚合物基因载体体外基因转染的研究 被引量：9
9
作者 平渊 马强 陈建海 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期669-674,共6页
本文研究了葡聚糖-精胺阳离子聚合物（DSP）基因载体的性能及其对体外细胞基因的转染效率。氧化葡聚糖与精胺通过还原胺化法反应制得DSP，所得DSP与质粒pEGFP通过静电吸附形成复合物；当DSP／DNA质量比在4：1至20：1，能形成稳定的复合... 本文研究了葡聚糖-精胺阳离子聚合物（DSP）基因载体的性能及其对体外细胞基因的转染效率。氧化葡聚糖与精胺通过还原胺化法反应制得DSP，所得DSP与质粒pEGFP通过静电吸附形成复合物；当DSP／DNA质量比在4：1至20：1，能形成稳定的复合物，复合物粒径为162．6～187．9nm，zeta电位则从＋8．45mV增至＋39．6mV：DSP能有效保护DNA不受核酸酶Ⅰ降解，同时在一定pH范围内载体具有较强的缓冲能力；复合物在质量比为8：1时对SMMC-7721肝癌细胞、BHK-21细胞的转染率分别达到最高，其效果均与Lipofectamine2000相当。该研究表明葡聚糖一精胺阳离子聚合物是一种高效的基因载体。 展开更多
关键词 葡聚糖-精胺阳离子聚合物 复合物 转染率
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阳离子脂质体用做基因传递载体的研究进展 被引量：9
10
作者 杨硕晔 陈西敬 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第20期1866-1870,共5页
基因治疗的难题之一在于研制安全有效的基因传递载体。常用的基因传递载体分为病毒载体和非病毒载体两类,其中,非病毒载体中的阳离子脂质体因具有低毒性与免疫原性、生物相容性好、易于制备等优点而受到广泛关注,具有良好的应用前景。... 基因治疗的难题之一在于研制安全有效的基因传递载体。常用的基因传递载体分为病毒载体和非病毒载体两类,其中,非病毒载体中的阳离子脂质体因具有低毒性与免疫原性、生物相容性好、易于制备等优点而受到广泛关注,具有良好的应用前景。近年来对阳离子脂质体载体的研究主要集中在对其传递基因机制的考察、各种影响其转基因效率的因素的探求、应用各种方法研制安全性和转染活性更佳的新型阳离子脂质体等方面。文中从转基因特点、传递机制、常用的制备材料、影响转基因效率的因素、近年来出现的新型阳离子脂质体等方面综述了此类基因传递载体的研究进展。 展开更多
关键词 基因传递 基因载体 阳离子脂质体 转染率 新型载体
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阳离子膜融合脂质体介导反义寡核苷酸在Hela细胞中的转染实验研究 被引量：8
11
作者 胡英 金一 +1 位作者 王华 李敏伟 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期892-896,共5页
目的　研究阳离子膜融合脂质体 (CFL)介导反义寡核苷酸 (ASON)的细胞转染效率及影响因素。方法逆相蒸发法制备 3种不同阳离子含量的脂质体 (CL) ,在CL上引入仙台病毒形成CFL ,将制得的阳离子膜融合脂质体与反义寡核苷酸混合得到复合物 ... 目的　研究阳离子膜融合脂质体 (CFL)介导反义寡核苷酸 (ASON)的细胞转染效率及影响因素。方法逆相蒸发法制备 3种不同阳离子含量的脂质体 (CL) ,在CL上引入仙台病毒形成CFL ,将制得的阳离子膜融合脂质体与反义寡核苷酸混合得到复合物 ,考察形态学及载药量 ,用MTT法考察该载体的细胞毒性 ,流式细胞仪测定阳性细胞百分率和平均荧光强度。结果　制得的CFL形态均匀 ,粒径为 (16 8± 6 5 )nm。载药量随着磷脂 ASON(+ - )电荷比增加而增加。CFL细胞毒性明显低于相同电荷比的CL ,细胞转染效率是随阳离子含量、磷脂 ASON(+ - )电荷比增加而增加 ,血清和低温均对CFL的细胞转染有影响。结论　阳离子膜融合脂质体作为载体在低电荷比条件下可降低细胞毒性并可提高细胞转染效率 ,可作为该ASON的给药系统而进一步研究。 展开更多
关键词 阳离子膜融合脂质体 反义寡核苷酸 仙台病毒 转染效率 实验研究 基因治疗
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纳米脂质体介导p53治疗鼻咽癌的实验研究 被引量：9
12
作者 刘海 秦学玲 +2 位作者 鲜均明 周光耀 梁传余 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2008年第1期21-24,共4页
