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猪带绦虫六钩蚴抗原基因的克隆与表达 被引量：17
1
作者 翟春生 唐雨德 顾志香 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期470-472,共3页
以λｇｔ１１为载体构建了猪带绦虫六钩蚴ｃＤＮＡ文库，从中筛选出５株表达六钩蚴抗原成分的重组噬菌体。将其中的六钩蚴ｃＤＮＡ与表达质粒ｐＧＥＸ－４Ｔ２连接，在ＴＧ１大肠杆菌中高效表达，获得了２株表达ＧＳＴ－六钩蚴抗原融合... 以λｇｔ１１为载体构建了猪带绦虫六钩蚴ｃＤＮＡ文库，从中筛选出５株表达六钩蚴抗原成分的重组噬菌体。将其中的六钩蚴ｃＤＮＡ与表达质粒ｐＧＥＸ－４Ｔ２连接，在ＴＧ１大肠杆菌中高效表达，获得了２株表达ＧＳＴ－六钩蚴抗原融合蛋白（Ｍｒ分别为５×１０４和６×１０４）的工程菌。在ＬＢ营养液中添加１％乳糖和０．２％葡萄糖，工程菌的表达效果优于用ＩＰＴＧ诱导的效果。融合蛋白约占工程菌总蛋白的２３％。 展开更多
关键词 猪带绦虫 CDNA文库 基因克隆 融合表达
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槟榔南瓜子合剂对猪带绦虫作用的超微结构观察 被引量：16
2
作者 田喜凤 戴建军 +3 位作者 董路 贺宝玲 杨兆勇 赵丽娜 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2002年第6期363-364,I016,F003,共4页
目的　研究槟榔南瓜子合剂对猪带绦虫的杀虫机理。　方法　猪带绦虫患者 ,晨空腹口服熟的、研成粉末的南瓜子仁 10 0 g,30 min后服用槟榔煎剂 (10 0 g,加水 5 0 0 ml,煎煮 ) ,30 min后服用 5 0 %的硫酸镁 6 0 ml。驱出的猪带绦虫活虫 ,... 目的　研究槟榔南瓜子合剂对猪带绦虫的杀虫机理。　方法　猪带绦虫患者 ,晨空腹口服熟的、研成粉末的南瓜子仁 10 0 g,30 min后服用槟榔煎剂 (10 0 g,加水 5 0 0 ml,煎煮 ) ,30 min后服用 5 0 %的硫酸镁 6 0 ml。驱出的猪带绦虫活虫 ,以 0 .2 mol/ L,p H7.2 PBS冲洗 3次 ,2 .5 %戊二醛固定 2 4 h以上。分别取幼节、成节、孕节各两节 ,每节取 2小块 ,修成 1mm3,置 2 .5 %戊二醛中备用。另取犬肠道内的豆状带绦虫 (Taenia pisiformis)及患者驱虫前自动排出的新鲜孕节片 (3节 )作对照。将上述虫块取出 ,PBS冲洗 3次后 ,1%四氧化锇后固定 4 h,冲洗 3次 ,梯度酒精脱水 ,环氧树脂 6 18浸透、包埋 ,超薄切片 ,厚 5 0～ 70 nm,经醋酸铀和枸橼酸铅双重染色 ,透射电镜观察。　结果　槟榔南瓜子合剂驱出的猪带绦虫的超微结构与正常对照组基本相同。(1)皮层无损伤。远端胞质区表面的微毛完整 ,胞质区内的囊泡、线粒体、内质网等细胞器无肿胀 ;核周胞质无变性、无细胞器减少或出现大量囊泡 ;(2 )实质无变化。实质浅层的环肌束和纵肌束排列整齐 ,无肌纤维断裂和线粒体肿胀。实质深层的实质细胞和支持细胞结构正常。　结论　槟榔南瓜子合剂对猪带绦虫的驱虫机理主要是麻痹作用 ,对神经无损伤。与阿苯达唑对猪带绦虫的? 展开更多
关键词 槟榔南瓜子合剂 猪带绦虫 超微结构 透射电镜
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猪囊尾蚴疫苗候选基因TSO18在酵母中的高效表达 被引量：9
3
作者 袁改玲 才学鹏 +5 位作者 景志忠 郑亚东 骆学农 贾万忠 李辉 丁军涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期563-567,共5页
将猪带绦虫六钩蚴TSO18基因亚克隆至毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K_TSO18,电转化毕赤酵母菌GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,并... 将猪带绦虫六钩蚴TSO18基因亚克隆至毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K_TSO18,电转化毕赤酵母菌GS115,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合。采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,并对表达产物进行SDS_PAGE和Westernblot分析、脱糖基化分析、分子筛纯化和小鼠免疫接种等表明,目的蛋白得到了高效表达并进行了适度的糖基化,易于纯化且具有免疫活性。在5L发酵罐中目的蛋白表达量达到2·54mg/mL,为制备基因工程疫苗打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 TSO18基因 毕赤酵母 高效表达
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山东省猪带绦虫病和囊尾蚴病流行病学调查 被引量：13
