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金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分型和分布 被引量:116
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作者 张严峻 张俊彦 +3 位作者 梅玲玲 王志刚 朱敏 王赞信 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第6期682-684,共3页
目的:建立金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测方法。初步研究生牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布状况。方法:应用PCR扩增经分离鉴定的金黄色葡萄球菌肠毒素基因SEA-SEJ,电泳检测扩增结果。结果:建立了金黄色葡萄球菌肠毒素基因PCR检... 目的:建立金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测方法。初步研究生牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布状况。方法:应用PCR扩增经分离鉴定的金黄色葡萄球菌肠毒素基因SEA-SEJ,电泳检测扩增结果。结果:建立了金黄色葡萄球菌肠毒素基因PCR检测方法。从生牛奶中分离的29株金黄色葡萄球菌检测到SEA-SED和SEG-SEJ基因,没有检测到SEE基因。毒素基因携带率为65.5%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占37.9%。有SEA基因的占51.7%,含其它传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占17.2%,携带新发现的毒素基因SEG、SEH、SEI和SEJ的菌株占41.4%。结论:建立的PCR检测金黄色葡萄球菌的肠毒素基因的方法可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型和分布的研究。研究表明,生牛奶中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,而且携带新发现的肠毒素基因的较多。 展开更多
关键词 肠毒素基因 金黄色葡萄球菌肠毒素 PCR检测方法 PCR扩增 基因携带率 SEA基因 生牛奶 分布状况 分离鉴定 电泳检测 基因类型 基因分型 E基因 步研究 菌株 SEB SEC SED SEG 带毒率 新发
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多重PCR检测猪源大肠杆菌毒素基因 被引量:19
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作者 陈祥 高崧 +2 位作者 王雷 张小荣 刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 2003年第3期12-14,67,共4页
根据猪源大肠杆菌产生的4种主要毒素(STa、STb、LT、SLT-2e)基因序列,设计4对聚合酶链式反应(PCR)引物,建立多重PCR方法。该方法能快速地检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)和产志贺样毒素大肠杆菌(SLTEC)菌株,准确地了解所检测菌株产生... 根据猪源大肠杆菌产生的4种主要毒素(STa、STb、LT、SLT-2e)基因序列,设计4对聚合酶链式反应(PCR)引物,建立多重PCR方法。该方法能快速地检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)和产志贺样毒素大肠杆菌(SLTEC)菌株,准确地了解所检测菌株产生肠毒素和志贺样毒素的情况。对215株猪源病原性大肠杆菌进行检测,其中STa为52.56%,STb为26.51%,STa+STb为8.84%,STa+STb+SLT-2e为6.51%。这表明多重PCR可为猪源大肠杆菌毒素基因的检测提供一种更加快速、经济、易行的技术。 展开更多
关键词 大肠杆菌 毒素基因 多重聚合酶链式反应
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金黄色葡萄球菌食物中毒分离株毒素基因的PCR分析 被引量:16
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作者 陈智 江元山 +2 位作者 熊燕 周水茂 龙一兵 《中国卫生检验杂志》 CAS 2009年第1期21-23,共3页
目的:应用PCR方法对武汉市近年来收集的19株金黄色葡萄球菌食物中毒分离株进行毒素基因检测并分析其分布情况。方法:PCR扩增经鉴定的金黄色葡萄球菌的毒素基因SA、clfA、nuc、coa、MRSA、mecA和肠毒素基因sea-seq,电泳检测扩增产物。结... 目的:应用PCR方法对武汉市近年来收集的19株金黄色葡萄球菌食物中毒分离株进行毒素基因检测并分析其分布情况。方法:PCR扩增经鉴定的金黄色葡萄球菌的毒素基因SA、clfA、nuc、coa、MRSA、mecA和肠毒素基因sea-seq,电泳检测扩增产物。结果:19株金黄色葡萄球菌食物中毒分离株均检出SA、clfA、nuc、coa基因,均未检测到MRSA、mecA基因,均检测到肠毒素基因,同时检出2种以上肠毒素基因的菌株占79%,检出sea基因的占58%,检出sem基因的占68%,检出sen基因的占89%,检出seq基因的占53%。结论:PCR方法可在金黄色葡萄球菌毒素基因的检测上发挥重要作用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 PCR 毒素基因