目的探讨纳米脂质体介导p53基因在体外转染鼻咽癌细胞株后细胞的生长变化情况。方法不同比例的纳米脂质体与p53质粒的混合物转染鼻咽癌细胞,转染效率最高的组用MTT法和流式细胞术检测鼻咽癌细胞的生长和凋亡情况。结果比例为纳米脂质体/... 目的探讨纳米脂质体介导p53基因在体外转染鼻咽癌细胞株后细胞的生长变化情况。方法不同比例的纳米脂质体与p53质粒的混合物转染鼻咽癌细胞,转染效率最高的组用MTT法和流式细胞术检测鼻咽癌细胞的生长和凋亡情况。结果比例为纳米脂质体/Porf-GFP=2.5/1的转染效率最高,达60%～70%。MTT法测定纳米脂质体包裹p53能明显抑制鼻咽癌细胞株的体外生长,抑制率为67.7%,且转染脂质体/Porf-hp53的鼻咽癌细胞中凋亡细胞占47.8%。结论纳米脂质体作为一种非病毒载体能有效的将p53基因转导入鼻咽癌细胞中,并抑制肿瘤细胞生长,诱发凋亡。 展开更多
关键词 纳米脂质体 P53 鼻咽肿瘤 凋亡 转染率
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脂质体介导法转染体细胞效率的优化 被引量：5
13
作者 侯颖 李文蓉 +1 位作者 谭立新 牛志刚 《黄牛杂志》 2005年第2期18-20,24,共4页
为建立脂质体介导的高效体细胞转染体系,采用脂质体TransfastTM包裹编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的pCMV-EGFP质粒,转染5～13代山羊胎儿成纤维细胞,并用流式细胞仪检测不同DNA剂量、细胞汇合度、血清、转染时间及脂质体与DNA比例等参数... 为建立脂质体介导的高效体细胞转染体系,采用脂质体TransfastTM包裹编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的pCMV-EGFP质粒,转染5～13代山羊胎儿成纤维细胞,并用流式细胞仪检测不同DNA剂量、细胞汇合度、血清、转染时间及脂质体与DNA比例等参数对转染效率的影响。实验发现0.75μgDNA按1∶1的脂质体与DNA比例,在无血清条件下转染汇合50%细胞3h,转染效率最高可达40.7%±5%。4h转染时间、细胞汇合80%及转染体系中有血清会降低转染效率。随着DNA剂量的增加,转染效率呈剂量依赖性增高,但山羊成纤维细胞的活细胞数显著下降。实验表明TransfastTM能高效安全地介导外源基因转染山羊成纤维细胞。 展开更多
关键词 转染效率 血清 脂质体介导法 流式细胞仪检测 DNA 剂量 羊胎 山羊 体细胞 胎儿成纤维细胞
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动物用质粒DNA内毒素去除方法的建立及其质量检验 被引量：7
14
作者 张泉 袁燕 +2 位作者 袁维峰 孙怀昌 朱鸿飞 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期63-66,96,共5页
用自行改进设计的TritonX-114方法去除动物用重组质粒DNA中的内毒素,鲎试剂检测方法确定每毫克质粒DNA中内毒素的含量为50 EU。将3种不同方法制备的重组质粒pEGFPN1包裹后转染COS-7、MDCK和Marc145细胞,结果表明,经TritonX-114去除内毒... 用自行改进设计的TritonX-114方法去除动物用重组质粒DNA中的内毒素,鲎试剂检测方法确定每毫克质粒DNA中内毒素的含量为50 EU。将3种不同方法制备的重组质粒pEGFPN1包裹后转染COS-7、MDCK和Marc145细胞,结果表明,经TritonX-114去除内毒素后的质粒DNA(A)与无热源质粒提取试剂盒制备的质粒DNA(B)的转染效率相当,比未经内毒素去除的质粒DNA(C)的转染效率高。将上述3种方法制备的pcDNAlacZ经PEI包裹后尾静脉注射小鼠,注射后每隔2 d扑杀小鼠,取其心、肝、脾、肺和肾组织,定量检测β-半乳糖苷酶的表达和持续时间,结果显示报告基因仅在小鼠的心、脾和肝组织中表达至第8天,A与B的表达水平接近,且明显高于C制备的pcDNALacZ的表达水平,提示经TritonX-114去除内毒素后的质粒DNA可提高转染效率和表达水平。多种动物体内注射重组质粒后,无体温升高等异常临床表征,进一步说明了使用经TritonX-114去除内毒素的质粒DNA具备良好的安全性。 展开更多
关键词 TritonX-114 内毒素 转染效率 表达 安全性
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脂质体介导法转染肿瘤细胞效率的优化 被引量：6
15
作者 潘宁 章蔼然 侯颖春 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第6期47-50,共4页
