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油茶总RNA及mRNA的分离与纯化 被引量:26
1
作者 张智俊 谭晓风 陈永忠 《中南林学院学报》 CSCD 2003年第2期76-78,共3页
 利用改良的CTAB法,从富含酚类糖类等次生物质油茶叶片中分离出总RNA,并从总RNA中,通过两次过Oligo(dT)柱分离纯化得到mRNA.实验结果证明:所提取的RNA和mRNA完整,质量较高,并应用到油茶cDNA文库的构建.
关键词 油茶 rna Mrna 分离 纯化 改良CTAB法 提取 CDNA文库
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植物组织总RNA提取的常用方法及优化策略 被引量:14
2
作者 谷守芹 解灵君 范永山 《保定师范专科学校学报》 2005年第2期40-43,共4页
讨论了植物组织总RNA提取的常用方法及检测技术,并对如何消除酚类物质、多糖、蛋白质等对RNA提取的干扰以及降低RNase对RNA的降解作用进行了较详细地阐述.
关键词 植物组织 rna提取 rnaSE
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从血液中提取总RNA的一种快速高效方法 被引量:14
3
作者 林明 张页 +1 位作者 张沙 周柔丽 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期786-787,共2页
血液中含有大量的RNA酶 ,可引起RNA的降解 .防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键 .目前提取RNA的方法较多 ,但有些方法尚不能完全防止RNA降解 .将TRIZOL方法稍加改进 ,将TRIZOL与异硫氰酸胍联用提取血液淋巴细胞总RNA .琼脂... 血液中含有大量的RNA酶 ,可引起RNA的降解 .防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键 .目前提取RNA的方法较多 ,但有些方法尚不能完全防止RNA降解 .将TRIZOL方法稍加改进 ,将TRIZOL与异硫氰酸胍联用提取血液淋巴细胞总RNA .琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,其 2 8SRNA与 18SRNA的比值为 2∶1,优于单独使用其中任何一种试剂者 .此方法同样适用于从其它细胞中提取RNA . 展开更多
关键词 血液 提取 rna 快速高效方法 异硫氰酸胍 rna降解 TRIZOL
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枣不同器官和组织RNA提取方法的研究 被引量:18
4
作者 赵锦 刘中成 +1 位作者 代丽 刘孟军 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期111-117,共7页
以田间幼嫩叶片为试材,建立枣RNA改良CTAB提取法,改良之处包括利用巯基乙醇和PVP联合去除多酚、CTAB与异硫酸氰胍联合促进RNA释放及加入糖原提高产率等。改良CTAB法提取液组成:2%CTAB,4mol/L异硫酸氰胍,100mmol/LTris-HCl(pH8.0),20mmol... 以田间幼嫩叶片为试材,建立枣RNA改良CTAB提取法,改良之处包括利用巯基乙醇和PVP联合去除多酚、CTAB与异硫酸氰胍联合促进RNA释放及加入糖原提高产率等。改良CTAB法提取液组成:2%CTAB,4mol/L异硫酸氰胍,100mmol/LTris-HCl(pH8.0),20mmol/LEDTA(pH8.0),2%PVP,4%β-巯基乙醇,250μg/ml糖原。进而采用Trizol试剂法、改良CTAB法、改进SDS-酚法、热硼酸法和异硫氰酸胍法5种方法分别对枣组培苗、幼叶、幼嫩枝皮、根皮和枣果5种器官和组织进行了总RNA提取。结果表明,组培苗RNA提取以Trizol试剂法为最佳,田间幼叶和成熟果实宜采用改良CTAB法,幼嫩枝皮和根皮宜采用改良CTAB法或改进SDS-酚法;本研究建立的改良CTAB法可作为枣不同器官和组织RNA提取的通用方法;根据季节可从不同器官和组织中获得高质量RNA;枣组织RNA含量相差较大,以幼嫩叶片含量最高,其次为组培苗、枝皮、枣果和根皮。 展开更多
关键词 器官 组织 rna提取
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不同温度和不同放置时间对总RNA提取浓度和纯度的影响 被引量:13
5
作者 张杰 武晶晶 +2 位作者 赵飞飞 闫宇翔 赵志强 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2013年第11期79-82,86,共5页