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副溶血弧菌PFGE分型、毒力基因及其耐药性分析 被引量:13
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作者 张冲 高翔 +1 位作者 甄博珺 邹林 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第4期1015-1018,1021,共5页
目的:了解通州区副溶血弧菌的分型、毒力基因特点及其耐药性状况。方法:对2009年-2011年103株副溶血弧菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,并应用PCR方法扩增不耐热直接溶血素(TLH)、耐热直接溶血毒素(TDH)、耐热直接溶血毒素相关溶血素(T... 目的:了解通州区副溶血弧菌的分型、毒力基因特点及其耐药性状况。方法:对2009年-2011年103株副溶血弧菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,并应用PCR方法扩增不耐热直接溶血素(TLH)、耐热直接溶血毒素(TDH)、耐热直接溶血毒素相关溶血素(TRH)。同时采用微量肉汤稀释法,测定了60株菌株对抗生素的最小抑菌浓度。结果:103株副溶血弧菌进行PFGE电泳后共得到39种带型编码。103株菌均含有TLH基因。菌株对阿莫西林、氨苄西林、盘尼西林和多粘菌素4种抗生素的敏感性较低。结论:所有菌株均含有TLH基因。通州区副溶血性弧菌的耐药不严重。菌株耐药与PFGE型别无必然联系。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 脉冲场凝胶电泳 毒力基因 耐药
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陕西省市售鸡肉中金黄色葡萄球菌的毒力基因及其药敏检测 被引量:11
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作者 徐本锦 张伟松 +5 位作者 王新 杨保伟 席美丽 夏效东 孟江洪 李新平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1076-1080,共5页
目的检测陕西省市售鸡肉中金黄色葡萄球菌的耐药性及毒素基因。方法采用PCR方法检测122株鸡肉源金黄色葡萄球菌的ses基因、ets基因、tsst-1基因、pvl基因和mecA基因;采用琼脂稀释法进行14种抗生素的药敏试验。结果 122株金黄色葡萄球菌,... 目的检测陕西省市售鸡肉中金黄色葡萄球菌的耐药性及毒素基因。方法采用PCR方法检测122株鸡肉源金黄色葡萄球菌的ses基因、ets基因、tsst-1基因、pvl基因和mecA基因;采用琼脂稀释法进行14种抗生素的药敏试验。结果 122株金黄色葡萄球菌,59.84%(73/122)携带有毒素基因,其中pvl基因的检出率为25.41%(31/122),肠毒素基因的检出率为51.64%(63/122),主要流行的肠毒素基因为sej[37.70%;)46/122)],[4.92%(6/122)]的株菌携带有mecA基因。所有菌株均未检测到see,seg,sei,ets和tsst-1基因;共得到20种毒素基因型,主要流行的基因型为sej[21.31%(26/122)],其次是pvl[8.20%(10/122)],sej+pvl[4.92%(6/122)],seh+sej+pvl[3.28%(4/122)]和seh+pvl[3.28%(4/122)]。122株金黄色葡萄球菌100.00%存在耐药,多重耐药率达88.52%(108/122),对红霉素耐药率最高[87.70%(107/122)],其次为甲氧苄啶/磺胺甲恶唑[81.97%(100/122)]、四环素[67.21%;(82/122)]、阿米卡星[59.02%(72/122)]、环丙沙星[53.28%(65/122)]、苯唑西林[52.46%(64/122)]和阿莫西林/克拉维酸[0.16%(49/122)],对氨苄西林、氯霉素、庆大霉素、头孢西丁和头孢哌酮的耐药率分别为[32.79%(40/122)]、[27.05%(33/122)]、[20.49%(25/122)]、[13.11%(16/122)]和[2.46%(3/122)],所有菌株均对万古霉素敏感。结论陕西省鸡肉金黄色葡萄球菌携带多种类型的毒素基因,且大部分菌株呈现出一定程度的多重耐药现象,同时证实陕西市售鸡肉中存在一定的MRSA污染,这给消费者的身体健康构成潜在的危险,应加强对鸡肉食品的卫生管理。 展开更多
关键词 鸡肉 金黄色葡萄球菌 MRSA 耐药性 毒素基因
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制药企业生产环境中污染葡萄球菌菌种鉴定方法的比较评价及毒素基因调查分析 被引量:10
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作者 李琼琼 宋明辉 +2 位作者 秦峰 刘浩 杨美成 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期416-421,共6页
比较评价16S rRNA序列比对、VITEK 2 Compact微生物鉴定系统和RiboPrinter鉴定系统对制药企业生产环境中分离的92株葡萄球菌菌种鉴定的准确性,研究12种毒素编码基因在制药企业生产环境污染葡萄球菌中的分布规律。结果表明92株葡萄球菌... 比较评价16S rRNA序列比对、VITEK 2 Compact微生物鉴定系统和RiboPrinter鉴定系统对制药企业生产环境中分离的92株葡萄球菌菌种鉴定的准确性,研究12种毒素编码基因在制药企业生产环境污染葡萄球菌中的分布规律。结果表明92株葡萄球菌均为凝固酶阴性菌,可分为8个葡萄球菌菌种,其中表皮葡萄球菌污染率最高(27.2%)。16S rRNA序列比对分析不能有效区分头状葡萄球菌和山羊葡萄球菌,RiboPrinter鉴定系统易把假中间葡萄球菌错误鉴定为中间葡萄球菌,而VITEK 2 Compact鉴定系统对头状葡萄球菌、人葡萄球菌、巴氏葡萄球菌和科氏葡萄球菌中的部分菌株存在不能有效鉴定或鉴定错误。在92株凝固酶阴性菌中共检出7种毒素基因(pvl,sea,seb,sec,sed,egc和eta),其中杀白细胞毒素基因pvl的检出率最高(8.70%),其次为肠毒素基因sec(6.52%)。综上所述,16S rRNA序列比对分析和RiboPrinter鉴定系统对不同种葡萄球菌的鉴定准确性优于VITEK2Compact鉴定系统。制药企业生产环境中污染的凝固酶阴性葡萄球菌具有一定潜在致病性,今后在药品微生物检验与生产过程中应加强对凝固酶阴性葡萄球菌的监控。 展开更多