目的：研究优化影响脂质体转染效率的因素，以提高脂质体转染效率，为相关研究和应用提供参考。方法：以绿色荧光蛋白（GFP）作为报告基因，采用脂质体Lipofectamine2000包裹pU6H1-GFP-FAK重组质粒转染Caco-2细胞，研究了细胞接种密度、... 目的：研究优化影响脂质体转染效率的因素，以提高脂质体转染效率，为相关研究和应用提供参考。方法：以绿色荧光蛋白（GFP）作为报告基因，采用脂质体Lipofectamine2000包裹pU6H1-GFP-FAK重组质粒转染Caco-2细胞，研究了细胞接种密度、DNA用量、脂质体与DNA的比例、脂质体-DNA复合物的形成时间、细胞与脂质体复合物的孵育时间、血清的有元及细胞的传代次数等因素对脂质体转染效率的影响。结果：2—5次细胞传代，2×10^5接种密度、4μgDNA用量、2．5：1的脂质体与DNA比例、30min脂质体-DNA复合物形成时间以及6h细胞与复合物孵育时间，转染效率最高。血清在本实验室条件下并不影响转染效率。结论：实验获得的优化条件可以明显提高脂质体对肿瘤细胞的转染效率，可作为有关研究或应用的参考。 展开更多
关键词 脂质体 细胞转染 转染效率 肿瘤细胞
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基于纳米材料的基因载体 被引量：8
16
作者 古晓晓 杜宝吉 +3 位作者 李云辉 高莹 李丹 汪尔康 《化学进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1093-1101,共9页
基因疗法是治疗基因变异引起的先天性遗传疾病和后天获得性疾病以及癌症的新型有效方法。外源基因在细胞中安全、高效、稳定的表达是基因治疗成功的关键,这与基因治疗所使用的载体系统息息相关。基因载体主要分为病毒载体和非病毒载体... 基因疗法是治疗基因变异引起的先天性遗传疾病和后天获得性疾病以及癌症的新型有效方法。外源基因在细胞中安全、高效、稳定的表达是基因治疗成功的关键,这与基因治疗所使用的载体系统息息相关。基因载体主要分为病毒载体和非病毒载体两大类:病毒载体的转染效率较高,但副作用较大;非病毒载体作为一种新型的基因传递系统,可以弥补病毒载体的缺陷,尽管其转染效率稍逊于病毒载体,但在基因治疗领域具有不可替代的作用。随着纳米技术的出现和蓬勃发展,基于纳米材料的基因载体研究受到越来越多的关注。纳米基因载体具有如下潜在的优势:它制备相对简单,易于对其进行多功能的修饰;具有良好的生物相容性,一般不会引起强烈的机体免疫反应;粒径普遍很小,容易穿过人体的组织间隙而被细胞吸收,基因转运效率较高;可以较有效保护其所携带外源基因,利于基因更高效地表达。本文主要对基于金属、无机非金属、阳离子聚合物和脂质体纳米材料作为基因载体的研究进展进行综述和展望。 展开更多
关键词 基因载体 纳米基因载体 基因治疗 转染效率
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PLGA纳米载体介导的端粒酶反义核酸体外转染率及对肝肿瘤细胞的影响 被引量：8
17
作者 潘一峰 张阳德 +3 位作者 王吉伟 翟登高 王绍闯 王渊璄 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第23期3540-3543,共4页
目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体,促进反义核酸对肝肿瘤细胞的抑制作用。方法用绿色荧光蛋白报道基因pEGFP-N1表达质粒DNA转染细胞;观测不同转染方法的转染率,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;噻唑蓝(MTT)法测定端粒酶... 目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体,促进反义核酸对肝肿瘤细胞的抑制作用。方法用绿色荧光蛋白报道基因pEGFP-N1表达质粒DNA转染细胞;观测不同转染方法的转染率,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;噻唑蓝(MTT)法测定端粒酶反义核酸对肝肿瘤细胞HepG2的抑制;过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果裸DNA和磷酸钙的转染效率均不高,分别为18%和24%;脂质体的转染效率为42%,纳米粒的转染效率最高,达61%;以脂质体或PLGA纳米粒为载体介导端粒酶反义核酸处理的肿瘤细胞,其端粒酶活性和生长与空白对照相比明显下降(P<0.05),两种载体之间的差异也非常显著(P<0.05);处理72h后,纳米粒介导组的肿瘤细胞凋亡率显著高于脂质体介导组,分别为23.1%和16.4%。结论PLGA纳米粒是一种非常有前途的非病毒基因治疗载体。 展开更多
关键词 纳米载体 端粒酶hTEKT反义核酸 转染率 肝肿瘤细胞
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阳离子聚合物基因转染载体的研究进展 被引量：4
18
作者 吴传保 郝建原 +1 位作者 邓先模 夏雨 《高分子通报》 CAS CSCD 2007年第4期34-46,共13页