4
作者 刘新 赵中平 +10 位作者 万功群 傅斌 李桂萍 陈锡欣 缪峰 赵长磊 李顺平 李文 付兆义 高长兰 邓绪礼 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期25-28,共4页
目的　调查山东省猪带绦虫病和囊尾蚴病流行现状。　方法　采用现场访问、粪便检查及血清学检测等方法对猪带绦虫病和囊尾蚴病人群的感染流行状况、猪囊尾蚴感染情况及有关流行因素进行调查分析。　结果　全省人群猪带绦虫病和囊尾蚴病... 目的　调查山东省猪带绦虫病和囊尾蚴病流行现状。　方法　采用现场访问、粪便检查及血清学检测等方法对猪带绦虫病和囊尾蚴病人群的感染流行状况、猪囊尾蚴感染情况及有关流行因素进行调查分析。　结果　全省人群猪带绦虫病和囊尾蚴病平均患病率分别为 0 .0 4 8%和 0 .0 5 7% ,抗囊尾蚴特异性 Ig G4 抗体阳性率平均为 1.91%。各地区流行程度不同 ,性别及城乡人群患病率均无显著性差异。流行因素调查结果表明 ,居民普遍存在不卫生习惯 ,如 :切菜刀、板生熟不分 ,饭前便后不洗手等。“连茅圈”养猪占 92 .3% ,粪便管理及生活环境卫生均较差。囊尾蚴病猪检出率平均为 0 .0 6 % ,囊尾蚴抗体阳性率平均为 1.99%。　结论　山东省绦虫病和囊尾蚴病患病率呈下降趋势 ,但流行范围扩大 ,各地区流行程度不同 。 展开更多
关键词 流行病学 猪带绦虫 囊尾蚴病 调查 山东
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猪带绦虫45W-4BX和TSOL18的高效表达及免疫效果研究 被引量：13
5
作者 骆学农 郑亚东 +7 位作者 胡志敏 丁军涛 张少华 侯俊玲 窦永喜 郭爱疆 景志忠 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期212-217,共6页
RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆入pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗... RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆入pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗分别免疫家猪,用25 000枚猪带绦虫成熟虫卵进行攻击感染,ELISA检测各组的抗体水平,90 d后剖检计算各组的减虫率。结果表明,45W-4BX和TSOL18基因在大肠杆菌中分别以可溶性和包涵体形式获得高效表达,并能被囊虫病人血清所识别。重组蛋白免疫猪15 d血清抗体即为阳性,30 d左右达到峰值。2种重组抗原的减虫率均在88%以上,与囊虫粗抗原免疫效果相当。这为进一步研制基于45W-4BX和TSOL18的猪囊虫重组基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 taenia solium TSOL18 45W-4BX VACCINE protective EFFICACY
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猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究 被引量：16
6
作者 郭爱疆 才学鹏 +3 位作者 房永祥 贾万忠 骆学农 刘红霞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期945-949,共5页
为研制新型猪囊尾蚴疫苗,将猪带绦虫六钩蚴阶段编码TSOL18的基因定向克隆于真核表达质粒pVAX1,经筛选、鉴定及DNA序列分析正确后,将重组质粒pVAX1/TSOL18转染BHK-21细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、免疫荧光试验等方法检测细胞中... 为研制新型猪囊尾蚴疫苗,将猪带绦虫六钩蚴阶段编码TSOL18的基因定向克隆于真核表达质粒pVAX1,经筛选、鉴定及DNA序列分析正确后,将重组质粒pVAX1/TSOL18转染BHK-21细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、免疫荧光试验等方法检测细胞中表达的TSOL18抗原。结果表明,重组真核质粒pVAX1/TSOL18可在BHK-21细胞中表达TSOL18目的蛋白,表达蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。动物免疫试验表明,真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,这为猪囊尾蚴病基因疫苗的研究奠定了良好基础。 展开更多
关键词 猪带绦虫 TSOL18基因 基因疫苗表达载体 免疫原性
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猪带绦虫六钩蚴45W-4B重组蛋白的免疫原性研究 被引量：14
7
作者 王福梅 骆学农 +2 位作者 景志忠 岳城 才学鹏 《中国兽医寄生虫病》 CAS 2006年第3期1-5,共5页