关键词 制药企业 微生物污染 葡萄球菌 菌种鉴定 毒素基因
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原料乳和临床乳房炎金黄色葡萄球菌毒力基因检测及药敏分析 被引量:10
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作者 张静 于三科 +1 位作者 王新 孙全才 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期759-764,770,共7页
对临床乳房炎(57株)和原料乳(44株)金黄色葡萄球菌菌株,用PCR方法检测mecA基因、PVL基因、ETs基因、SEs基因和TSST-1基因;采用CLSI指导说明执行琼脂稀释法药敏性试验。结果显示原料乳菌株中,84.09%携带有毒素基因,其中PVL的检出率为84.0... 对临床乳房炎(57株)和原料乳(44株)金黄色葡萄球菌菌株,用PCR方法检测mecA基因、PVL基因、ETs基因、SEs基因和TSST-1基因;采用CLSI指导说明执行琼脂稀释法药敏性试验。结果显示原料乳菌株中,84.09%携带有毒素基因,其中PVL的检出率为84.09%,肠毒素的检出率为52.27%,主要流行的肠毒素基因为sea(56.82%),均未检测到携带mecA、ETs、TSST-1、sei和sej基因的菌株;同时得到10种毒素基因型,其主要流行的毒素基因型为PVL+sea(29.55%)和PVL(27.27%)。临床菌株中,78.95%携带有毒素基因,其中PVL的检出率为28.07%,肠毒素的检出率为77.19%,主要流行的肠毒素基因为sea(47.37%),没有检测到携带ETs、TSST-1和seh基因菌株;同时得到25种毒素基因型,其主要流行的毒素基因型为sea(19.30%),其次是seb(7.02%),sea+sed+sej(3.51%)和PVL+sea+seb+sec+seg+sei(3.51%)。6株(10.53%)携带有mecA基因菌株均含有较多毒素基因。原料乳分离株对甲氧苄啶和头孢西丁的耐药率较高,分别为100%和86.36%,其次对氯霉素、红霉素、苯唑西林、头孢哌酮和庆大霉素的耐药率分别为11.36%、4.55%、2.27%、2.27%和6.82%,所有原料乳菌株均对环丙沙星敏感,同时得到8种耐药谱,多重耐药率达22%;临床乳房炎菌株对红霉素和甲氧苄啶的耐药率较高,分别为100%和71.93%,其次对氯霉素、庆大霉素、环丙沙星、头孢西丁和苯唑西林的耐药率分别为28.07%、26.07%、24.56%、19.30%和7.02%,临床乳房炎菌株对头孢哌酮和四环素的敏感率为100%,同时得到13种耐药谱,多重耐药率达77.19%。所有原料乳和临床乳房炎菌株均对万古霉素和阿米卡星敏感。临床乳房炎菌株携带的毒素基因和多重耐药率比原料奶菌株高,同时在临床乳房炎乳中检测到MRSA菌株,提示我们应加强乳及其乳制品的管理,并对奶牛乳房炎加以重视。 展开更多
关键词 原料乳 乳房炎 金黄色葡萄球菌 毒素基因 药敏性
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仔猪粪便DNA中产气荚膜梭菌主要毒素基因检测及荧光定量PCR计数方法的建立 被引量:8
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作者 韩春生 戴益民 +3 位作者 王林康 王婧祺 周姣 张锦华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期57-62,共6页
为探究产气荚膜梭菌(Cp)及其产生的β2毒素对7日龄内仔猪腹泻的影响,本试验利用PCR技术对江西不同地区96份仔猪粪样DNA进行分析。首先检测产气荚膜梭菌α、β、β2、ε、ι、CPE毒素基因来推断Cp存在和基因型,然后对不同地区的β2毒素... 为探究产气荚膜梭菌(Cp)及其产生的β2毒素对7日龄内仔猪腹泻的影响,本试验利用PCR技术对江西不同地区96份仔猪粪样DNA进行分析。首先检测产气荚膜梭菌α、β、β2、ε、ι、CPE毒素基因来推断Cp存在和基因型,然后对不同地区的β2毒素基因全长进行测序比对、MEGA7构建进化树,最后采用荧光定量PCR对携带CpA(β2+)的健康、腹泻样品中的Cp菌数进行测定。结果显示:α毒素基因在健康、腹泻仔猪的检测率分别为85.4%(41/48),81.3%(39/48),β2毒素基因则分别为79.2%(38/48),77.1%(37/48);β、ε、CPE及ι毒素基因未能检测到,综合各分型毒素检测结果,阳性粪样存在的Cp均为A型。β2基因全长除九江地区得到的β2基因在第706~733bp缺失28个碱基,其他地区β2全长序列不多于3个碱基的差异,与GenBank登录号AJ537530.1对应序列同源性最高。携带CpA(β2+)的健康、腹泻粪样同浓度DNA中Cp菌数为104~105 CFU,经SPSS17分析,差异不显著(P>0.05)。结果表明,江西地区的猪源β2毒素基因保守性较高,但仔猪腹泻与β2毒素基因存在与否和Cp菌数没有明显的相关关系,是否与毒素表达有关有待进一步的研究,本试验结果为研究Cp致病机制提供了依据。 展开更多
关键词 仔猪 产气荚膜梭菌 毒素基因 β2毒素 荧光定量PCR
