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应用SELDI-TOF-MS技术筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株差异表达蛋白
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作者 冠潇 黎丹戎 +3 位作者 王琪 李力 阮和云 张玮 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1155-1160,共6页
背景与目的:人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3及其在裸鼠体内建立的淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞株,为卵巢癌转移分子机制的研究提供了细胞模型。本研究应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选卵... 背景与目的:人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3及其在裸鼠体内建立的淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞株,为卵巢癌转移分子机制的研究提供了细胞模型。本研究应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞株之间的蛋白质表达差异。方法:采用动物实验测定SKOV3、SKOV3-pm2和SKOV3-pm3三种细胞株的淋巴结转移率。应用表面增强激光解吸离子化-飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption and ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测各细胞株提取的胞浆总蛋白和分泌蛋白,每种细胞分别采用CM-10型弱阳离子交换芯片和IMAC-3型固定金属亲和芯片检测。应用Ciphergen Protein Software3.2.0软件和Biomarker Wizard软件对采集3组细胞的蛋白峰进行比较,峰强度相差0.5倍以上者定义为差异蛋白。结果:动物实验显示,细胞株SKOV3及高转移亚克隆SKOV3-pm2、SKOV3-pm3的淋巴结转移率分别为20%、90%和100%,前者与后二者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。获得CM-10和IMAC3两种蛋白芯片上SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞株蛋白质谱图谱,对比发现:质荷比(m/z)为6971、7475、9089、9453、10103、11655的胞浆蛋白及质荷比(m/z)为4746的分泌蛋白在上述三种细胞株中存在不同程度差异表达。结论:应用SELDI-TOF-MS技术结合固定金属亲和芯片和弱阳离子交换芯片,可有效筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株中的特异性表达蛋白;寻找到的差异蛋白与淋巴结定向高转移潜能密切相关。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 SKOV3细胞株 SKOV3一pm2细胞株 SKOV3-pm3细胞株 蛋白芯片 差异蛋白 表面增强激光 解吸离子化:飞行时间质谱
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刺梨果汁成分分析、抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究
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作者 黄婕 李慧馨 +3 位作者 胡晓 申莉萍 周锦 黄春跃 《食品科技》 CAS 北大核心 2024年第3期112-119,共8页
为分析刺梨果汁的成分及评价抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制作用,以Waters ACQUITYUPLCHSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱采集及分析数... 为分析刺梨果汁的成分及评价抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制作用,以Waters ACQUITYUPLCHSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱采集及分析数据。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除实验考察抗氧化活性,硝基苯-α-D-葡萄糖苷(p-Nitrophenyl-α-D-glucopyranoside,PNPG)法评价α-葡萄糖苷酶抑制能力。在负离子模式下,从刺梨果汁中鉴定出33个化合物,包括11个三萜及其皂苷、8个原花青素、6个酚酸类、4个鞣质及4个其他类成分。刺梨果汁不同样品均具有抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制能力,其中富含酚酸、原花青素及鞣质的刺梨果汁的大孔吸附树脂40%乙醇洗脱部位清除DPPH自由基、ABTS阳离子自由基与抑制α-葡萄糖苷酶能力最好,IC50分别为6.08、2.95μg/mL和5.66μg/mL。该研究结果可为刺梨作为天然功能性食品的开发提供一定的科学依据。 展开更多