目的观察猪带绦虫六钩蚴45 W-4B抗原对仔猪的免疫保护作用。方法用IPTG诱导表达融合蛋白GST-45W-4B,用GST柱进行纯化,以Montan ide ISA 206为佐剂制成疫苗免疫仔猪。间接ELISA检测仔猪血清抗45W-4B IgG抗体水平,MTT法进行外周血淋巴细... 目的观察猪带绦虫六钩蚴45 W-4B抗原对仔猪的免疫保护作用。方法用IPTG诱导表达融合蛋白GST-45W-4B,用GST柱进行纯化,以Montan ide ISA 206为佐剂制成疫苗免疫仔猪。间接ELISA检测仔猪血清抗45W-4B IgG抗体水平,MTT法进行外周血淋巴细胞殖试验。免疫1个月后全部实验组经口攻击感染25000枚/头猪带绦虫虫卵,攻虫3个月后剖检,计算减虫率及保护率。结果免疫组注射疫苗的第2周起,抗体为阳性,45W-4B组持续升高至第8周,淋巴细胞增殖明显高于未免疫感染组。用该抗原制备的疫苗获得了95%的减虫率和33%的保护率。结论该抗原对猪囊尾蚴病具有很好的免疫保护作用。 展开更多
关键词 猪带绦虫 六钩蚴 45W-4B重组蛋白 免疫原性
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猪带绦虫成虫cDNA质粒文库的构建及EST测序 被引量：14
8
作者 黄江 胡旭初 +4 位作者 徐劲 余新炳 包怀恩 郎书源 廖兴江 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1126-1128,共3页
目的构建猪带绦虫(Taeniasolium)成虫全长cDNA表达文库,为获取猪带绦虫成虫的基因信息,建立基因表达谱,并为筛选疫苗基因和诊断抗原基因奠定基础。方法提取猪带绦虫成虫mRNA,构建pBluescriptIISK全长cDNA质粒文库,测定扩增文库的滴度;... 目的构建猪带绦虫(Taeniasolium)成虫全长cDNA表达文库,为获取猪带绦虫成虫的基因信息,建立基因表达谱,并为筛选疫苗基因和诊断抗原基因奠定基础。方法提取猪带绦虫成虫mRNA,构建pBluescriptIISK全长cDNA质粒文库,测定扩增文库的滴度;用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建文库的质量。随机挑选质粒文库转化的阳性重组克隆,进行较大规模的5’端测序,归并unigene。结果文库库容达到1×106pfu/ml,插入片段的大小主要在1000bp以上。获得有效EST序列2000条,归并为1171条unigene。结论已成功获得一高质量的猪带绦虫成虫全长cD-NA表达文库,并获得了较丰富的成虫表达基因数据。 展开更多
关键词 猪带绦虫成虫 全长cDNA质粒文库 表达序列标签(EST)
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带绦虫体壁的超微结构研究 被引量：11
9
作者 田喜风 张宝栋 +1 位作者 周珍 徐敏 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 1995年第4期213-217,共5页
用ＴＥＭ观察了Ｔａｅｎｉａｓｏｌｉｕｍ，Ｔ．Ｓａｇｉｎａｔａ，Ｔ．Ｄｉｓｉｆｏｒｍｉｓ成虫体壁的超微结构。体壁由皮层及实质两部分组成。皮层为合胞层，从位置上分成两个区：远端胞质区（ｄｉｓｔａｌｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｚ... 用ＴＥＭ观察了Ｔａｅｎｉａｓｏｌｉｕｍ，Ｔ．Ｓａｇｉｎａｔａ，Ｔ．Ｄｉｓｉｆｏｒｍｉｓ成虫体壁的超微结构。体壁由皮层及实质两部分组成。皮层为合胞层，从位置上分成两个区：远端胞质区（ｄｉｓｔａｌｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｚｏｎｅ），和深层的核周胞质区（ｐｅｒｉｎｕｃｌｅａｒｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｚｏｎｅ）。远端胞质的外表面密布微毛。微毛外被质膜，由基部和端部组成，端部较基部致密，呈电子致密的棘状。基部与端部之间有电子致密环（ｅｌｅｃｔｒｏｎｄｅｎｓｅｒｉｎｇ）２条。微毛的长度，随节片的发育而增长，主要是棘的增长。远端胞质内充满大量的，形状各异的空泡、囊泡、杆状器（ｒｈａｂｄｉｔｉｆｏｒｍｏｒｇａｎｅｌｌｅ），线粒体及内质网。其中豆状带绦虫远端胞质内主要是杆状器；猪带绦虫则以圆形囊泡为主；牛带绦虫为充满内含物的椭圆形囊泡。远端胞质的内面为基膜。基膜下为实质区，实质以网状细纤维样的间质为基质，肌束，核周胞质、支持细胞、实质细胞分布其间。在实质深层，实质细胞逐渐退化成空泡样，构成实质的海绵状结构。 展开更多
关键词 带绦虫 体壁 超微结构
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猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗的构建及鉴定 被引量：13
10
作者 周必英 刘美辰 贺莉芳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第4期289-292,298,共5页