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五重PCR检测大肠杆菌O157∶H7菌体抗原和毒素基因 被引量:7
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作者 薄清如 周志江 +8 位作者 吴小伦 徐海聂 黄云君 冯家望 王小玉 黄建珍 陈静静 潘文波 廖秀云 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期169-172,共4页
针对 O1 5 7∶H7大肠杆菌 O抗原抗血清同多种细菌有交叉反应 ,而单一毒素基因并不是 O1 5 7∶ H7所独有这一特点 ,建立了五重和四重 PCR方法 ,同时检测大肠杆菌 O1 5 7∶ H7的 O抗原、H抗原和 4种毒素基因 ,可在较短的时间内检测、鉴定... 针对 O1 5 7∶H7大肠杆菌 O抗原抗血清同多种细菌有交叉反应 ,而单一毒素基因并不是 O1 5 7∶ H7所独有这一特点 ,建立了五重和四重 PCR方法 ,同时检测大肠杆菌 O1 5 7∶ H7的 O抗原、H抗原和 4种毒素基因 ,可在较短的时间内检测、鉴定大肠杆菌 O1 5 7∶ H7,并有较高的特异性 ,解决了传统细菌检测方法耗时长、灵敏度低 。 展开更多
关键词 大肠杆菌 菌体抗原 毒素基因 多重PCR技术
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Microbial Quality and Molecular Identification of Enterotoxigenic Staphylococcus Strains Isolated from Dried, Smoked, and Braised Fish Sold in Ouagadougou Markets
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作者 Arouna Ouédraogo Ganamé Abasse Ouédraogo +3 位作者 Henri Sidabéwindin Ouédraogo François Tchoumbougnang Cheikna Zongo Aly Savadogo 《Advances in Microbiology》 CAS 2024年第1期59-76,共18页
Background: The investigation of toxin genes in strains involved in staphylococcal food poisoning contributes to food safety. The aim of this study was to isolate and identify enterotoxigenic Staphylococcus strains fr... Background: The investigation of toxin genes in strains involved in staphylococcal food poisoning contributes to food safety. The aim of this study was to isolate and identify enterotoxigenic Staphylococcus strains from dried, smoked, and braised fish sold in Ouagadougou markets. Methodology: Staphylococci were isolated using standard microbiology methods. Staphylococcus strains were identified using API Staph kit (Reference # 20500, BioMerieux S.A., Marcy l'Etoile, France). The molecular identification of isolated Staphylococcus aureus strains was specifically confirmed by PCR using the Staur4 and Staur6 primers. The genes encoding enterotoxins, enterotoxin-like toxins, exfoliative toxins, and TSST-1 toxin were detected by multiplex PCR using specific primers from Inquaba Biotec West Africa Ltd, Africa's Genomics Company. Results: The results of the microbiological quality assessment indicated that most of the samples analyzed were found to be of unsatisfactory microbiological quality according to the Staphylococcus aureus microbiological criteria (m = 102). Overall, only 12.55% of samples were satisfactory, while 97.45% were unsatisfactory. The STAPH API gallery allowed the identification of the following species: Staphylococcus aureus, Staphylococcus xylosus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus hominis, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus lentus, Staphylococcus sciuri and Staphylococcus capitis. Of the 108 Staphylococcus isolates, 81 (75%) showed at least one (1) toxin gene. Among the 21 toxin genes tested in this study, 20 genes were detected in all strains analyzed. The staphylococcal toxin genes detected were present in both Staphylococcus aureus and the other coagulase-negative strains isolated in this study. In addition, these genes are found individually or in association in certain strains. The most frequent genes detected in toxin gene-positive strains were: the tsst-1 gene in 45 isolated strains (41.7%), sei (16/14.8%), seg (13/12%), ser (7/6.5%) sec (6/5.5%), and sea (5/4.6%) for staph 展开更多
关键词 FISH Stapholocuccus toxin genes OUAGADOUGOU
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ST9型动物源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子分型、毒素基因检测及耐药性分析 被引量:7
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作者 张强 邢晓楠 +4 位作者 王新 王晓 俞英 吴聪明 沈建忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期853-858,共6页
为了解动物源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)ST9型的耐药表型、毒素基因和分子型,采用琼脂平板稀释法、药敏纸片法、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、SCCmec分型、spa分型和PFGE分型技术分别对12株猪源和6株牛源MRSA... 为了解动物源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)ST9型的耐药表型、毒素基因和分子型,采用琼脂平板稀释法、药敏纸片法、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、SCCmec分型、spa分型和PFGE分型技术分别对12株猪源和6株牛源MRSA ST9进行耐药性、毒素基因和分子分型研究。结果显示这些MRSA ST9型菌株除了对万古霉素100%敏感外,对其余31种抗生素均产生了不同程度的耐药,其耐药率在5.6%~100%;所有菌株(100%)均携带有毒素基因,毒素基因的检测依次为seg(94.4%)、seb(83.3%)、sed(72.2%)、PVL(55.6%)、sei(11.1%)和sea(5.6%),均未检测到ETs、tsst-1、sec、see、seh和sej基因,得到10个毒力基因型;分子型以ST9-SCCmec IVb-t899克隆系为主(17株,94.4%),其次是MRSA-ST9-SCCmec II-t899(1株,5.6%)。PFGE分型证实MRSA ST9存在一定的传播性。本研究MRSA ST9型菌株主要流行ST9-SCCmec IVb-t899克隆系,该克隆系携带较多毒素基因、多重耐药和传播性,给动物和人类健康构成潜在的风险。 展开更多
关键词 MRSA ST9 耐药性 毒素基因 分子型
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2006—2011年西安市食品及食物中毒中金黄色葡萄球菌毒素基因分布及分型研究 被引量:7
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作者 彭雁 吴守芝 +3 位作者 栾阳 王增国 李芳 刘晓岑 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2013年第5期413-416,共4页
目的了解2006—2011年西安市污染食品及食物中毒中金黄色葡萄球菌(S.aureus)分离株肠毒素(SEs)、杀白细胞素(PVL)、表皮剥落毒素(ETs)、毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)等毒素基因的分布状况,并比较两种分离株在基因分布及分型上的差异。... 目的了解2006—2011年西安市污染食品及食物中毒中金黄色葡萄球菌(S.aureus)分离株肠毒素(SEs)、杀白细胞素(PVL)、表皮剥落毒素(ETs)、毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)等毒素基因的分布状况,并比较两种分离株在基因分布及分型上的差异。方法采用多重PCR法检测61株S.aureus(包括40株食品分离株和21株食物中毒分离株)sea、seb、sec、sed、pvl、eta、etb、tsst-1基因,其中sea、seb、sec、sed基因引物加入同一反应体系,剩余4对基因引物加入另一反应体系。结果 40株食品分离株中17株检出毒素基因(42.50%);21株食物中毒分离株中18株检出毒素基因(85.71%),食物中毒分离株毒素基因的检出率明显高于食品分离株(P<0.01)。食品分离株中主要流行的毒素基因为sea(25%)、eta(12.5%),未检测到携带etb、tsst-1基因的菌株;同时得到8种毒素基因型,主要流行的基因型为sea(10.00%)、sea+eta(7.50%)。食物中毒分离株中主要流行的毒素基因为sea(76.19%)、sec(28.57%),未检测到携带pvl基因的菌株;同时得到6种毒素基因型,主要流行的基因型为sea(42.86%)、sea+sec+tsst-1(14.29%)。结论 S.aureus食品分离株和食物中毒分离株在毒素基因的分布及分型上存在较大差异。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 毒力基因 多重PCR 基因分型 食物中毒