关键词 刺梨果汁 超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱 化学成分 抗氧化 Α-葡萄糖苷酶
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结直肠癌与其他恶性肿瘤血清低分子差异蛋白的比较 被引量:1
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作者 盛新华 高春芳 +2 位作者 王秀丽 李冬晖 郑国宝 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第9期945-949,共5页
目的:通过结直肠癌与其他常见恶性肿瘤血清低分子差异蛋白的分析,探讨其对结直肠癌的诊断特异性.方法:收集结直肠癌(68例)、其他恶性肿瘤(乳腺癌、胃癌、食管癌、肝癌、肺癌及肾癌各25例)血清标本共218份,应用表面增强激光解吸/电离-飞... 目的:通过结直肠癌与其他常见恶性肿瘤血清低分子差异蛋白的分析,探讨其对结直肠癌的诊断特异性.方法:收集结直肠癌(68例)、其他恶性肿瘤(乳腺癌、胃癌、食管癌、肝癌、肺癌及肾癌各25例)血清标本共218份,应用表面增强激光解吸/电离-飞行时间-质谱检测其蛋白质指纹谱.用Biomarker Wizard软件分析结直肠癌与其他恶性肿瘤患者血清中的低分子差异蛋白后,分别作出受试者工作特征(ROC)诊断曲线.再选取ROC曲线下面积(AUC)>0.8的蛋白,建立Fisher判别模型.结果:结直肠癌与其他恶性肿瘤相比,血清中有12种蛋白相对高表达,102种蛋白相对低表达.ROC曲线显示,有75种蛋白AUC>0.5,其中8911、8919、8964、11726、14049、14139M/Z的蛋白AUC>0.8.用这6种蛋白建立的Fisher判别模型,鉴别结直肠癌的敏感性88.2%,特异性93.3%,准确率91.7%.结论:结直肠癌与其他恶性肿瘤相比,血清中存在明显差异表达的低分子蛋白,对结直肠癌具有诊断特异性,值得进一步研究. 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 蛋白质组学 表面增强激光解 吸/电离-飞行时间-质谱 质荷比 判别分析
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绍兴黄酒中ACE活性抑制肽的分离分析 被引量:15
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作者 戴军 陈尚卫 +4 位作者 谢广发 刘俊 帅桂兰 顾小红 赵光螯 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期74-77,共4页
首次将绍兴黄酒中的肽类组分进行大孔吸附树脂柱层析和高效凝胶过滤色谱以及反相色谱的多步提取纯化与抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性试验,并首次利用基体辅助激光解吸电离-飞行时间串联质谱分析和液相色谱-电喷雾电离四极杆-飞行时间... 首次将绍兴黄酒中的肽类组分进行大孔吸附树脂柱层析和高效凝胶过滤色谱以及反相色谱的多步提取纯化与抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性试验,并首次利用基体辅助激光解吸电离-飞行时间串联质谱分析和液相色谱-电喷雾电离四极杆-飞行时间串联质谱联用分析鉴定出黄酒中4种ACE活性抑制肽的氨基酸序列为:VEDGGV、PST、NT和LY。 展开更多
关键词 黄酒 血管紧张素转换酶 活性肽 氨基酸序列 高效液相色谱 基体辅助激光解吸电离 串联飞行时间质谱 电喷雾电离 四极杆飞行时间串联质谱
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海带等4种大型海藻中甜菜碱液质分析研究 被引量:11
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作者 赵鹏 徐继林 +4 位作者 刘雪梅 陈娟娟 王秀娟 陈海敏 严小军 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第24期1886-1889,共4页
目的利用高效液相色谱-三重四极杆质谱和四极杆-飞行时间质谱建立了大型海藻中甜菜碱的分析方法。方法海藻用甲醇-氯仿-0.2 mol.L-1碳酸氢钾水溶液(12∶5∶1)提取,经过MCX柱固相微萃取后上机分析。标准甘氨酸甜菜碱和葫芦巴碱在SCX强阳... 目的利用高效液相色谱-三重四极杆质谱和四极杆-飞行时间质谱建立了大型海藻中甜菜碱的分析方法。方法海藻用甲醇-氯仿-0.2 mol.L-1碳酸氢钾水溶液(12∶5∶1)提取,经过MCX柱固相微萃取后上机分析。标准甘氨酸甜菜碱和葫芦巴碱在SCX强阳离子交换色谱柱实现分离;利用高效液相色谱-三重四极杆质谱系统,在电喷雾电离源正离子模式下,分别取m/z 58.34和92.18作为甘氨酸甜菜碱和葫芦巴碱的定量目标离子进行检测。结果甘氨酸甜菜碱和葫芦巴碱的检测限分别为0.12和0.06μg.L-1,回收率分别为83.76%和95.54%,相对标准偏差均小于6%;另外,借助液相色谱-四极杆-飞行时间质谱系统,对海藻中除标准品外几种可能的甜菜碱进行了结构确认,并对海带(Laminaria japonica)、长石莼(Ulva lactuca L)、蜈蚣藻(Grateloupia filicina)和紫菜(Porphyra tenera Kjellm)中的甘氨酸甜菜碱和葫芦巴碱进行了精确定量分析,对没有标准品的几种甜菜碱进行了半定量分析。该方法测定各种甜菜碱在4种大型海藻中的含量在未检出~1 015.3 ng.g-1内。结论所建方法灵敏、精密、准确,可用于大型海藻中甜菜碱定性定量的研究。 展开更多
