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猪细小病毒4型Taq Man荧光定量PCR方法的建立与应用
被引量：
13
1
作者
黄律
龙进学
+3 位作者
翟少伦
刘长龙
张荣
袁世山
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第1期1-9,共9页
根据GenBank中发表的猪细小病毒4型(PPV4)全基因组序列,针对其结构蛋白VP2基因的保守序列,设计合成特异性引物及Taq Man探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了PPV4的T...
根据GenBank中发表的猪细小病毒4型(PPV4)全基因组序列,针对其结构蛋白VP2基因的保守序列,设计合成特异性引物及Taq Man探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了PPV4的Taq Man荧光定量PCR。反应条件优化后,该方法在6.73×109copies/μL^6.73×101copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.998;对PPV4的最低检测限为6.73×101copies/μL。特异性试验结果显示,用该方法检测其他基因型猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪圆环病毒2型等临床常见病毒,结果均为阴性。批内及批间变异系数均低于2%。用建立的荧光定量PCR方法和普通PCR方法对672份临床病料感染情况进行检测,阳性率为1.93%,而普通PCR检出率仅为1.63%。本研究首次报告在我国猪群中存在PPV4,同时建立的荧光定量方法为PPV4的检测、体外敏感细胞的筛选以及病毒器官嗜性的研究等提供了快速而敏感的分子检测技术。
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关键词
猪细小病毒4型
taq
man
荧光
pcr
检测
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职称材料
诺如病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的设计与优化
被引量：
1
2
作者
陈波
李家奇
+1 位作者
付立申
吴文明
《五邑大学学报（自然科学版）》
CAS
2024年第3期1-6,共6页
为设计一种快速、高灵敏度检测诺如病毒(Norovirus,NV)的方法.本文通过检索参考NCBI数据库中收录的国内典型流行的NV毒株BJSMQ的基因序列NC_039476.1,合成了NV的标准重组质粒,根据NV的ORF1基因保守序列设计一组特异性引物和荧光探针;通...
为设计一种快速、高灵敏度检测诺如病毒(Norovirus,NV)的方法.本文通过检索参考NCBI数据库中收录的国内典型流行的NV毒株BJSMQ的基因序列NC_039476.1,合成了NV的标准重组质粒,根据NV的ORF1基因保守序列设计一组特异性引物和荧光探针;通过正交试验进行程序及试剂反应体系的优化,设计TaqMan荧光定量PCR检测方法.结果表明该检测方法具有高灵敏度,最低检测限可达1.2 copies/μL,且在标准重组质粒浓度1.2×10^(5)~1.2×10^(0) copies/μL范围内具有较好的线性关系,其R^(2)=0.9907;该方法特异性强,在病毒的混合重组质粒样液中仅与NV病毒反应;组内和组间的重复性良好,变异系数(CV)值均小于2%;在数字PCR试验中进一步验证了该方法的可行性.本文设计的TaqMan荧光定量PCR检测方法可用于NV毒株的快速准确检测,有望成为NV诊断的有效工具.
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关键词
诺如病毒
taq
man
荧光定量
pcr
荧光探针
扩增试验
正交试验
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职称材料
题名
猪细小病毒4型Taq Man荧光定量PCR方法的建立与应用
被引量：
13
1
作者
黄律
龙进学
翟少伦
刘长龙
张荣
袁世山
机构
中国农业科学院上海兽医研究所传染病防治研究室
新疆农业大学动物医学院
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第1期1-9,共9页
基金
中央级公益性科研院所基本科研业务专项资金项目(2010-JB05)
上海市技术标准专项项目(10DZ0503600)
文摘
根据GenBank中发表的猪细小病毒4型(PPV4)全基因组序列,针对其结构蛋白VP2基因的保守序列,设计合成特异性引物及Taq Man探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了PPV4的Taq Man荧光定量PCR。反应条件优化后,该方法在6.73×109copies/μL^6.73×101copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.998;对PPV4的最低检测限为6.73×101copies/μL。特异性试验结果显示,用该方法检测其他基因型猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪圆环病毒2型等临床常见病毒,结果均为阴性。批内及批间变异系数均低于2%。用建立的荧光定量PCR方法和普通PCR方法对672份临床病料感染情况进行检测,阳性率为1.93%,而普通PCR检出率仅为1.63%。本研究首次报告在我国猪群中存在PPV4,同时建立的荧光定量方法为PPV4的检测、体外敏感细胞的筛选以及病毒器官嗜性的研究等提供了快速而敏感的分子检测技术。
关键词
猪细小病毒4型
taq
man
荧光
pcr
检测
Keywords
Porcine
parvovirus
type
4
taq
man
fluorescent
quantitative pcr
detection
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
诺如病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的设计与优化
被引量：
1
2
作者
陈波
李家奇
付立申
吴文明
机构
五邑大学应用物理与材料学院
五邑大学环境与化学工程学院
广东省科学院生物与医学工程研究所
出处
《五邑大学学报（自然科学版）》
CAS
2024年第3期1-6,共6页
基金
国家科技计划人才项目(0523129001)。
文摘
为设计一种快速、高灵敏度检测诺如病毒(Norovirus,NV)的方法.本文通过检索参考NCBI数据库中收录的国内典型流行的NV毒株BJSMQ的基因序列NC_039476.1,合成了NV的标准重组质粒,根据NV的ORF1基因保守序列设计一组特异性引物和荧光探针;通过正交试验进行程序及试剂反应体系的优化,设计TaqMan荧光定量PCR检测方法.结果表明该检测方法具有高灵敏度,最低检测限可达1.2 copies/μL,且在标准重组质粒浓度1.2×10^(5)~1.2×10^(0) copies/μL范围内具有较好的线性关系,其R^(2)=0.9907;该方法特异性强,在病毒的混合重组质粒样液中仅与NV病毒反应;组内和组间的重复性良好,变异系数(CV)值均小于2%;在数字PCR试验中进一步验证了该方法的可行性.本文设计的TaqMan荧光定量PCR检测方法可用于NV毒株的快速准确检测,有望成为NV诊断的有效工具.
关键词
诺如病毒
taq
man
荧光定量
pcr
荧光探针
扩增试验
正交试验
Keywords
Norovirus
taq
man
fluorescent
quantitative pcr
fluorescent
probes
Amplification
test
Orthogonal
tests
分类号
R183.3 [医药卫生—流行病学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪细小病毒4型Taq Man荧光定量PCR方法的建立与应用
黄律
龙进学
翟少伦
刘长龙
张荣
袁世山
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011
13
下载PDF
职称材料
2
诺如病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的设计与优化
陈波
李家奇
付立申
吴文明
《五邑大学学报（自然科学版）》
CAS
2024
1
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职称材料
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