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贵州省一起产气荚膜梭菌引起食源性疾病暴发事件的调查及病原体溯源
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作者 张莉 代华 +9 位作者 简洁 黄靖宇 蒋家俊 周亚娟 田继贵 朱姝 廖春 李军 李薇薇 郭华 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2024年第5期557-563,共7页
目的对贵阳市某学校由产气荚膜梭菌引起发的食源性疾病暴发事件开展流行病学调查和病因食品和病原的溯源分析,探讨全基因组测序新技术在食源性疾病暴发溯源中的应用。方法采用现场流行病学分析,采集可疑生物样本,食品样本和外环境样本... 目的对贵阳市某学校由产气荚膜梭菌引起发的食源性疾病暴发事件开展流行病学调查和病因食品和病原的溯源分析,探讨全基因组测序新技术在食源性疾病暴发溯源中的应用。方法采用现场流行病学分析,采集可疑生物样本,食品样本和外环境样本进行常规的实验室病原分离及沙门菌、致泻大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌和产气荚膜梭菌的病原鉴定。对分离的病原菌进行毒素基因检测和全基因组测序溯源分析。结果22名病例症状以腹痛(95.45%,21/22)、腹泻(95.45%,21/22)为主;流行曲线为点源暴露模式,潜伏期为6-15 h。在5份肛拭子样本、3份粪便样本和1份留样早餐肉末食品样本中分离出产气荚膜梭菌,且均检出肠毒素cpe基因,所有样本均未检出沙门菌、致泻大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌。其中早餐肉末食品样品中经全基因组测序分析对比发现产气荚膜梭菌为3.5×10^(5) CFU/g,经全基因组测序分析比对发现,来源于早餐肉末食品和肛拭子样本的产气荚膜梭菌,其分子分型为ST139型,菌株均携带cpe毒力基因。结论通过现场调查和溯源分析,判定产气荚膜梭菌污染早餐肉末是导致此次食源性疾病暴发的原因。全基因组测序新技术在食源性疾病暴发中可起到精准溯源作用。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 食源性疾病 暴发事件 毒素基因 溯源分析 食源性致病菌
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猪肉源金黄色葡萄球菌毒力基因检测与耐药性分析 被引量:4
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作者 陶晓亚 徐明悦 +5 位作者 王新 周婷 夏效东 杨保伟 席美丽 孟江洪 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第3期165-171,共7页
【目的】了解陕西关中地区猪肉中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的污染状况、耐药性及其毒素基因的分布。【方法】采集陕西关中6个地区的猪肉165份,按国标GB/T 4789.10-2010的方法,对其中的金黄色葡萄球菌进行分离,采用PCR方法... 【目的】了解陕西关中地区猪肉中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的污染状况、耐药性及其毒素基因的分布。【方法】采集陕西关中6个地区的猪肉165份,按国标GB/T 4789.10-2010的方法,对其中的金黄色葡萄球菌进行分离,采用PCR方法对该菌进行确证并对其相关基因(如nuc、mecA、PVL、SEs和ETs)进行检测,最后采用琼脂稀释法检测金黄色葡萄球菌对11种抗菌药物的耐药性。另外,在BP平板中分别添加头孢西丁(4μg/mL)和苯唑西林(4μg/mL),分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。【结果】165份样品的金黄色葡萄球菌污染率为33.33%(55/165);从中分离出103株金黄色葡萄球菌,但未检测出MRSA,这些菌对甲氧苄啶的耐药性最强,耐药率为100%;其次对红霉素和四环素的耐药率较高,分别为57.28%和34.95%;对苯唑西林、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星的耐药率分别为2.91%,10.68%,2.91%和3.88%;所有菌株对头孢西丁、头孢哌酮、万古霉素、阿米卡星均敏感,同时得到21种耐药谱,多重耐药率达20.39%。猪肉金黄色葡萄球菌中杀白细胞素基因(Panton-valentine leu-kocidin,PVL)的检出率为34.95%,肠毒素基因(SEs)中sej的检出率最高,为98.06%,然后依次为sea(50.49%)、see(34.95%)、sed(31.07%)、sec(13.59%)、seh(8.74%)、sei(8.74%)、seg(6.80%)和seb(1.94%);同时得到71种毒素基因型,以sea+sej(11.65%)最为流行,分布地区不尽相同,其次为PVL+sea+see+sej(9.71%),耐红霉素的金黄色葡萄球菌含的毒素基因类型比较复杂,sej基因检出率高达98.68%。在BP平板中分别添加头孢西丁和苯唑西林,均未检测出MRSA。【结论】猪肉存在金黄色葡萄球菌的污染,其污染菌株存在多重耐药性并携带较多毒素基因,提示应加强猪肉金黄色葡萄球菌的监测。在BP平板中分别添加头孢西丁(4μg/mL)和苯唑西林(4μg/mL)筛选MRSA的方法不一定可靠,其可信度有待证明。 展开更多