目的构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌(Bb)(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗。方法用疏水甘氨酸接头连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成方法合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因。将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿... 目的构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌(Bb)(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗。方法用疏水甘氨酸接头连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成方法合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因。将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18。电穿孔法将该质粒导入Bb,构建猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。结果全基因合成789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段。从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切得到4 944bp的pGEX-1λT载体片段和789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,与预期结果相符;以该重组质粒为模板进行PCR扩增得到789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,经测序基因片段为789bp,与预期大小相符。结论成功构建了猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,为该疫苗的表达及免疫原性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪带绦虫 重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗 构建 鉴定
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猪带绦虫六钩蚴45W基因家族分子克隆 被引量：10
11
作者 才学鹏 郑亚东 +3 位作者 贾万忠 骆学农 景志忠 陆承平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期2117-2123,共7页
利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从激活的猪带绦虫六钩蚴克隆到45W基因家族。通过测序及DNAStar软件分析证实,共得到8个A型转录本、3个与A型转录本相应的B型转录本和4个其它B型转录本,以及1个C型转录本,提示45W相关基因可能更多。在... 利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从激活的猪带绦虫六钩蚴克隆到45W基因家族。通过测序及DNAStar软件分析证实,共得到8个A型转录本、3个与A型转录本相应的B型转录本和4个其它B型转录本,以及1个C型转录本,提示45W相关基因可能更多。在本研究中,发现45W-4B非常保守,有望以此为基础研制出有效的抗猪囊尾蚴病的疫苗。在大肠杆菌中以融合蛋白(GST)的形式对经改造的A型转录本(A3)和B型转录本(B2)进行表达,SDS-PAGE证明,A3呈可溶性表达;B2的表达产物主要形成了包涵体,用强变性剂(6M尿素)处理后再经SDS-PAGE,证明B2也得到了高效表达。Western分析结果表明,二者均与囊虫患者血清不反应或反应很弱;B2能与猪抗六钩蚴血清反应,说明B2可能具有免疫反应性,且其抗原表位可能是线性的。从预测的结果看,猪带绦虫45W蛋白可能是跨膜糖蛋白,跨膜区位于C末端,在它的结构中可能还存在FnⅢ组件。同时,A3和B2蛋白结构中还存在Cn-Em重复单元,以及由16～17个氨基酸构成的α-螺旋的结构单元。在45W蛋白的加工过程中,磷酸化修饰可能是一项重要内容。由此推测,45W蛋白的作用很复杂,可能在调节基因的表达和维持正常的细胞形态等过程中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 猪带绦虫 基因家族 六钩蚴 转录本 结构预测 分子克隆 反转录聚合酶链式反应 SDS-PAGE Western 跨膜糖蛋白
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云南、贵州两省38条人体带绦虫的分子鉴别 被引量：10
12
