期刊文献+
共找到2篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
番茄叶绿体外膜转运蛋白SlToc159-2的多克隆抗体制备以及果实中蛋白表达分析
1
作者 王琪 闫见敏 +2 位作者 岳江 王馨敦 陈精艺 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1707-1716,共10页
核编码叶绿体蛋白通过叶绿体被膜上的TOC-TIC装置靶向导入叶绿体,对于叶绿体生物发生以及植物生长发育至关重要。Toc159家族蛋白是前体蛋白导入叶绿体这一过程中最重要的受体。以前期克隆到的番茄SlToc159-2基因为模版,选取SlToc159-2基... 核编码叶绿体蛋白通过叶绿体被膜上的TOC-TIC装置靶向导入叶绿体,对于叶绿体生物发生以及植物生长发育至关重要。Toc159家族蛋白是前体蛋白导入叶绿体这一过程中最重要的受体。以前期克隆到的番茄SlToc159-2基因为模版,选取SlToc159-2基因N端409~745个氨基酸之间包括5个保守GTPase基序的cDNA序列,亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,融合N端GST标签,并转化大肠杆菌BL21(DE3),探索不同诱导条件下目的蛋白表达。GST-SlToc159-2409-745重组蛋白在1 mmol·L^(-1) IPTG,16℃ 4 h诱导表达效果最好,融合蛋白主要以包涵体形式存在。融合蛋白经过亲合纯化,凝胶过滤层析纯化,离子柱纯化后作为抗原,进行3次免疫注射兔子,1周后采心脏血作为多克隆抗血清,通过抗原亲和纯化,得到多克隆抗体anti-SlToc159-2409-745,将纯化后的抗体通过间接酶联免疫(ELISA)和蛋白质印迹(Western blot)分析,表明所制备的抗体具有很好的效价,效价比为1:128000,同时具有良好的灵敏度和特异性。通过免疫印迹检测SlToc159-2在番茄不同成熟度果实中的表达情况,结果显示,SlToc159-2在绿熟期表达量较低,在果实成熟过程中表达量升高。SlToc159-2抗体的成功制备为深入探究番茄中复杂的叶绿体蛋白导入机制奠定了基础。 展开更多
关键词 番茄 叶绿体外膜转运蛋白 toc159 原核表达 抗体制备 蛋白表达分析
原文传递
The Chloroplast Import Receptor Toc90 Partially Restores the Accumulation of Toc159 Client Proteins in the Arabidopsis thaliana ppi2 Mutant 被引量:1
2
作者 Sibylle Infanger Sylvain Bischof +3 位作者 Andreas Hiltbrunner Birgit Agne Sacha Baginsky Felix Kessler 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2011年第2期252-263,共12页
Successful import of hundreds of nucleus-encoded proteins is essential for chloroplast biogenesis. The import of cytosolic precursor proteins relies on the Toc- (translocon at the outer chloroplast membrane) and Ti... Successful import of hundreds of nucleus-encoded proteins is essential for chloroplast biogenesis. The import of cytosolic precursor proteins relies on the Toc- (translocon at the outer chloroplast membrane) and Tic- (translocon at the inner chloroplast membrane) complexes. In Arabidopsis thaliana, precursor recognition is mainly mediated by outer membrane receptors belonging to two gene families: Toc34/33 and Toc159/132/120/90. The role in import and precursor selectivity of these receptors has been intensively studied, but the function of Toc90 still remains unclear. Here, we report the ability of Toc90 to support the import of Toc159 client proteins. We show that the overexpression of Toc90 partially complements the albino knockout of Toc159 and restores photoautotrophic growth. Several lines of evidence including proteome profiling demonstrate the import and accumulation of proteins essential for chloroplast biogenesis and functionality. 展开更多
关键词 CHLOROPLAST protein import toc159 substrate specificity PROTEOMICS
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部