关键词 猪肉 金黄色葡萄球菌 毒素基因 耐药性
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金黄色葡萄球菌及毒素多重实时荧光PCR检测技术及其试剂盒性能测试 被引量:3
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作者 周海波 沈宇飞 +2 位作者 陆兆新 胡安妥 别小妹 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1258-1265,共8页
[目的]本文基于自筛的金黄色葡萄球菌特异性靶基因ASL18_04625(sa19)以及2种重要的毒素基因(A型和U型肠毒素,sea344和seu222),建立一种同时检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素的多重实时荧光PCR检测方法。[方法]通过优化引物浓度等因素,确定... [目的]本文基于自筛的金黄色葡萄球菌特异性靶基因ASL18_04625(sa19)以及2种重要的毒素基因(A型和U型肠毒素,sea344和seu222),建立一种同时检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素的多重实时荧光PCR检测方法。[方法]通过优化引物浓度等因素,确定最适多重实时荧光PCR反应体系,并将此检测体系组装成试剂盒,对人工污染样品和实际样品进行检测。[结果]选用1.5×Syto9 Green作为荧光染料,优化后的反应体系为0.015 U·μL^(-1)Taq酶,0.10 mmol·L^(-1)dNTP,终浓度分别为0.05、0.10和0.20μmol·L^(-1)的3对引物。sa19的基因组灵敏度为40.7 pg·μL^(-1),sea344、seu222的基因组灵敏度均为4.07 pg·μL^(-1);sa19的菌液浓度灵敏度为1.19×10^(3)CFU·mL^(-1),sea344、seu222的菌液浓度灵敏度均为1.19×10^(4)CFU·mL^(-1)。构建的试剂盒组内和组间重复率均为100%。在经历60次反复冻融、72 h泡沫箱储藏、-20℃储藏90 d、4℃储藏45 d后,试剂盒检测结果仍没有显著变化,同时具有良好的特异性与抗干扰能力。[结论]本研究针对食源性金黄色葡萄球菌建立的多重实时荧光PCR法,具有快速、特异性强、灵敏度高的优点,并组建成适用于实际检测应用的商品化试剂盒,在食品安全检测方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 毒素基因 多重实时荧光PCR 试剂盒
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北京市顺义区零售生猪肉中小肠结肠炎耶尔森菌的检测与病原特征分析 被引量:3
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作者 张彦春 杨波 +4 位作者 王苗 冀国强 马红梅 李颖 张茂俊 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期945-949,共5页
目的获得北京市顺义区零售市场生猪肉中小肠结肠炎耶尔森菌的分布及病原特征。方法采集样本,应用细菌增菌培养并同时对增菌液进行荧光PCR预筛查的方法检测小肠结肠炎耶尔森菌。对于鉴定阳性菌株应用传统PCR及多重荧光PCR方法分析5种毒... 目的获得北京市顺义区零售市场生猪肉中小肠结肠炎耶尔森菌的分布及病原特征。方法采集样本,应用细菌增菌培养并同时对增菌液进行荧光PCR预筛查的方法检测小肠结肠炎耶尔森菌。对于鉴定阳性菌株应用传统PCR及多重荧光PCR方法分析5种毒力基因的分布特征。应用肉汤稀释法获得分离菌株的耐药特征并应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株分子分型。结果70份样本中19份增菌液foxA基因实时荧光PCR筛查阳性,阳性率为27.14%(19/70)。19份foxA筛查阳性标本培养获得小肠结肠炎耶尔森菌。19株菌对头孢唑啉、氨苄西林、头孢西丁、氨苄西林/舒巴坦耐药率分别为97.74%、84.21%、47.39%和42.11%,其携带毒力基因特征均为ail-/ystA-/ystB+/yadA-/virF-。17株菌完成PFGE检测并被分为15种带型。结论针对增菌液进行荧光PCR预筛查,可提高食品样本中小肠结肠炎耶尔森菌分离培养的检出率。菌株毒力基因的荧光PCR组合检测可快速获得分离菌株的毒力特征。本次研究中分离自本地区零售生猪肉中的小肠结肠炎耶尔森菌未发现显著遗传聚集性特征。 展开更多
关键词 小肠结肠炎耶尔森菌 生猪肉 脉冲场凝胶电泳 抗生素敏感性 毒力基因
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牛奶中产气荚膜梭菌的分离鉴定和带菌量测定 被引量:3
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作者 潘奕帆 刘变芳 《动物医学进展》 北大核心 2020年第7期53-57,共5页