作者 陈峥宏 包怀恩 +4 位作者 牟荣 吴晓娟 郎书源 杨廷秀 胡兴竹 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第4期263-265,共3页
目的对采自云南、贵州两省的38条人体带绦虫进行分子鉴别,了解当地猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫的分布状况。方法对云南大理和贵州都匀及从江地区有排节片史的病人以槟榔-南瓜子法驱虫,虫体经形态学初步鉴别后,以组织DNA提取试剂盒... 目的对采自云南、贵州两省的38条人体带绦虫进行分子鉴别,了解当地猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫的分布状况。方法对云南大理和贵州都匀及从江地区有排节片史的病人以槟榔-南瓜子法驱虫,虫体经形态学初步鉴别后,以组织DNA提取试剂盒提取虫体基因组DNA,分别采用亚洲带绦虫、牛带绦虫和猪带绦虫线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1基因(cox1)片段的特异性引物对各DNA样品进行常规PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测;PCR阴性样品采用带绦虫cox1片段PCR通用引物进行扩增,并选择1份亚洲带绦虫特异性PCR阳性的样品作为对照。从3种带绦虫PCR阳性的扩增产物中各选择1份进行核酸序列测定,并用NCBIBlast将各核酸序列与GenBank数据库中带绦虫的cox1进行比对分析。结果采自大理的4条带绦虫(DL1～4)的猪带绦虫cox1片段PCR为阳性,扩增产物约980bp;其余25条大理带绦虫(DL5～29)和5条都匀带绦虫(DY1～5)的亚洲带绦虫cox1片段PCR为阳性,扩增产物约260bp;各样品的牛带绦虫cox1片段PCR均为阴性。DL2PCR产物的核酸序列与GenBank中猪带绦虫cox1的同源性为99%～100%,DY1PCR产物的核酸序列与亚洲带绦虫cox1的同源性为100%。特异性PCR均阴性的4条从江带绦虫(CJ1～4)和亚洲带绦虫特异性PCR阳性的DL7以带绦虫cox1片段通用引物的PCR扩增出约1kb的产物。测序表明,CJ1片段的核酸序列与牛带绦虫cox1的同源性为99%,DL7与亚洲带绦虫cox1的同源性为99%～100%。结论cox1片段PCR扩增和核酸测序分析表明,采集的云南大理人体带绦虫为猪带绦虫和亚洲带绦虫,贵州都匀和从江人体带绦虫分别为亚洲带绦虫和牛带绦虫。 展开更多
关键词 亚洲带绦虫 猪带绦虫 牛带绦虫 分子鉴别
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猪囊尾蚴病的小鼠动物模型的建立 被引量：11
13
作者 杨晓明 许华 +1 位作者 曹自文 王薇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期297-299,共3页
对猪带绦虫病患者，用南瓜子、槟榔和５０％硫酸镁驱虫。成虫漂洗后取成熟孕节分离虫卵。虫卵于培养瓶内，加入人胃液、猪胆汁、胰酶等，置于３７℃温箱孵化，再将孵出的六钩蚴注入昆明种小鼠尾静脉内，感染２个月后解剖，在其肌肉和肺... 对猪带绦虫病患者，用南瓜子、槟榔和５０％硫酸镁驱虫。成虫漂洗后取成熟孕节分离虫卵。虫卵于培养瓶内，加入人胃液、猪胆汁、胰酶等，置于３７℃温箱孵化，再将孵出的六钩蚴注入昆明种小鼠尾静脉内，感染２个月后解剖，在其肌肉和肺脏检出活猪囊尾蚴。将囊尾蚴置于胃液和胆汁中，于３７℃孵化２ｈ，其头节可自动翻出。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 人工感染 动物模型 囊尾蚴病
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猪带绦虫TSOL18基因的表达、纯化和兔抗血清的制备 被引量：12
14
作者 周必英 周泠 +2 位作者 刘美辰 刘晖 张曦 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期977-980,985,共5页
目的构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TSOL18,表达纯化TSOL18重组蛋白,制备兔抗重组蛋白血清。方法全基因合成猪带绦虫TSOL18抗原编码基因,定向克隆到pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSOL18;转化大肠埃希菌ArcticExpress(DE3),IPTG诱导表... 目的构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TSOL18,表达纯化TSOL18重组蛋白,制备兔抗重组蛋白血清。方法全基因合成猪带绦虫TSOL18抗原编码基因,定向克隆到pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSOL18;转化大肠埃希菌ArcticExpress(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达情况;亲和层析纯化获得重组蛋白,免疫兔制备抗血清;ELISA测定抗血清的效价,Western blot鉴定抗血清的特异性。