目的:探索一种提高总RNA提取浓度的方法。方法 :用Trizol方法分别提取乳腺癌细胞和心肌组织中的总RNA。在提取过程中,分别把加入异丙醇后的混合液8等份,其中4个样品管分别在室温、4℃、-20℃、-80℃下放置10min,另外4个样品管在-80℃冰... 目的:探索一种提高总RNA提取浓度的方法。方法 :用Trizol方法分别提取乳腺癌细胞和心肌组织中的总RNA。在提取过程中,分别把加入异丙醇后的混合液8等份,其中4个样品管分别在室温、4℃、-20℃、-80℃下放置10min,另外4个样品管在-80℃冰箱中分别放置0.5、1、2、4h;然后检测提取到的总RNA质量浓度、纯度及完整性。结果:均放置10min时,提取的总RNA质量浓度随放置温度的降低而增加(P≤0.01);放置于-80℃时,随放置时间的增加,提取的总RNA浓度增加(P≤0.01)。两种条件下提取的总RNA的纯度均无显著性差异(P>0.05),其完整性也无明显影响。结论:不同的放置时间和温度会影响RNA提取的质量浓度,但对RNA纯度和完整性无明显影响。 展开更多
关键词 rna提取 TRIZOL法 rna浓度 rna纯度 rna完整性
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简便高质量的食用菌总RNA提取方法 被引量:11
6
作者 税丕容 郑晓冰 +1 位作者 林俊芳 郭丽琼 《食用菌学报》 2008年第1期32-41,共10页
STE法是针对食用菌多糖含量高而设计的一种提取食用菌总RNA的有效方法。本研究以灵芝、香菇和白腐真菌TR16菌株的菌丝体为材料,采用STE法提取其总RNA,同时以Trizol法作对照。结果表明:采用STE法提取的三种菌丝的总RNAA260/A280比值在1.8... STE法是针对食用菌多糖含量高而设计的一种提取食用菌总RNA的有效方法。本研究以灵芝、香菇和白腐真菌TR16菌株的菌丝体为材料,采用STE法提取其总RNA,同时以Trizol法作对照。结果表明:采用STE法提取的三种菌丝的总RNAA260/A280比值在1.80~2.10范围内,A260/A230略大于2.00;而Trizol法提取的总RNAA260/A280比值小于1.80,A260/A230小于1.90,明显比STE法效果差;总RNA电泳检测表明:STE法的3条带(28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA)清晰,无拖尾,无杂带,效果比Trizol法好;将STE法提取的总RNA进行反转录后合成双链cDNA,进行预扩增,电泳显示呈弥散状;再进行选择性扩增,有相同或相异的条带。进一步表明STE法提取的总RNA质量较高,可以满足后续分子生物学研究的要求。 展开更多
关键词 食用菌 rna STE法
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蒙古沙冬青总RNA提取与mRNA分离方法的研究 被引量:10
7
作者 林清芳 王存芳 +2 位作者 赵欢欢 刘佳杰 王茅雁 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期460-463,共4页
蒙古沙冬青是分布于我国西北荒漠区的常绿旱生阔叶灌木,因其富含多糖和多酚等次生代谢物质,用常规RNA提取方法难以从中获得高质量总RNA。本研究通过在热酚法的RNA提取液中加入高浓度的KAc和β-巯基乙醇,从该植物的不同样品中提取到高质... 蒙古沙冬青是分布于我国西北荒漠区的常绿旱生阔叶灌木,因其富含多糖和多酚等次生代谢物质,用常规RNA提取方法难以从中获得高质量总RNA。本研究通过在热酚法的RNA提取液中加入高浓度的KAc和β-巯基乙醇,从该植物的不同样品中提取到高质量总RNA,并用筛选到的合适试剂盒分离到高纯度的mRNA。所得到的总RNA和mRNA已被成功应用于基因克隆和SMART全长cDNA文库的构建。 展开更多
关键词 蒙古沙冬青 rna提取 mrna分离
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白刺总RNA提取方法的研究 被引量:9
8
作者 张建秋 陆海 +2 位作者 杜希华 张玉玲 苟小军 《成都大学学报(自然科学版)》 2004年第1期9-14,共6页
以不同西伯利亚白刺组织为材料 ,利用TRIZOL试剂快速提取法、异硫氰酸胍法、苯酚法和CTAB法提取白刺总RNA ,通过RNA的产率、纯度、电泳图谱等分析来确立适用于白刺总RNA分离的方法 研究结果表明 ,CTAB法提取的RNA具有 2 8SrRNA、 18Sr... 以不同西伯利亚白刺组织为材料 ,利用TRIZOL试剂快速提取法、异硫氰酸胍法、苯酚法和CTAB法提取白刺总RNA ,通过RNA的产率、纯度、电泳图谱等分析来确立适用于白刺总RNA分离的方法 研究结果表明 ,CTAB法提取的RNA具有 2 8SrRNA、 18SrRNA和 5SrRNA三条较清晰的条带 ,很少有降解 ,其A2 6 0 /A2 80为 1.893~ 1.90 1,A2 6 0 /A2 30为 1.80 7~ 2 .4 87 具有较高的纯度 其他三种方法获得的RNA纯度较低 ,降解严重 ,有较多小分子和盐存在 ,RNA无明显条带出现 ,而是以小分子RNA弥撒状分布 将CTAB法提取的RNA逆转录成cDNA ,使用随机引物进行PCR扩增 ,PCR条带清晰 ,分布均匀 ,背景小 该结果进一步证明了CTAB法提取的RNA具有很高的质量与纯度 。 展开更多
关键词 白刺 rna 提取方法 PCR扩增 蒺藜科
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石斛总RNA提取方法的研究 被引量:7
9
作者 樊洪泓 李廷春 +1 位作者 林毅 蔡永萍 《激光生物学报》 CAS CSCD 2007年第1期105-108,共4页