关键词 大型海藻 甜菜碱 高效液相色谱仪 三重四极杆质谱 四极杆-飞行时间质谱
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基于HPLC-Q-TOF-MS/MS的广枣果肉化学成分分析 被引量:30
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作者 杨璐萌 杨凌鉴 +5 位作者 贾璞 兰薇 张亚军 王世祥 张鹏 郑晓晖 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期159-166,共8页
目的采用高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)法对广枣醇提物的主要化学成分进行分析鉴定。方法采用回流提取法制备广枣醇提物,以Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm)柱为分析柱,并以0.2%甲酸-甲醇溶液为流动相... 目的采用高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)法对广枣醇提物的主要化学成分进行分析鉴定。方法采用回流提取法制备广枣醇提物,以Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm)柱为分析柱,并以0.2%甲酸-甲醇溶液为流动相,流速0.7mL/min,柱温30℃,进样量25μL,进行梯度洗脱;质谱采用电喷雾离子源,毛细管电压4.0kV,干燥器流速10.0L/min,干燥器温度350℃,雾化器压力35.0psi(1psi=6 894.8Pa),正负离子模式下扫描采集数据,并对各主要色谱峰进行归属。结果通过正负离子质谱信息及元素组成分析,并结合相关文献和对照品数据对照,共鉴定出42种化合物,主要为氨基酸类、有机酸类及黄酮类,其中首次在广枣中发现的成分有17种。结论 HPLC-Q-TOF-MS/MS兼具色谱的高分离特性和质谱的高灵敏度双重优势,能对广枣的主要化学成分进行定性分析,可为广枣药效物质的基础研究提供依据。 展开更多
关键词 广枣 化学成分 高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱 定性分析
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原发性肝癌介入治疗围手术期不同中医证型的血清蛋白表达差异 被引量:9
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作者 杨素芳 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期314-317,共4页
目的探讨原发性肝癌介入治疗围手术期不同中医证型的血清蛋白差异表达,并分析其意义。方法将154例原发性肝癌患者按中医辨证分为肝郁证(37例)、脾虚证(45例)、湿热证(18例)、血瘀证(28例)及阴虚证(26例),应用表面加强激光解析电离化飞... 目的探讨原发性肝癌介入治疗围手术期不同中医证型的血清蛋白差异表达,并分析其意义。方法将154例原发性肝癌患者按中医辨证分为肝郁证(37例)、脾虚证(45例)、湿热证(18例)、血瘀证(28例)及阴虚证(26例),应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱法(surface enhanced laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)分析其血清蛋白指纹图谱,并结合中医证候特点,探讨肝癌介入治疗围手术期不同中医证型的血清蛋白差异表达。结果介入前1周,M/Z为3392、4970、5911、6200、8575Da的血清蛋白峰在各证型间的表达比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);上述5个差异蛋白峰同时出现于脾虚证和血瘀证中。介入后1周,阴虚证M/Z为8575Da的血清蛋白峰表达下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论肝癌介入治疗围手术期不同证型间出现血清差异蛋白质峰。 展开更多
关键词 原发性肝癌 蛋白组学 表面加强激光解析电离化飞行时间质谱法 介入治疗 中医证型
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采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测产KPC大肠埃希菌ST131和ST405分型的研究 被引量:6
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作者 黄永禄 李佳萍 +3 位作者 顾丹霞 林晓伟 吕火烊 张嵘 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期460-464,共5页