结果全基因扩增出393bp的TSOL18抗原编码基因,酶切和测序鉴定证实TSOL18基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达重组蛋白相对分子质量(Mr)约为41kDa,经亲和层析后可获得纯度为75%的重组蛋白;ELISA测定抗血清的效价为1∶256 000,Western blot证实该抗血清能与重组蛋白发生特异性反应。结论猪带绦虫TSOL18基因能在大肠埃希菌中高效表达,成功制备了高纯度的TSOL18重组蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清,为猪带绦虫的疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪带绦虫 TSOL18 重组蛋白 抗血清 制备
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四川省凉山彝族地区囊尾蚴病血清学调查(英文) 被引量：12
15
作者 陈兴旺 李调英 +4 位作者 Akira Ito Yasuhito Sako 邱东川 肖宁 Philips.Craig 《寄生虫病与感染性疾病》 CAS 2010年第2期57-61,共5页
目的了解四川省凉山州彝族地区囊尾蚴病感染情况和流行风险因素。方法于2006年对凉山州昭觉县比尔乡的部分居民问卷调查;猪带绦虫尾蚴GPs作为抗原,用ELISA方法检测人、猪血清猪囊尾蚴特异性抗体。结果当地居民继发型癫痫发作率为9.1%(57... 目的了解四川省凉山州彝族地区囊尾蚴病感染情况和流行风险因素。方法于2006年对凉山州昭觉县比尔乡的部分居民问卷调查;猪带绦虫尾蚴GPs作为抗原,用ELISA方法检测人、猪血清猪囊尾蚴特异性抗体。结果当地居民继发型癫痫发作率为9.1%(57/626),人、猪血清阳性率分别为7.2%(36/499)、13.9%(14/101)。该病在当地流行的主要原因包括猪放养、不良食肉习惯(坨坨肉)、人无厕所、肉品检疫不严以及经济落后等。结论囊尾蚴病高度流行于四川省彝族地区。为控制该病的流行,必需采取综合性的防治措施,如主动的人群绦虫病筛查和治疗、加强肉食品检疫和人粪管理、改变不良饮食习惯、提倡猪圈养等。 展开更多
关键词 猪带绦虫 囊尾蚴病 癫痫 ELISA 彝族
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猪带绦虫45W基因家族cDNA克隆和序列分析 被引量：7
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作者 贾万忠 郑亚东 +4 位作者 王佩雅 陈涓 程晓红 景志忠 才学鹏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期776-780,共5页
根据猪带绦虫45W基因序列设计引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对六钩蚴总RNA进行cDNA扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离、纯化、回收,与载体pGEMT-easyVector连接,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,测序。结果显示,已成功克隆到... 根据猪带绦虫45W基因序列设计引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对六钩蚴总RNA进行cDNA扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离、纯化、回收,与载体pGEMT-easyVector连接,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,测序。结果显示,已成功克隆到重要保护性抗原45W基因B型转录本cDNA,完整开放阅读框(ORF)的大小为459bp。序列同源性分析与比较表明,所获得的9个B型转录本cDNA除TSO45W-4B-1和TSO45W-4B-2与已报道的TSO45W-4B同源外,其余均属于首次报道的45W基因家族新成员。各cDNA克隆之间核苷酸序列的差异性为1.5%～19.8%,氨基酸序列之间的差异性为2.6%～29.7%,后者比前者的差异程度更大。 展开更多
关键词 猪 带绦虫 45W基因家族 CDNA克隆 序列分析 囊尾蚴病
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感染猪囊尾蚴的家猪组织中不同时间IL-6、IL-8、TNF-α和sIL-2R含量变化 被引量：8
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作者 方文 包怀恩 +1 位作者 肖靓靓 牟荣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期556-559,共4页