采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD... 采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD260nm/OD280nm接近2.0,具有较高的纯度。其它三种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良的RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增,出现清晰的条带,进一步证明改良的RNA提取方法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。 展开更多
关键词 石斛 rna 提取方法
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山核桃花芽总RNA提取方法研究 被引量:8
10
作者 沈乾 夏国华 +3 位作者 张秋月 黄有军 郑炳松 王正加 《浙江林业科技》 北大核心 2009年第3期57-60,共4页
以山核桃的花芽为材料,利用改良CTAB法、异硫氰酸胍法和改良热酚法提取其总RNA,并对RNA产率、纯度、电泳图谱和RT-PCR进行分析,结果表明:改良CTAB法明显优于其它两种提取方法,用它提取的28SrRNA、18SrRNA条带清晰、稳定,无降解,O... 以山核桃的花芽为材料,利用改良CTAB法、异硫氰酸胍法和改良热酚法提取其总RNA,并对RNA产率、纯度、电泳图谱和RT-PCR进行分析,结果表明:改良CTAB法明显优于其它两种提取方法,用它提取的28SrRNA、18SrRNA条带清晰、稳定,无降解,OD260/OD280值保持在1.9~2.0,产率相对较高;经RT-PCR检测发现,改良CTAB提取的RNA能被成花基因特异引物扩增出清晰的条带,说明该法完全适合于山核桃花芽总RNA的提取,并可用于Northern杂交、cDNA文库构建等分子生物学操作。 展开更多
关键词 山核桃 花芽 rna提取 改良CTAB
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兰州大尾羊脂肪组织总RNA提取方法的试验研究 被引量:6
11
作者 徐红伟 臧荣鑫 +3 位作者 杨具田 张远兴 杨智 王鹏 《西北民族大学学报(自然科学版)》 2008年第3期42-45,共4页
在Trizol法的基础上通过优化操作规程、改进操作步骤等手段提取纯化了兰州大尾羊脂肪组织总RNA,并利用紫外分光光度计和凝胶电泳对其浓度和质量检测进行分析.结果表明:该方法可快速高效地获得适用于RT-PCR、基因表达的高通量分析、cDNA... 在Trizol法的基础上通过优化操作规程、改进操作步骤等手段提取纯化了兰州大尾羊脂肪组织总RNA,并利用紫外分光光度计和凝胶电泳对其浓度和质量检测进行分析.结果表明:该方法可快速高效地获得适用于RT-PCR、基因表达的高通量分析、cDNA文库的构建等研究的高质量的总RNA. 展开更多
关键词 兰州大尾羊 rna提取 实验研究
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栀子高质量总RNA的提取 被引量:8
12
作者 朱玉野 朱继孝 +1 位作者 罗光明 王晓云 《中国农学通报》 CSCD 2012年第27期194-198,共5页
利用改进的高盐高pH值法和EASYspin植物RNA快速提取试剂盒,从富含次生代谢产物的栀子叶片和果实中提取总RNA。用紫外分光光度法和1%非变性琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量,0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳检测反转录产物质量,利用RT-PCR反应检测... 利用改进的高盐高pH值法和EASYspin植物RNA快速提取试剂盒,从富含次生代谢产物的栀子叶片和果实中提取总RNA。用紫外分光光度法和1%非变性琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量,0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳检测反转录产物质量,利用RT-PCR反应检测反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明,高盐高pH值法提取的栀子果实总RNA,试剂盒法提取的栀子叶片总RNA产量均较高,28S和18S条带清晰,28S条带亮度是18S条带的2倍,且A260/A280在1.9~2.0;以提取的RNA为模板反转录的cDNA长度范围较广(250~5000bp);上述反转录获得的cDNA均能够成功用于60S核糖体蛋白L18A基因片段的扩增。综上所述,利用高盐高pH值法提取栀子果实总RNA、利用EASYspin植物RNA快速提取试剂盒提取栀子叶片总RNA,效果最好。本研究成功建立了从栀子果实和叶片中提取高质量总RNA的方法。 展开更多
关键词 栀子 叶片 果实 rna CDNA 60S核糖体蛋白L18A基因
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干种子高质量总RNA的快速提取方法 被引量:7
13