目的采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速检测产KPC大肠埃希菌ST131、ST405,并对该方法的可行性进行评价。方法收集浙江省人民医院临床分离46株大肠埃希菌,扩增blaKPC耐药基因,采用多位点序列分型方法(MLST)进行分... 目的采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速检测产KPC大肠埃希菌ST131、ST405,并对该方法的可行性进行评价。方法收集浙江省人民医院临床分离46株大肠埃希菌,扩增blaKPC耐药基因,采用多位点序列分型方法(MLST)进行分型。MALDI-TOF MS对大肠埃希菌进行鉴定并对不同克隆的峰图进行主成分分析和算法统计,获得分型区分的特征峰。结果 46株KPC型大肠埃希菌均携带KPC-2耐药基因,MLST方法检测到2种ST型,分别为ST131和ST405。主成分分析图显示ST131和ST405可分为2簇,其中2株ST131和3株ST405分类错误。ClinProTools软件4种算法结果基本相似,方法特异度和灵敏度分别为93.27%和97.92%。用于区分ST131和ST405的特征峰主要为8 331.84、4 166.44、4 860.21和2 783.66 Da。这4个峰区分具有统计学意义,有较高准确性。结论采用MALDI-TOF MS可快速区分产KPC大肠埃希菌ST131和ST405,具有操作简单、耗时短、区分灵敏度和特异度高以及成本低等优点,能用于大肠埃希菌克隆分型研究。 展开更多
关键词 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 大肠埃希菌 多位点序列分型 质谱分型 ST131 ST405
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测支气管肺泡灌洗液对非结核分枝杆菌肺病的诊断价值 被引量:2
9
作者 张新宝 张妍蓓 +2 位作者 姚超 王华 刘盛盛 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期729-733,共5页
目的 探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)对非结核分枝杆菌(NTM)肺病的诊断价值。方法 收集2020年1月—2021年12月安徽省胸科医院收治的112例疑似NTM肺病患者。对患者BALF行MALDI-TOF MS检... 目的 探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)对非结核分枝杆菌(NTM)肺病的诊断价值。方法 收集2020年1月—2021年12月安徽省胸科医院收治的112例疑似NTM肺病患者。对患者BALF行MALDI-TOF MS检测、PCR荧光探针检测、BACTEC MGIT 960分枝杆菌全自动快速液体培养(BD960法)检测,并对三种检测技术诊断效能进行比较。结果 依据NTM的诊断标准,112例患者最终诊断为NTM肺病78例,MALDI-TOF MS、PCR荧光探针法、BD960法检测NTM的灵敏度分别为:85.9%(67/78)、56.4%(44/78)、28.2%(22/78),MALDI-TOF MS分别与PCR荧光探针、BD960比较,χ^(2)分别为:16.52、52.98,P均<0.05,差异有统计学意义。三种检测技术阳性预计值分别为:98.5%、93.6%、100%,阴性预计值为:75.0%、47.7%、37.8%。MALDI-TOF MS检测诊断NTM肺病时间明显短于液体培养法,差异有统计学意义(Z=8.168,P<0.001)。结论 MALDI-TOF MS检测技术对NTM肺病的诊断具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 非结核分枝杆菌 支气管肺泡灌洗液 诊断技术
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一起猪霍乱沙门菌和鼠伤寒沙门菌引起食源性暴发事件同源性分析 被引量:1
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作者 李冬梅 莫丽娟 +4 位作者 尹江源 杨昌祖 林瑶 林永通 吴南卫 《中国热带医学》 2023年第12期1353-1357,共5页
目的对三亚市2022年7月15日发生一起食源性暴发事件进行同源性分析,为临床治疗和防控提供科学依据,探讨脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorpti... 目的对三亚市2022年7月15日发生一起食源性暴发事件进行同源性分析,为临床治疗和防控提供科学依据,探讨脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术在沙门菌同源分析中的应用可行性。方法通过传统的细菌检验方法、PFGE和MALDI-TOF MS技术与临床症状、流行病特征相结合,准确对食物中毒事件溯源分析。结果本起事件中出现发热、恶心、呕吐等中毒症状共14例,均有在同一餐厅就餐经历,发病过程和临床表现相似,其中1例为该餐厅制蛋炒饭厨师。经病原学培养鉴定显示为猪霍乱沙门菌和鼠伤寒沙门菌共同引起,其中采集患者14例,检出猪霍乱沙门菌5例,鼠伤寒沙门氏菌3例,阳性率为57.14%(8/14)。环境样本检出1份,食品样本2份。PFGE图谱结果显示9种PFGE型,7株菌株同源性为95.0%,4株菌株同源性为94.0%。结论此次食物中毒原因是食用被猪霍乱沙门菌的蛋炒饭和含鼠伤寒沙门菌污染的猪肉肠。今后应加强食品污染和有害因素风险监测,从食品供应源头保证食品安全,严防食源性感染事件发生。同时规范相关人员健康体检,多渠道宣教食源性疾病危害和预防知识也至关重要。 展开更多