调查陕西关中地区牛奶中产气荚膜梭菌的污染情况及其优势血清型和携带的毒素基因。通过对3个奶牛场采集的86份牛奶样品进行细菌分离纯化,应用多重PCR鉴定分离菌株的血清型,进行cpb2、cpe毒素基因检测,并对场3的乳样按照GB 4789.13-2012... 调查陕西关中地区牛奶中产气荚膜梭菌的污染情况及其优势血清型和携带的毒素基因。通过对3个奶牛场采集的86份牛奶样品进行细菌分离纯化,应用多重PCR鉴定分离菌株的血清型,进行cpb2、cpe毒素基因检测,并对场3的乳样按照GB 4789.13-2012规定的方法进行产气荚膜梭菌带菌量的测定。结果显示,个体乳样产气荚膜梭菌的分离率为11.3%(7/62),且全部为A型菌,57.1%(4/7)的分离菌株携带atyp.cpb2基因,但所有分离菌株均未检测到cons.cpb2和cpe基因。而混合乳样(24份)中未分离出目的菌。场3的28份乳样中3份产气荚膜梭菌阳性乳的带菌量为1 CFU/mL^15.3 CFU/mL。初步了解了陕西关中地区生鲜牛奶中产气荚膜梭菌的污染情况、血清型及其携带的毒素基因,为关中地区牛奶中该菌污染的防控提供科学依据,为该菌引起食物中毒的流行病学研究提供参考资料。 展开更多
关键词 牛奶 产气荚膜梭菌 分离鉴定 聚合酶链反应 毒素基因
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杀蚊球形芽孢杆菌BS10的质粒限制图谱 被引量:2
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作者 韦北阳 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期46-50,共5页
本文报道一株国内分离的具有杀幼蚊活性的球形芽孢杆菌(Bactllus sphaerieus下文简称BS)的大质粒(pFWI),其分子量为69.5×10~6道尔顿,绘制了该质粒的Xho Ⅰ限制性核酸内切酶酶图。以苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensi... 本文报道一株国内分离的具有杀幼蚊活性的球形芽孢杆菌(Bactllus sphaerieus下文简称BS)的大质粒(pFWI),其分子量为69.5×10~6道尔顿,绘制了该质粒的Xho Ⅰ限制性核酸内切酶酶图。以苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis israelensis下文简称BTI)75×10~6道尔顿质粒为探针与该菌株DNA进行核酸杂交,结果表明BTI与该菌株为毒素蛋白编码的基因序列之间无同源性,说明它们的进化来源是不相同的。 展开更多
关键词 球形芽孢杆菌 BS10质粒 限制图谱
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金黄色葡萄球菌侵袭性感染分离株细胞毒素与侵袭毒素基因研究 被引量:2
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作者 唐朝贵 张小云 +2 位作者 林涛 李前辉 陈滢 《中华临床感染病杂志》 CAS 2014年第5期468-470,共3页
金黄色葡萄球菌不仅可致皮肤软组织感染,并可致败血症、骨髓炎、关节炎等侵袭性感染[1-4].为了解金黄色葡萄球菌细胞毒素基因和侵袭性毒素基因的状况以及与患者临床特征的关系,我们对南京医科大学附属淮安第一医院住院患者无菌部位体液... 金黄色葡萄球菌不仅可致皮肤软组织感染,并可致败血症、骨髓炎、关节炎等侵袭性感染[1-4].为了解金黄色葡萄球菌细胞毒素基因和侵袭性毒素基因的状况以及与患者临床特征的关系,我们对南京医科大学附属淮安第一医院住院患者无菌部位体液分离的一组金黄色葡萄球菌,进行了10种细胞毒素基因与9种侵袭毒素基因检测,并对患者的临床资料进行了分析. 展开更多
关键词 葡萄球菌属 细胞毒素类 侵袭毒素 基因
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健康儿童产毒艰难梭菌定植率研究 被引量:1
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作者 王燕 郭姝 +1 位作者 赵春娜 徐樨巍 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期294-297,共4页
目的 调查健康儿童中产毒的艰难梭菌定植情况,了解各年龄段产毒艰难梭菌的定植率及其毒素类型.方法 病例观察性研究,连续性收集2014年9月至2015年1月北京儿童医院保健科健康儿童的粪便标本,按年龄分4组,分别是<1岁53例,1~<3岁、3~<... 目的 调查健康儿童中产毒的艰难梭菌定植情况,了解各年龄段产毒艰难梭菌的定植率及其毒素类型.方法 病例观察性研究,连续性收集2014年9月至2015年1月北京儿童医院保健科健康儿童的粪便标本,按年龄分4组,分别是<1岁53例,1~<3岁、3~<6岁和6~ <14岁组各50例,共203例,应用PCR检测艰难梭菌的毒素基因,包括tcdA、tcdB及二元毒素基因,并检测其毒素调节基因,包括tcdC、tcdD、tcdE.对阳性结果进行基因测序分析.计量资料组间比较采用t检验、秩和检验,计数资料采用x2检验.结果 入组的203例标本中共检测出产毒艰难梭菌阳性标本15例(7.4%),其中tcdA阳性而tcdB阴性(A+B-)基因型8例,tcdA、tcdB均阳性(A+B+)基因型4例,tcdA阴性而tcdB阳性(A-B+)基因型3例(20.0%),未检测到二元毒素阳性标本.tcdC、tcdD、tcdE基因阳性的标本分别为8例(53.3%)、6例(40.0%)、11例(73.3%).tcdA、tcdB、tcdC、tcdD、tcdE基因阳性标本经测序未发现基因突变.在15例阳性标本中,<1岁组检出4例(4/53,7.5%);1~<3岁组检出4例(4/50,8.0%);3~<6岁组检出1例(1/50,2.0%);6~<14岁组检出6例(6/50,12.0%),各年龄组产毒艰难梭菌定植率差异无统计学意义(P>0.05).结论 本组产毒的艰难梭菌在健康儿童中的定植率为7.4%,且各年龄组均可检测到产毒的艰难梭菌. 展开更多
关键词 梭菌 难辨 儿童 定植 毒素基因
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