作者 胡群文 陈晓玲 +3 位作者 张志娥 辛霞 卢新雄 刘旭 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期360-363,共4页
高效快速提取高质量的种子RNA是种子分子生物学研究的基础。现有的提取方法难以高效快速地从种子中得到高质量的总RNA。本试验有机地将改进SDS法和异硫氰酸胍法相结合,采用改进的酸性SDS提取液、不溶性PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)阻止酚类... 高效快速提取高质量的种子RNA是种子分子生物学研究的基础。现有的提取方法难以高效快速地从种子中得到高质量的总RNA。本试验有机地将改进SDS法和异硫氰酸胍法相结合,采用改进的酸性SDS提取液、不溶性PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)阻止酚类氧化、KAc去除多糖、异丙醇沉淀RNA,可以高效地从0.01~0.1g水稻、大豆、蚕豆、芸豆、花生等干种子中提取到高质量总RNA。此法提取的总RNA,能够满足分子生物学研究的要求,可以进行反转录和RT-PCR反应,用于基因表达研究,并为从具相似成分的其他物种干种子提取总RNA提供参考方法。 展开更多
关键词 种子 rna提取 SDS 异硫氰酸胍 rna反转录 RT-PCR
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越橘果实总RNA提取方法比较研究 被引量:7
14
作者 裴嘉博 李晓艳 李亚东 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期30-34,共5页
越橘成熟果实富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢物质,严重影响果实总RNA的提取。试验以越橘成熟果实的果肉和果皮为试材,采用适合多糖多酚植物RNA提取试剂盒及试剂和改良的CTAB法提取越橘果肉和果皮中总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋... 越橘成熟果实富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢物质,严重影响果实总RNA的提取。试验以越橘成熟果实的果肉和果皮为试材,采用适合多糖多酚植物RNA提取试剂盒及试剂和改良的CTAB法提取越橘果肉和果皮中总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测。结果表明,改良的CTAB法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高。通过RT-PCR验证,所提取的总RNA可以满足基因克隆等分子生物学试验的要求。 展开更多
关键词 越橘 果实 rna提取 多糖 多酚
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适宜苹果组培苗总RNA提取方法的研究 被引量:7
15
作者 张鑫 杜国强 师校欣 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第B10期50-53,共4页
利用CTAB-异硫氰酸胍法、改良CTAB法和RNAplant试剂盒法,从富含多糖和酚类物质的苹果组培苗继代苗中提取总RNA。结果表明CTAB.异硫氰酸胍法对苹果组培苗总RNA的提取有较好的效果,所得RNA的A260/A瑚大于2.0,A260/‰为1.8—2.0... 利用CTAB-异硫氰酸胍法、改良CTAB法和RNAplant试剂盒法,从富含多糖和酚类物质的苹果组培苗继代苗中提取总RNA。结果表明CTAB.异硫氰酸胍法对苹果组培苗总RNA的提取有较好的效果,所得RNA的A260/A瑚大于2.0,A260/‰为1.8—2.0,产率在16.95μg/g左右。改良CTAB法和RNAplant试剂盒法提取的RNA均有少量DNA污染,但RNAplant试剂盒法比CTAB法更快捷,简便。 展开更多
关键词 苹果 rna 提取方法 组培苗
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小麦总RNA的快速提取(英文) 被引量:5
16
作者 龚莉桂 沈龙珠 徐子勤 《激光生物学报》 CAS CSCD 2002年第4期301-304,共4页
RNeasy Kits用于从小量小麦中分离总 RNA。它为同时和多次制备各种生物样品提供了一种快捷而简便的方法 -整个过程可以在 30分钟内完成。而且 RNeasy方法中不再涉及使用有毒物质 ,如酚类、氯仿等。通过此方法纯化的 RNA可用于各种标准... RNeasy Kits用于从小量小麦中分离总 RNA。它为同时和多次制备各种生物样品提供了一种快捷而简便的方法 -整个过程可以在 30分钟内完成。而且 RNeasy方法中不再涉及使用有毒物质 ,如酚类、氯仿等。通过此方法纯化的 RNA可用于各种标准的下游技术 ,如 RT- PCR、poly A+RNA选择、差异显示技术、Northern点杂交和狭线杂交、引物延伸、c DNA合成、陈列表达分析和表达芯片分析等。使用这个盒子 ,我们多次成功的进行了小麦总 RNA的分离 ,其中的三次在本文中进行了分析。 OD2 60 nm/ OD2 80 nm介于 1 .7~ 2 .0之间 ,OD2 60 nm/ OD2 3 0 nm大于 2 .0 .说明 RNA纯度很高 ,未被蛋白质、苯酚等物质污染。 展开更多