安全有效的基因载体是实现基因治疗的必要条件,由于阳离子聚合物易于合成和改性,无免疫原性,可以方便地与DNA形成紧密的超分子复合物,保护DNA免受核酸酶的降解,并促进其进入细胞,从而成为非病毒基因载体中的一个重要类型;但阳离子聚合... 安全有效的基因载体是实现基因治疗的必要条件,由于阳离子聚合物易于合成和改性,无免疫原性,可以方便地与DNA形成紧密的超分子复合物,保护DNA免受核酸酶的降解,并促进其进入细胞,从而成为非病毒基因载体中的一个重要类型;但阳离子聚合物基因载体,对细胞具有电荷相关的毒性,转染效率低于病毒载体,这成为限制其进入临床使用的瓶颈。本文从提高阳离子聚合物作为基因载体时的转染效率及降低其毒性方面综述了阳离子聚合物基因载体的研究进展,归纳了改善阳离子聚合物基因载体转染特性的八种方法,预测了阳离子聚合物基因载体的发展前景。 展开更多
关键词 阳离子聚合物 基因载体 转染效率 细胞毒性
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阳离子脂质体Lipofectamine 3000对贴壁细胞、悬浮细胞和原代细胞转染效率比较的研究 被引量：8
19
作者 吴婷 吴江 +3 位作者 金书欣 席晔斌 钮晓音 陈广洁 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期89-94,共6页
为了比较阳离子脂质体Lipofectamine 3000(Lipo3000)在不同细胞类型中的转染效率,课题组分别在贴壁细胞NIH3T3、悬浮细胞EL4和原代细胞CD4+T细胞中,利用Lipo3000将不同浓度的miRNA mimics转染至细胞内,通过流式细胞术检测的方法,比较不... 为了比较阳离子脂质体Lipofectamine 3000(Lipo3000)在不同细胞类型中的转染效率,课题组分别在贴壁细胞NIH3T3、悬浮细胞EL4和原代细胞CD4+T细胞中,利用Lipo3000将不同浓度的miRNA mimics转染至细胞内,通过流式细胞术检测的方法,比较不同细胞之间以及同一细胞、不同浓度的miRNA mimics组之间转染效率的差异。结果显示,在NIH3T3细胞中,miRNA mimics为100nmol/L时,转染效率最高,可达(41.47±8.10)%;而在EL4和CD4+T细胞中,随着miRNA mimics浓度的增加,转染效率呈上升的趋势,最高分别可达(12.13±1.16)%和(3.80±0.60)%。可见,Lipo3000在贴壁细胞和悬浮细胞的转染效率明显高于原代细胞。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 转染效率 贴壁细胞 悬浮细胞 原代细胞
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U937单核细胞几种不同转染方法的比较 被引量：7
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作者 潘俊杰 施海明 +4 位作者 罗心平 李剑 梁旺 张进 马端 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期594-597,共4页
目的采用不同质粒转染方法介导重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒转染U937单核细胞,以获得较高转染效率的方法。方法分别采用电穿孔法、Effectene转染试剂、Lipofectamine 2000转染试剂、电穿孔+Effectene转染试剂、电穿孔+Lipofectamine 200... 目的采用不同质粒转染方法介导重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒转染U937单核细胞,以获得较高转染效率的方法。方法分别采用电穿孔法、Effectene转染试剂、Lipofectamine 2000转染试剂、电穿孔+Effectene转染试剂、电穿孔+Lipofectamine 2000转染试剂及HilyMax转染试剂等不同方法介导质粒进行转染,测定不同方法的转染效率、目的基因mRNA表达水平及其对细胞活力的影响。结果电穿孔+Effectene转染试剂组、电穿孔+Lipofectamine 2000组及HilyMax组的转染效率和目的基因mRNA表达较高,且HilyMax组对细胞活力影响较小。结论将重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒体外成功转染入U937单核细胞中,通过优化转染方法提高转染效率、降低对细胞活力的影响,为基因治疗提供了实验基础。 展开更多
关键词 U937单核细胞 转染效率 电穿孔 脂质体
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