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基于Toll-MyD88信号通路研究桂枝芍药知母汤治疗痛风性关节炎的作用机制 被引量：18
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作者 王永辉 房树标 +1 位作者 李艳彦 周然 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第21期121-126,共6页
目的:观察桂枝芍药知母汤(GD)对尿酸钠致痛风性关节炎(GA)模型大鼠关节滑膜组织中Toll-髓性分化因子88(My D88)信号通路炎性信号表达的影响,探讨其相关的作用机制。方法:180只雄性SD大鼠随机分配到3个实验,分别为关节滑膜免疫组织化学技... 目的:观察桂枝芍药知母汤(GD)对尿酸钠致痛风性关节炎(GA)模型大鼠关节滑膜组织中Toll-髓性分化因子88(My D88)信号通路炎性信号表达的影响,探讨其相关的作用机制。方法:180只雄性SD大鼠随机分配到3个实验,分别为关节滑膜免疫组织化学技术(IHC)实验、酶联免疫吸附测定(ELISA)实验、蛋白质免疫印迹(Western blot)实验。各实验取大鼠60只,按体重随机分为6组,每组10只,分别为模型组,正常组,GD高、中、低剂量组(4,8,16 g·kg^(-1)),秋水仙碱阳性药组(3×10^(-4)g·kg^(-1))。实验组均ig给药,正常组、模型组给予等容积的蒸馏水,每天1次,连续给药7 d。第5天ig前,大鼠足踝关节注射尿酸钠悬液诱导GA。取大鼠关节滑膜组织,IHC检测受体Toll样受体-2(Toll-like receptor 2,TLR-2),TLR-4的表达,Image-Pro Plus 6.0图像分析系统测定平均积分吸光度IA,ELISA测定环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2),转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)表达,Western blot检测My D88,核因子κB酶抑制剂-β(inhibitorκB kinaseβ,IκK-β),核因子κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitorα,IκB-α),过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)表达水平。结果:造模72 h后,与正常组比较,GA模型大鼠关节滑膜组织中TLR-2,TLR-4平均IA,My D88,IκK-β蛋白及COX-2表达水平明显增高(P<0.05);与模型组比较,GD中、高剂量组TLR-2,TLR-4平均IA,My D88,IκK-β蛋白及COX-2含量表达均明显低于模型组(P<0.05);而TGF-β_1含量及IκB-α,PPAR-γ蛋白表达水平明显增高(P<0.05);GD各剂量组IκK-β蛋白无明显变化。结论:GD治疗GA的作用机制可能与降低TLR-2,TLR-4受体及My D88蛋白表达,增加PPAR-γ,IκB-α表达,抑制NF-κB活化,降低Toll-My D88信号通路炎性因子表达有关。 展开更多
关键词 桂枝芍药知母汤 痛风性关节炎 toll-髓性分化因子88 关节滑膜组织
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桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞Toll-MyD88信号通路炎性信号表达的影响 被引量：11
2
作者 王永辉 房树标 +1 位作者 李艳彦 周然 《中医学报》 CAS 2017年第5期784-788,共5页
目的:基于Toll-My D88信号通路观察桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响,以期分析其抗炎的药效作用机制。方法:以尿酸钠混悬液诱导大鼠巨噬细胞制备痛风性关节炎巨噬细胞模型,以桂枝芍药知母汤含药血清进行干预... 目的:基于Toll-My D88信号通路观察桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响,以期分析其抗炎的药效作用机制。方法:以尿酸钠混悬液诱导大鼠巨噬细胞制备痛风性关节炎巨噬细胞模型,以桂枝芍药知母汤含药血清进行干预,ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、钙结合蛋白S100A8的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性;Western-Blot法检测髓性分化因子-88(myeloid differentiation factor 88,My D88)信号衔接蛋白、核因子κB酶抑制剂-β(inhibitor kappa B kinaseβ,IKK-β)、核因子κB抑制蛋白α亚基(NF-kappa-B inhibitor alpha,IKB-α)表达水平;逆转录PCR检测Toll样受体-2(toll-like receptor-2,TLR-2)、TLR-4mRNA的表达。结果:尿酸钠混悬液诱导巨噬细胞造模2 h后,模型细胞对照组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、S100A8含量,NF-κB活性,My D88、IKK-β蛋白表达及TLR-2、TLR-4 mRNA表达较正常细胞对照组显著增高(P<0.05),IKB-α表达较正常细胞对照组显著降低(P<0.05);与模型细胞对照组比较,桂枝芍药知母汤各剂量组细胞表达TLR-2、TLR-4 mRNA水平显著降低(P<0.05);在不加受体抑制剂的实验中,桂枝芍药知母汤各剂量组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量,My D88、IKK-β蛋白表达水平显著降低(P<0.05),高剂量组NF-κB活性显著降低(P<0.05),高剂量组S100A8、IKB-α表达水平显著升高(P<0.05)。结论:桂枝芍药知母汤抗炎作用机制与降低TLR-2、TLR-4 mRNA表达,抑制My D88、IKK-β蛋白表达,增加S100A8、IKB-α蛋白表达水平,抑制NF-κB激活,进而降低Toll-My D88信号通路相关炎性因子表达密切有关。 展开更多
关键词 桂枝芍药知母汤 巨噬细胞 toll-My D88 尿酸钠 白细胞介素-1β 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α 钙结合蛋白S100A8 髓性分化因子-88 核因子κB酶抑制剂-β 核因子κB抑制蛋白α亚基 toll样受体-2 大鼠
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黄芪甲苷对肾纤维化小鼠Toll/MyD88依赖性通路的作用研究 被引量：23
3
作者 杨茹茜 徐倩 +4 位作者 杨旖 金晶 卢雨松 罗韬 赵春玲 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第18期3775-3782,共8页
目的观察黄芪甲苷(astragaloside IV)对单侧输尿管结扎(UUO)小鼠肾组织纤维化程度的影响,探讨其作用机制。方法将雄性C57BL/6小鼠50只随机均分为假手术组,模型组,黄芪甲苷高、中、低剂量(50、30、10 mg/kg)组。除假手术组外,其余各组小... 目的观察黄芪甲苷(astragaloside IV)对单侧输尿管结扎(UUO)小鼠肾组织纤维化程度的影响,探讨其作用机制。方法将雄性C57BL/6小鼠50只随机均分为假手术组,模型组,黄芪甲苷高、中、低剂量(50、30、10 mg/kg)组。除假手术组外,其余各组小鼠均行UUO术,从手术当天黄芪甲苷各组ig给药,连续14 d。检测血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平,HE和Masson染色下光镜观察肾组织病理和胶原的沉积;免疫组化和Western blotting方法从蛋白水平观察各组肾脏中Toll/MyD88依赖信号通路相关分子(TLR4、TLR2、MyD88、TRAF-6、NF-κB、TNF-α、IL-6)的表达。结果模型组小鼠患侧肾脏的纤维化程度、病理损害最明显;Toll/MyD88依赖信号通路相关的分子的表达量最多。而随着黄芪甲苷组药物剂量的增加,小鼠肾脏损伤有明显改善,该信号通路相关因子(TLR4、TLR2、MyD88、TRAF-6、NF-κB)蛋白表达水平也在相应减少,且对该信号通路末端炎症因子TNF-α和IL-6的表达有抑制作用。结论黄芪甲苷可能通过抑制Toll/MyD88依赖信号通路及炎症因子TNF-α和IL-6的释放来改善小鼠UUO所致的肾纤维化。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 肾纤维化 toll/myd88依赖信号通路 单侧输尿管结扎 免疫炎症反应
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