关键词 rna提取 小麦 抗盐基因
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药用植物白木香高质量总RNA提取方法的研究 被引量:6
17
作者 吴宏清 王磊 +3 位作者 郭维 高晓霞 白玲 章卫民 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1055-1059,共5页
目的:白木香次生代谢产物成分复杂,干扰其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或总RNA降解严重。为获得高质量的总RNA,本实验开展了白木香正常及结香组织采集及高质量总RNA提取方法的研究。方法:对从野外采集的白木香样品,用改良CT... 目的:白木香次生代谢产物成分复杂,干扰其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或总RNA降解严重。为获得高质量的总RNA,本实验开展了白木香正常及结香组织采集及高质量总RNA提取方法的研究。方法:对从野外采集的白木香样品,用改良CTAB-LiCl法、去温浴的改良CTAB-LiCl法、SDS酸酚法、改良异硫氰酸胍-CTAB法和EASYspin RN09试剂盒5种方法分别对白木香叶、白木香枝条、白木香树干中的白木样品和结香样品进行RNA提取。结果:研究表明白木香枝条的离体样品室温保存5 h内不影响总RNA质量,确定EASYspin RN09试剂盒是白木香叶RNA的最佳提取方法,改良异硫氰酸胍-CTAB法是其他白木香组织RNA的最佳提取方法。结论:用改良异硫氰酸胍-CTAB法大量提取白木香树干中的白木样品及结香样品RNA,其28S∶18S为1.2~1.4,RIN值为6.8~7.5,并应用于转录组测序。 展开更多
关键词 白木香 rna提取 改良异硫氰酸胍-CTAB法
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山药总RNA不同提取方法的比较研究 被引量:4
18
作者 李书杰 郭晓博 +3 位作者 王运英 赵喜亭 李俊华 李明军 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2015年第3期129-132,共4页
为提取高质量的山药总RNA,以铁棍山药茎段为材料,采用Trizol法、RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法、改良CTAB法和试剂盒法提取总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提取RNA的完整性,并用超微量分光光度计分析RNA的纯度.结果显... 为提取高质量的山药总RNA,以铁棍山药茎段为材料,采用Trizol法、RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法、改良CTAB法和试剂盒法提取总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提取RNA的完整性,并用超微量分光光度计分析RNA的纯度.结果显示采用Trizol法难以提RNA,RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法提取效果不理想,存在DNA和蛋白质污染,而用改良CTAB法和试剂盒法提取到的总RNA纯度高、完整性好,其中,改良CTAB法较试剂盒法价格便宜,但提取过程较烦琐.因此,应根据实验需要选择CTAB法或试剂盒法提取铁棍山药总RNA.本结果对其他品种山药或富含多糖多酚类物质植物的RNA的提取也具有一定借鉴意义. 展开更多
关键词 山药 茎段 rna提取 多酚类物质 多糖
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两种球形棕囊藻细胞总RNA提取方法的比较 被引量:4
19
作者 彭喜春 杨维东 刘洁生 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期493-496,共4页
不同植物细胞RNA提取的适宜方法各不相同.本实验分析、比较了QIAGEN试剂盒法和西曲溴铵(CTAB)法用于赤潮藻细胞总RNA提取的情况.结果显示,两种方法均可获得高质量的总RNA.比较而言,CTAB法比QIAGEN试剂盒更可取,适合藻细胞RNA的大量提取.
关键词 rna提取 赤潮藻 球形棕囊藻
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一种简捷提取植物总RNA的方法 被引量:4
20
作者 孙娣 汪洋 +1 位作者 张丽娟 闫玉清 《黑龙江医药》 CAS 2005年第6期396-397,共2页
植物总 RNA 的提取历来是分子生物学实验中的重点及难点。在实验中,我们找到了一种改进的提取植物总 RNA 的方法。该方法不仅简单、快捷,而且经济、方便,尤其适用于 RNA 提取困难的豆科植物。
关键词 rna 提取 豆科植物
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