关键词 食物中毒 沙门氏菌 脉冲场凝胶电泳技术 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术
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用MALDI-TOF-MS法快速测定天花粉蛋白分子量 被引量:2
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作者 季怡萍 刘淑莹 《分析测试技术与仪器》 CAS 1999年第2期94-95,共2页
采用MALDITOFMS法快速测定了天花粉蛋白的分子量,并讨论和对比了三种不同基质对其影响,认为用基质芥子酸是最佳适宜条件。
关键词 测定 分子量 MALDI TOF MS 天花粉蛋白 TCS
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血清蛋白指纹图谱筛选胃癌血清标志物的初步探讨 被引量:3
12
作者 刘春 徐亮 +3 位作者 韩海彬 杨建碧 罗兵 彭超 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2009年第1期23-27,共5页
目的利用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱仪及其配套蛋白质芯片筛选胃癌生物学标志物,初步探讨建立的诊断模型在胃癌诊断中的临床意义。方法用美国Ciphergen公司研制的蛋白指纹图谱仪和蛋白质芯片检测40例胃癌患者、20例胃溃疡患者... 目的利用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱仪及其配套蛋白质芯片筛选胃癌生物学标志物,初步探讨建立的诊断模型在胃癌诊断中的临床意义。方法用美国Ciphergen公司研制的蛋白指纹图谱仪和蛋白质芯片检测40例胃癌患者、20例胃溃疡患者和20例正常人血清蛋白质的相对含量,用SPSS 11.5软件分析处理数据,筛选标志物,建立诊断模型。结果在正常人中未发现差异蛋白质峰表达;胃溃疡患者中仅1例有差异蛋白质峰表达,质荷比分别为5910和4095;在胃癌中共发现5个差异有统计学意义的蛋白质峰表达,质荷比分别为:3300、5329、4095、5910和8691。筛选质荷比为4095、5910和8691建立诊断模型,诊断灵敏度和特异度分别为92.5%和97.5%。结论蛋白指纹图谱技术在胃癌的早期诊断及筛选生物学标志物方面有很大的价值,值得进一步研究及推广应用。 展开更多
关键词 胃癌 蛋白质组学 血清标志物 表面增强激光解析离子化飞行时间质谱仪 诊断
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慢性阻塞性肺疾病的血清蛋白质组学研究
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作者 张霞 张杰 +3 位作者 李仲兴 陈文妃 王婷 王玉玲 《国际呼吸杂志》 2009年第7期410-413,共4页
目的利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption ionizationtime-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术研究慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)血清蛋白质... 目的利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption ionizationtime-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术研究慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)血清蛋白质指纹图谱。方法应用SELDI-TOF-MS技术检测30例COPD患者和18名健康人血清蛋白质质谱,筛选出COPD血清差异蛋白。结果COPD患者血清蛋白图谱与对照组相比,存在25个差异表达蛋白(P〈0.05),包括9个高表达蛋白,其中质荷比为2152、3287、3533、3614、4924、5887、6729的7个蛋白质其含量由对照组、COPD稳定期、COPD急性加重期依次升高(P〈0.05);16个低表达蛋白,其中质荷比为4313、4380、8634、8765、8842、13878、14086的7个蛋白质其含量由对照组、COPD稳定期、COPD急性加重期依次升高(P〈0.05)。经蛋白质数据库搜索,初步确立特定相对分子质量所对应的蛋白。结论SELDI-TOF-MS技术为研究COPD提供了可行的技术平台,COPD患者血清和对照组血清中存在明显差异蛋白,这些差异蛋白可能与COPD的发生发展密切相关。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 表面增强激光解析电离飞行时间质谱 蛋白质组学
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