目的研究实验家猪感染猪囊尾蚴不同时间组织中细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α和sIL-2R含量变化,从细胞因子角度探讨家猪抗猪带绦虫免疫应答的机制。方法用猪带绦虫虫卵直接灌胃20d龄健康乳猪4头,并以健康乳猪4头作对照。于感染后第40、60... 目的研究实验家猪感染猪囊尾蚴不同时间组织中细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α和sIL-2R含量变化,从细胞因子角度探讨家猪抗猪带绦虫免疫应答的机制。方法用猪带绦虫虫卵直接灌胃20d龄健康乳猪4头,并以健康乳猪4头作对照。于感染后第40、60、80和120 d取实验组猪肝脏、骨骼肌、心肌、舌肌及脑组织中囊尾蚴寄生处组织200 mg匀浆,用ELISA法测定匀浆上清液中细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α和sIL-2R的含量。结果1.肝脏病变组织中4种细胞因子的含量在40d时均明显高于同期对照组(P<0.01);随感染时间延长,4种细胞因子的含量逐渐降低,至80d时与同期对照组差别缩小(P<0.05),120d时肝脏已无囊尾蚴寄生;对照组肝脏组织中4种细胞因子的含量在不同时间始终保持基本稳定。2.肌肉和脑部份病变组织中4种细胞因子的含量在40d时也明显高于同期对照组(P<0.01);随感染时间延长至80d时与同期对照组差别变小(P<0.05),120d时与同期对照组差别无显著性(P>0.05)。3.对照组家猪肝脏中4种细胞因子的含量绝对值高于肌肉和脑组织(P<0.01);实验组肝组织在40d时各种细胞因子的增量更明显高于肌肉和脑组织中的增量(P<0.01)。结论家猪感染猪带绦虫早期,IL-6、IL-8和TNF-α作为前炎性反应因子在家猪肝脏的高水平表达诱导肝脏发生严重的炎症反应,限制和杀灭肝内的早期囊尾蚴,而肌肉和脑组织中这些细胞因子表达稍低,炎症反应相对较轻,因而囊尾蚴易于在这些部位存活。这一点可以从感染后期肌肉、脑组织中的囊尾蚴数量远多于肝脏而得到证实。 展开更多
关键词 猪带绦虫 猪囊尾蚴 IL-6、IL-8、TNF-α SIL-2R
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猪带绦虫TSO45W-4B基因的克隆、表达和抗体制备 被引量：10
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作者 周必英 周泠 +2 位作者 刘美辰 刘晖 张曦 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期372-375,共4页
目的克隆、表达猪带绦虫TSO45W-4B基因,以重组蛋白TSO45W-4B免疫兔制备抗体。方法全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B抗原编码基因,定向克隆至pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B。转化至大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)后,异丙基-β... 目的克隆、表达猪带绦虫TSO45W-4B基因,以重组蛋白TSO45W-4B免疫兔制备抗体。方法全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B抗原编码基因,定向克隆至pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B。转化至大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达情况。表达产物经谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析柱纯化后,免疫新西兰大白兔,制备抗血清。GST亲和层析柱纯化获得血清中抗体后,ELISA测定抗体效价,蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定抗体特异性。结果酶切和测序结果表明,重组质粒pGEX-TSO45W-4B构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白相对分子质量(M r)约为40 000,经GST亲和层析后可获得纯度为90%以上的重组蛋白。ELISA结果显示,抗体的效价为1∶512 000。Western blotting分析结果显示,该抗体能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,在约M r40 000处出现一条带,与预期大小一致。结论猪带绦虫TSO45W-4B基因能在大肠埃希菌中表达,制备了TSO45W-4B重组蛋白和兔抗血清。 展开更多
关键词 猪带绦虫 TSO45W-4B 表达 纯化 抗体
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猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress（DE3）中的表达、纯化和兔抗血清的制备 被引量：10
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作者 周泠 周必英 +2 位作者 刘美辰 刘晖 贺莉芳 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期619-624,共6页
目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒，纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头（Gly,Ser），连接TS045W-4B和TSOL18编码基因，通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向... 目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒，纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头（Gly,Ser），连接TS045W-4B和TSOL18编码基因，通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向克隆到pGEX—1λT表达载体上，构建重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18，再用重组质粒转化大肠埃希菌（E．col）ArcticExpress（DE3）。用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析表达情况，亲和层析纯化获得重组融合蛋白。用纯化的重组蛋白按0．5mg／只与弗氏完全佐剂（CFA）混合，于兔后腿肌肉及背部皮下多点免疫注射；2周后再用相同剂量的重组蛋白与弗氏不完全佐剂（IFA）混合加强免疫，此后每隔10d按第2次免疫法重复加强免疫，第4次免疫后6d，采集兔心脏血并分离血清，立即纯化及制备抗血清。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗血清的效价，采用蛋白印迹（Western blot）法鉴定抗血清的特异性。结果全基因合成的TS045W-4B—TSOL18融合基因片段长度为789bp。酶切证实pGEX—TS045W-4B—TSOL18重组质粒成功构建，测序结果获得的基因片段大小为789bp，与预期大小相符。SDS—PAGE分析和亲和层析后显示，重组质粒在转化E．col ArcticExpress（DE3）后，获得了相对分子质量约为55×10。的重组融合蛋白，纯度为85％。EUSA测定兔抗血清的效价为1：512000，Westernblot证实抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应，在相对分子质量约为55×10^3处出现1条与预期大小-致的特异性条带。结论成功地构建猪带绦虫重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18及制备了高纯度的TS045W-4B—TSOL18重组融合蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清。 展开更多
关键词 猪带绦虫 TS045W-4B—TSOL18编码基因 重组融合蛋白 抗血清
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云南大理白族带绦虫mtDNA-Cytb序列测定及分析 被引量：6
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作者 罗浪 杨毅梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期425-428,共4页
目的利用分子遗传标记对采自云南大理白族地区人体带绦虫标本进行生物多态性的研究。方法从云南大理采集人体带绦虫标本株成虫节片,抽提虫体基因组DNA,PCR扩增线粒体DNA细胞色素B(mtDNA-Cytb)序列部分片段,测序;结合GenBank中已知猪带... 目的利用分子遗传标记对采自云南大理白族地区人体带绦虫标本进行生物多态性的研究。方法从云南大理采集人体带绦虫标本株成虫节片,抽提虫体基因组DNA,PCR扩增线粒体DNA细胞色素B(mtDNA-Cytb)序列部分片段,测序;结合GenBank中已知猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫mtDNA-Cytb序列,经DNAMAN软件处理后计算遗传距离并构建系统发育树状图。结果大理白族带绦虫标本系统发育树显示大理(B1,B2,B5,B6)株带绦虫标本与亚洲带绦虫的遗传距离最接近,距牛带绦虫标本较远,与猪带绦虫则更远。大理(B3,B4)株带绦虫标本与猪带绦虫的遗传距离最接近,距牛带绦虫和亚洲带绦虫标本远。结论云南大理(B1,B2,B5,B6)株带绦虫标本属于亚洲带绦虫,而(B3,B4)株带绦虫标本属于猪带绦虫;mtDNA-Cytb序列分析可以用于带绦虫生物多态性研究。 展开更多
关键词 猪带绦虫 牛带绦虫 亚洲带绦虫 分子遗传学标记 聚合酶链反应 序列分析
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